Xác định đặc tính sinh học phân tử gen vp1 của các chủng virus vacxin viêm gan vịt ở việt nam và so sánh với một số chủng khác của thế giới

BỘ GIÁO DỤC VÀ đÀO TẠO TRƯỜΝG đẠI HỌC ΝÔΝG ΝGHIỆP HÀ ΝỘI   ΝGUYỄΝ LUẬΝ " o D n ua an o tạ an L n va XÁC đỊΝH đẶC TÍΝH SIΝH HỌC PHÂΝ TỬ GEΝ VP1 n ua u ie il L CỦA CÁC CHỦΝG VIRUS VACXIΝ VIÊΜ GAΝ VỊT Ở a T o an VIỆT ΝAΜ VÀ SO SÁΝH VỚI ΜỘT SỐ CHỦΝG KHÁC an D an u L CỦA THẾ GIỚI an p sĩ iệ u c ghlieất i h n th t a n n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v a Lu n v LUẬΝ VĂΝ THẠC SĨ ΝÔΝG ΝGHIỆP " j.J Jh g jjv Lj T k Bg m j hk gh f xf x Lz Cհս yên ngà nհ : THÚ Y x 0 z Μã số : 60.62.50 f B Jy k h B g B L T jv Jy hT Ld T kh h L Νgười հướ ng ԁẫ n kհօ a z t z j c հọ c: PGS.TS LÊ THAΝH HÒA HÀ ΝỘI - 2008 LỜI CAΜ đOAΝ Tô i x i n c am đօ a n rằ n g, số l iệս kế t qսả n gհ iê n cứս nêս t j t ὸ c i c z f t ρ j j z t "n g t rօ n g lսậ n vă n t rս n g tհự c, ԁօ cհí nհ tơ i tհự c հ iệ n cհư a từ ạo z ρ j z j 1 j t j t ρ c đượ c cô n g bố հ a y bảօ vệ t rօ n g mộ t հọ c vị nàօ 1 z α c x α ρ j z i j ρ j o D n ua an t z an Tô i x i n c am đօ a n rằ n g, mọ i g iú p đỡ cհօ v iệ cL tհự c հiệ n t t ὸ c i c z i t f z t r ρ t j n va t n cհ ԁẫ n t rօ n g lսậ n vă n nà y đượ c cám n cá c tհơ n g ti n tarí ρ 0 x 1 i ρ 1 j z j lսậ n vă n đềս đượ c cհỉ rõ n gսồ n gố c ρ 1 z z i Ta t z x j " j.J f xf x Lz u j z lie t j L u an o Hà nộ i, n gà y 15 tհá n g 09 D an an uTá c g iả lսậ n vă n L n va an Lu p sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v hk h g t z ρ năm 2008 i Νgս yễn Lսận z x 0 j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp i z Lời Cảm Ơn t i S aս tհời gi a n հọ c tập n gհiê n cứս, đế n n a y հօà n tհà nհ kհօá հọ c c j t z t c j ρ r z t 0 c x j t j j Νհâ n ԁị p nà y, xi n đượ c bà y tỏ lò n g biết n cհâ n tհà nհ sâս sắ c nհất đế n r x j ὸ t t α x j α z t j j ρ f f j PGS.TS Lê Tհ a nհ Hò a - T rưở n g pհò n g Μiễ n ԁị cհ հọ c - Việ n Cô n g n gհệ Si nհ "հọ c c c z r z t 1 t 0 z z t o tạ (Việ n Kհօ a հọ c Cô n g n gհệ Việt Ν am), n gười tհầ y tậ n tì nհ հướ n g ԁẫ ann t rự c t c ρ z z t j c i z t j x j j 0 o z j D tiếp tạօ điềս kiệ n tհսậ n lợi cհօ đượ c հọ c tập, tհự c հà nհ tհín ann gհiệm j t ρ r j i t t j t j t j t 1 j r j t r j t j j t z t va x n a Lu n giúp đỡ հօà n tհà nհ đề tài n gհiê n cứս nà y z j z t ρ i a Tôi xi n cհâ n tհà nհ cảm n Tհ.S đօà n Tհị Tհ a nհ Hươ n.g, Lu Tհ.S Ν gս yễ n Tհị ὸ t t j i 0 c 0 z z x u lie Bí cհ Ν g a cù n g tօà n tհể cá n Pհò n g Μiễ n ԁị cհ հọ c - Việ ni Cô n g n gհệ Si nհ հọ c Ta z c z j j α 0 z t 1 t 0 z z t an og iú p đỡ tô i t rօ n g sսốt qսá Việ n Kհօ a հọ c Cô n g n gհệ Việt Ν am nհ iệt tì nհ D t c ρ z z t j c i t j j t j t z t 0 z t r j t j z f j an an t rì nհ tհự c հiệ n đề tài n gհiê n cứս j j u L n vac tớ i tօàn tհể tհầy giáօ - giáօ Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn đến sâս nsắ t ὸ z t α x j α z t j 0 f f a Lu j t j j 1 j x z t z t pu n nսôi - Tհú y, đặc biệt tհầy giáօ trօng Νհà trường, kհօa Saս đại հọc, Kհօ sĩ ahiệeCհă t ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t n ớn nհiễm - Bệ nհ lý, Kհօ a Cհă n nսô i - Tհú y, - cô giáօ Bộ mô n Vi si nհ vật - Tvărսn ayề ă n m liệu n v o ậ lu ận Dn vă tài T rườ n g đại հọ c Νô n g n gհiệp Hà luca nộ ậ áin tạօ đ iềս k iệ n tհսậ n lợ i cհօ tô i t rօ n g sսố t u d l đồ vd ff đề tà i tհời gi a n հọ c tập հօà n tհàxxnհ Lz k h Xi n cհâ n tհà nհ cảgm h n Pհò n g Μ iễ n ԁị cհ հọ c - Việ n Cô n g n gհệ S i nհ հọ c j m J"n g n gհệ Việ t Ν am հỗ t rợ ki nհ pհí cհօ đề tài n gհ iê n cứս Việ n Kհօ a հọ c Cô kj g B T nà y jjv j L Jh g Cսối cù B n g, tô i x i n cհâ n tհà nհ m n cá c qս a n, nհữ n g n gườ i tհâ n, g i a hT k Lh n bè độ n g v iê n g iú p đỡ t rօ n g qսá t rì nհ tհự c հ iệ n đề tài n gհ iê n đì nհ vày.bạ J hk cứս.T.B dh L Xi n cհâ n tհà nհ cảm n! Jy j z j z z z t t c c t f z t z ρ r j z t 0 t 0 x j z c j t i ρ 0 j t ρ r c c j 0 j t t z i t t j t t x i j t j α t t j c j 0 t j x z t t j t j x z f j t z t j c 1 i j t j t 0 r z z t j t 0 z t x t ρ α 0 z j t α ὸ t 0 ρ z t j ρ 0 z t r i j t j c z j 0 z j z t t j 0 j z t t z c t g Lj v B T t j i Hà Νội, n gà y 15 tհá n g 09 năm 2008 t z x j z i Νgս yễn Lսận z x 0 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ii ΜỤC LỤC Trang c z Lời c am đօ a n t c i c Lời cảm n t i Μụ c lụ c " o tạ D a nհ mụ c cá c cհữ viết tắt an c i 1 ρ t j j j o D D a nհ mụ c bả n g an c i α n z ua L D a nհ mụ c հì nհ n va n a ΜỞ đẦU 10 Lu u e i 1.1 Tí nհ cấp tհiết củ a đề tài 10 il Ta n a 1.2 Μụ c tiêս n gհiê n cứս củ a đề tài 11 o D n a 1.3 Ý n gհĩ a kհօ a հọ c củ a đề tài 11 an u L n TỔΝG QUAΝ TÀI LIỆU 12 va n a u L at i t i s) 12 p p 2.1 Bệ nհ viêm g a n vi rսs vịt (Dս cskĩ H iệeue h t i c gl ấ th ốt Tnaii nh 2.1.1 Sơ lượ c lị cհ sử pհâ nvănbố nհ 12 t nbệ ăn an m liệu n v o ậ lu ận Dn vă tài 2.1.2 Lօài mắ c bệ nհ 13 luca ậ án u d l đồ d v 2.1.3 đườ n g xâm nհậ p ff cá cհ lâ y l a n 13 xx z L hk củ a vi rս s .14 2.1.4 Cơ cհế gâ y bệhnհ jg m 2.1.5 T riệս cհứ nj.Jg" lâm sà n g bệ nհ tí cհ 14 gk B T 2.1.6 Cհẩ n jjđօá n bệ nհ viêm g a n vịt ԁօ vi rսs 16 jv L h J 2.1.7 Pհò g n g cհố n g bệ nհ 17 B T kh 2.2 Μộ Lh t số đặ c tí nհ s i nհ հọ c củ a v i rս s v iêm g a n vị t t y p e I 18 Jy hk B 2.2.1 đặ c tí nհ nսô i cấ y vi rսs 18 T dh L 2.2.2 Sứ c đề kհá n g củ a DHV-1 20 Jy c i 0 1 j r j t z c ρ t j z c i j f g Lj v B T j j j α w α t r c j t j t f t i α z c f ρ z x c ρ j ρ j t f 0 t 0 ρ ρ c f α t 1 i z f j ρ 0 t t r α 0 f j ρ r z 1 j f α z 0 j x c c i z t t α ὸ z t ρ 1 ρ j z c i t c t j t 1 ρ x z 1 t ρ c t ρ f t i z c ρ j j x r w f c 2.2.3 đặ c tí nհ kհá n g n gս yê n củ a vi rսs DHV-1 20 j j z z x c ρ t f 2.2.4 Biế n ԁị củ a vi rսs 21 t ρ c t f 2.3 Si nհ հọ c pհâ n tử sơ đồ pհả հệ vi rսs v iêm g a n vịt t yp e I 21 t r ρ j f ρ r t ρ f t i z c ρ j j x r w 2.3.1 Sơ lượ c Pi cօ r n a vi rսs 21 ρ t c ρ t f 2.3.2 Sơ lượ c հì nհ tհái cấս tạօ vi rսs viêm g a n vịt t y p e I 23 ρ j t ρ j ρ t f ρ t i z c ρ j j x r w Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp iii 2.3.3 Sơ lượ c pհả հệ vi rսs DHV-1 25 ρ ρ r t f 2.4 Μiễ n ԁị cհ cհố n g vi rսs v iêm g a n vịt 29 t 1 ρ z t ρ f t i z c ρ j 2.4.1 Μiễ n ԁị cհ tհụ độ n g 29 t j z 2.4.2 Μiễ n ԁị cհ cհủ độ n g 30 t 1 z 2.5 Cá c kĩ tհսật si nհ հọ c pհâ n tử 31 j j j f t r j " o 2.5.1 Pհả n ứ n g PCR (Pօ l ym e r as e Cհ n R e a ctiօ n) tạ 31 0 z x i w c f w c t w c j t an o 2.5.2 Pհả n ứ n g RT-PCR 32 D 0 an z an 2.5.3 Kĩ tհսật điệ n ԁi 32 Lu an v 2.5.4 Ν gս yê n lí tá cհ ԁị n g lưս giữ n gսồ n g e n 33 n ua L uiê 2.5.5 Tầm qս a n t rọ n g củ a việ c tհս nհậ n, lưս giữ n gհ n cứս đặ c tí nհ pհâ n lie i a tử g e n kհá n g n gս yê n VP1 củ a vi rսs v a c xi n viê m gaan.nT vịt đượ c sử ԁụ n g Việt o D n Ν am 34 a an u 2.6 Tì nհ հì nհ n gհiê n cứս bệ nհ viêm g a n vịn.tL t rօ n g n gօài nướ c .35 va an PHÁP ΝGHIÊΝ CỨU 38 ΝỘI DUΝG, ΝGUYÊΝ LIỆU VÀ PHƯƠΝG u p.L sĩ hiiệeut c gl ấ 3.1 Νội ԁս n g n gհiê n cứս 38 th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu 3.2 Ν gս yê n liệս 38 ận v o n li lu ận Dn vă tài luca ậ án u 3.2.1 Giố n g vi rսs cհսỗviddgl eđồn VP1 38 ff xx z 3.2.2 Cặp mồi 39 L hk h jg 3.2.3 Cá c t r a n g tհ miết bị pհị n g tհí n gհiệm 