Phân lập, tuyển chọn và nghiên cứu đặc tính sinh học của các chủng vi khuẩn có khả năng đối kháng với nấm sclerotium rolfsii gây bệnh thối gốc lạc

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC -*** KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN VÀ NGHIÊN CỨU ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA CÁC CHỦNG VI KHUẨN CÓ KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG VỚI NẤM SCLEROTIUM ROLFSII GÂY BỆNH THỐI GỐC LẠC HÀ NỘI-2022 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC *** KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN VÀ NGHIÊN CỨU ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA CÁC CHỦNG VI KHUẨN CÓ KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG VỚI NẤM SCLEROTIUM ROLFSII GÂY BỆNH THỐI GỐC LẠC Sinh viên thực : NGUYỄN KHÁNH LY Lớp : K63CNSHA MSV : 637047 Giảng viên hƣớng dẫn : PGS.TS NGUYỄN XUÂN CẢNH Bộ môn : CÔNG NGHỆ VI SINH HÀ NỘI-2022 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trính nghiên cứu khoa học thực thời gian từ tháng 11/2021- 05/2022 hướng dẫn PGS.TS Nguyễn Xuân Cảnh, Bộ môn Công nghệ Vi sinh, Khoa Công nghệ Sinh học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam Các số liệu kết nghiên cứu khóa luận trung thực chưa bất kí công bố nghiên cứu khác Các tài liệu trìch dẫn khố luận nêu mục tài liệu tham khảo Hà Nội, ngày 20 tháng 05 năm 2022 Sinh viên Nguyễn Khánh Ly i LỜI CẢM ƠN Lời cho cảm ơn đến ban Giám đốc Học viện, đội ngũ giảng viên, cán giảng dạy công tác Học viện Tôi vô biết ơn đến thầy cô khoa Công nghệ sinh học giảng dạy, hướng dẫn tạo điều kiện để tơi hồn thành chương trính học, thực tập nghề nghiệp khoá luận tốt nghiệp Đặc biệt hơn, tơi xin bày tỏ kình trọng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Xuân Cảnh định hướng nghiên cứu hướng dẫn tận tính tơi thời gian thực khố luận Tơi xin cảm ơn đến thầy cô môn Công nghệ vi sinh thầy PGS.TS Nguyễn Văn Giang, cô Th.S Trần Thị Hồng Hạnh, cô Th.S Nguyễn Thanh Huyền, cô Th.S Trần Thị Đào anh, chị nghiên cứu viên Dương Văn Hồn, Nguyễn Thị Thu giúp đỡ tơi thời gian thực khố luận Cuối tơi xin cảm ơn đến bạn bè thực khoá luận mơn Cơng nghệ vi sinh gia đính khuyến khìch, động viên giúp đỡ để tơi hồn thành khố luận tốt nghiệp Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 20 tháng 05 năm 2022 Sinh viên Nguyễn Khánh Ly ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH viii TÓM TẮT ix PHẦN I: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đìch nghiên cứu 1.3 Nội dung nghiên cứu PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan lạc 2.1.1 Nguồn gốc, vị trì lạc 2.1.2 Vai trò, ứng dụng lạc đời sống 2.2 Một số bệnh hại phổ biến lạc 2.2.1 Bệnh thối gốc lạc 2.2.2 Một số bệnh hại khác 10 2.3 Khái quát vi khuẩn: 13 2.3.1 Vi sinh vật đất 13 2.3.2 Vi khuẩn đối kháng nấm bệnh trồng 14 2.4 Một số nghiên cứu nước giới vi khuẩn đối kháng nấm 16 2.4.1 Nghiên cứu nước 16 2.4.2 Nghiên cứu giới 17 iii PHẦN III ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 3.1 Đối tượng, vật