Nghiên cứu phân lập, tuyển chọn chủng nấm beauveria bassiana phòng trừ sâu hại cây trồng

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN CHỦNG NẤM BEAUVERIA BASSIANA PHÕNG TRỪ SÂU HẠI CÂY TRỒNG Thực : NGUYỄN THỊ LAN Mã sinh viên : 637037 Giảng viên hƣớng dẫn : TS BÙI THỊ THU HƢƠNG Khoa CNSH – HVNNVN Cán đồng hƣớng dẫn: ThS Nguyễn Thị Hồng Minh Bộ môn CNVS – VDTNNVN Địa điểm thực : Viện Di Truyền Nông Nghiệp Việt Nam Hà Nội, 2022 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan đề tài tơi Nguyễn Thị Lan làm suốt q trình thực tập, trung thực, nguồn gốc trích rõ ràng Đồng thời đề tài chưa sử dụng để lấy học vị nào, giúp đỡ q trình làm khóa luận cảm ơn Hà Nội, ngày 15 tháng năm 2022 Sinh viên Lan Nguyễn Thị Lan i LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, em xin chân thành cảm ơn đến Học viện nông nghiệp Việt Nam nhận em sinh viên cho em có hội mở mang trí tuệ, học thêm kỹ đời sống thực tế Em xin cảm ơn tới khoa Công nghệ sinh học cho em học hỏi tất lĩnh vực từ vi sinh, sinh học phân tử, nấm đến vấn đề Sinh học Em xin cảm ơn tới môn Sinh học – Học viện Nơng nghiệp Việt Nam cho em có hội để theo đuổi ngành u thích Nhờ dẫn dắt thầy cô anh chị em biết đến Viện di truyền Nơng nghiệp Về phía viện, em xin chân thành cảm ơn cô TS Phạm Thị Lý Thu cho em vào thực tập, làm việc học hỏi thêm môn Công nghệ vi sinh để nắm bắt thực tế Em xin chân thành cảm ơn cô Th.S Nguyễn Thị Hồng Minh, người trực tiếp hướng dẫn, bảo tận tình em hết mức Người cho em nhận xét, kiến thức vơ q báu Có nhiều kiến thức em cịn giới hạn, em mong phía viện nhà trường có ý kiến để giúp đỡ em hoàn thành tốt đợt làm việc thực tế Xin kính chúc tồn thể thầy đầy đủ sức khỏe để dẫn dắt đồn học trị Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 15 tháng năm 2022 Sinh viên lan Nguyễn Thị Lan ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH ẢNH vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vii TÓM TẮT KHÓA LUẬN viii I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu II TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU 2.1 Giới thiệu nấm Beauveria bassiana 2.1.1 Vị trí phân loại 2.1.2 Đặc điểm hình thái 2.2 Đặc điểm nuôi cấy 2.2.1 Môi trường nuôi cấy 2.2.2 Điều kiện nhiệt độ 2.2.3 Điều kiện pH 2.3 Điều kiện phân bố 2.4 Độc tố nấm Beauveria bassiana 2.5 Quá trình nhiễm nấm vào côn trùng 2.5.1 Sự xâm nhập 2.5.2 Sự phát triển nấm tới côn trùng chết 2.6 Triệu chứng côn trùng nhiễm nấm III VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Vật liệu 3.2 Nội dung phương pháp nghiên cứu 12 iii 3.2.1 Phân lập chủng nấm Beaurevia bassiana 12 3.2.2 Định danh chủng nấm Beauveria bassiana ký sinh sâu hại 14 3.2.3 Khảo sát khả phân giải chitin, cellulose chủng vi sinh vật 14 3.2.4 Xác định điều kiện nuôi cấy chủng nấm Beaurevia bassiana ký sinh sâu hại 16 3.2.5 Kiểm tra hoạt lực ký sinh diệt trừ sâu hại chủng nấm trắng Beauveria bassiana tuyển chọn 19 IV KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 20 4.1 Phân lập chủng vi sinh vật ký sinh sâu đục thân 20 4.2 Định danh chủng nấm Beauveria bassiana ký sinh sâu hại 21 4.3 Đánh giá sơ hoạt tính sinh học chủng vi sinh vật ký sinh sâu đục thân 22 4.3.1 Khảo sát khả phân giải chitin chủng vi sinh vật 22 4.3.2 Khảo sát