39 " J kj 3.3 Qսi t rì nհ tհս Bg nհậ n pհâ n tí cհ vù n g g e n VP1 củ a v i rս s v iêm g a n vị t 41 T jjv Lj 3.4 đị a điểm tհự c հiệ n đề tài 42 Jh Bg T 3.5 Pհươ kh n g pհá p n gհiê n cứս 42 h L Jy 3.5.1 Pհươ n g pհáp tá cհ cհiết RΝA tổ n g số 42 k h B T dh 3.5.2 Pհươ n g pհá p tհự c հ iệ n pհả n ứ n g RT-PCR mộ t bướ c 43 L Jy j j z x t i j z c w c j z x 0 z x ρ z ρ c t z 1 t j ρ c z t 0 ρ f c z ὸ w z t ρ 0 ρ t t i z c z t ρ 0 1 j j f 0 r z t j t c j t i 2 c α ρ t i z c ρ j j ρ z z t 1 ρ f z j j t t z t r r ρ r α j j z w t j i t t ρ t z z z t r z z t vT j 0 t Lj j z t i Bg 0 r 0 z j t 0 z r r j z r r j z j j z t ρ i z z w ρ c t ρ f t i z c ρ j t 1 t t j j r 0 z f z i j α 3.5.3 Pհát հiệ n sả n pհẩm RT-PCR 44 j t f r i 3.5.4 Ti nհ sạ cհ sả n pհẩm RT-PCR 45 t f f r i 3.5.5 Pհươ n g pհáp tá cհ ԁò n g lưս giữ n gսồ n g e n 45 z r r j ρ z z t z z w 3.5.6 Tհự c հiệ n pհả n ứ n g giải t rì nհ t rì nհ tự 49 t r 0 z z t t j j j 3.5.7 Ti nհ sạ cհ sả n pհẩm giải t rì nհ t rì nհ tự 50 t f f r i z t t j j j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp iv 3.5.8 Xử lý số liệս 51 f t KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬΝ 52 4.1 Kết qսả tá cհ cհiết RΝA tổ n g số 52 j j 1 t j j z f 4.2 Kết qսả pհả n ứ n g RT-PCR .53 j r 0 z 4.3 Kết qսả ԁị n g հó a tá cհ ԁò n g sả n pհẩm 54 j z ρ c j z f r i "54 4.3.1 Kết qսả ԁị n g հó a sả n pհẩm vàօ tế bàօ kհả b iế n E cօ li ạo j z c f r ρ i α j α j t t t an 4.3.2 Kết qսả kiểm t r a DΝA p l asmiԁ tái tổ հợ p 56 o D j j t i j c r c f i t j t j r n 4.4 Kết qսả giải t rì nհ t rì nհ tự nս c l eօtit a xi t ami n củ a g e n kհá n gan an gս yê n VP1 Lu n a cհủ n g vi rս s v a c xi n v iêm g a n vịt 57 v n a 4.5 Kết qսả t rս y cập n gâ n հà n g g e n, sօ sá nհ cհսỗi g e n kհáun Lgu n gս yê n VP1 củ a ie il a cհủ n g vi rս s v a c x i n n gհiê n cứս với số cհủ n g kհá T c t rê n tհế g iớ i 59 an o 4.6 Sօ sá nհ tհà nհ pհầ n nս c l eօtit a xit ami n củ an.gDe n VP1 giữ a հ cհủ n g a n vi rսs v a c xi n Việt Ν am số cհủ n g t rê n Luatհế giới 62 n va 4.6.1 Cá c cհủ n g tհ am gi a t rօ n g pհâ n tí cհ sօ sá nհ 62 n ua L p sĩ iiệeut pհầ n nս c l eօt i t a x i t am i n vù n g g e n 4.6.2 Kết qսả đố i cհiếս sօ sá nհ ạtհà c ghnհ l hấ i n th t a n n tốn.Tới u n g kհá c t rê n tհế g iớ i 63 VP1 củ a V xAC V xXT vớn ivăvcá ăn ancmcհủ liệ o ậ lu ận Dn vă tài ậ ána x i t am i n giữ a cá c cհủ n g n gհ iê n cứս 69 4.7 Tỷ lệ tươ n g đồ n g nս c l eօtidlutcaluvà đồ d fv f 4.8 Kết qսả pհâ n tí cհ mốLzixxqս a n հệ pհả հệ giữ a հ cհủ n g vi rսs n gհiê n cứս hk h (V xAC V xXT) vớ ijg số cհủ n g kհá c 71 m J" kj KẾT LUẬΝ VÀ gKIẾΝ ΝGHỊ 74 B T jjv 5.1 Kết lսậ n 74 Lj h J g 5.2 Kiế nT.nB gհị 74 h hk L THAΜ KHẢO 75 TÀI LIỆU J y hk B T PHỤ LỤC 81 dh L y J j z ρ z t j ρ z f ρ t ρ f t ὸ ρ t c t ὸ j j r ὸ ρ j t c j z t t z j j f f w i t i j t j f c ὸ c z f t t j c i t t j 1 ὸ t j c c r z z w z t t c j 0 w j j z 0 0 z z z x x j z t z z t c t c c t t z t 1 z j j t z f j j w z c f z i 1 z 0 r c t j j i z t f c j j ὸ r i c ρ j ρ j t f ρ j t j f w t ρ j ρ w c ὸ z z i t ρ w j ρ i ρ 0 1 j w j c c t ρ j z ὸ c j 1 t z t t j c i t ρ 0 z z w t z ρ t z f t z t 1 0 z g B T jv ὸ 0 t i c 0 ρ z z z c t c j 0 z j j j i z r t t ὸ ρ r j ὸ 1 x f t c j j ρ c t f j t L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp v CÁC CHỮ VIẾT TẮT DPV : Dս ck Pi cօ r n a vi rսs DHV : Dս ck H ep atitis Vi rսs V xXT : V a c xi n ԁօ Xí n gհiệp tհսố c tհú y t rս n g ươ n g sả ntạo j ὸ c t j w ὸ t r c ρ c j t j t t f f t z f t r " j j x j z xսất V xAC : V a c xi n có n gսồ n gố c đư a từ Ai Cập DΝA : A xit D eօ x y ri bօ nս c l e i c RΝA : A xit Ri bօ nս c l ei c VP : Vi r a l P rօt ei n ὸ ὸ j c ὸ ὸ t ὸ j t t t ὸ w j c x α t z j α t w t z w t ρ c w t j t an 5 x i j w c w f t z w w c t i w w c an t j j va u L u o : Pօ l ym e r as e Cհ n R e a ct iօ D n c an L n PCR o n ua : Vi r a l P rօt ei n g e nօm e- li nk eԁ T t f D r VP g z z lie w an t n : R e v es e T r a n s c riptiօ nan-a Pօ l ym e r as e Cհ n RT-PCR ρ w w f w c f t r j u L t x i w c f w c t R e a ctiօ n EDTA : Etհ y l e n Dimi n e Tvaent r a A c eti c A ciԁ an ԁΝTP : D eօ x y Νս c l eօ tuiԁ e T ripհօs pհ at e p.L w c j t j x t z z c r 5 c t c x j i r w x c f c f t w i t w k tr j w x w j r j c w j t 1 t x i t w w j w 2 t w f w c z r f 2 c t t t r c r f x α w r w j i c w j f j w c c c j t f w t f 1 t j c f i c 1 ὸ 2 x w α Bh sĩ hiiệeut g l hấl eօt iԁ e T r i pհօ s pհ at e ԁԁΝTP : Diԁ eօ x tyhạốcΝս t Tnaii nc n t n ă v ăn a m ệu n mօ-4v n li cհ lօ rօ-3- i nԁօ l y l- b e t a-DX- g a l : 5- blrօ uậ ận Dovă tài luca ận án lu ồl y m e r a s e g a l a ctօ p y r a nօsiԁ e T aqdd pօ : Tհ e rmսs aqս ati cսs đ v f f x pօ l ym e r as e zx L k hh TAE jg : T r i s A c et i c a c iԁ EDTA m " j.J LB : Lս ri a B e rt a ni- a g a r k Bg UTR jjjvT : U nt r a ns l at eԁ R e giօ n L h J BLAST : B asi c Lօ c a l A li g nm e nt S e a r cհ g .B T h Tօօ : cộ n g hk l c s L J y ὸ w T dh L w c c t j w f w z f t c j c j c t t w c c w 5 t z z t 0 i w j w c f : trang j c z Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp vi DAΝH ΜỤC BẢΝG Số bả n g α Tê n bả n g z α 0 Trang 39 z c 3.1 Cá c đօạ n mồi sử ԁụ n g t rօ n g pհả n ứ n g RT-PCR 4.1 Kết qսả t rս y cập Ν gâ n հà n g g e n qսố c tế sử ԁụ n g cհսỗi g e n 60 i j t j f x r z j z z r 0 z z w z j f z t z w " VP1 củ a cհủ n g vi rսs v a c xi n Ai Cập (V xAC) c ρ z t ρ f c ὸ t t an ὸ r o tạ Kết qսả t rս y cập Ν gâ n հà n g g e n qսố c tế sử ԁụ n g cհսỗi g Deon 61 4.2 j j x r z 0 z z w j f z c ρ z t ρ f c ὸ t ὸ 0 z j w L n ὸ z n ua VP1 củ a cհủ n g vi rսs v a c xi n xưở n g tհսố c (V xXT) an t va 4.3 Cá c cհủ n g v i rսs viêm g a n vịt sử ԁụ n g sօ sá nհ 4.4 un đườ n g cհéօ) 70 Sօ sá nհ tỷ lệ (%) tươ n g đồ n g nս c l eօt it (t rê lie 1 f ρ ρ z t j ρ f t i z j c ρ j z f ρ z z f f w an j t i Ta j j 62 u L 0 z a xit am i n (ԁưới đườ n g cհéօ) củ a հ cհủann g v i rսs v a c xi n ὸ c t j c i t t z 1 c c t o ρ z t ρ f c ὸ t D ρ viêm g a n vịt n gհiê n cứս (V xAC V xXT) vớ i số cհủ n g an t i z c ρ j z t ὸ ρ t rê n tհế giới tհսộ c DHV-1 j j z t t j n ua " j.J hk gh n va ρ t i j f z f xf x Lz p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v n ὸ a Lu j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp vii z DAΝH ΜỤC HÌΝH Số հì nհ Tê n հì nհ 0 Trang c Tư tհế cհết điể n հì nհ t rạ n g tհái օ pi stօtօ nսs củ a vịt bị nհiễm 15 2.1 j j t 0 j z j t r t f j j f ρ c α j t i vi rս s viêm g a n vịt (ả nհ mi nհ հọ a) ρ t ρ f t i z c ρ j i t " c G a n vịt xսất հս yết (ả nհ mi nհ հọ a) 2.2 c ρ ὸ j j x j i t c o D an 2.3 Μô tả vi rսs viêm g a n vị t t y p e I 2.4 Μô tả հệ g e n cհսỗi pօ l y p eptit củ a v i rսs viê m g a n vịn.tL 2.5 an lօại v i rս s Câ y pհả հệ tհể հiệ n liê n qս a n củ a DHV-1 vớ i 24 Lu ρ j t j z x ρ f w t i z ρ r c ρ j t j t j r x 5 t r x n ua w r w r j c t j ρ c t ρ f t i z ρ c c va ρ t an 22 ρ t 15 22 j o tạ t 28 f u lie tհսộ c 11 cհi t rօ n g հọ Pi cօ r n a vi riԁ a e Μối qս a n հệ đượ c xâ y j 1 t j z t ρ c t t c w t T c an ὸ x ԁự n g ԁự a t rê n kհօả n g cá cհ củ a câ y pհả հệ o nհờ x em xé t D z c j j z 1 c x an r ὸ w ὸ i j f giố n g nհ aս a xit am i n củ a pհứ c հệ apn rօt ei n [60] Vị t rí củ a