Phân lập, tuyển chọn và định danh một số chủng vi khuẩn có khả năng phân giải kẽm và kích thích sinh trưởng thực vật từ đất vùng rễ lúa

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC - - KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN VÀ ĐỊNH DANH MỘT SỐ CHỦNG VI KHUẨN CÓ KHẢ NĂNG PHÂN GIẢI KẼM VÀ KÍCH THÍCH SINH TRƯỞNG THỰC VẬT TỪ ĐẤT VÙNG RỄ LÚA HÀ NỘI - 2022 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC - - KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN VÀ ĐỊNH DANH MỘT SỐ CHỦNG VI KHUẨN CĨ KHẢ NĂNG PHÂN GIẢI KẼM VÀ KÍCH THÍCH SINH TRƯỞNG THỰC VẬT TỪ ĐẤT VÙNG RỄ LÚA Sinh viên thực hiện: NGUYỄN THỊ QUỲNH Khoa: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MSV: 637166 Lớp: K63CNSHB Giảng viên hướng dẫn: PGS TS NGUYỄN VĂN GIANG HÀ NỘI - 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan, đề tài “Phân lập, tuyển chọn định danh số chủng vi khuẩn có khả phân giải kẽm kích thích sinh trưởng thực vật từ đất vùng rễ lúa” tiến hành nghiên cứu thực Bộ môn Công nghệ Vi sinh – Khoa Công nghệ Sinh học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam Số liệu kết nghiên cứu trung thực chưa công bố cơng trình nghiên cứu khoa học nước quốc tế Các tài liệu tham khảo trích dẫn cơng khai ghi rõ nguồn gốc Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực khoá luận cảm ơn Tôi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Sinh viên Nguyễn Thị Quỳnh i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành khố luận tốt nghiệp Bộ mơn Cơng nghệ Vi sinh – Khoa Công nghệ Sinh học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam, nhận hướng dẫn, bảo tận tình q thầy/cơ giáo ngồi mơn Tơi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Khoa Công nghệ Sinh học, PGS TS Nguyễn Xn Cảnh – Trưởng Khoa tồn thầy/cơ giáo, cán giảng viên khoa tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành khố luận Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc chân thành đến PGS TS Nguyễn Văn Giang tận tình hướng dẫn, dành nhiều thời gian, công sức dạy bảo, truyền cho nguồn tri thức quý giá cảm hứng đam mê nghiên cứu khoa học để tơi hồn thành tốt khố luận Trong khoảng thời gian khó khăn ảnh hưởng đại dịch Covid-19 cảm ơn thầy quan tâm, giúp đỡ kịp thời động viên Tôi xin cảm ơn anh chị, bạn bè thực nghiên cứu khoa học Bộ môn Công nghệ Vi sinh động viên, hỗ trợ cổ vũ tinh thần giúp tơi hồn thành tốt khố luận Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến bố mẹ tơi ln chỗ dựa vững chắc, ủng hộ, tạo động lực điều kiện tốt cho suốt trình học tập nghiên cứu Một lần nữa, xin chân thành cảm ơn Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Sinh viên Nguyễn Thị Quỳnh ii TÓM TẮT Trong nghiên cứu này, mẫu đất vùng rễ lúa thu hai xã Yên Sơn xã Phượng Cách, huyện Quốc Oai, Hà Nội phân lập, tuyển chọn năm chủng vi khuẩn HZ 1.1, HZ 2.11, HZ 3.6, HZ 4.2 HZ 6.9 có khả phân giải kẽm tốt đồng thời biểu số đặc tính kích thích sinh trưởng trồng khả phân giải phosphate, sinh tổng hợp IAA, sinh siderophore tổng số 26 chủng vi khuẩn phân lập Năm chủng vi khuẩn sinh trưởng phân giải kẽm tốt điều kiện môi trường nuôi cấy nhiệt độ 30 oC, pH – sử dụng tốt nguồn carbon: glucose, lactose nguồn nitơ: (NH4)2SO4, peptone Đánh giá ảnh hưởng chủng vi khuẩn tuyển chọn đến tỷ lệ nảy mầm, khả sinh trưởng sinh khối giống lúa TBR225 Kết quả, chủng vi khuẩn HZ 4.2 có ảnh hưởng tốt đến tỷ lệ nảy mầm tiêu sinh trưởng giống lúa TBR225 (20 ngày): chiều cao cây, chiều dài rễ, số lá, số rễ khối lượng Kết hợp nghiên cứu đặc điểm sinh lý, hoá sinh so sánh, phân tích trình tự nucleotide 16S rRNA năm chủng vi khuẩn HZ 1.1, HZ 2.11, HZ 3.6, HZ 4.2 HZ 6.9 với trình tự nucleotide GenBank (https://www.ncbi.ncbi.gov/) cho thấy chủng vi khuẩn có quan hệ họ hàng gần gũi với chủng Klebsiella pneumoniae (98,51%), Acinetobacter sp (98,79%), Cytobacillus firmus (99,40%), Pseudomonas flourescens (99,64%) Klebsiella pneumoniae (99,84%) đặt tên Klebsiella pneumoniae HZ1.1, Acinetobacter sp HZ2.11, Cytobacillus firmus HZ3.6, Pseudomonas flourescens HZ4.2, Klebsiella pneumoniae HZ6.9 iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii TÓM TẮT iii MỤC LỤC iv DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH viii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT x PHẦN I: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích đề tài 1.3 Ý nghĩa đề tài PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Kẽm 2.1.1 Lịch sử nghiên cứu kẽm 2.1.2 Vai trò kẽm 2.2 Vi sinh vật phân giải kẽm 2.3 Vi sinh vật kích thích sinh trưởng trồng 2.4 Giới thiệu sơ lược lúa PHẦN III: VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 3.1 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 12 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 12 3.1.2 Dụng cụ, thiết bị thiết bị nghiên cứu 12 3.1.3 Hoá chất 12 3.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 13 3.2.1 Thời gian nghiên cứu 13 3.2.2 Địa điểm nghiên cứu 13 3.3 Nội dung nghiên cứu 13 3.4 Phương pháp nghiên cứu 14 iv 3.4.1 Phương pháp thu thập mẫu đất 14 3.4.2 Phương pháp phân lập, làm giữ giống 14 3.4.3 Khảo sát khả phân giải Phosphate 16 3.4.4 Khảo sát khả sinh Indole acetic acid (IAA) 16 3.4.5 Khảo sát khả sinh Siderophore 17 3.4.6 Khảo sát ảnh hưởng số điều kiện nuôi cấy đến khả phân giải kẽm chủng vi khuẩn tuyển chọn 17 3.4.7 Khảo sát ảnh hưởng nguồn chất khác đến khả phân giải kẽm chủng vi khuẩn tuyển chọn 18 3.4.8 Đánh giá ảnh hưởng chủng vi khuẩn tuyển chọn đến khả nảy mầm, sinh trưởng sinh khối lúa 18 3.4.9 Phương pháp xác định đặc điểm hình thái đặc tính sinh học chủng vi khuẩn tuyển chọn 21 3.5.10 Định danh số chủng vi khuẩn tuyển chọn phương pháp giải trình tự đoạn nucleotide 16S rRNA 25 PHẦN IV: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 4.1 Kết phân lập tuyển chọn chủng vi khuẩn có khả phân giải kẽm 27 4.2 Xác định hoạt tính phân giải kẽm chủng vi khuẩn 28 4.3 Khảo sát khả sinh Indole acetic acid (IAA) chủng vi khuẩn 31 4.3 Khảo sát khả phân giải Phosphate chủng vi khuẩn 34 4.4 Khảo sát khả sinh Siderophore chủng vi khuẩn 36 4.5 Khảo sát ảnh hưởng số điều kiện nuôi cấy đến khả phân giải kẽm chủng vi khuẩn tuyển chọn 37 4.5.1 Ảnh hưởng nhiệt độ 37 4.5.2 Ảnh hưởng pH 38 4.5.3 Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy chủng vi khuẩn 39 4.6 Khảo sát ảnh hưởng nguồn chất khác đến khả phân giải