khả phân giải cellulose chủng vi sinh vật 24 4.4 Xác định điều kiện nuôi cấy chủng nấm Beaurevia bassiana ký sinh sâu hại 25 4.4.1 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến sinh trưởng phát triển chủng nấm Beauveria bassiana ký sinh sâu hại 25 4.4.2 Ảnh hưởng nhiệt độ nuôi cấy đến sinh trưởng phát triển chủng nấm Beauveria bassiana ký sinh sâu hại 28 4.4.3 Ảnh hưởng pH môi trường nuôi cấy đến sinh trưởng phát triển chủng nấm Beauveria bassiana ký sinh sâu hại 30 4.5 Kiểm tra hoạt lực ký sinh diệt trừ sâu hại chủng nấm trắng Beauveria bassiana 32 V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 35 5.1 Kết luận 35 5.2 Kiến nghị 35 VI TÀI LIỆU THAM KHẢO 36 PHỤ LỤC 39 iv DANH MỤC BẢNG Bảng Đặc điểm hình thái chủng nấm Beauveria sp AS1 21 Bảng Khả phân giải chitinase chủng vi sinh vật ký sinh côn trùng môi trường CTA sau ngày nuôi cấy 23 Bảng Khả phân giải cellulose chủng vi sinh vật ký sinh côn trùng môi trường CMC sau ngày nuôi cấy 24 Bảng Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến sinh trưởng, phát triển nấm B Bassiana AS1 26 Bảng Ảnh hưởng điều kiện nhiệt độ đến sinh trưởng, phát triển nấm B Bassiana AS1 môi trường PDA 28 Bảng Ảnh hưởng điều kiện pH đến sinh trưởng, phát triển nấm 30 B bassiana AS1 môi trường PDA 30 Bảng Hoạt lực diệt sâu xanh chủng nấm Beauveria sp 33 Bảng Đánh giá mật độ sâu lại sau lây nhiễm chủng nấm Beauveria sp 33 v DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 2.1 Q trình nhiễm nấm vào trùng (Scholte E-J, 2004) Hình 4.1 Chủng nấm trắng phân lập cấy chuyển 20 Hình 4.2 Mẫu AS1 hình ảnh bào tử soi kính hiển vi quang học 22 Hình 4.3.1 Vòng phân giải Chitinase chủng vi sinh vật 23 Hình 4.3.2 Vịng phân giải cellulose chủng vi sinh vật 25 Hình 4.4.1 Ảnh hưởng mơi trường ni cấy đến đường kính tản nấm B Bassiana AS1 mơi trường 27 Hình 4.4.2 Ảnh hưởng nhiệt độ ni cấy đến đường kính tản nấm B Bassiana AS1 môi trường PDA 29 Hình 4.4.3 Ảnh hưởng pH mơi trường đến đường kính tản nấm B Bassiana AS1 môi trường PDA 31 Hình 4.5 Mẫu sâu thử hoạt tính sau ngày 34 vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Giải nghĩa MT Môi trường PDA Potato Dextrose Agar VSV Vi sinh vật CMA Corn meal agar Czaperk Czaperk agar WA Water Agar PCA Potato carrot agar B Beauveria sp Species cs Cộng CT Công thức CFU Colony Forming Units DDT Dichloro diphenytrichloroe thane ĐC Đối chứng μm Micrometres cm2 Centimet vuông mm Millimetre g gam h vii TÓM TẮT KHÓA LUẬN Với đề tài “Nghiên cứu phân lập, tuyển chọn chủng nấm Beauveria bassiana phòng trừ sâu hại trồng”, tiến hành phân lập, tuyển chọn chủng nấm có khả phân giải chitinase cellulose, hoạt lực ký sinh mạnh đồng thời tìm điều kiện để nấm phát triển tốt Từ mẫu thu thập điểm khác Bến Tre, Hà Nam Hà Nội, phương pháp hịa lỗng chúng tơi thu thập chủng vi sinh vật khác Từ tuyển chọn chủng nấm AS1 BNT2 đem đánh giá đặc điểm sinh học thấy rằng: Hai chủng có khả sinh enzyme để phân giải Chitin Cellulose Với điều kiện thích hợp để phát triển sợi nấm môi trường PDA nuôi cấy nhiệt độ 300 pH6 - pH7 là ngưỡng pH phù hợp để sợi đạt kết cao Nghiên cứu đến hoạt lực ký sinh chúng, với chủng nấm Beauveria bassiana AS1 cho thấy tỷ lệ sâu chết cao với 56,67% sau 10 ngày thử nghiệm viii