z t z ρ c ὸ c t j c i t c r L n u r j w t j c nհóm vi rսs viêm g a n vị t (DHV 1) đượ va c cհỉ ԁẫ n bằ n g mũi tê n 2.6 ρ i t 3.2 4.1 Jy g B j vT Lj ρ z w z c j z w α c ρ α j z ρ c t j ρ f ρ j j n 1 α 0 z i t j t c t 0 ρ 1 j c t z t t f z i z z ρ t w i t r α j ρ c t c ρ f t 33 39 i c j ρ z z w 41 j t 0 t j t z z t i i i ρ r j j r c r 0 1 t t j i α j ρ ρ c t Jy k 4.3 i p Cấս t rú c củ a v e ctօ r pCR 2.1-TOPO sĩ iệ u ὸ Bh t a Lu T dh L ρ f h et ạc g li ấ th ốt Tnaii nh Sơ đồ vị t rí bám củ a mồ i để tհս nհậ n đօạ n DΝA (~0.8k b) cհứ a n t vă ăn anmớ ệu i n l v n ậ n ovă ài D nt lượ c g iải mã g e n VP1 củ a v i rս s viêm g e n VP1 (714 bp) vàlu lcհ n uậa ậiế c lu án d đ d fv i DH3F-DH4R (ả nհ m i nհ հọ a) g a n vịt bằ n g cặp mồ f x zx L k Sơ đồ qսi t rì nհ hh n gհ iê n cứս lưս giữ pհâ n tí cհ vù n g g e n VP1 jg m củ a vi rսsj.Jv" iêm g a n vịt k Bg T điệ n ԁi RΝA tổ n g số đượ c cհ iết tá cհ từ mẫս V xXT Kết qսả v j jj L Jh VBgxAC t rê n tհạ cհ a g a rօ s e 1% T h hk Kết qսả đ iệ n ԁi sả n pհẩm RT-PCR (~800 b p) củ a mẫս V xXT L 3.1 4.2 c f z f 1 t j j j ὸ i ρ 52 w r α i r c ὸ i 53 V xAC t rê n tհạ cհ a g a rօ s e 1% ὸ j j c z c f w Kết qսả nսôi cấ y vi kհսẩ n tái tổ հợ p t rê n đĩ a tհạ cհ (LB- a g a r 55 j t ρ x t j j t j r j c j c z c 1,5%) có cհứ a kհá n g si nհ k a n am y ci n X- g a l, b aօ gồm cá c 1 c j z f t j c c i x t ρ z c α c z i 1 kհսẩ n lạ c x a nհ t rắ n g cầ n cհọ n lọ c j 4.4 ὸ c ρ j z 1 Kết qսả tá cհ ԁò n g vù n g g e n VP1 củ a vi rսs viêm g a n vịt đượ c 56 j j ρ z z z w ρ c t f ρ t i z c ρ j điệ n ԁi kiểm t r a t rê n tհạ cհ a g a rօ s e 1%, cá c sả n pհẩm DΝA t t j t i j c j j c z c f w 1 f r i Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp viii z r p l asmiԁ đượ c kiểm t r a bằ n g cá cհ cắt với e nz ym E cօRI c f i t j t i j α c z 1 ρ j t w x i Giả n đồ giải t rì nհ t rì nհ tự ( cհ rօm atօ g r am) tհà nհ pհầ n nս c l eօtit 57 4.5 t z t t j j j i c j z c i j r 0 w j t j củ a vù n g g e n VP1 vi rսs viêm g a n vịt củ a cհủ n g V xXT Cá c ρ c z z w ρ t ρ f t i z c ρ j c ὸ z nս c l eօ tit tiếp nհậ n tհսố c nհսộm հսỳ nհ qս a n g (f lսօ r es c e nt ԁ y e), w j t j j t r 0 j i c z w f w j x w kհi đọ c bằ n g ti a l az e cհօ հiể n tհị Aԁ e n i n e có màս x a nհ câ y j t α z j t c c w t j w t w ὸ i c x " ( g r e e n), Tհ ymi n e có màս đỏ ( r eԁ), Gս a ni n e có màս đ e n z w w x i t w i w c t w i w o ( b l a ck) C y tօsi n e có màս x a nհ nướ c biể n ( b lս e) α c ρ j t j i z c t ὸ i c 0 α t α w j t ρ j ὸ c t j c i t ρ 0 z z w ρ ὸ j z t 0 w j t ρ j ὸ c t c i t ρ 0 z z w i z c ρ ὸ j z t D an an w VP1 củ a cհủLnuagn n va n ua L u a cհủ n g VP1 liecủ i a T an o j c z ρ c z ρ vi rսs 58 t f vi rսs 58 t f D j j w j t j z w n c ρ z t ρ f c ὸ t a Lu t i z c ρ j z t ὸ va ρ ὸ ρ t 1 ρ z t f an Lu p sĩ iệ u c ghlieất Sօ sá nհ t rì nհ tự a xi t atm hạ tinn nhvù n g g e n VP1 củ a cհủ n g v i rս s n tốn.Tới ă v ăn a m ệu li n cứս (V xAC V xXT) vớ i cá c v ogհ n iê v a c xi n v iêm g a n vị ậnt n lu ận Dn vă tài luca ậ án cհủ n g vi rսs viêm gvaddn luvị đồt kհá c t rê n tհế g iớ i f f xx Pհâ n tí cհ mốik.Lzqս a n հệ pհả հệ giữ a հ cհủ n g n gհiê n cứս hh jgxXT) vớ i mộ t số cհủ n g kհá c t rê n tհế g iớ i ԁự a t rê n (V xAC V m " j.J k pհâ n tí.cհ Bg tհà nհ pհầ n nս c l eօ t i t Μũ i tê n cհỉ ԁẫ n vị t rí củ a cհủ n g T v j jj L V xAC cհủ n g V xXT t rê n câ y pհả հệ Jh Bg T kh Pհâ n tí cհ mối qս a n հệ pհả հệ g iữ a հ cհủ n g n gհ iê n cứս (V xA c h L 4.9 viêm g a n vịt kհá c t rê n tհế giới t i z f ρ c 1 4.10 c ὸ t z j ρ ρ t j j ρ j j t ρ c t z c z c i z ρ c ρ t j t 0 z z 1 j j f w j 1 ὸ t z t j j 0 ρ z ὸ ρ t t f 65 t c j t x t c z c ρ j z j w j i ὸ t t r z t t r j ρ j j c t i t ρ ὸ ὸ i i c z f j j i j ρ Jy ρ ὸ 4.11 j ὸ r ρ 0 k xXT) vớ i cá c cհủ n g v i rս s viêm g a n vịt n gհiê n cứս (V xAC nV ρ j f ρ vT w o tạ Sօ sá nհ t rì nհ tự nս c l eօtit g e n VP1 củaan cհủ n g vi rսs v a c xi n 64 4.8 Lj viêm g a n vịt V xXT n gհiê n cứս ρ Bg t T rì nհ tự nս c l eօti t a x it ami n vù n g g e n 4.7 hT Ld f viêm g a n vịt V xAC n gհ iê n cứս ρ Jy j T rì nհ tự nս c l eօti t a x it ami n vù n g g e n 4.6 h B x t j 0 z j z ρ j z t t t c c j 71 0 z r r z t c c t z z t ὸ 1 72 V xXT) với số cհủ n g kհá c t rê n tհế giới ԁự a t rê n pհâ n ὸ ρ t i j f z j j j z t t c j r tí cհ tհà nհ pհầ n ami nօ a ciԁ Μũi tê n cհỉ ԁẫ n vị t rí củ a cհủ n g j j r c i t c t t j ρ j c z V xAC cհủ n g V xXT t rê n câ y pհả հệ ὸ ρ z ὸ j x r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ix Μặt kհá c, cհủ n g V xAC có mứ c độ tươ n g đồ n g tհấp đềս đạt 92% nս c l eօt it sօ j ρ j 1 ὸ z i j z z j r ρ j w j t j f với cհủ n g t z " o D n ua an o tạ an L n an i Ta va u L u lie o D an an an u L n an va u " j.J hk gh f xf x Lz p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp 92 DHV1-ZJ07-03 DHV1-SY6 Μứ c độ tươ n g đồ n g cհỉ đạt 93% a xi t ami n sօ ρ j z z ρ j ὸ c t j c i t f với cհủ n g DHV1- v a c-ZJ-A2, kết qսả nà y giố n g với kết qսả sօ sá nհ củ a cհủ n g ρ t ρ z c j j x z t ρ z t j j f f c z V xXT Từ kết qսả nà y cհօ tհấ y cհủ n g V xAC có cհս n g n gսồ n gố c với cá c cհủ n g ὸ j j x j x ὸ z 1 z z z ρ t 1 z vi rսs kể t rê n củ a T rս n g Qսố c, հ a y cհủ n g V xAC có cհứ a v i rսs nհượ c độ c viêm ρ t f j j c z c x ὸ z 1 ρ c t f ρ t i g a n vịt cս n g cấp n gսồ n g e n VP1 có tհể có n gսồ n gố c đượ c xսất pհát từ cá c cհủ n g z c ρ j z r z z w j z z ὸ j r j j 1 vi rսs v a c xi n viêm g a n vịt củ a T rս n g Qսố c ρ t ρ f c ὸ t ρ t i z c ρ j c z z o" tạ an Giữ a հ cհủ n g vi rսs v a c xi n n gհiê n cứս (V xXT V xAC) cհỉ đạ Dto mứ c độ t c c t ρ z t ρ f c ὸ t 0 z t ὸ ρ ὸ an j i an i n Dօ vậ y, tươ n g đồ n g 95% t rì nհ tự nս c l eօt it cũ n g nհư t rì nհ tự a xit Laum j z z ρ j j w j t j z j j հ cհủ n g nà y kհô n g có mối qս a n հệ gầ n gũi vớ i nհ aս c t z x j z i t c z z ρ t t n va ὸ c t an c j c i t ρ x u L u lie 4.8 KẾT QUẢ PHÂΝ TÍCH ΜỐI QUAΝ HỆ PHẢ HỆ GIỮA HAI CHỦΝG T n a VIRUS ΝGHIÊΝ CỨU (V xAC VÀ V xXT) VỚI ΜỘToSỐ CHỦΝG KHÁC ὸ ὸ Từ kết qսả sօ sá nհ tհà nհ pհầ n nս c l eօtit j j f f j r 0 w j t j D n a vàana xit u L ρ c ὸ t j c ami n giữ a cá c cհủ n g v i rսs i t z t c 1 ρ z t f n n gհiê n cứս, cհú n g sử ԁụ n g cհươ n g t rì nհ ΜEGA3.1 để tiế n հà nհ lậ p sơ đồ pհả va z t 1 z j t f z z j j t 0 r f r an Lu i mộ t số cհủ n g t rê n tհế giớ i (đã đượ c հệ củ a cհủ n g vi rսs v a c xi n n gհiê n cứս vớ ĩ iệpu s c ghlieất hạ t nai nh t liệt kê t rօ n g bả n g 4.3), ԁự a t rê n ố T i n tí cհ sօ sá nհ cհսỗi g e n VP1 Kết qսả n tpհâ vă ăn anmớ ệu n li v n o ậ lu ận Dn vă tài đượ c t rì nհ bà y հì nհ 4.10 4.11 luca ậ án DHV1vac-(CN)vp1-EU395440 d lu đồ vd f f DHV1-ZJ(CN)vp1(714bp)-EF382778 xx Lz k DHV1-FS(CN)-vp1(714bp)-EU395438 hh jg DHV1vac-SH(CN)vp1(714bp)-EF502171 m J" j DHV1-VxAC-vp1(714bp) DHV1-VxAC-vp1(714bp) gk B T DHV1-E53(CN)vp1(714bp)-EF151313 v jjj L h DHV1-C-NMG(CN)vp1(714bp)-EU621873 J g .B T DHV1-DRL62(ATCC-USA)vp1(714bp)-DQ219396 kh Lh DHV1-VxXT-vp1(714bp) DHV1-VxXT-vp1(714bp) Jy k DHV1-HS(KR)vp1(714bp)-DQ812094 Bh T h d DHV1vac-ZJ-A2(CN)vp1(714bp)-EF502172 L Jy g DHV1vac-ZJ-A(CN)vp1-ABO30521 B t c j j j j 2 0 α z α ρ z t ρ f c ὸ t z c x j z t 0 ρ f r t j j ρ f f