kẽm chủng vi khuẩn tuyển chọn 40 4.6.1 Ảnh hưởng nguồn Carbon 40 4.6.2 Ảnh hưởng nguồn Nitơ 41 v 4.7 Đánh giá ảnh hưởng số chủng vi khuẩn tuyển chọn đến tỷ lệ nảy mầm khả sinh trưởng sinh khối giống lúa TBR225 42 4.8 Phương pháp xác định đặc điểm hình thái đặc tính sinh học chủng vi khuẩn tuyển chọn 45 4.9 Định danh số chủng vi khuẩn tuyển chọn phương pháp giải trình tự đoạn nucleotide 16S rRNA 47 4.9.1 Tách chiết DNA 47 4.9.2 Kết PCR 48 4.9.3 Kết giải trình tự nucleotide 16S rRNA 48 PHẦN V: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 54 5.1 Kết luận 54 5.2 Kiến nghị 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO 55 PHỤ LỤC 60 vi DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Kết phân lập, sàng lọc chủng vi khuẩn có khả phân giải kẽm .27 Bảng 4.2 Hiệu chủng vi khuẩn tuyển chọn đến tỷ lệ nảy mầm, sinh trưởng sinh khối giống lúa TBR225 (20 ngày) 43 Bảng 4.3 Các đặc điểm hình thái tế bào, hình thái khuẩn lạc chủng vi khuẩn tuyển chọn .45 Bảng 4.4 Một số đặc điểm sinh lý, hoá sinh chủng vi khuẩn tuyển chọn 46 Bảng 4.5 Kết đo nồng độ DNA chủng vi khuẩn 47 vii DANH MỤC HÌNH Hình 3.1 Hình ảnh định vị GPS địa điểm thu thập mẫu 12 Hình 3.2 Giống lúa TBR225 19 Hình 4.1 Hình ảnh phân lập chủng vi khuẩn có khả phân giải kẽm 28 Hình 4.2 Vịng phân giải kẽm chủng vi khuẩn phân lập 28 Hình 4.3 Diện tích vịng phân giải kẽm chủng vi khuẩn phân lập 29 Hình 4.4 Hiệu suất kẽm hoà tan chủng vi khuẩn 30 Hình 4.5 Khả sinh tổng hợp chủng vi khuẩn phân lập 32 Hình 4.6 Hàm lượng IAA sinh từ chủng vi khuẩn phân lập 33 Hình 4.7 Vịng phân giải phosphate chủng vi khuẩn phân lập 35 Hình 4.8 Khả phân giải phosphate chủng vi khuẩn phân lập 35 Hình 4.9 Khả sinh Siderophore chủng vi khuẩn phân lập 36 Hình 4.10 Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả phân giải kẽm chủng vi khuẩn tuyển chọn 38 Hình 4.11 Ảnh hưởng pH đến khả phân giải kẽm chủng vi khuẩn tuyển chọn 39 Hình 4.12 Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy đến khả phân giải kẽm chủng vi khuẩn tuyển chọn 40 Hình 4.13 Ảnh hưởng nguồn carbon khác đến khả phân giải kẽm chủng vi khuẩn tuyển chọn 41 Hình 4.14 Ảnh hưởng nguồn nitơ khác đến khả phân giải kẽm chủng vi khuẩn tuyển chọn 42 Hình 4.15 Hiệu chủng vi khuẩn tuyển chọn đến giống lúa TBR225 (20 ngày) 43 Hình 4.16 DNA tổng số năm chủng vi khuẩn tuyển chọn 47 Hình 4.17 Kết sản phẩm PCR mẫu DNA tách từ chủng vi khuẩn 48 Hình 4.18 Kết search Blast trình tự nucleotide 16S rRNA chủng vi khuẩn Klebsiella pneumoniae HZ 1.1 GenBank 49 viii vi khuẩn Pseudomonas flourescens HZ 4.2 GenBank Hình 4.22 Kết search Blast trình tự nucleotide 16S rRNA chủng vi khuẩn Klebsiella pneumoniae HZ 6.9 GenBank Dự đoán sâu thực cách xây dựng phát sinh loài Cây phát sinh loài xây dựng dựa trình tự 16S rRNA phương pháp “Maximum Parsimony” với giá trị Boostrap 1000 phần mềm MEGA-X Đây phương pháp xây dựng phát sinh lồi dựa phân tích ký tự, khơng đưa chiều dài nhánh mà đưa trật nhánh giá trị boostrap tương ứng Kết phân tích chủng vi khuẩn Klebsiella pneumoniae HZ 1.1 thể hình sau (Hình 4.23) Hình 4.23 Cây phát sinh chủng loại chủng vi khuẩn Klebsiella pneumoniae HZ 1.1 dựa trình tự nucleotide 16S