liệu nghiên cứu 19 3.1.1 Thời gian, địa điểm nghiên cứu 19 3.1.2 Đối tượng nghiên cứu 19 3.1.3 Thiết bị hoá chất 19 3.1.4 Môi trường sử dụng nghiên cứu 19 3.2 Phương pháp nghiên cứu 20 3.2.1 Phương pháp thu thập mẫu: 20 3.2.2 Phương pháp phân lập, làm thuần, giữ giống vi khuẩn 20 3.2.3 Phương pháp xác định hính thái khuẩn lạc hính thái tế bào chủng vi khuẩn phân lập 21 3.2.4 Khảo sát khả đối kháng nấm chủng vi khuẩn phân lập 22 3.2.5 Đánh giá ảnh hưởng dịch nuôi cấy vi khuẩn đến phát triển nấm 23 3.2.6 Xác định số đặc điểm sinh học chủng vi khuẩn tuyển chọn (Nguyễn Lân Dũng, 2010) 23 3.2.7 Khảo sát khả sinh enzyme ngoại bào 25 PHẦN IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 4.1 Kết phân lập vi khuẩn 27 4.2 Tuyển chọn chủng vi khuẩn có khả kháng nấm gây bệnh thối gốc lạc 29 4.3 Đánh giá ảnh hưởng dịch nuôi cấy chủng vi khuẩn H14 đến phát triển nấm S.rolfsii 32 4.4 Khảo sát số đặc điểm sinh học chủng vi khuẩn tuyển chọn 32 4.4.1 Đặc điểm hính thái 32 4.4.2 Thử khả di động 33 4.4.3 Phản ứng catalase 34 4.4.4 Phản ứng MR (Methyl Red) 35 4.4.5 Phản ứng VP (Voges-Proskauer) 36 4.4.6 Khả sử dụng citrate 37 iv 4.4.7 Khả khử nitrate 38 4.5 Khảo sát khả sinh enzyme ngoại bào 39 PHẦN V: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 5.1 Kết luận 41 5.2 Kiến nghị 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 PHỤ LỤC 47 v DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Cs LB MT PDA CMC & µl ml VSV SCA FAO : : : : : : : : : : : Cộng Luria Bertani Môi trường Potato Dextrose Agar CarboxyMethyl Cellullose Và Microlit Mililit Vi sinh vật Simmon‘s citrate agar Food and Agriculture Organization of the United Nations vi DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Diện tìch, suất sản lượng lạc Việt Nam Bảng 4.1 Các chủng vi khuẩn phân lập 27 Bảng 4.2 Sự phân bố màu sắc 57 chủng phân lập 28 Bảng 4.3 Hính thái chủng vi khuẩn tuyển chọn 32 Bảng 4.4 Các đặc điểm hóa sinh chủng vi khuẩn tuyển chọn 40 vii DANH MỤC HÌNH Hính 2.1 Cây lạc (đậu phộng) Hính 2.2 Triệu chứng bệnh thối gốc lạc, thối thân Hính 2.3 Vết bệnh mầm lạc với nhiều bào tử nấm Aspergillus niger 11 Hính 2.4 Bệnh đốm nâu lạc 12 Hính 2.5 Bệnh đốm đen lạc 13 Hính 4.1 Hính ảnh số khuẩn lạc chủng vi khuẩn phân lập sau 24h nuôi cấy 30°C môi trường LB 28 Hính 4.2 Hính thái khuẩn lạc chủng vi khuẩn tuyển chọn sau 24h nuôi cấy 30°C môi trường LB 29 Hính 4.3 Khả kháng nấm S rolfsii chủng vi khuẩn tuyển chọn sau ngày nuôi cấy 30 Hính 4.4 Khả ức chế hính thành hạch nấm S rolfsii chủng vi khuẩn tuyển chọn sau ngày nuôi cấy 31 Hính 4.5 Ảnh hưởng dịch ni cấy chủng H14 đến phát triển nấm bệnh 32 Hính 4.6 Hính thái tế bào chủng vi khuẩn tuyển chọn vật kình 100X 33 Hính 4.7 Khả di động chủng vi khuẩn tuyển chọn 34 Hính 4.8 Hoạt tình catalase chủng vi khuẩn 35 Hính 4.9 Thử nghiệm phản ứng MR với chủng vi khuẩn tuyển chọn 36 Hính 4.10 Thử nghiệm phản ứng VP với chủng vi khuẩn tuyển chọn 37 Hính 4.11 Khả sử dụng citrate chủng vi khuẩn tuyển chọn 38 Hính 4.12 Khả khử nitrate chủng vi khuẩn tuyển