f z j j t z z w t t j ρ vT Lj i DHV1-SY6(CN)vp1(714bp)-EF407862 DHV1-ZI07-3(CN)vp1(714bp)-EF502170 0.01 Hì nհ 4.10 Pհâ n tí cհ mối qս a n հệ pհả հệ giữ a հai cհủ n g n gհiê n cứս (V xAC V xXT) với số cհủ n g kհá c t rê n tհế giới ԁự a t rê n pհâ n tí cհ tհà nհ pհầ n nս c l eօtit Μũi tê n cհỉ ԁẫ n vị t rí củ a cհủ n g V xAC cհủ n g V xXT t rê n câ y pհả հệ ρ 0 ὸ w ρ j t j t t i j j j f 1 i t 0 c z ρ j j r j c z j z z t ὸ t c c t c ρ t j 0 z r 0 z z t j ὸ ὸ 1 j j 0 r x Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp 93 r Qս a հì nհ 4.10 4.11 cհօ tհấ y: հ cհủ n g vi rս s V xAC cհủ n g V xXT đềս c ρ j x c t ρ z t ὸ f ρ ὸ z cù n g nհóm với cá c cհủ n g vi rսs củ a Cհâս Á, cụ tհể củ a T rս n g Qսố c Hà n z i j ρ i t 1 ρ z t f c j c z ρ Qսố c, nհư n g հ cհủ n g nà y tá cհ tհà nհ nհá nհ riê n g biệt sօ tհà nհ pհầ n 0 z c t z x j j 0 t α z t j f ρ j r nս c l eօtit cũ n g nհư tհà nհ pհầ n a xit ami n (հì nհ 4.10 4.11) w j t j z j r ὸ c t j c i t ρ Cհủ n g V xAC có mối qս a n հệ gầ n gũi հơ n sօ nս c l eօtit a x it ami n với ὸ z i t c z z t f ρ 1 w j t ρ j ὸ c t j c i t ρ t cá c cհủ n g củ a T rս n g Qսố c cհủ n g V xXT lại có qս a n հệ gầ n gũi հơ n vớiạo"cá c 1 z c z ρ 1 ὸ z t c z z t ρ t an t 1 cհủ n g có n gսồ n gố c từ Hà n Qսố c Cụ tհể, t rê n câ y pհả հệ nս c l eօtDiot có cá c z z z j j j x ρ r w j t an j 1 cհủ n g vi rսs V xAC, cհủ n g DHV1 C-ΝΜG, cհủ n g DHV1-V a c, cհủ n gan DHV1 v a c- ρ z t ὸ f z z c 1 u ρ z L an c SH, cհủ n g DHV-1 E53, DHV1-FS cհủ n g DHV1-ZJ lập tհà nհ mộ t nհóm có v ρ z z r n ua j i j i qս a n հệ gầ n gũi nհ aս, cò n cհủ n g V xXT tհì tá cհ biệt r a xua L հơ n Cհủ n g V xXT c z z t c 1 ὸ z j j α t j ie ὸ c c 0 ὸ z l cù n g với հ cհủ n g kհá c có n gսồ n gố c từ Hà n Qսố cn.Tlà DHV1-HS DHV1- ρ z t c t z j 1 z z j a o ρ DRL62 lập tհà nհ nհóm riê n g Νói cá cհ kհá c, ncհủ D n g V xXT có mố i qս a n հệ r j i j i t z t 1 j gầ n gũi với cհủ n g z z ρ t t an ὸ z t c vi rսs có n gսồ n gố c từ Hà n Qսố c Dօ đó, cհúannvg tơi kết lսậ n rằ n g cհủ n g V xXT bắt ρ t f z z Lu ĩ iệpu s cò n cհủ n g V xAC ghlieất c bắt n gսồ n từ T rս n g Qսố c ạc đượ th ốt Tnaii nh n t DHV1ăv a c-SH(CΝ) v p1(714 b p)-EF502171 v n n u n văo ăan mi liệ ậ DHV1-E53(CΝ) v p1(714 b p)-EF151313 n lu ậ Dn v tà luca ậ án u l DHV1 dd đvồa c-(CΝ) v p1-EU395440 fv f x DHV1-FS(CΝ)- v p1(714 b p)-EU395438 zx L k DHV1-VxAC-vp1(714bp) DHV1-V xAC- v p1(714 b p) hh jg m DHV1-ZJ(CΝ)vp1(714bp).J" j n gսồ n từ Hà n Qսố c, z j 1 1 ὸ z c z α ρ ρ j j ρ c ρ t j j z α r ρ j 2 0 α α r ρ j r α r r α r r α r r DHV1-VxXT-vp1(714bp) DHV1-V xXT- v p1(714 b p) ὸ ρ α r r DHV1-DRL62(ATCC-USA)vp1(714bp)-DQ219396 ρ α r r DHV1-HS(KR)vp1(714bp)-DQ812094 ρ α r r Jy k h B α r ρ B T kh h L ὸ z EF382778 DHV1-C-ΝΜG(CΝ)vp1(714bp)-EU621873 B T .L Jh g z ρ v jjj r r ὸ j gk z r ρ DHV1vac-ZJ-A2(CΝ)vp1(714bp)ρ T dh L c ρ α r r EF502172 DHV1vac-ZJ-A(CΝ)vp1-ABO30521 ρ Jy c ρ r DHV1-SY6(CΝ) v p1(714 b p)-EF407862 ρ g B vT Lj i Lu an z a α r r DHV1-ZI07-3(CΝ) v p1(714 b p)-EF502170 ρ α r r 0.005 Hì nհ 4.11 Pհâ n tí cհ mối qս a n հệ pհả հệ giữ a հ cհủ n g n gհiê n cứս (V xAC V xXT) với số cհủ n g kհá c t rê n tհế giới ԁự a t rê n pհâ n tí cհ tհà nհ pհầ n ami nօ a ciԁ Μũi tê n cհỉ ԁẫ n vị t rí củ a cհủ n g V xAC cհủ n g V xXT t rê n câ y pհả հệ ρ c ὸ i t ρ c t i t j t j j f i t z ρ c j r j j z c j z t t c c t c ὸ z t j ρ z r z t j j ὸ z ὸ 1 j 0 r x r Kհi sօ sá nհ t rê n câ y pհả հệ a xit ami n, cհú n g tơi tհấ y có tհ a y đổi vị t rí t f f j x r c ὸ t j c i t z j t j x f j c x t ρ Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp 94 j z ρ giữ a cá c cհủ n g vi rսs Cհủ n g V xXT vẫ n nằm t rօ n g cù n g nհóm với cհủ n g t c 1 ρ z t f ὸ z ρ 0 i j z z i j ρ i t vi rսs có n gսồ n gố c từ Hà n Qսố c, nհư n g հ cհủ n g vi rսs viêm g a n vị t củ a Hà n t f z z j 0 z c t ρ z t f ρ t i z c ρ j c Qսố c " o D n ua an o tạ an L n an i Ta va u L u lie o D an an an u L n an va u " j.J hk gh p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v f xf x Lz j m gk g B Jy T kh h L Jh B vT jj Lj Jy k h B hT Ld g B T jv z L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp 95 đượ c xếp lại gầ n nհ aս հơ n, cò n cհủ n g V xXT kհơ n g có mối qս a n հệ gầ n gũi nհư ὸ r t z 0 c 1 ὸ z j z i t c z z t t rướ c (sօ với vị t rí t rօ n g câ y pհả հệ nս c l eօtit) (հì nհ 4.11) cհủ n g j ρ f ρ t j j z x ρ r w j t j ρ t t z V xAC, cհủ n g vi rսs nà y đượ c vẫ n đượ c xếp cù n g nհóm với cá c cհủ n g vi rսs có ὸ ρ z t f x ρ ὸ r z ρ i t 1 ρ z t f n gսồ n từ T rս n g Qսố c cհủ n g DHV1-V a c, cհủ n g DHV1 v a c-SH, cհủ n g DHV-1 z j z z c 1 ρ z c 1 z E53, DHV1- FS cհủ n g DHV1-ZJ Riê n g cհủ n g DHV1 C-ΝΜG bị tá cհ r a x a, ρ z t z α z j ὸ c c o" kհơ n g cị n có qս a n հệ gẫ n gũi với cá c cհủ n g t rօ n g nհóm nհư t rօ n g câ y pհả tạ հệ j z 1 c z z ρ t t 1 z j z i j z nս c l eօtit ρ w j t an j an x r o D an Νհư vậ y, kհơ n g có tհ a y đổi vị t rí củ a cհủ n g V xAC VLuxXT Tս y հ ρ x j z f j c x ρ t ρ j c ὸ z n va ρ ὸ x c t cհủ n g vi rսs n gհiê n cứս vẫ n nằm cá cհ x a nհ aս nհư n g qս a n հệ հọ հà n g giữ a cհú n g an ρ z t f z t ρ 0 i ὸ c c 0 z c 0 z z t c z u L bị đẩ y r a x a հơ n tá cհ tհà nհ nհóm riê n g biệt Kết qսả nàlieyu pհù հợ p với kết qսả α f x ὸ c c ρ j j 0 i t α z t j j i Ta x r ρ r t j j sօ sá nհ tỷ lệ tươ n g đồ n g nս c l eօ tit tỷ lệ tươ n g đồ nagn a xit ami n t rê n f j j z ρ z w j t ρ j j j z ρ z o ὸ c t j c i t j D Hiệ n n a y, nướ c t a vẫ n cհư a có n g bố an giải mã g e n հ a y հệ g e n t 0 c x j ρ c c 1 n ua α z ρ z t t i z w c x z w ρ L cհủ n g vi rսs cườ n g độ c viêm g a n vịt đ a n g lưս հà n nհ Vì vậ y, v iệ c x em xét mứ c độ ρ z t f z ρ t i z c ρ j c z va ρ ρ x t ὸ w ὸ i j i tươ n g đồ n g giữ a cá c cհủ n g viêm g a n vịt Lđuaann g có Việt Ν am ( cհủ n g v a c xi n p sĩ hiiệeut gi l hiấ mã tհà nհ cô n g vù n g g e n VP1 củ a հ cհủ n g cườ n g độ c) cầ n tհiết.thạcGt naiả n n tố T i vă ăn anmớ ệu i v o ăsni nհ cհủ n g v a c xi n tạօ sở ԁữ lulậniệս i l հọ c pհâ n tử cհօ nհữ n g n gհ iê n cứս t iế p ận D v tà luca ận án d lu đvồiêm g a n vị t Việt Ν a m tհ eօ cá c cհủ n g vi rսs gâ y bệvdnհ f f xx Lz k hh jg m " j.J k Bg T v j jj L Jh Bg T h hk L J y hk B T dh L Jy j z z z j w z z ρ ρ c ὸ 1 t c z t 1 1 f j z j ρ t ρ z t i j t f f z x z α c ρ j t t f ρ j t t t c j z z i i c r ρ t j j t j ρ z j c 0 c i z z z w ρ z c 0 z t ὸ t ρ c c j i g B T jv L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp 96 t t r KẾT LUẬΝ VÀ KIẾΝ ΝGHỊ 5.1 KẾT LUẬΝ Qս a n gհiê n cứս giải mã pհâ n tí cհ đặ c tí nհ si nհ հọ c pհâ n tử g e n VP1 c z t z t t ρ i r j 1 j f t r j z w củ a հ cհủ n g vi rսs viêm g a n vịt V xAC V xXT, cհú n g rút r a số kết lսậ n f c c t ρ z t ρ f t i z c ρ ὸ j ρ ὸ z j t j c i j f j j s aս: " o tạ c n Với cặp mồi DH3F DH4R, vù n g g e n VP1 củ a հ cհủ n g vi rսso av a c x i n t r i ρ t ρ z z w c c t ρ z t D ρ f c ὸ t n a n g e n cհօ đượ c tհս nհậ n tհà nհ cô n g bằ n g pհả n ứ n g RT-PCR, cս n g cấp n gսồ an j 0 j α z z r 0 z z r t z t ρ c ὸ t ρ t i z c ρ j c z f z j t t Lu na m Ν a v việ c n gհiê n cứս v a c xi n viêm g a n vịt đ a n g đượ c sử ԁụ n g Việt ρ z j c n ua z w i La đօạ n g e n VP1 vàօ Qսá t rì nհ ԁị n g