rRNA 51 Hình 4.24 Cây phát sinh chủng loại chủng vi khuẩn Acinetobacter sp HZ 2.11 dựa trình tự nucleotide 16S rRNA Hình 4.25 Cây phát sinh chủng loại chủng vi khuẩn Cytobacillus firmus HZ 3.6 dựa trình tự nucleotide 16S rRNA Hình 4.26 Cây phát sinh chủng loại chủng vi khuẩn Pseudomonas flourescens HZ 4.2 dựa trình tự nucleotide 16S rRNA Hình 4.27 Cây phát sinh chủng loại chủng vi khuẩn Klebsiella pneumoniae HZ 6.9 dựa trình tự nucleotide 16S rRNA Cây phát sinh chủng loại hình thành nhánh thể mối quan hệ loài với nhau, nút thể giá trị bootstrap tương ứng Giá trị 52 bootstrap lớn 70% số lần lặp lại coi có giá trị thống kê cao 95% Chủng vi khuẩn Klebsiella pneumoniae HZ 1.1 hình thành nhánh với chủng Klebsiella pneumoniae F16KP0038 với giá trị bootstrap cao 100 nằm khoảng tin cậy Ba chủng vi khuẩn Acinetobacter sp HZ 2.11, Cytobacillus firmus HZ 3.6 Pseudomonas flourescens HZ 4.2 có giá trị bootstrap cao 70 hình thành nhánh với chủng vi khuẩn Acinetobacter sp A2-1, Cytobacillus Pseudomonas flourescens S181R 53 firmus BSRNA4 PHẦN V: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Năm chủng vi khuẩn Klebsiella pneumoniae HZ1.1, Acinetobacter sp HZ2.11, Cytobacillus firmus HZ3.6, Pseudomonas flourescens HZ4.2, Klebsiella pneumoniae HZ6.9 tuyển chọn tổng số 26 chủng vi khuẩn phân lập từ đất vùng rễ lúa nghiên cứu có khả phân giải kẽm khó tan cao với diện tích vịng phân giải kẽm đạt 0,79 – 2,27 cm2, hiệu suất kẽm hoà tan đạt 433,33 – 600% Điều kiện tối ưu để chủng vi khuẩn phân giải kẽm tốt môi trường ZnSB 30 oC dải pH – sau 20 ngày nuôi cấy, sử dụng tốt nguồn carbon: glucose, lactose nguồn nitơ: (NH4)2SO4, peptone Trong nghiên cứu này, chủng vi khuẩn Pseudomonas flourescens HZ4.2 có khả kích thích sinh trưởng thực vật với thông số đánh giá ảnh hưởng chủng đến tỷ lệ nảy mầm, khả sinh trưởng sinh khối giống lúa TBR225 Chủng vi khuẩn Pseudomonas flourescens HZ4.2 có có khả làm tăng tỷ lệ nảy mầm tốt đạt 98,67%, đồng thời chủng có tiêu sinh trưởng sinh khối giống lúa TBR225 tốt sau 20 ngày theo dõi 5.2 Kiến nghị - Khảo sát khả chịu mặn chủng vi khuẩn tuyển chọn - Khảo sát khả đối kháng chủng vi khuẩn tuyển chọn với số chủng nấm gây bệnh hại trồng 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Nguyễn Thị Dơn, Nguyễn Thị Kiều Diễm & Cao Ngọc Diệp (2012) Phân lập nhận diện vi khuẩn hoà tan Lân Kali từ mẫu vật liệu phong hoá đá Hoa Cương núi Sập, tỉnh An Giang Trường Đại học Cần Thơ Tạp chí Khoa học 24a: 179-186 Trần Võ Hải Đường, Đào Thị The & Nguyễn Khởi Nghĩa (2018) Đánh giá hiệu năm dịng vi khuẩn hịa tan khống silic phân lập lên tỉ lệ nảy mầm, sinh trưởng sinh khối lúa điều kiện có khơng bổ sung NaCl Can Tho University, Journal of Science 54(Nông nghiệp): 227 Nguyễn Văn Giang, Trần Thị Huế & Phạm Thị Quỳnh (2019) Phân lập tuyển chọn chủng vi nấm có khả phân giải kẽm từ đất trồng lúa Tạp chí Khoa học Cơng nghệ 36-41 Trương Thị Minh Hạnh, Nguyễn Thị Minh Nguyệt, Văn Hà Vy & Võ Viết Lai (2016) Research on process of isolating, identifying, and selecting bacillus subtilis natto that can synthesize nattokinase enzyme from natto products Tạp chí Khoa học Công nghệ-Đại học Đà Nẵng 73-77 Nguyễn Anh