chọn 38 Hính 4.13 Khả sinh enzyme ngoại bào chủng vi khuẩn tuyển chọn 39 viii Hình 4.11 Khả sử dụng citrate chủng vi khuẩn tuyển chọn 4.4.7 Khả khử nitrate Để xác định khả khử nitrate thành nitrit, chủng vi khuẩn tuyển chọn nuôi cấy môi trường khử nitrate 30oC Sau 48 nuôi cấy thêm thuốc thử Grien A Grien B vào dịch nuôi Sau vài giây, dịch ni chủng H14 chuyển đỏ sậm, CG1, H5 khơng có tượng Do đó, chủng H14 có khả khử nitrate thành nitrit Hình 4.12 Khả khử nitrate chủng vi khuẩn tuyển chọn 38 4.5 Khảo sát khả sinh enzyme ngoại bào Enzyme đóng vai trị quan trọng phản ứng thuỷ phân, có nhiều ứng dụng quan trọng chăn nuôi, nông nghiệp, công nghiệp thực phẩm Nguồn enzyme sử dụng phổ biến có nguồn gốc từ vi sinh vật Các enzyme ngoại bào vi sinh vật tổng hợp tiết vào mơi trường có vai trị quan trọng việc phân hủy hợp chất hữu tự nhiên để thu nhận nguồn dinh dưỡng cho chình vi sinh vật cung cấp dinh dưỡng cho trồng Chình ví khả sinh nhiều chất khác tiêu chì quan trọng chọn lọc chủng vi sinh vật Vi khuẩn nuôi lắc (120 vịng/phút) mơi trường LB, sau 1-2 ngày tiến hành thu dịch nuôi cấy vi khuẩn li tâm 4oC, 6.000 vịng/phút, 15 phút Dịch enzyme thơ thu sau ly tâm sử dụng để đánh giá hoạt tình số enzyme ngoại bào Hình 4.13 Khả sinh enzyme ngoại bào chủng vi khuẩn tuyển chọn (A) Cellulase (B) Chitinase Kết nghiên cứu cho thấy chủng vi khuẩn CG1, H5, H14 có chủng H14 xuất vịng sáng quanh giếng thạch, vòng sáng quanh giếng thạch to, sáng thí hoạt tình enzyme mạnh Chứng tỏ chủng H14 có khả sinh enzyme chitinase, cellulase cho hoạt tình mạnh Kết thử nghiệm hóa sinh tóm tắt bảng 39 Bảng 4.4 Các đặc điểm hóa sinh chủng vi khuẩn tuyển chọn Đặc tính sinh học CG1 H14 H5 Kết nhuộm Gram + + + Khả di động ++ + ++ Phản ứng MR ++ + ++ Phản ứng VP + ++ + Khả sử dụng citrate + ++ - Khả khử nitrate - ++ - Khả sinh catalase + + + Khả sinh chitinase - ++ - Khả sinh cellulase - ++ - Chú thích: (++) Tốt, (+) Có phản ứng, (-) Khơng có phản ứng Tóm lại, sau tiến hành phân lập sàng lọc đối kháng tím 03 chủng có khả đối kháng cao là: CG1, H5, H14 Tiến hành nhuộm gram thử hóa sinh thấy 03 chủng bắt màu gram (+) Cả ba chủng có khả di động, có hoạt tình với enzyme catalase; có khả chuyển hóa glucose, sản sinh trí acid bền trính lên men glucose; có khả chuyển hóa glucose thành acetoin 40 PHẦN V: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận - Phân lập 57 chủng vi khuẩn có màu sắc, hính thái khuẩn lạc đa dạng từ mẫu đất thu thập Hưng Hà - Thái Bính Ý Yên - Nam Định kết hợp với 15 chủng vi khuẩn từ môn Công nghệ Vi sinh thu tổng 72 chủng vi khuẩn có 12 chủng có khả đối kháng nấm bệnh Trong có chủng có khả đối kháng mạnh với chủng nấm kiểm định Sclerotium rolfsii (40,78-52,77%) - Khảo sát khả ức chế dịch nuôi vi khuẩn H14 với nấm kiểm định đĩa đối chứng, đối kháng dao động từ 68,89% (1:50) - 81,11% (1:10) - Ba chủng vi khuẩn tuyển chọn: H5, CG1, H14 trực khuẩn gram dương, có khả di động, có hoạt tình với enzyme catalase; có khả chuyển hóa glucose, sản sinh trí acid bền q trính lên men