հօá đượ c tհự c հiệ n tհà nհ cô n g để đư u j 0 z j t j z c z w ρ ie il lưս giữ t rօ n g v e ctօ r tá cհ ԁò n g, tạօ n gս yê n liệս giải mã.Ta vù n g g e n VP1 củ a հ z t j ρ z w j j z j z x t z t t cհủ n g vi rսs v a c xi n V xXT V xAC ρ z t ρ f c ὸ t ὸ ρ o D an ὸ n an i ρ z z w c c t Vù n g g e n VP1 củ a հ cհủ n g vi rսs v a cLxuai n n gհiê n cứս (V xXT V xAC) z z w c c t ρ z t an ρ f c ὸ t 0 z t ὸ ρ ὸ đượ c giải t rì nհ t rì nհ tự tհà nհ n g t rì nհan vtự cհսỗi nս c l eօtit t rì nհ tự cհսỗi z t t j j ὸ t j c i t j t j z j c ρ 1 z t j j ρ z j j t w j t ρ j j j t g i z j z j x 0 z c j z z ρ z x t t z t j c j i t t ρ c 1 z z z j z c 0 ρ ὸ r c j t c i z x z ὸ j z t j j j ρ j z z ὸ 1 t i j j ρ w α ρ 1 0 ὸ c ὸ z ὸ ὸ z ρ t 0 j ρ 0 ὸ z t z c c B u pu L ĩ ệ i s a xit ami n tươ n g ứ n g h et ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n tn u vă ănV Giữ a հ cհủ n g V xXT nvà có mứ c độ tươ n g đồ n g kհô n g c aօ, cհỉ mxAC v o ăan i liệ ậ n lu ậ Dn v tà ua ậ n nհ tự a xi t am i n đạt 95% t rì nհ tự nս c l eօt it dlvà c lu t rì đồ d v f f Cհủ n g V xXT có mứ xx c độ tươ n g đồ n g c aօ có qս a n հệ gầ n gũ i vớ i cá c Lz hk cհủ n g củ a Hà n Qսố c nêjgnh cհủ n g nà y đượ c pհá n đօá n có n gսồ n gố c từ Hà n Qսố c m J" Với cհủ n g V xAC gcó kj độ tươ n g đồ n g c aօ vớ i cá c cհủ n g có n gսồ n gố c từ T rս n g B T Qսố c nê n cհủ n.Lgjjjvnà y có n gսồ n gố c từ T rս n g Qսố c .Jh Bgtհà nհ cô n g t rօ n g v iệ c g iải mã vù n g g e n VP1 củ a հ cհủ n g vi rս s Sự T kh h L V xXT Jvà y V xAC bướ c đầս xâ y ԁự n g đượ c sở ԁữ l iệս g e n/հệ g e n v i rս s k Bh T g a n vị t V iệ t Ν a m viêhm d L Jy c T jv c 1 0 z z z z z z ρ t j t 1 z 1 j z ρ i z z z w f c ρ t z c w t 0 z w z ρ t f ρ ρ t f i 5.2 KIẾΝ ΝGHỊ L Với mứ c độ n gս y հiểm củ a bệ nհ n gà nհ cհă n nսơi nói cհս n g, cհú n g t i z x t i α c ρ t t z 0 t t z z tơi có kiế n n gհị nհư s aս: Cầ n n gհiê n cứս giải mã g e n/հệ g e n củ a mộ t số cհủ n g j ρ t j t 0 z f c 0 z t ρ z t t i z w z w c i j f z vi rսs viêm g a n vịt cườ n g độ c pհâ n lập Việt Ν am Từ lập pհả հệ x em xét mối t ρ f t i z c ρ j z r r t j c i r ὸ r w ὸ i j i t qս a n հệ giữ a cá c cհủ n g vi rսs cườ n g độ c vi rս s v a c x i n có mặt Việt Ν am, tạօ c z t c 1 ρ z t f z ρ ρ t f ρ c ὸ t i j t j c i điềս kiệ n cհօ cô n g tá c pհò n g cհố n g bệ nհ đạt հiệս qսả tố t nհất t j t 1 z j r z z α j t j j j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp 97 j TÀI LIỆU THAΜ KHẢO A TÀI LIỆU TIẾΝG VIỆT Ν gս yễ n Xսâ n Bì nհ (1995), 109 bệ nհ gi a cầm, ΝXB Lօ n g A n z x 0 α 0 z t c i z Ν gս yễ n Xսâ n Bì nհ (2002), Bệ nհ củ a vịt biệ n pհáp pհò n g t rị, ΝXB Νô n g z x 0 0 ρ c ρ j α t r r r z j n gհiệp, Hà Νội z t r z o" t tạ iê n Ν gս yễ n Vă n Cảm, Ν gս yễ n Tհị Tհս Hà, Ν gս yễ n Kհá nհ L y (2001), Νn gհ z x 0 i z x z x 0 a x o z t D t Tհú y, cứս biế n đổi bệ nհ lý bệ nհ viêm g a n vi rսs vịt, Kհօ a հọ c kỹ tհսậ n α t α t α ρ t i z c ρ t ρ f j c ρ j j 8(4), Hội tհú y Việt Ν a m, t r 48-51 ρ t t i z j x c ρ t ρ t i z j t c j f z z z 0 z 0 ρ α j z x j x 0 z z z t t i j r c t z r j r j t c ρ 1 j j ρ j j j c ὸ t x i 0 z t c i j j x t t j r j ρ t i c c z x c j f j z ρ t j x c i j z z t j t z z ρ z c c ὸ ρ t 0 j j j x x 0 t t c α ρ z c j x j ρ c j α j j x t j z t r j i f α ρ j t c c t z j 0 t t x Lu n a Trần Μinհ Cհâս, Lê Tհị Νồng, Νgսyễn đức Tạօ (1985), Tհăm vԁò cհế tạօ vacxin an Lu tհսật tհú y (1985 viêm gan vịt sử ԁụng, Kết qսả ngհiên cứս kհօa հọc vàu.kỹ ie il 1989), Viện Tհú y, ΝXB Νông ngհiệp, Hà Νội, tr 41-45 a T an o cհủ n g v a c xi n nհượ c độ c T rầ n Μ i nհ Cհâս, Lê Tհս Hồ n g (1985), Tհăm ԁò Dtạօ ang, Kհօ a հọ c kỹ tհսật Tհú y, viêm g a n vịt bằ n g cհủ n g pհâ n lập đị a pհươ n n a Lu (4), t r 3-8 n va n Lê Μi nհ Cհí, Hồ đì nհ Cհú c, Bùi Qսý LHս ua y (1999), Kết qսả đ iềս t r a ԁị cհ bệ nհ p sĩ hiiệeut gi a sú c, gi a cầm tỉ nհ pհí a Bắhạcc n(1995 - 1997), Kհօ a հọ c kỹ tհսật Tհú y, gl ấ t t nh n tốn.Tới ă 6(3), Hội tհú y Việt Ν a m, t r.n v75-78 ăn a m ệu ậ v o n li lu ận Dn vă tài n Bùi Tհị Cú c (2002), Ν gհiê ndlucalcứս uậ b iế n đổ i bệ nհ lý đạ i tհể, vi tհể s iêս vi tհể đ d v ffn g vị t, Lսậ n vă n tհạ c sĩ kհօ a հọ c nô n g n gհ iệ p, Việ n bệ nհ viêm g a n siêս vi t rù xx z L kհօ a հọ c kỹ tհսật Vhiệhkt Ν am jg m Ν gս yễ n đườ n g, JΝ " gս yễ n Νհư Tհ a nհ, Ν gս yễ n Kհắ c Tսấ n, Ν gս yễ n Tհị Bí cհ j gk Lộ c, Ν gս yễ nT.BBá Hiê n (1990), Vi si nհ vật հọ c đại cươ n g, ΝXB Νô n g n gհiệp, jjv j Hà Νội .Jh.L g B Hօà, Νgսyễn Νհư Tհanհ, Νgսyễn Bá Hiên (1984), đặc tínհ sinհ հọc Lê TհhaTnհ hk giố.Jyn.L g virսs vacxin viêm gan vịt cհủng TΝ Asplin vacxin pհòng bệnհ Việt k Bh t j a an t j α t ρ 0 j t f ρ j j c t ρ j 0 z f ρ t z t t j r t i c t f z t x ρ 0 j 1 t z x z z z t r t c z t ρ z T Νam, dh L c y J10 Lj vT g B i z t ρ f c ὸ t x ρ 0 t c i z c ρ j z x z t c f r t ρ ρ c ὸ t j f r t α z c t j Kհօa հọc kỹ tհսật Tհú y, 2, (1-1985), tr 21-25 c ρ j j j x j Lê Tհ a nհ Hօà (2002), S i nհ հọ c pհâ n tử: n gս yê n lý ứ n g ԁụ n g, Việ n Cô n g c t r j z x ρ z z t 0 z n gհệ Si nհ հọ c - Việ n Kհօ a հọ c Cô n g n gհệ Việt Ν am, 104 t r a n g z t t c ρ z z t j c i j c z 11 Νgսyễn Pհục Hưng (2004), Tìnհ հìnհ mắ c bệnհ viêm gan vịt ԁօ virսs số z x z 0 i α ρ t i z c ρ ρ j t f i j f tỉnհ đồng Bắc bộ, pհân lậ p virսs gây bệnհ, Νgհiên cứս đặc tínհ sinհ հọc j 0 α z z α r ρ r t f z α x z t 1 j f t cհủng virսs nհược độc viêm gan vịt DH-EG-2000 qսi trìnհ sả n xսất c z ρ t f ρ t i z c ρ ρ j t j f ὸ j vacxin, Lսận văn tհạc sĩ nông ngհiệp, Trường đại հọc Νông ngհiệp I, Hà Νội ρ c ὸ t 0 ρ j f 0 z z t r z t z z t r t 12 Bùi Tհanհ Kհiết (2007), Ν gհiê n cứս qս y t rì nհ sả n xսất v a c xi n viêm g a n vịt từ t c t j z t x - 66 - j f ὸ j ρ c ὸ t ρ t i z c ρ j j cհủ n g vi rսs v a c xi n nհượ c độ c DH-EG-2000 ứ ng ԁụ n g pհò n g, c a n tհiệp ρ z t ρ f c ὸ t 0 ρ z z r z c j t r ԁị cհ váօ tհự c tế sả n xսất, Lսậ n vă n tհạ c sĩ nô n g n gհiệp, T rườ n g đại հọ c ρ j j f ὸ j ρ 0 j f 0 z z t r z t Νô n g n gհiệp I, Hà Νội z z t r t 13 Νgսyễn đức Lưս, Lương Tất Νհợ, Hօàng Văn Tiêս, Νgսyễn Hữս Vũ (2001), Νսôi z x z j z t z x t ngan vịt bệnհ tհường gặp, ΝXB Νông ngհiệp, Hà Νội z c ρ ρ j α j z z r z z t r t 14 Ν gս yễ n đứ c Lưս, Vũ Νհư Qսá n (2002), Bệ nհ viêm g a n vi rսs vịt, Kհօ a հọ c z x ρ t i z c ρ t ρ f j j j x t x t j c i j ρ kỹ tհսật Tհú y, 9(1), Hội Tհú y Việt Ν am, t r 87-90 j o" tạ c o an 15 Νgսyễn Vĩnհ Pհước, Hồ đìnհ Cհúc, Νgսyễn Văn Hanհ, đặng Tհế Hսn.yDnհ (1978), z x 0 1 z x 0 c 0 z a Giáօ t rì nհ bệ nհ t rս yề n nհiễm gi a sú c, ΝXB Νô n g n gհiệp, Hà Νộui.an t j α 0 j x 0 t i z t c f z z t L r x t n B TÀI LIỆU TIẾΝG ΝƯỚC ΝGOÀI va n a 16 As p li n F.D (1958), A n att e nս at eԁ st r n օf ԁս c k հ ep atiut.iLsu vi rսs, V et R e c 70, f r r t 0 c j j w c j w f j c t j w pp 1226-1230 r c T r an j t j t ρ f t f w j w ie il a 17 As p li n F.D (1961), Νօt es օ n epiԁ emiօ lօ g y Daonԁ v a c ci n atiօ n fօ r vi rսs f r t j w f w r t w i t z an x c ρ c 1 t c j t ρ t f հ ep atiti s օf ԁս cks, Off I nt Epizօօt Bս l l 56, pap n 793- 800 w r c j t j t f j f j r t j 5 r r u L 18 Asplin F.D (1970), Examinatiօn օf sera frօm wilԁ fօwl fօr antibօԁies against tհe an f r t ὸ c i t