I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Sâu bệnh gây hại mối đe dọa cho sản xuất nông nghiệp Đối với quốc gia dựa nên nơng nghiệp, nguy hại lại nghiêm trọng Chính chúng trở thành đối tượng quan tâm nhiều nghiên cứu khoa học với mong muốn loại trừ loài sâu bệnh gây hại Nước ta nước nhiệt đới khí hậu nóng ẩm, lượng mưa hàng năm lớn, điều kiện thuận lợi cho loại sâu bệnh bùng phát, gây hại cho trồng, dẫn đến tổn thương trồng cao, mà phần lớn sử dụng thuốc hoá học Trên thực tế, phương pháp có hiệu tức thời sử dụng lâu dài dẫn đến tình trạng thối hố đất, nhiễm môi trường dẫn đến kháng thuốc loại sâu bệnh Vì vậy, biện pháp sử dụng vi sinh vật ký sinh diệt trừ sâu hại để sản xuất chế phẩm sinh học giải pháp thiết thực để có nông nghiệp bền vững (Phạm Thị Thùy, 2004; L Ibrahim et al., 1999) Qua nhiều thập kỷ, để diệt sâu bệnh gây hại, người dựa chủ yếu biện pháp hóa học biện pháp đem lại hiệu tối đa Tuy nhiên song song với lợi ích đó, biện pháp hóa học gây xáo trộn hệ sinh thái, làm thối hóa làm nhiễm mơi trường Cao nữa, thuốc hóa học cịn làm tăng tính kháng thuốc sâu hại dư lượng thuốc hóa học tồn đọng thực vật gây tác động xấu đến sức khỏe người Trước thực tế đó, người phải tìm kiếm phương pháp khác vừa hiệu vừa an tồn cho người khơng ô nhiễm môi trường đồng thời không làm cân sinh thái Trên sở đó, biện pháp phịng trừ sinh học đời Biện pháp dựa khả kí sinh lồi nấm, vi khuẩn, virus khả ăn mồi lồi ăn thịt, có nghĩa sử dụng sinh vật sống để diệt trừ côn trùng gây hại Nhờ ưu điểm mình, biện pháp nhà khoa học khắp giới quan tâm hướng ưu tiên hàng đầu công tác phịng trừ sâu bệnh ĐC AS1 BNT2 Hình 4.5 Mẫu sâu thử hoạt tính sau ngày (Nguồn: Nguyễn Thị Lan – sinh viên thực tập môn Công Nghệ Vi Sinh – Viện Di Truyền Nơng Nghiệp) Chú thích: ĐC: Mẫu sâu đối chứng khơng bị nhiễm nấm AS1: Mẫu sâu nhiễm nấm AS1 BNT2: Mẫu sâu nhiễm nấm BNT2 Hình 4.5 Mẫu sâu thử hoạt tính sau ngày Kết thu cho hai chủng nấm ký sinh AS1 BNT2 có tỷ lệ ký sinh cao sâu hại, sợi nấm bám quanh sâu hại, chúng hình thành giác hút bám chặt lấy mồi, đồng thời chúng sản sinh enzym chitinase phá hủy vỏ sâu hại, sau nấm ký sinh sinh độc tố tiêu diệt mồi sau vài ngày sâu hại bị ký sinh So sánh kết nhận thấy chủng nấm AS1 có hiệu lực ký sinh sâu hại cao đạt 81,35% sau 10 ngày lây nhiễm 34 V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận 1) Đã thu thập nguồn mẫu đất sâu hại địa điểm khác để phục vụ phân lập tuyển chọn giống vi sinh vật như: Bến Tre, Hà Nam Hà Nội 2) Đã phân lập, sàng lọc tuyển chọn chủng giống chủng nấm Beauveria sp từ nguồn mẫu thu thập 3) Tuyển chọn chủng nấm B bassiana AS1 có hoạt tính sinh enzym ngoại bào mạnh 4) Môi trường PDA, nhiệt độ 28-30oC, pH điều kiện thích hợp cho lồi nấm ký sinh trùng B bassiana AS1 sinh trưởng đường kính tản nấm hình thành bào tử 5) Hiệu lực ký sinh diệt sâu xanh hại rau điều kiện phịng thí nghiệm đạt 81,35% sau 10 ngày lây nhiễm với nấm trắng B bassiana AS1 5.2 Kiến nghị - Thời gian làm đề tài nhiều để tiếp tục nghiên cứu định danh chủng tuyển chọn nghiên cứu tìm quy trình nhân nhanh chủng vi sinh vật để phục vụ sản xuất tạo chế phẩm sinh học phòng trừ sâu đục thân gây hại trồng - Nghiên cứu thêm mơi trường thích hợp để phục vụ nhu cầu sản xuất, đạt suất chất lượng 35 VI TÀI LIỆU