glucose; có khả chuyển hóa glucose thành acetoin Trong đó, chủng H14 cịn có khả sử dụng citrate, khử nitrate sinh enzyme chitinase, cellulase 5.2 Kiến nghị Do thời gian thực đề tài có hạn nên tơi chưa sâu vào nghiên cứu nên tơi có kiến nghị phương hướng nghiên cứu tiếp theo: - Khảo sát điều kiện tối ưu chủng vi khuẩn ảnh hưởng đến khả đối kháng nấm S.rolfsii - Định danh chủng vi khuẩn tuyển chọn 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt: Anh H N (2018) Phân lập nhận diện dòng vi khuẩn chịu mặn có khả cố định đạm tổng hợp IAA từ đất sản xuất lúa-tơm Bạc Liêu, Sóc Trăng Kiên Giang Tạp chì Khoa học Trường Đại học Cần Thơ 54(1): 7-12 Đ Tấn Dũng (2000) Bệnh héo rũ trồng cạn biện pháp phòng chống NXB Nông nghiệp Hà Nội Giang N V., Cảnh N X & Phùng Thị Lệ Quyên N (2019) Kết khảo sát ảnh hưởng số yếu tố môi trường nuôi cấy in vitro tới khả kháng nấm Neoscytalidium dimidiatum chủng Bacillus velezensis YMĐ1 Tạp chì Khoa học Cơng nghệ Việt Nam (2B): 42 Hiếu N M & Ctv (2003) Giáo trính công nghiệp Nhà xuất Nông nghiệp Hà Nội Lê Lương Tề (1997) Ảnh hưởng số yếu tố sinh thái bệnh héo rũ vi khuẩn hại lạc vùng đất bạc màu trung du Bắc Tạp chì Bảo vệ Thực vật số 4: – Lê Lương Tề & Vũ Triệu Mân (1998) Bệnh nông nghiệp NXB Nông nghiệp Hà Nội Lê Văn Chánh (2012) Bài giảng lạc Đại học Nông Lâm Huế Lê Xuân Phương (2008) Vi sinh vật học môi trường ĐH Bách Khoa Đà Nẵng Lê L.T (Ed) (1977) Bệnh nông nghiệp Nông nghiệp, Hà Nội 10 Lương Đức Phẩm (2004) Công nghệ vi sinh NXB Nông nghiệp Hà Nội 11 Ngô Thế Dân (2000) Kỹ thuật đạt suất lạc cao Việt Nam NXB Nông nghiệp Hà Nội 71-95 12 Nguyễn Hữu Đồng, Việt N T., Hằng Đ T T., Hùng P Đ., Lịch N Q & Duân T H (2019) Khả nitrit hóa amoni chủng vi khuẩn Pseudomonas Aeruginosa HT1 phân lập từ nước thải sau biogas trang trại chăn nuôi lợn Hà Tĩnh Hue University Journal of Science: Agriculture and Rural Development 128(3C): 119–132 13 Nguyễn Lân Dũng (2010) Vi sinh vật học NXB Giáo dục Việt Nam 42 14 Nguyễn Minh Hiếu (2003) Giáo trính cơng nghiệp NXB Nơng nghiệp Hà Nội 301-322 15 Nguyễn Văn Giang, Phùng Thị Lệ Quyên & Nguyễn Văn Thành (2018) Đặc điểm sinh học chủng vi khuẩn đối kháng nấm Neoscytalidium dimiatum gây bệnh đốm nây long Tạp chì Khoa học Cơng nghệ Nông nghiệp Việt Nam 10(95) 16 Phạm Văn Ty (2006) Công nghệ sinh học -Công nghệ vi sinh môi trường NXB Giáo dục, TP HCM 17 Tài liệu đào tạo nghề (2012) Kỹ thuật lạc (dùng cho trính độ tháng) Trường Trung học Nông nghiệp PTNT Quảng Trị Sở Nông nghiệp PTNT Quảng Trị 18 Tuấn T Q & Trần Quang Lợi (2006) Cây đậu phụng kỹ thuật trồng thâm canh Nhà xuất Nơng nghiệp Thành phố Hồ Chì Minh 19 Trang T T., Nguyệt N T Á., Đức N T., Hoàng P N Đ & Xô D H (2020) Phân lập tuyển chọn chủng vi khuẩn thuộc nhóm Bacillus subtilis có khả đối kháng tốt với nấm Colletotrichum scovillei gây bệnh thán thư ớt Thành phố Hồ Chì Minh Tạp chì khoa học đại học mở thành phố Hồ Chì Minh- Kỹ thuật cơng nghệ 15(1): 72-86 20 Ưng Định & Đặng Phú (1999) Kinh nghiệm thâm canh tăng suất lạc NXB Nông thôn 21 Yen