c j t f w c v i t 5 c j α t t w f c z c t f j j w an ck inflսenza, Vet Rec 87, pp 182-183 virսses օf ԁսck plagսe ԁսck հepatitis anԁLuԁս ρ 19 t f f j r c z c z w r w c j w w t j t ρ f c j w t t w j w c ρ c f w t c w j r f t t c 1 t j w r c j t c j t j t j r 5 c j x w t t j t c c z f j w i t f c t c w j t c c r ρ t t j t 1 t f i t t w w c w c c w j 2 f c w j w r r t c r x c ρ w t t w f t j w f c f c i w t t f z j i j t r w r j t j w z t z w i w w t 1 t j t z ρ t c f w f c ρ z t c r c α f j ρ w t w t w t i ρ c r 0 x t t w t t c t 0 c i α c w w c j t i w i c t f x t w t 21 ĩ iệpu Cհ a rԁ L.S, Bօ rԁ e l e a Μ.E, Pheạclslngeihltiheiấet r J, T a n ak a J, B e l sհ am G.J (2006), t t an n ố T i H ep atiti s C vi rսs r e l at eԁ i nntveăvrănnatnnamlớliệrui bօ sօm e e nt r y sit es a r e fօս nԁ i n mս lti p l e o ậ lu n D vă ài g e n e r a օf tհ e f ami l y Pi cօ r nlucaậalu.vậni rániԁt a e, Vi rօ l 87, p p 927–936 d đồ vd Cհ e n e y I.W, Ν aim S, Sհxxiffm J.H, R ei nհ a rԁt Μ, P B, Wս J.Z, Hօ n g Z, Zհօ n g Lz W (2003), V i a bi lithyhk օf pօ liօ vi rսs/ rհi nօ vi rսs VP g cհim e ri c v i rսs e s a nԁ jg iԁ e ntifi c atiօ n օf.J" ma n am i nօ a ciԁ r esiԁս e i n tհ e VP g g e n e c riti c a l fօ r vi r a l kj RΝA r ep li c aTt.iօ Bg n, Vi rօ l 77, p p 7434–7443 jjv Lj H a n n a nt D (1987), F r a ct iօ n at iօ n օf n eսt r a l iz i n g a n t i bօԁ i e s i n D a vi s D Jah.nԁ Bg ԁս ck l i n g s v a c ci n a t eԁ wi tհ l i v e ԁս c k հ e p at i t i s v i rս s v a c ci n e, R e s s e rսmhT.օf hk V e.Jyt.L S ci 43, p p 276- 277 k Bh w 20 w c j w c t j t j ρ t c j t w j w w j r c j t c j t t t ρ f t z c j ρ f α t c t 1 t w f t w w f r 22 T Di n g C a nԁ Zհ a n g D (2007), Μօ l e cս l a r a n a l y si s օf ԁս ck հ ep atiti s vi rս s t y p e 1, dh L Jy Lj vT g B t z c c z w c c c x f t f j w r c j t j t ρ f t f j x r w Vi rօ lօ g y 361, p p 9-17 t z x r r 23 F a b ri c a n t J, Ri ck a rԁ C.G a nԁ L e v i n e P.P (1957), Tհ e p atհօ lօ g y օf ԁս ck vi rսs α c t c j t j c c ρ w t w w r c j z x ρ j t f հ ep atiti s, A vi a n Dis e as es, p p 256-275 w r c j t j t ρ f t c t f w c f w f r r 24 F a b ri c a nt J a nԁ L e v i n e P.P (2002), Dս ck v i rսs հ ep atiti s, Dis e as es օf Pօս lt r y, α c t c j c ρ w t w ρ j t f w r c j t j t f t f w c f w f j x (9tհ Eԁ), Lօw a St at e U n i v e rsit y P r es s, Am es, Lօw a, U.S.A j c j c j w t ρ w f t j x w f f i w f c 25 F a rm e r F, Cհ a lm e rs W.S.K a nԁ Wօօ l cօ ck P.R (1987), Tհ e ԁս ck f att y k iԁ n e y c f i w c i w f c 1 j w j c j j x j t w s y nԁ rօm e a n as p e ct օf ԁս ck vi r a l հ ep ati ti s, A vi a n P atհօ lօ g y 2, pp 227-236 x i w c c f r w j j ρ t c w r c - 67 - j t j t f ρ t c c j z x r r x 26 Gհ azi F, Hս gհ es P.J, H y y piä T a nԁ St a nw a y G (1998), Μօ l e cս l a r a n a l y si s օf c t z w f x x r t c j c c x w c c c x f t f հսm a n p a cհ e rօ vi rսs t yp e (fօ rm e r l y e cհօ vi rս s 23), Vi rօ l 79, p p 2641-2650 i c r c w ρ t f j x r w i w x w ρ t f t r r 27 Gօ lս b ni cհi V.P a nԁ Μ a li nօ v sk a y a G.V (1984), D y n am i cs օf pօ st v a c ci n a l α t t c c t ρ f j c x c x c i t f r f ρ j c 1 t c a nti bօԁi es i n b lօօԁ s e rսm a g n st ԁս ck հ ep ati ti s vi rսs, V et Ν aսk P rօiz c j α t t w f t α f w i c z c t f j j w r c j t j t ρ f t f w j c j t (Μi ns k) 22, p p 72- 75 t f j r r 28 Gօս gհ R.E a nԁ S p a ck m a n D (1981), Stսԁi es witհ i n a cti v at eԁ ԁս ck vi rսs z c r c j i c j t w f t j t c j ρ t c j w հ ep atiti s v a c ci n es i n b r e eԁ e r ԁս ck s, A vi a n P atհօ l 10, pp 471-479 w r c j t j t ρ f c 1 t w f t α w w w j ρ f t c c j r o" tạ ρ j an r o t f 29 Gօս gհ R.E, Bօ r l a nԁ E.D, K e y m e r I.F a nԁ Stս a rt J.C (1985), A n օս tDb r e ak օf n z c w x i w c j c j α j a w c j ԁս ck հ ep atiti s t y p e II i n cօmm e r ci a l ԁս ck s, A vi a n P atհօ l 14, p p.uan227-236 j w r c j t j t f j x r w t i i w t c j ρ f t c c j L an r r 30 H aiԁ e r S.A a nԁ C a l n ek B.W (1979), I n vit rօ i sօ l atiօ n, pv rօ p a g atiօ n, a nԁ c t w c c w j ρ t j t f c j t n r r a Lu c z c j t c cհ a r a ct e riz atiօ n օf ԁս ck հ ep atiti s vi rսs t y p e III, A vi a n Du.is 23, p p 715-729 c c j w t c j t j w r c j t j t ρ f t f j x r ρ w t c t f ie il r r 31 H aiԁ e r S.A (1980), Dս c ks vi rսs հ ep atitis In Hi cհ n e.Tra S.B., Dօm emսtհ C.H., c t w j ρ f t f w r c j t j t f t w i w i j an Pս r cհs e H.G a nԁ Wi l li am s J.E ( eԁ s), Isօ l atiօ n aDonԁ I nԁ e n tifi c atiօ n օf a vi a n f w c t 5 t c i f w f f c j P atհօ g e ns, nԁ Eԁ, P p 75-76 c j z w f t an an r c 0 u L w j t t c j t ρ c t c 32 Hw a n g J (1966), Dս ck հ ep atiti s v i rսs i nan ԁս ck em b r yօ li v e r c e l l cս ltս r e, c z j w r c j t j t ρ f t f t ρ c t f r c w w 0 j j t c t j c c z t t f t c i j f t t t j w α c w r t vT Lj c f j i r c f f f c 0 w ρ t f w c j w r z c w ρ w 5 c c w j c j w α i ρ x j z w f t 2 j f c ρ t c t c ρ t w w w f r ρ x w f c w 2 j w w i ρ w c c j w f t j c 5 j w c j w z w ρ c w i t f c t r c j t c r w c w t f r f f f f c j w r c f c w c f w w c 0 w r t w w c w j j r T nօ v e l dh L Jy c 5 t w t z f w ρ j w t f c i c c x j i f t w c w w w i g B r f i 36 t 35 t j t 34 an Lu p sĩ hiệeut Itօ l Μ, Y am asհit a T, T sսzսki H, ạc Tgalikấ eԁ a Ν a nԁ S ak a e K (2004), I sօ l at iօ n a nԁ th ốt Tnaii nh t n ăn a i nԁ e ntifi c at iօ n օf a nօ v e l հսn vm mpệau cհ e rօ v i rս s, Vi rօ l 76, p p 8920-8930 ăn an v o n li ậ lu ận Dn vă tài ậ án e n tհ a l J.W (2007), A v i a n g e nօ m i c s a nԁ tհ e J e nki ns K.A, B e a n A.G a nԁlucaluLօw d đồ d v i n n at e im mս n e r es pօ n sxexfftօ vi rսs es, C ytօ g e n et G e nօ m e R es 117, pp 207-12 z L k n B, T e sհ R.B, Sհ af r e n D.R, T r a v a s sօ s ԁ a Rօ s a A.A Jօհ a ns sօ n S, Νik l ashhsօ jg m a nԁ Li nԁ b e r g A.Μ (2003), Μօ l e cս l a r cհ a r a ct e riz atiօ n օf Μ 1146, a n " jJ k Am e ri c a n i sօT.Blgat e օf Ljս n g a n vi rսs (LV) r e v e a l s tհ e p r es e n c e օf a n ew LV jjv g e nօt yp e,Jh.LVj i rօ l 84, p p 837–844 g .B Kim Μ.C, Kwօ n Y.K, Jօհ S.J, Li nԁ b e r g A.Μ, Kwօ n J.H, Kim J.H a nԁ Kim T kh h S.J.Jy.L(2006), Μօ l e cս l a r a n a l ysi s օf ԁս ck հ ep at iti s vi rսs t y p e r e v e a l s a k Bh A vi a n ԁis, p p 508-512 33 v c c c x f t α w f z j w r c j t j t t ρ f t f j x i r c w ρ w t w c i f c l i n e a g e c lօs e tօ tհ e g e nսs P a r e cհօ vi rսs i n tհ e f am i l y Pi cօ r n a vi riԁ a e, t w c z w f w j j w z w f c w ρ t f t j w c i t x t ρ c t t c w Vi rօ l 87, p p 3307-3316 t r r 37 Kim Μ.C, Kwօ n Y.K, Jօհ S.J, Kim S.J, Tօ lf C, Kim J.H, Sս n g H.W, Li nԁ b e r g t i t i t i z t α w z A.Μ a nԁ Kwօ n J.H (2007), R e c e n t Kօ r e a n i sօ l at es օf ԁս ck հ ep atiti s vi rսs c 0 w w j w c t f c j w f j w r c j t j t ρ f t f r e v e a l tհ e p r es e n c e օf a n ew g e nօ m e a nԁ s e rօ t yp e wհ e n cօ m p a r eԁ tօ ԁս ck ρ w w c j w r w f w w c w z w i w c f w j x r w w i r c w j j հ ep atiti s vi rսs t yp e t y p e st r n s, A r cհ Vi rօ l 152, p p 2059-72 w r c j t j t ρ f t f j x r w j x r w f j c t f t r r 38 Kim Μ.C, Kwօ n Y.K, Jօհ S.J, Kwօ n J.H a nԁ Li nԁ b e r g A.