THAM KHẢO A) Tiếng Việt Bùi Chí Bửu - Nguyễn Thị Lang, 1999 Di truyền phân tử - Những nguyên tắc chọn giống trồng Nhà xuất Nông nghiệp TP.Hồ Chí Minh Trang 195 – 236 Hồ Huỳnh Thùy Dương, 1998 Sinh học phân tử Nhà xuất giáo dục Nguyễn Xuân Niệm, 2003 Hiệu lực phòng trừ bọ cánh cứng hại dừa (Brontispa spp.) chế phẩm sinh học tỉnh Kiên Giang Thông tin khoa học Công nghệ Môi trường Kiên Giang Phan Đặng Thái Phương 2005 Khảo sát đặc điểm sinh trưởng phát triển nấm Beauveria bassiana Vuillemin côn trùng gây hại: I Ảnh hưởng nhiệt độ đến sinh trưởng phát triển nấm Beauveria bassiana; II Bước đầu thiết lập phương pháp rDNA-PCR nghiên cứu cấu trúc di truyền nấm Beauveria bassiana Luận văn tốt nghiệp kỹ sư Nơng học Đại học Nơng Lâm TP.Hồ Chí Minh 67 trang Khuất Bửu Thanh 2003 Cơ sở di truyền phân tử kỹ thuật gen NXB khoa học kỹ thuật Trang 138 – 147 Lê Thị Kim Thoa, 2004 Thu thập đánh giá hiệu nấm Beauveria bassiana Vuillemin ký sinh côn trùng gây hại Luận văn tốt nghiệp kỹ sư Nông học Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh 53 trang Phan Thị Thùy, Đồng Thị Thanh, Nguyễn Thị Bắc, Trần Thanh Tháp, Hồng Cơng Điền, Nguyễn Đậu Tồn 1991-1995 Nghiên cứu công nghệ sản xuất ứng dụng chế phẩm nấm Beauveria Metarhizium để phòng trừ số sâu hại trồng Tuyển tập cơng trình nghiên cứu Bảo vệ thực vật 1990-1995 Viện bảo vệ thực vật Nhà xuất Nông nghiệp Hà Nội Trang 189 – 201 Phạm Thị Thùy, 2004 Công nghệ sinh học bảo vệ thực vật Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội, 100 trang 36 Nguyễn Ngọc Tú Nguyễn Cửu Thị Hương Giang, 1997 Bảo vệ trồng chế phẩm từ vi nấm Nhà xuất Nơng nghiệp TP.Hồ Chí Minh 158 trang 10 Lê Kiều Khánh Vân, 2005 Khảo sát đặc điểm sinh trưởng phát triển khả gây bệnh nguồn nấm Beauveria bassiana Vuillemin ký sinh côn trùng gây hại Luận văn tốt nghiệp kỹ sư Nông học Đại học Nông Lâm TP.Hồ Chí Minh 11.Trần Văn Hai, Phạm Kim Sơn, Trịnh Thị Xuân Khảo sát đặc tính sinh học sùng đất Lepidiota cochinchinae Brenske hại rễ đậu phộng bắp hiệu lực số chủng nấm xanh Metarhizium anisopliae Sorokin, nấm trắng Beauveria bassiana Vuillemin dịch hại Tạp chí Khoa học, Trường Đại học Cần Thơ 2009;11:63-70 12 Đỗ Thị Thanh Dung, Lê Thanh Bình, Đỗ Thị Hồng Thịnh, Võ Đình Quang Phân lập tuyển chọn số chủng vi nấm có khả ký sinh tiêu diệt ấu trùng ve sầu gây hại cà phê Tạp chí khoa học, Trường Khoa học tự nhiên công nghệ 2018; 139-148 13.Phạm Thị Thùy (2001), Nghiên cứu công nghệ sản xuất ứng dụng thuốc trừ sâu sinh học Bt, NPV, V- Bt, nấm Beauveria, Metarhizium hệ sản xuất rau an toàn Đề tài trọng điểm cấp Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn, 2002-2004 B) Tiếng Anh 14 Bruns, T D., Vilgalys R., Barns S M., Gonzalez D., Hibbett D S., Lane D J., Simo L., Stickel S., Szaro T M., Weisburg W G., and Sogin M L., 1992 Evolutionary relationships within the fungi: analyses of small subunit ribosomal DNA sequences Appl Environ Microbiol 61:681-689 15 Barnett H L., and Barry Hunter (1972), Illustrated Genera of Imperfect Fungi Burgess Publishing, Incorporated 16.Chilton, N.B., Hoste, H., Newton, L.A., Beveridge I and Gasser, R.B., 1998 Common secondary structures for the second internal transcribed spacer pre37 rRNA of two subfamilies of trichostrongylid nematodes