N N T & Xuân M T T (2016) Phân lập tuyển chọn vi khuẩn từ đất vùng rễ ớt có khả đối kháng với nấm Colletotrichum sp gây bệnh thán thư ớt Tạp chì Khoa học Trường Đại học Cần Thơ (47): 16-23 Tiếng Anh: 22 Abdulkadir, Musliu & Waliyu S (2012) Screening and isolation of the soil bacteria for ability to produce antibiotics European Journal of Applied Sciences 4(5): 211-215 23 Gorbet D & Shokes F (2002) Registration of Florida MDR 98'peanut (Registrations Of Cultivars) Crop science 42(6): 2207-2209 24 Gorbet D & Tillman B (2009) Registration of ‗Florida-07‘peanut Journal of Plant Registrations 3(1): 14-18 25 Kumar K V K., Reddy M., Kloepper J., Lawrence K., Yellareddygari S., Zhou X., Sudini H., Reddy E S., Groth D & Miller M (2011) Screening and selection of elite 43 plant growth promoting rhizobacteria (PGPR) for suppression of Rhizoctonia solani and enhancement of rice seedling vigor J Pure Appl Microbiol 5(2): 1-11 26 Kumari P., Bishnoi S K & Chandra S (2021) Assessment of antibiosis potential of Bacillus sp against the soil-borne fungal pathogen Sclerotium rolfsii Sacc.(Athelia rolfsii (Curzi) Tu & Kimbrough) Egyptian Journal of Biological Pest Control 31(1): 1-11 27 Lacey L A., Frutos R., Kaya H & Vail P (2001) Insect pathogens as biological control agents: they have a future? Biological control 21(3): 230-248 28 Le C., Kruijt M & Raaijmakers J (2012) Involvement of phenazines and lipopeptides in interactions between Pseudomonas species and Sclerotium rolfsii, causal agent of stem rot disease on groundnut Journal of applied microbiology 112(2): 390-403 29 Li Y., He F., Lai H & Xue Q (2017) Mechanism of in vitro antagonism of phytopathogenic Scelrotium rolfsii by actinomycetes European journal of plant pathology 149(2): 299-311 30 Lorito M., Woo S L., Harman G E & Monte E (2010) Translational research on Trichoderma: from'omics to the field Annual review of Phytopathology 48: 395-417 31 Manjunatha H., Naik M., Patil M., Lokesha R & Vasudevan S (2012) Isolation and characterization of native fluorescent pseudomonads and antagonistic activity against major plant pathogens Karnataka Journal of Agricultural Sciences 25(3) 32 Mehan V., Mayee C & Mcdonald D (1994) Management of Sclerotium rolfsii‐ caused stem and pod rots of groundnut—A critical review 33 Moulin L., Munive A., Dreyfus B & Boivin-Masson C (2001) Nodulation of legumes by members of the β-subclass of Proteobacteria Nature 411(6840): 948-950 34 Ongena M & Jacques P (2008) Bacillus lipopeptides: versatile weapons for plant disease biocontrol Trends in microbiology 16(3): 115-125 35 Podile A R & Kishore G K (2007) Plant growth-promoting rhizobacteria Plantassociated bacteria Springer: 195-230 36 Punja Z K (1985) The biology, ecology, and control of Sclerotium rolfsii Annual review of Phytopathology 23(1): 97-127 44 37 Raaijmakers J M., Paulitz T C., Steinberg C., Alabouvette C & Moënne-Loccoz Y (2009) The rhizosphere: a playground and battlefield for soilborne pathogens and beneficial microorganisms