Huy & Nguyễn Hữu Hiệp (2018) Phân lập nhận diện dịng vi khuẩn chịu mặn có khả cố định đạm tổng hợp IAA từ đất sản xuất lúa - tơm Bạc Liêu, Sóc Trăng Kiên Giang Can Tho University Journal of Science 54(1): Nguyễn Hoàng Nhựt Lynh & Nguyễn Hữu Hiệp (2019) Tuyển chọn vi khuẩn có khả cố định đạm, hịa tan lân, tổng hợp IAA nội sinh cà phê vối (Coffea canephora Pierre ex A froehner) trồng tỉnh Đắk Lắk Can Tho University Journal of Science 55(Công nghệ Sinh học): 34 Nguyễn Thị Phương Oanh, Trần Bửu Minh & Nguyễn Thị Pha (2013) Phân lập tuyển chọn số dòng vi khuẩn đất vùng rễ lúa có khả cố định đạm tổng hợp IAA Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ (26): 82-88 Lương Đức Phẩm (2004) Công nghệ vi sinh Nhà xuất Nông nghiệp Đặng Thị Ngọc Thanh, Nguyễn Thị Xuân Mỵ & Cao Ngọc Điệp (2016) Sự sản xuất IAA siderophore dòng vi khuẩn liên hiệp thực vật ảnh hưởng lên tăng trưởng bắp (Zea mays L.) trồng chậu Can Tho University Journal of Science 47: 59 10 Bùi Trang Việt (2016) Giáo trình Sinh lý thực vật đại cương Trường Đại học Khoa học Tự nhiên-Đại học Quốc gia TPHCM-lưu hành nội 11 Đỗ Năng Vịnh, Hà Thị Thúy, Lê Quốc Hùng, Dương Ngô Thành Trung & Nguyễn Văn Toàn (2020) Nghiên cứu suất hạt tiềm sinh khối lúa số định hướng ứng dụng Tạp chí Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam, 18(8): 570-479 12 Tiêu chuẩn Việt Nam (2006) Phần I: Hướng dẫn lập chương trình lấy mẫu TCVN 7538-1: 2006 ISO 10381-1: 2002 55 Tài liệu Tiếng Anh 13 Adel Elbeltagy, Kiyo Nishioka, Hisa Suzuki, Tadashi Sato, Yo-Ichiro Sato, Hisao Morisaki, Hisayuki Mitsui & Kiwamu Minamisawa (2000) Isolation and characterization of endophytic bacteria from wild and traditionally cultivated rice varieties Soil science and plant nutrition 46(3): 617-629 14 Agency N.L (2013) Ministry of Economic Affaires Rice straw and Wheat straw Potential feedstocks for the Biobased Economy Netherland Agency, June 2013, Netherlands Programmes Sustainable Biomass Wageningen UR, Food & Biobased Research 15 Al-Khafaji K.A.A., S A Raheem & A M Jwaad (2016) The efficiency of rhizospheric bacteria in solubilization of phosphate-zinc under vitro conditions Iraqi J Agric Res Vol 21(1): 237-245 16 Alloway B.J (2004) Zinc in soils and crop nutrition International Zinc Association Communications Brussels: IZA Publications 17 Alloway Brian J (2008) Znic in soils and crop nutrition Brussels, Belgium and Paris, France 18 Aketi Ramesh, Sushil K Sharma, Mahaveer P Sharma, Namrata Yadav & Om P Joshi (2014) Inoculation of zinc solubilizing Bacillus aryabhattai strains for improved growth, mobilization and biofortification of zinc in soybean and wheat cultivated in Vertisols of central India Applied Soil Ecology 73: 87-96 19 Azhar Hussain, Muhammad Arshad, Zahir Ahmad Zahir & Muhammad Asghar (2015) Prospects of Zinc solubilizing bacteria for enhancing growth of maize Pak J Agri Sci., Vol 52(4): 915-922 20 Azhar Hussain (2015) Efficacy of bio-activated Zn for improving yield and quality of maize, University of Agriculture, Faisalabad-Pakistan, Pakistan 21 Azhar Hussain, Zahir Ahmad Zahir, Allah Ditta, Muhammad Usman Tahir, Maqshoof Ahmad, Muhammad Zahid Mumtaz, Khizar