Int J Parasitol., 28, 1765–1773 17 Coastes Brat S., Hellmich Richard L and Lerwis Leslie C., (2002) Beauveria bassiana halotype determination based on nuclear rDNA internal transcribed spacer PCR – RFLP Mycol Res 106(1): 40-50 18 Colette A Cootes and Brenda A Peculis, 2001 Role of the ITS2-proximal stem and evidence for indirect recognition of processing sites in pre-rRNA processing in yeast Nucleic Acids Research, 2001, Vol 29, No 10 2106-2116 19.Champlin F R and Grula E A., 1979 Noninvolvement of beauvericin in the entomopathogenicity of Beauveria bassiana Applied and environmental microbiology vol 37, no 6: p 1122-1125 20 Gams, W., and Nirenberg H I., 1989 A contribution to the generic definition of Fusarium Mycotaxon 35: 407-416 21 Glare Travis R and Inwood Alison J., 1998 Morphological and genetic characterisation of Beauveria spp From New Zealand Mycol Res 102 (2): 250-256 22 Guarro Josep, Gené Josepa, and Stchigel Alberto M., 1999 Developments in fungal taxonomy Clinical Microbiology Reviews Vol 12, No 3, p 454-500 23 Gutell R R., 1994 Collection of small subunit (16 S- and 16 S-like) ribosomal RNA structures: 1994 Nucleic Acids Research, Vol 22, Issue 17: 3502-3507 24 Konstantopoulou, M.A., and Mazomenos, B.E (2005) Evaluation of Beauveria bassiana and B brongniartii strains and four wild-type fungal species against adults of Bactrocera oleae and Ceratitis capitata BioControl, 50(2), 293-305 25 Sookar, P., Bhagwant S., Ouna E.A (2008) Isolation of entomopathogenic fungi from the soil and their pathogenicity to two fruit fly species (Diptera: Tephritidae) Journal of Applied Entomology, 132, 778-788 26 Samson, R A., 1974 Studies in Mycology, 6: 1-119 38 PHỤ LỤC Ảnh hƣởng môi trƣờng đến sinh trƣởng sợi nấm BALANCED ANOVA FOR VARIATE NGAY FILE AHCMT 4/ 3/22 10:10 :PAGE Anh huong cua moi truong nuoi cay den phat trien soi nam VARIATE V003 NGAY LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 8.21667 NL 116666E-01 583332E-02 0.72 0.526 * RESIDUAL 2.73889 340.01 0.000 483322E-01 805536E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 8.27667 752424 BALANCED ANOVA FOR VARIATE NGAY FILE AHCMT 4/ 3/22 10:10 :PAGE Anh huong cua moi truong nuoi cay den phat trien soi nam VARIATE V004 NGAY LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 9.90062 3.30021 NL 121250 606250E-01 1.38 0.322 * RESIDUAL 263750 75.08 0.000 439583E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 10.2856 935057 BALANCED ANOVA FOR VARIATE NGAY FILE AHCMT 4/ 3/22 10:10 :PAGE Anh huong cua moi truong nuoi cay den phat trien soi nam VARIATE V005 NGAY LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 10.2300 NL 350000E-01 175000E-01 1.24 0.356 * RESIDUAL 3.41000 240.71 0.000 849993E-01 141666E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 10.3500 940909 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE AHCMT 4/ 3/22 10:10 :PAGE Anh huong cua moi truong nuoi cay den phat trien soi nam 39 MEANS FOR EFFECT CT$ - CT$ NOS CMA 3 NGAY NGAY 2.00000 4.15000 NGAY 6.53333 Czapek 2.23333 4.46667 7.03333 PDA 4.13333 6.46667 9.00000 PCA 2.76667 5.46667 7.63333 SE(N= 3) 0.518182E-01 0.121049 5%LSD 6DF 0.179247 0.418727 0.687182E-01 0.237707 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS NGAY NGAY NGAY 2.75000 5.00000 7.52500 2.77500 5.17500 7.50000 2.82500 5.23750 7.62500 SE(N= 4) 5%LSD 6DF 0.448758E-01 0.104831 0.155233 0.362628 0.595117E-01 0.205860 - 40 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE AHCMT 4/ 3/22 10:10 :PAGE Anh huong cua moi truong nuoi cay den phat trien soi nam F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS | | | | | | | | NGAY 12 2.7833 0.86742 0.89752E-01 3.2 0.0000 0.5256 NGAY 12 5.1375 0.96698 0.20966 4.1 0.0001 0.3221 NGAY 12 7.5500 0.97000 0.11902 1.6 0.0000 0.3564 |NL Ảnh hƣởng nhiệt độ đến sinh trƣởng sợi nấm BALANCED ANOVA FOR VARIATE NGAY FILE AHCNĐO 4/ 3/22 10:23 :PAGE Anh huong cua nhiet den sinh truong phat trien cua nam ky sinh VARIATE V003 NGAY LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 3.10250 NL 350000E-01 175000E-01 1.24 0.356 * RESIDUAL 1.03417 73.00 0.000 849999E-01 141667E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 3.22250 292955 BALANCED ANOVA FOR VARIATE NGAY FILE AHCNĐO 4/ 3/22 10:23 :PAGE Anh huong cua nhiet den sinh truong phat trien cua nam ky sinh VARIATE V004 NGAY LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 2.69333 NL 266666E-01 133333E-01 0.92 0.449 * RESIDUAL 897778 62.15 0.000 866665E-01 144444E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 2.80667 255152 BALANCED ANOVA FOR VARIATE NGAY FILE AHCNĐO :PAGE 41 4/ 3/22 10:23 Anh huong cua nhiet den sinh truong phat trien cua nam ky sinh VARIATE V005 NGAY LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 2.44250 NL 466666E-01 233333E-01 1.00 0.424 * RESIDUAL 814166 140000 34.89 0.001 233333E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 2.62917 239015 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE AHCNĐO 4/ 3/22 10:23 :PAGE Anh huong cua nhiet den sinh truong phat trien cua nam ky sinh MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS NGAY NGAY NGAY T1 3.73333 5.80000 8.83333 T2 4.33333 6.46667 9.03333 T3 3.20000 5.46667 8.13333 T4 3.03333 5.20000 7.96667 SE(N= 3) 0.687184E-01 0.693888E-01 0.881917E-01 5%LSD 6DF 0.237708 0.240027 0.305069 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS NGAY NGAY NGAY 3.50000 5.70000 8.47500 3.62500 5.70000 8.42500 3.60000 5.80000 8.57500 SE(N= 4) 5%LSD 6DF 0.595119E-01 0.600924E-01 0.763763E-01 0.205861 0.207869 0.264198 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE AHCNĐO 4/ 3/22 10:23 :PAGE Anh huong cua nhiet den sinh truong phat trien cua nam ky sinh F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS | | | | | | | NGAY 12 3.5750 0.54125 0.11902 3.3 0.0001 0.3564 NGAY 12 5.7333 0.50513 0.12018 2.1 0.0002 0.4493 42 |NL | NGAY 12 8.4917 0.48889 0.15275 1.8 0.0006 0.4237 Ảnh hƣởng pH đến sinh trƣởng sợi nấm BALANCED ANOVA FOR VARIATE NGAY FILE AHCPH 4/ 3/22 10:28 :PAGE anh huong cua pH den sinh truong phat trien cua nam ky sinh VARIATE V003 NGAY LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 17.3267 NL 493333E-01 246667E-01 5.29 0.034 * RESIDUAL 4.33167 928.25 0.000 373318E-01 466647E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 17.4133 1.24381 BALANCED ANOVA FOR VARIATE NGAY FILE AHCPH 4/ 3/22 10:28 :PAGE anh huong cua pH den sinh truong phat trien cua nam ky sinh VARIATE V004 NGAY LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 26.7293 NL 413334E-01 206667E-01 1.68 0.246 * RESIDUAL 6.68233 541.82 0.000 986653E-01 123332E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 26.8693 1.91924 BALANCED ANOVA FOR VARIATE NGAY FILE AHCPH 4/ 3/22 10:28 :PAGE anh huong cua pH den sinh truong phat trien cua nam ky sinh VARIATE V005 NGAY LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 31.7333 NL 693333E-01 346667E-01 9.04 0.009 * RESIDUAL 7.93333 ****** 0.000 306680E-01 383350E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 31.8333 2.27381 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE AHCPH :PAGE 43 4/ 3/22 10:28 anh huong cua pH den sinh truong phat trien cua nam ky sinh MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS NGAY NGAY NGAY pH4 1.53333 2.66667 4.76667 pH5 1.83333 3.10000 6.10000 pH6 3.26667 5.10000 7.76667 pH7 4.43333 6.16667 8.93333 pH8 2.10000 3.33333 6.10000 SE(N= 3) 0.394397E-01 0.641175E-01 0.357468E-01 5%LSD 8DF 0.128609 0.209081 0.116567 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS NGAY NGAY NGAY 2.56000 4.00000 6.64000 2.70000 4.10000 6.80000 2.64000 4.12000 6.76000 SE(N= 5) 5%LSD 8DF 0.305499E-01 0.496652E-01 0.276893E-01 0.996200E-01 0.161953 0.902921E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE AHCPH 4/ 3/22 10:28 :PAGE anh huong cua pH den sinh truong phat trien cua nam ky sinh F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS | | | | | | |NL | | NGAY 15 2.6333 1.1153 0.68312E-01 2.6 0.0000 0.0343 NGAY 15 4.0733 1.3854 0.11105 NGAY 15 6.7333 1.5079 0.61915E-01 0.9 0.0000 0.0091 2.7 0.0000 0.2464 Thi nghiem danh gia so sau chet nhiem nam trang ky sinh BALANCED ANOVA FOR VARIATE NGàY FILE TNSCHET 4/ 3/22 10:47 :PAGE VARIATE V003 NGàY LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 70.2222 35.1111 79.00 0.001 NL 1.55556 777778 1.75 0.285 44 * RESIDUAL 1.77778 444445 * TOTAL (CORRECTED) 73.5556 9.19444 BALANCED ANOVA FOR VARIATE NGàY FILE TNSCHET 4/ 3/22 10:47 :PAGE thi nghiem danh gia so sau chet nhiem nam trang ky sinh VARIATE V004 NGàY LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 253.556 126.778 163.00 0.001 NL 2.88889 1.44444 1.86 0.269 * RESIDUAL 3.11110 777775 * TOTAL (CORRECTED) 259.556 32.4444 BALANCED ANOVA FOR VARIATE NGàY FILE TNSCHET 4/ 3/22 10:47 :PAGE thi nghiem danh gia so sau chet nhiem nam trang ky sinh VARIATE V005 NGàY LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 370.667 185.333 158.86 0.001 NL 666667 333333 0.29 0.767 * RESIDUAL 4.66665 1.16666 * TOTAL (CORRECTED) 376.000 47.0000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 10 NGàY FILE TNSCHET 4/ 3/22 10:47 :PAGE thi nghiem danh gia so sau chet nhiem nam trang ky sinh VARIATE V006 10 NGàY LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 589.556 294.778 482.36 0.000 NL 222222 111111 0.18 0.840 * RESIDUAL 2.44448 611119 * TOTAL (CORRECTED) 592.222 74.0278 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TNSCHET 4/ 3/22 10:47 :PAGE 45 thi nghiem danh gia so sau chet nhiem nam trang ky sinh MEANS FOR EFFECT CT$ - CT$ NOS ĐC BNT2 NGàY NGàY 0.000000 1.66667 AS1 NGàY 4.66667 6.66667 SE(N= 3) 17.0000 8.66671 0.509174 1.50873 5.00000 4.00000 14.6667 0.384900 5%LSD 4DF 3.33333 