Plant and soil 321(1): 341-361 38 Rakh R., Raut L., Dalvi S & Manwar A (2011) Biological control of Sclerotium rolfsii, causing stem rot of groundnut by Pseudomonas cf monteilii Recent Research in science and Technology 3(3): 26-34 39 Ramkumar B., Nampoothiri K., Sheeba U., Jayachandran P., Sreeshma N., Sneha S., Meenakumari K & Sivaprasad P (2015) Exploring Western Ghats microbial diversity for antagonistic microorganisms against fungal phytopathogens of pepper and chickpea Journal of BioScience & Biotechnology 4(2) 40 Safni I & Antastia W (2018) In vitro antagonism of five rhizobacterial species against athelia rolfsii collar rot disease in soybean Open Agriculture 3(1): 264-272 41 Tu C & Kimbrough J (1978) Systematics and phylogeny of fungi in the Rhizoctonia complex Botanical Gazette 139(4): 454-466 42 Waard M., Georgopoulos S., Hollomon D., Ishii H., Leroux P., Ragsdale N & Schwinn F (1993) Chemical control of plant diseases: problems and prospects Annual review of Phytopathology 31(1): 403-421 43 Wang X., Li Q., Sui J., Zhang J., Liu Z., Du J., Xu R., Zhou Y & Liu X (2019) Isolation and characterization of antagonistic bacteria Paenibacillus jamilae HS-26 and their effects on plant growth BioMed Research International 2019 44 Živković S., Stojanović S., Ivanović Ž., Gavrilović V., Popović T & Balaž J (2010) Screening of antagonistic activity of microorganisms against Colletotrichum acutatum and Colletotrichum gloeosporioides Archives of Biological Sciences 62(3): 611-623 Website: 45.https://npkdinhvu.com.vn/vi/tin-tuc-su-kien/phan-bon-va-ky-thuat-trong-cay/64quy-trinh-gieo-trong-va-cham-soc-cay-lac 46 http://www.phanbonsongma.vn/benh-dom-la-lac-va-bien-phap-phong-tru-hieuqua nd.972.html 47.http://phanbonsongma.vn/benh-heo-ru-goc-moc-trang-thoi-than-va-bien-phapphong-tru-benh-hieu-qua nd.984.html 45 48.https://www.fao.org/faostat/en/#home 49.https://www.gso.gov.vn/nong-lam-nghiep-va-thuy-san/ 46 PHỤ LỤC Phụ lục Bảng hình thái khuẩn lạc 57 chủng phân lập STT Ký hiệu chủng H0.2 H1 H3 H4 H5 H6 H7 H8 H9 10 H10 11 12 H11 H12 13 H13 14 H14 15 16 H15 H17.1 17 H17.2 18 H18 19 20 H19.1 H19.2 Hình thái khuẩn lạc Trắng đục, mép gợn sóng, bóng, lồi, kìch thước bính thường, hính trịn Trắng đục, mép gợn sóng trong, phẳng, nhân nhăn, kìch thước bính thường, hính trịn Cam trong, mép ngun, bóng, lồi, kìch thước nhỏ, hính trịn Vàng, mép ngun, bóng, lồi, kìch thước bính thường, hính trịn Trắng đục, mép ngun, bóng, lồi, kìch thước bính thường, hính trịn Cam trong, mép ngun, phẳng, bóng, nhân cam đậm, kt bính thường, hính trịn Hồng, mép ngun, viền trong, phẳng, kìch thước bính thường, hính trịn Vàng đục, mép ngun, phẳng, kìch thước bính thường, hính trịn Vàng, mép ngun, lồi có mấu giữa, kìch thước nhỏ, híng trịn Trắng đục, mép ngun, lồi, bóng, kìch thước lớn, hính trịn Hồng, mép ngun, bóng, lồi, kt bính thường, hính trịn Hồng, mép ngun, nhân nhăn, kt lớn, hính trịn Vàng, mép gợn sóng, phẳng, nhân vàng đục, kìch thước nhỏ, hính trịn Trắng trong, mép ngun, nhân