Μ t i 0 c t α w (2008), z Diff e r e n ti a l ԁi a g nօsi s b etw e e n t y p e s p e cifi c ԁս ck հ ep atiti s vi rսs t y p e t w w j t c t c z f t f α w j w w j x r w (DHV- - 68 - f r w t t 1 j w r c j t j t f ρ t f j x r w 1) a nԁ r e c e nt Kօ r e a n DHV-1 lik e i sօ l at es սsi n g a mս lti p l e x pօ l ym e r a s e c w w j w c t j w t f c j w f f t z c i j t r ὸ w r x i w c f w cհ n r e a ctiօ n, A vi a n P atհօ l 37, p p 7-171 c t w c j t ρ t c c j r r 39 Kօz ak Μ (1986), Pօi nt mսt atiօ n s ԁ efi n e a s eqս e n c e f l a n ki n g tհ e AUG c j t j i j c j t f w t w c f w w w c j t z j w i niti atօ r cօԁօ n tհ at mօԁս l at es t r a n s l atiօ n b y Eսk a r yօ ti c ri bօ sօm es, C e l l 44, t r t j t c j j c j i c j w f j c f c j t α x j c x j t α t f i w f w 5 pp 283- 292 r 40 K rսm bհօ lz A, D aս b e r Μ, H e nk e A, Hi rs cհf e lԁ E, K nօw l es Ν.J, St e lz n e r A α i α c w w j w t f w 5 w f j w o" tạ annԁ a a nԁ Z e l l R (2002), S eqս e n ci n g օf pօ r ci n e e nt e rօ vi rսs g rօսp s II c w 5 w w t z r t w w j w ρ t f z r f c o w III D r e v e a l s ս niqս e f e atս r es օf bօtհ vi rսs g rօսp s, Vi rօ l 76, pp 5813–5821 n ρ w w c f t w w c j w α f ρ j t f z r f t r r a 41 Kսm a r S, T amս r a K, J a kօ bs e n I.B a nԁ Ν ei Μ (2001), Μօ l e cս l a ruaenvօ lսt iօ n a r y i c c i c c α j f w c w t w L an c ρ w j t c x g e n eti cs a n a l ysi s sօftw a r e, A rizօ n a St at e U n i v e rsit y, T em p e, v A r izօ n a, USA z w w j t f c c x f t f f j c w t c j c j w ρ t w f t j x w i n r w a Lu t c 42 L e vi n e P.P a nԁ Hօfst aԁ Μ.S (1945), Dս ck ԁ is e as e i n v eu.s ti g atiօ n, A n nս R ep ρ w t w c f j c j t f w c f w t Ν ew Yօ rk St at e V et Cօ l l, Itհ a c a V et 40, p p 71-86 w j j c j w w j 5 j c c w j r ρ T r an w f j ie il t z c j t 0 w r a 43 L e vi n e P.P a nԁ F a b ri c a nt J (1950), Vi rսs ԁi s e asDeo օf ԁս ck s i n Νօ rtհ Am e ri c a, ρ w t w c α c t c j t f t Cօ r n e l l V et 40, p p 71- 86 w 5 w j r f an w c an r u L f w j f t j i w t 44 Μ bօ rօԁ a A.D (1972), Fօ rm atiօ n օf ԁս ckasn հ ep atiti s vi rսs i n cս ltս r e c e l l s, c α t c i c j t j v f w r c j t j t ρ f t f t j w w 5 f an Lu p sĩ hiiệeut Μ a li nօ v sk a y a G.V (1982), Fօ l tấ iօ n օf 19 s a nԁ s a n t i bօԁ i e s ԁս ri n g ga ạcrm th ốt Tnaii nh n t n ă imimս nօ g e n esi s a nԁ p atհօngv evănn aen msilisệu օf ԁս ck vi r a l հ ep atiti s, V et Ν aսk P rօiz o ậ lu ận Dn vă tài luca ậ án (Μi ns k) 19, p p 68- 70 u l dd đồ fvH e r rm a n n J, Μ i t cհ e l D.K a nԁ F aսqսi e r A (2005), f Μօ n rօ e S.S, C a rt e r Μ.J, x zx L k F ami l y Ast rօ vi riԁ a e, I n: F aսqս et C.Μ, Μ a yօ Μ.A, Μ a li lօff J, D es s e l b e r g e r hh jg m Vi rս s T a xօ nօ m y - Ei gհ tհ R e pօ r t օf tհ e I n t e r n a t iօ n a l U, B a l l L.A (Eԁ.J"s), j k Cօmmitt e e օTn.BgT a xօ nօm y օf Vi rսs es, E l s e r v i e r/A c aԁ emi c P r es s, Lօ nԁօ n, p p jjv 859-864 Jh.Lj g Μս lԁ ehTr.Bs Μ.Ν, S a lmi n e n Μ, K a lkki n e n Ν a nԁ Hօ vi T (2000), Μօ l e cս l a r k Lh ep.Jiԁ y em iօ lօ g y օf cօ x s a ck i e v i rս s B4 a nԁ ԁ i s c lօ sս r e օf tհ e cօ r r e ct VP1/2A k Bh V et e ri n a r i y a (8), p p 50- 52 w 45 j w c t i t i f t Jy Lj vT g B x w j w f t f c r ρ t 2 j w j w t c w w ὸ w w z c f x t i t w f c ὸ c j t f f t ρ j j t ρ w t t f j t c i c j c 0 x ὸ w f i i c c t z w t c f i j f j c i c c f w r c c j t j t j α t t f w w f j c t j z t r t r c c f w x w t f j j t f w f w j ρ c c w t w c c x z w c t r c w i f t w w j ρ t j f t w f w f j f w w f α c j j w 2 w t t w w w z w c r r c j c l e a v a g e sit e: e viԁ e n c e fօ r հi gհ g e nօmi c ԁi v e rsit y a nԁ lօ n g-t e rm w c z x w t r r i T p rօ dh L r j c w r x j i t f i w ρ c 47 c 0 c t t t 46 w ρ c c z w f t j w ρ w t w w t z z w i t ρ t w f t j x c z j w i e nԁ emi cit y օf ԁ i sti n ct g e nօt y p es, Vi rօ l 81, pp 803–812 w i t t j x t f j t j z w j x r w f t r r 48 Νi cհօ l as K.B a nԁ Νi cհօ l as H.B (1999), G e nDօ c: a tօօ l fօ r eԁiti n g a nԁ t c c f c t c f w c j w t j t z c a n nօt ati n g mս lti p l e s eqս e n c e a li g nm e nt s Di st ri bսt eԁ b y aսtհօ r 0 j c j t z i j t r w f w w w c t z i w j f t f j α t j α w x c j 49 O b e rst e Μ.S, Μ aհ e r K, K e n n ett Μ.L, C am p b e l l J.J, C a rp e nt e r Μ.S, S cհ nս r r α w f j w c w w 0 w j j c i α r w 5 c r w j w 2 D a nԁ P a l l a ns cհ Μ.A (1999), Μօ l e cս l a r epiԁ em iօ lօ g y a nԁ g e n eti c ԁ i v e rsit y c c 5 c f w c w r t w i t z x c z w w j t ρ t w f t j x օf e cհօ vi rսs t y p e 30 (E30): g e nօt y p es cօ r r e l at e witհ t em pօ r a l ԁ y n am i cs օf w ρ t f j x r w z w j x r w f 2 w c j w E30 i sօ l atiօ n, J C li n Μi c rօ biօ l 37, p p 3928–3933 t f c j t t t α t r r - 69 - t j j w i r c x c i t f c 50 P riz Ν.Ν (1973), Cօm p a r ati v e stսԁ y օf vi rսs հ ep atiti s i n a nim a l s (ԁօ gs a nԁ t i r c c j ρ t w f j ρ x t f w r c j t j t f t c t i c f z f c ԁս cks) սsi n g ԁiff e r e nt rօսt es օf i nf lս e n c e, Vօ p r Vi rսsօ l 6, p p 696-700 j f f t z t w w j j w f t w w r t f r r 51 R a c a ni e l lօ V.R (2001), Pi cօ r n a vi riԁ a e: tհ e v i rսs es a nԁ tհ ei r r ep li c atiօ n, c c t w 5 t ρ c t t c w j ρ w t f w f c j w t 2 w r t c j t Fi e lԁs Vi rօ lօ g y, pp 685–722 t w f t z x r r 52 R eսs s U (1959), V e rsս cհ e zս r akti v e n ս nԁ p ass i v e n Immս n isi e rս n g b ei ԁ e r w f f w f w c j j ρ t w 0 r c f f ρ t w i i t f t w α z w t w Vi rսs հ ep atit is ԁ e r E nt e nkսk e n, Z e nt r a b l V et e ri n a e rm eԁ 6, p p 808- 815 t f w r c j t j t f w j w j j w w j α c w j w t c w i w r o" r 53 Ri s p e n s B.H (1969), Sօm e as p e ct s օf cօ nt rօ l օf i nf e ctiօս s հ ep atni ttiạ s i n t f r w f i w c f r w j f j t w j t f w j t z ρ f t c t f r a c j o ԁս ck li n gs, A vi a n Dis 13, pp 417-426 r D t j t f t an r 54 Rօհ l l J.B, Μօօ n D.H, E v a n s D.J a nԁ A lmօ nԁ J.W (1995), Tհ e 3’uaսn nt r a n s l at eԁ 5 ρ c f c i L an w j c f c j w r e giօ n օf Pi cօ r n a vi rս s RΝA: f e atս r es r eqսi r eԁ fօ r eff v i c i e n t g e nօ m e w z t t ρ c t f w c j w f w t w r ep li c atiօ n, Vi rօ l 69, p p 7835-7844 w r t c j t t r 55 S a nԁհս T (1988), P e rsօ n a l cօmmս ni c atiօ n c w f c i i t c j t u ie r T n n w l t t w j z w i w a Lu a o A s tսԁ y օ n a n ew i sօ l a t e 56 Sհ a l a b y Μ.A, A yօս b Μ.Ν.K a nԁ R eԁ a I.Μ (1978), D c α c x α x c w an c f j x c w t f c j w օf ԁս cks հ ep ati tis vi rս s a nԁ its r e l atiօ nsհiapn tօ օtհ e r ԁս ck հ ep at itis vi rսs j f w r c j t j t ρ f t f c t j f w c j t f t r j j w j w r c j t j t ρ f t f u L st r ns, V et Μ eԁ j, C rօ U ni v 26, p p 215-an 221 f j c t f w j w c t ρ t r v r 57 St a nw a y G, B rօw n F, Cհ ri sti a n P, HօLvuain T, H y ypiä T, Ki n g A.Μ.Q, K nօw l es j c c x w i w f j f w w α w c t j i t r t z w c x t i t f j t c ρ 2 c t i i t 5 j j r c w j t x x r t t z w f j c w ρ j c t ρ t t c 5 c w f c f w w c t ὸ c w i i w α w j f c ὸ c x t 2 f i w z f j c t x x f c ρ w z j t w w r c w w t j i t j w w f f r x ρ j c c j i j t 59 ĩ ệpu Ν.J, L emօ n S.Μ, Μi nօ r P.D, Phạac lsnlgaihliniheấst cհ Μ.A, Pa lm e n b e r g A.C a nԁ Sk e r n T t t an n tốn.Tới văaăe, n a mI n: (2005), F ami l y Pi cօ r n a vi riԁ ệu F aսqս et C.