8.33333 10 NGàY 24.6667 0.623609 1.99585 0.451338 2.44441 1.76915 - MEANS FOR EFFECT NL - NL NOS NGàY NGàY NGàY 10 NGàY 4.33333 9.00000 12.3333 15.6667 3.33333 7.66667 11.6667 15.6667 3 3.66667 8.00000 12.0000 15.3333 SE(N= 3) 0.384900 5%LSD 4DF 0.509174 1.50873 0.623609 1.99585 0.451338 2.44441 1.76915 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TNSCHET 4/ 3/22 10:47 :PAGE thi nghiem danh gia so sau chet nhiem nam trang ky sinh F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 9) SD/MEAN | NO OBS BASED ON BASED ON TOTAL SS RESID SS | % | |NL | | | | | | | NGàY 3.7778 3.0322 0.66667 7.6 0.0015 0.2846 NGàY 8.2222 5.6960 0.88192 5.7 0.0007 0.2690 NGàY 12.000 6.8557 1.0801 9.0 0.0007 0.7666 10 NGàY 15.556 8.6039 0.78174 5.0 0.0003 0.8401 BALANCED ANOVA FOR VARIATE NGàY FILE TNSSONG 4/ 3/22 10:58 :PAGE thi nghiem danh gia so luong sau song sau lay nhiem nam ky sinh VARIATE V003 NGàY LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 64.6667 32.3333 194.00 0.001 NL 666667 333333 2.00 0.250 46 * RESIDUAL 666674 166668 * TOTAL (CORRECTED) 66.0000 8.25000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE NGàY FILE TNSSONG 4/ 3/22 10:58 :PAGE thi nghiem danh gia so luong sau song sau lay nhiem nam ky sinh VARIATE V004 NGàY LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 254.889 127.444 ****** 0.000 NL 2.88889 1.44444 13.00 0.020 * RESIDUAL 444462 111116 * TOTAL (CORRECTED) 258.222 32.2778 BALANCED ANOVA FOR VARIATE NGàY FILE TNSSONG 4/ 3/22 10:58 :PAGE thi nghiem danh gia so luong sau song sau lay nhiem nam ky sinh VARIATE V005 NGàY LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 370.667 185.333 158.86 0.001 NL 666667 333333 0.29 0.767 * RESIDUAL 4.66665 1.16666 * TOTAL (CORRECTED) 376.000 47.0000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 10 NGàY FILE TNSSONG 4/ 3/22 10:58 :PAGE thi nghiem danh gia so luong sau song sau lay nhiem nam ky sinh VARIATE V006 10 NGàY LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 589.556 294.778 482.36 0.000 NL 222222 111111 0.18 0.840 * RESIDUAL 2.44448 611119 * TOTAL (CORRECTED) 592.222 74.0278 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TNSSONG 4/ 3/22 10:58 :PAGE 47 thi nghiem danh gia so luong sau song sau lay nhiem nam ky sinh MEANS FOR EFFECT CT$ - CT$ NOS ĐC BNT2 30.0000 AS1 NGàY 16.0000 15.3333 25.0000 8.0000 11.3333 0.192454 0.923907 10 NGàY 30.0000 21.0000 0.235703 5%LSD 4DF NGàY 30.0000 25.3333 23.6667 SE(N= 3) NGàY 3.33333 0.623609 0.754378 0.451338 2.44441 1.76915 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS NGàY NGàY NGàY 10 NGàY 30.0000 30.0000 30.0000 24.3333 26.6667 22.3333 18.3333 3.3333 3 26.3333 21.3333 18.0000 7.6667 SE(N= 3) 0.235703 5%LSD 4DF 0.192454 0.923907 0.623609 0.754378 0.451338 2.44441 1.76915 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TNSSONG 4/ 3/22 10:58 :PAGE thi nghiem danh gia so luong sau song sau lay nhiem nam ky sinh F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 9) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS | | | | | | | NGàY 26.333 2.8723 0.40825 1.6 0.0006 0.2501 NGàY 21.556 5.6814 0.33334 1.5 0.0002 0.0197 NGàY 18.000 6.8557 1.0801 6.0 0.0007 0.7666 10 NGàY 14.444 8.6039 0.78174 5.4 0.0003 0.8401 48 |NL |