Hayat & Shahzad Hussain (2019) Production and Implication of Bio-Activated Organic Fertilizer Enriched with Zinc-Solubilizing Bacteria to Boost up Maize (Zea mays L.) Production and Biofortification under Two Cropping Seasons Agronomy 10(1): 39 22 Bal H.B., S Das, T K Dangar & T K Adhya (2013) ACC deaminase and IAA producing growth promoting bacteria from the rhizosphere soil of tropical rice plants J Basic Microbiol 53(12): 972-84 23 Bhatt K & D K Maheshwari (2019) Decoding multifarious role of cow dung bacteria in mobilization of zinc fractions along with growth promotion of C annuum L Sci Rep 9(1): 14232 24 Bhatt K & D K Maheshwari (2020) Zinc solubilizing bacteria (Bacillus megaterium) with multifarious plant growth promoting activities alleviates growth in Capsicum annuum L Biotech 10(2): 36 25 Benhard Schwyn & J B Neilands (1987) Universal Chemical Assay for the Detection and Determination of Siderophores Analytical Biochemistry 160: 47-56 56 26 Bernard R Glick (2012) Plant growth-promoting bacteria: mechanisms and applications Scientifica 27 Bunt JS & AD Rovira (1955) Microbiological studies of some subantarctic soils Journal of Soil Science 6(1): 119-128 28 Claudia Schubert, Karina Guttek, Annegret Reinhold, Kurt Gruengreiff & Dirk Reinhold (2015) The influence of the trace element zinc on the immune system LaboratoriumsMedizin 39(s1) 29 Deepak Joshi, Geeta Negi, Sachin Vaid & Anita Sharma (2013) Enhancement of wheat growth and Zn content in grains by zinc solubilizing bacteria International Journal of Agriculture, Environment and Biotechnology 6(3): 363-370 30 Dinesh R., V Srinivasan, S Hamza, C Sarathambal, S J Anke Gowda, A N Ganeshamurthy, S B Gupta, V Aparna Nair, K P Subila, A Lijina & V C Divya (2018) Isolation and characterization of potential Zn solubilizing bacteria from soil and its effects on soil Zn release rates, soil available Zn and plant Zn content Geoderma 321: 173-186 31 FAO Joint (2004) Vitamin and mineral requirements in human nutrition Diamond Pocket Books (P) 32 Fatemeh Hashemnejad, Mohsen Barin, Maryam Khezri, Youbert Ghoosta & Edith C Hammer (2021) Isolation and Identification of Insoluble Zinc-Solubilising Bacteria and Evaluation of Their Ability to Solubilise Various Zinc Minerals Journal of Soil Science and Plant Nutrition 21(3): 2501-2509 33 Fageria N.K, VC Baligar & RB Clark (2002) Micronutrients in crop production Advances in agronomy 77: 185-268 34 Faisal Mehmood Mirza, Noshaba Najam, Mubashir Mehdi & Burhan Ahmad (2015) Determinants of technical efficiency of wheat farms in Pakistan Pak J Agri Sci 52: 565-570 35 Gandhi A & G Muralidharan (2016) Assessment of zinc solubilizing potentiality of Acinetobacter sp isolated from rice rhizosphere European Journal of Soil Biology 76: 1-8 36 Husna Siddiqui, Priyanka Singh, Yamshi Arif, Fareen Sami, Romana Naaz & Shamsul Hayat (2022) Role of Micronutrients in Providing Abiotic Stress Tolerance In: Microbial Biofertilizers and Micronutrient Availability Springer: 115136 pages 37 Iti Gontia-Mishra, Swapnil Sapre & Sharad Tiwari (2017) Zinc solubilizing bacteria from the rhizosphere of rice as prospective