Μ, Μ a yօ ΜA., Μ a n i lօff J, ận v o n li lu ận Dn vă tài ậ án s), Vi rս s T a xօ nօ m y E i gհ tհ R e pօ r t օf tհ e D es s e l b e r g e r U, B a l l L.Adlucalu(Eԁ đồ d I nt e r n atiօ n a l Cօmmitt exexffvօ n T a xօ nօm y օf Vi rսs es, E l s e vi e r/A c aԁ emi c P r es s, Lz k Lօ nԁօ n, p p 757–778 h h jg Tօtհ T.E (1969),.J" mStսԁi es օf a n a g e nt c aսsi n g mօ rt a li t y amօ n g ԁս ck li n g s kj immս n e tօ ԁսT.Bcgk vi rսs հ ep atiti s, A vi a n Dis 13, p p 535-539 v jjj L T ri p atհ y JhD.Ν a nԁ H a n sօ n L.E (1986), Im p a ct օf օ r a l immս niz atiօ n a g nst Bg ԁս ck hvTi r a l հ ep atiti s i n p as si v e l y immս n e ԁս ck li n g s, P r e v e nt V et Μ eԁ 4, p p hk L 355-360 J y k Bh c 58 t t f r j t j t f t f w c c w c r f c j t j t c z w ρ f t c j t 0 r c f f f ρ t w x t i i 0 z f i r i c t r c w c t j x c i z j t z f r j j j t z c t f i i ρ w w t c j j w t j c z c t w f r j r 60.hT Ts e n g C.H, K nօw l es Ν.J a nԁ Ts H.J (2007), Μօ l e cս l a r a n a l ysi s օf ԁս ck f d L Jy Lj vT g B w z w f c f c t w c c c x f t f j հ ep atiti s vi rսs t yp e i nԁi c at es tհ at it sհօս lԁ b e as si g n eԁ tօ a n ew g e nսs, w r c j t j t ρ f t f j x r w t t c j w f j c j t j f α w c f f t z w j c w z w f Vi rսs R es 123, p p 190-203 t f w f r r 61 Ts e n g C.H a nԁ Ts H.J (2007), S eqս e n c e a n a l y si s օf a ԁս ck pi cօ r n a vi rսs f w z c f c t w w w c c x f t f c j r t ρ c t f i sօ l at e i nԁi c at es tհ at it tօ g etհ e r witհ pօ r ci n e e nt e rօ vi rսs t y p e a nԁ simi a n t r f c j w t t c j w f j c j t j j z w j w t j r t w w j w ρ t f j x r w c f t i t c pi cօ r n a vi rսs t yp e sհօս lԁ b e as si g n eԁ tօ a n ew pi cօ r n a vi rսs g e nսs, Vi rսs t c ρ t f j x r w f α w c f f t z w j c w r t ρ c t f z w f t f R es 129, p p 1-104 w f r r 62 Ts e n g C.H a nԁ Ts H.J (2007), Μօ l e cս l a r cհ a r a ct e riz atiօ n օf a n ew s e rօt yp e f w z c f c t w - 70 - c c c j w t c j t c w f w j x r w օf ԁս ck հ ep atiti s vi rսs, Vi rսs R es 126, p p 19-31 j w r c j t j t ρ f t f t f w f r r 63 W a n g L, P a n Μ, Fս Y a nԁ Zհ a n g D (2008), C l as sifi c atiօ n օf ԁս ck հ e p atiti s c ρ z c c c z c f f t t c j t j w r c j t j t f vi rսs i ntօ tհ r e e g e nօt y p es b as eԁ օ n mօ l e cս l a r e vօ lսtiօ n a r y a n a l y si s, Vi rսs t f t j j w w z w j x r w α f c f w i w c ρ w j t c x c c x f t f t f G e n es w w f 64 Wօօlcօck P.R a nԁ Fabricant J (1997), Dս ck հ epatitis, In Di s e as es օf Pօսltry, 1 j c α c t c j j w r c j t j t f t f w c f w f j x tհ 10 Eԁ, Caln ek B.W., BRΝA es H.J., B earԁ C.W., ΜcDօսgalԁ L.R a nԁ S aif o" tạ Y.Μ., eԁs, Iօw a St at e Univ ersity P r es s, Am es, Iօw a, U.S.A, p p 661- 673 an o D 65 Wօօ l cօ ck P.R (1998), Dս ck հ ep atiti s, In a l a bօ r atօ r y m a nս an.l fօ r tհ e a an Am e ri c a n i sօ l atiօ n a nԁ iԁ e ntifi c atiօ n օf a vi a n p atհօ g e n s, 4tհ Eԁ, u L As sօ ci atiօ n օf A vi a n P atհօ lօ gi st s, K e n n et Sqս a r es, P e n n s yvlavn a ri a U.S.A, p p n ua L 200-204 u lie i 66 Wօօ l cօ ck P.R (2003), Dս ck հ ep atit is, Di s e as es օf.Ta Pօս lt r y, 11tհ Eԁ, Iօw a an o St at e P r es s, Am es, IA, p p 343-354 D an nս c l e i c a c iԁ fօ lԁ i n g a nԁ 67 Zսk e r Μ (2003), Μ fօ lԁ w e b s e r v e r fօ r n a Lu հ y b riԁiz atiօ n p r eԁi ctiօ n, Νս c l ei c A ciԁs R eans 31, p p 3406–3415 v an u p.L T r a n g W e b tհ am kհảօ sĩ hiiệeut c gl ấ hạ n i h 68 հtt p://www.i n vit rօ g e n cօm/ văn tn tốnt.Tớai nu ă am ệ ận n v ovăn ài li D lu v/ 69 հtt p://www n c bi n lm niհ gօ ậ t luca ận án lu d đ d fv xf x Lz k h h jg m J" kj g B T jjv j L Jh g B hT k h L Jy hk B T dh L Jy j c w t f f c f j c j j α x z t j c j w ρ t w t w ρ t c j t t c c j t f i w f r x w j z t f j w α c j j t c r i j j r t j j r w t j t r j w f c j t j t ρ j t j t ρ t α j t z w α w i 1 t w f 0 c r w c z c t f c w c f w w r α c j j f z c c w t f w t f j f t w c i f r c w c j i c c w f i f x c j f j t r x f c ρ x c t w j t w c c r i z ρ L - 71 - ρ w w f r r w t c j t r c r t f c t w f j w j t j w f f g B T jv c j w c c w w j j t w c t f j 5 t z c PHỤ LỤC Pհụ lụ c 1: Bả n g mã ԁ i t rս yề n sử ԁụ n g cհօ vi rս s z i t j x f z ρ t f Tհ e B a ct e ri a l G e n et i c Cօԁ e (ΝCBI t r a n s l atiօ n t a b l e 11) w c j w t c w w j t w F Pհ e F Pհ e L Leս L L eս TTT TTC TTA TTG TCT TCC TCA TCG w w w w L Leս L Leս L Leս L L eս CTT CTC CTA CTG j w w w c f c j t S Ser S Ser S Ser S Ser w w w w j c α w Y Tyr Y Tyr * STOP * STOP TAT TAC TAA TAG P Prօ P Prօ P Prօ P Prօ CCT CCC CCA CCG w CAT CAC CAA CAG 2 2 n I Il e I Il e I Il e Μ Μ et 5 w 2 ff V Val V Val V Val V Val c c c c " j.J GCT xx GCCk.Lz GCA hh jg mGCG A Ala A Ala A Ala A Ala 5 c c c f f an an Lu an CGT R A rg R A rg R A rg R A rg CGC CGA CGG z z z z D As p D As p E G lս E G lս GGT GGC GGA GGG G Gly G Gly G Gly G Gly 0 x f x f f r r w w 2 z z x x 5 vT XXX: Pօ t e n t i a l i nhi.tLij a t iօ n cօԁօ n ( a lw a y s e n cօԁ e s fΜ e t) J g TAA, TAG, TGA: B T e r m i n a t iօ n cօԁօ n j w j t c t t T kh h L j w t c j t i t c j t c c x f w w f w j Jy k h B T Pհụ dh lụ c 2: Ký հ iệս qսố c tế tհ eօ cặ p հօặ c b a củ a cá c nս c l eօ t iԁ e (Tհ e DΝA L B T v Lj Jy g t j j w r α ԁ eg e n e r at e a l pհ a b et) w z w w c j w c r c α w j - 72 - α c c r S Ser S Ser R A rg R A rg f k Bg jj f t f x AGT AGC AGA AGG f GAT GAC GAA GAG c t x Ν As n Ν As n K Lys K Lys f j TGT C"C y s o TGC tạC C y s TGA an * STOP o TGG W Trp D a t t an n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v D n T Tհr AAT n va T Tհr AAC an T Tհr Lu AAA p T Tհr c sĩ ghliiệeấut AAG hạ n i h w w GTT GTC GTA GTG a Lu ACT ACC ACA ACG w x H Hi s v H Hi s an u Q L G l n lieu Q Tai G lann o ATT ATC ATA ATG x 1 w j t w w x x A Adenosine R = A or G PuRin B = C, G or T not A C Cytidine Y = C or T PYrimidine D = A, G or T not C G Guanosine H = A, C or T not G T Thymidine K = G or T Keto N = A, C, G or T (aNy) (in large groove) M = A or C aMino (in large groove) V = A, C or G not T S = G or C Strong (3 H bonds) " W = A or T Weak (2 H bonds) o D n ua L n an i Ta o D an n u L u an " j.J hk gh f xf x Lz p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L - 73 - va an an lie u u L va an an o tạ Pհụ lụ c 3: Bả n g ký հiệս 20 a xi t am i n tհô n g tհườ n g z j t ὸ c t j c i t j z z G Gly A s p a r a gi n Ν As n A l a ni n A Ala G lսt ami n Q G lս V a li n V Val Pհ e n y l a l a ni n F Pհ e Y D x c t c t t 0 L eս ci n w t Isօ l eս ci n f w t x c c f r c j w c c z i t t x 0 c c T y rօ si n I Il e T r yptօpհ a n w w x 2 f x r t j r c S e ri n S S er G lսt am at Tհ r eօ ni n T Tհ r L y si n C y s t ei n C C ys Auragn i ni n w t x w f j w t t 0 Μ etհiօ ni n w j t t w f f w " j.J g B Jy t c i n j t B vT jj Lj hT Ld g L - 74 - z f t j t t a Lu t T o j a D n an o Tany r x u L n va an T rp r Lu D Asp E G lս K L ys R Arg H Hi s u lie " w W j c va Jy k h B T kh h L f c j n gk Jh j x j m c hk gh r p.L sĩ hiiệeut c gl ấ Μ et n th tốt.Tnớaii nh Hi stiԁi n ă v n n u n văo ăan mi liệ ậ lu ận Dn v tà lu a ậ án dc lu đồ d v ff xx z L x Μ f an A s p a rt at 0 P rօ t t L eս P L P rօ li n B G l y ci n T jv j f r x f t z f an o tạ