trắng đục, kìch thước bính thường, hính trịn Trắng ngà, mép ngun, lồi, nhân trắng đục, kìch thước lớn, hính trịn Vàng nhạt, mép gợn sóng, phẳng, bóng, kìch thước lớn Vàng nhạt, mép ngun, phẳng, bóng, kìch thước nhỏ, hính trịn Trắng ngà, mép gợn sóng,phẳng, kìch thước lớn, hính trịn Vàng nhạt, mép ngun, bóng, phẳng, kìch thước bính thường, hính trịn Trắng đục, mép gợn sóng, phẳng, kìch thước lớn,hính 47 21 H20.1 22 H20.2 23 H20.3 24 H21 25 H22 26 H25 27 H26 28 H27 29 30 31 32 PL1 PL2 PL3 PL4 33 PL5 34 PL6.2 35 PL7.1 36 PL8 37 PL9.1 38 PL9.2 39 40 PL10 PL12 41 PL13 42 43 PL14 PL15 tròn Trắng ngà, mép gợn, bóng, phẳng, kìch thước bính thường, hính trịn Trắng ngà, mép gợn sóng, nhăn giữa, kìch thước bính thường, hính trịn Trắng trong,mép ngun, phẳng, nhân tìm nhạt nhăn, kìch thước khơng đều, hính trịn Vàng nhạt, mép ngun, bóng, phẳng, kìch thước khơng đều, hính trịn Vàng nhạt, mép ngun, lồi, kìch thước bính thường, hính trịn Trắng ngà, mép gợn sóng, phẳng, kìch thước lớn, hính trịn Vàng nhạt, mép gợn sóng, lồi, bóng, nhân nhăn, kìch thước lớn, hính trịn Trắng ngà, mép gợn sóng, phẳng, nhăn, kìch thước lớn, hính trịn Trắng ngà, lồi, mép ngun trong, nhân vàng đục,kìch thước bính thường, hính trịn Trắng đục, mép ngun, kìch thước nhỏ, lồi Vàng, mép nguyên, phẳng, hính quay Vàng, mép nguyên, lồi, hính trịn Vàng nhạt, mép ngun, bóng, lồi, kìch thước bé, hính trịn Trắng trong, mép gợn sóng, nhăn viền, kìch thước bính thường, hính trịn Vàng nhạt, mép ngun, bóng, lồi , nhân trắng, kìch thước khơng đều, hính trịn Trắng đục, mép ngun, phẳng, kìch thước bé, hính trịn Trắng trong, mép ngun, lồi, bọng nước,nhân có mấu trắng đục, kìch thước khơng đều, hính trịn Trắng trong, mép ngun, lồi, bọng nước, nhân có mấu, kìch thước bính thường, hính trịn Trắng đục, bóng, nhớt, có mấu giữa, kt khơng đều, hính trịn Trắng trong, mép ngun, phẳng, kìch thước nhỏ Vàng, mép ngun, bóng, lồi, nhân màu vàng đậm, kìch thước khơng đều, hính trịn Trắng ngà, mép ngun,phẳng, kìch thước nhỏ, hính trịn Cam trong, mép nguyên, lồi, bóng, nhân cam đậm, kt 48 44 PL16 45 PL17 46 PL18 47 PL19 48 PL20 49 PL21 50 PL22 51 PL23 52 53 54 55 56 57 CG1 CG4 CG5 CG2 CG3 CG6 nhỏ, hính trịn Trắng trong, mép ngun, bóng, phẳng, kìch thước bính thường Trắng ngà, mép nguyên, phẳng,nhân trắng đục, kìch thước khơng đều, hính trịn Trắng đục, mép gợn sóng, phẳng, nhân trắng ngà, kìch thước lớn,hính trịn Vàng đục, mép ngun, phẳng, kìch thước lớn, hính trịn Vàng nhạt, mép gợn sóng, nhân nhăn vàng đục, kìch thước lớn Trắng đục,mép ngun, phẳng, nhân màu vàng, kìch thước bính thường, hính trịn Vàng nhạt, mép ngun, bóng, lồi, kt khơng đều, hính quay Trắng đục, mép nguyên, phẳng, viền lồi, hính trịn Trắng ngà, mép ngun, phẳng, nhân nhăn, kìch thước bính thường, hính trịn Trắng đục, ría gợn sóng, nhăn lồi có mấu Trắng trong, viền trắng đục, nhăn lồi Trắng đục, nhân vàng, mép nguyên, kìch thước to Vàng nhạt, nhân vàng đậm, mép nguyên Trắng đục, ría gợn sóng, có màu tìm 49 Phụ lục Một số hình ảnh sàng lọc đối kháng 50 51 52