modulator of zinc biofortification in rice Rhizosphere 3: 185-190 38 Irum Naz, Habib Ahmad, Shahida Nasreen Khokhar, Khalid Khan & Azhar Hussain Shah (2016) Impact of zinc solubilizing bacteria on zinc contents of wheat Am Euras J Agric Environ Sci 16: 449-454 39 Jason W Kelsey & Martin Alexander (1997) Declining bioavailability and inappropriate estimation of risk of persistent compounds Environmental Toxicology and Chemistry: An International Journal 16(3): 582-585 57 40 Kamran S., I Shahid, D N Baig, M Rizwan, K A Malik & S Mehnaz (2017) Contribution of Zinc Solubilizing Bacteria in Growth Promotion and Zinc Content of Wheat Front Microbiol 8: 2593 41 Kathleen Hefferon (2019) Biotechnological approaches for generating zinc-enriched crops to combat malnutrition Nutrients 11(2): 253 42 Khanghahi M.Y., P Ricciuti, I Allegretta, R Terzano & C Crecchio (2018) Solubilization of insoluble zinc compounds by zinc solubilizing bacteria (ZSB) and optimization of their growth conditions Environ Sci Pollut Res Int 25(26): 2586225868 43 Maqshoof Ahmad, Lisa Pataczek, Thomas H Hilger, Zahir Ahmad Zahir, Azhar Hussain, Frank Rasche, Roland Schafleitner & Svein Ø Solberg (2018) Perspectives of microbial inoculation for sustainable development and environmental management Front Microbiol 2992 44 Muhammad Shakeel, Afroz Rais, Muhammad Nadeem Hassan & Fauzia Yusuf Hafeez (2015) Root associated Bacillus sp improves growth, yield and zinc translocation for basmati rice (Oryza sativa) varieties Front Microbiol 6: 1286 45 Muhammad Abaid-Ullah, Muhammad Nadeem Hassan, Muhammad Jamil, Günter Brader, Muhammad Kausar, Nawaz Shah, Angela Sessitsch & Fauzia Yusuf Hafeez (2015) Plant Growth Promoting Rhizobacteria: An Alternate Way to Improve 46 Nazanin Roohani, Richard Hurrell, Roya Kelishadi & Rainer Schulin (2013) Zinc and its importance for human health: An integrative review J Res Med Sci 18(2): 144-157 47 Nur Maizatul Idayu Othman, Radziah Othman, Halimi Mohd Saud & Puteri Edaroyati Megat Wahab (2017) Effects of root colonization by zinc-solubilizing bacteria on rice plant (Oryza sativa MR219) growth Agriculture and Natural Resources 51(6): 532-537 48 Robin D Graham (2008) Micronutrient Deficiencies in Crops and Their Global Significance Springer, New York 41-61 49 Saravanan V.S., M Madhaiyan & M Thangaraju (2007) Solubilization of zinc compounds by the diazotrophic, plant growth promoting bacterium Gluconacetobacter diazotrophicus Chemosphere 66(9): 1794-8 50 Saravanan V.S., M Rohini Kumar & TM Sa (2011) Microbial zinc solubilization and their role on plants In: Bacteria in agrobiology: plant nutrient management Springer: 47-63 pages 51 Sachin Kumar Vaid, B Kumar, A Sharma, AK Shukla & PC Srivastava (2014) Effect of Zn solubilizing bacteria on growth promotion and Zn nutrition of rice Journal of Soil Science and Plant Nutrition 14(4): 889-910 52 Seema B Sharma, Riyaz Z Sayyed, Mrugesh H Trivedi & and Thivakaran A Gobi (2013) Phosphate solubilizing microbes: sustainable approach for managing phosphorus deficiency in agricultural soils SpringerPlus (2): 587 53 Shams Tabrez Khan (2021) Microbial Biofertilizers and Micronutrient Availability: The Role of Zinc in Agriculture and Human Health Springer Nature 58 54 SŁawomir Tubek (2007) Selected zinc metabolism parameters in premenopausal and postmenopausal women with moderate and severe primary arterial hypertension Biological trace element research 116(3): 249-255 55 Sunithakumari K., S N Padma Devi & S Vasandha (2016) Zinc solubilizing bacterial isolates from the agricultural fields of Coimbatore, Tamil Nadu, India Current science Vol.110(2): 196-205 56 Tavallali, V., Rahemi, M., Eshghi, S., Kholdebarin, B., & Ramezanian, A (2010) Zinc alleviates salt stress and increases antioxidant enzyme activity in the leaves of pistachio (Pistacia vera L.‘Badami’) seedlings Turkish Journal of Agriculture and Forestry, 34(4), 349-359 57 Yasmin R., S Hussain, M H Rasool, M H Siddique & S Muzammil (2021) Isolation, Characterization of Zn Solubilizing Bacterium (Pseudomonas protegens RY2) and its Contribution in Growth of Chickpea (Cicer arietinum L) as Deciphered by Improved Growth Parameters and Zn Content Dose Response 19(3): 15593258211036791 58 Yield and Quality of Wheat (Triticum aestivum) Interational journal of Agriculture & Biology Vol 17(1): 51-60 59 Yiik Siang Hii, Chan Yen San, Shiew Wei Lau & Michael Kobin Danquah (2020) Isolation and characterisation of phosphate solubilizing microorganisms from peat Biocatalysis and Agricultural Biotechnology 26: 101643 60 Zaheer A., A Malik, A Sher, M Mansoor Qaisrani, A Mehmood, S Ullah Khan, M Ashraf, Z Mirza, S Karim & M Rasool (2019) Isolation, characterization, and effect of phosphate-zinc-solubilizing bacterial strains on chickpea (Cicer arietinum L.) growth Saudi J Biol Sci 26(5): 1061-1067 61 Zastrow M.L & V L Pecoraro (2014) Designing hydrolytic zinc metalloenzymes Biochemistry 53(6): 957-78 59 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Ảnh hưởng chủng vi khuẩn tuyển chọn đến tỷ lệ nảy mầm giống lúa TBR225 Phụ lục 2: Thí nghiệm trồng lúa TBR225 đánh giá ảnh hưởng chủng vi khuẩn tuyển chọn đến tỷ lệ nảy mầm, khả sinh trưởng phát triển giống lúa TBR225 (20 ngày) 60 Phụ lục 3: Quan sát hình thái tế bào hình thái khuẩn lạc chủng vi khuẩn tuyển chọn Chủng vi khuẩn HZ 1.1 Hình thái tế bào HZ 2.11 HZ 3.6 HZ 4.2 HZ 6.9 61 Hình thái khuẩn lạc Phụ lục 4: Khả di động chủng vi khuẩn tuyển chọn Phụ lục 5: Khả đồng hoá Citrate chủng vi khuẩn tuyển chọn Phụ lục 6: Khả sinh Catalase Phụ lục 7: Thử nghiệm Methyl chủng vi khuẩn tuyển chọn Red chủng vi khuẩn tuyển chọn Phụ lục 8: Phản ứng Voges Proskauer Phụ lục 9: Khả khử (VP) chủng vi khuẩn tuyển Nitrate chủng vi khuẩn chọn tuyển chọn 62 Phụ lục 10: Đồ thị đường chuẩn IAA Phụ lục 11: Ảnh hưởng pH đến chủng vi khuẩn tuyển chọn pH pH pH pH 63 pH Phụ lục 12: Ảnh hưởng nhiệt độ đến chủng vi khuẩn tuyển chọn 25 oC 30 oC 37 oC 40 oC Phụ lục 13: Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy đến chủng vi khuẩn tuyển chọn 10 ngày 15 ngày 20 ngày Phụ lục 14: Ảnh hưởng nguồn nitơ khác đến chủng vi khuẩn tuyển chọn (NH4)SO4 NH4Cl Peptone KNO3 64 NH4NO3 Phụ lục 15: Ảnh hưởng nguồn carbon khác đến chủng vi khuẩn tuyển chọn Glucose Lactose Dextrin Xylose Maltose Fructose 65