Nghiên cứu phân lập, tuyển chọn chủng vi sinh vật có khả năng phân giải hợp chất hữu cơ trong nước thải nhà máy bia

LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình học tập thực đề tài nhận đƣợc giúp đỡ tận tình thầy giáo, bạn bè gia đình nhiều Để có đƣợc kết nhƣ hơm nay, tơi xin chân thành bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến TS Nguyễn Nhƣ Ngọc TS Trần Thị Thu Lan dành nhiều thời gian hƣớng dẫn tận tình, cung cấp nhiều kiến thức tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình thực đề tài khóa luận tốt nghiệp Tơi xin gửi lời cảm ơn tới thầy cô giáo, anh chị Viện Công nghệ sinh học Lâm Nghiệp –Trƣờng Đại Học Lâm Nghiệp tạo điều kiện giúp đỡ, bảo tận tình tơi suốt q trình nghiên cứu Tơi xin cảm ơn gia đình, bạn bè động viên, giúp đỡ tơi để hồn thành đề tài Một lần nữa, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến tất ngƣời! Hà nội, ngày 14 tháng năm 2018 Sinh viên thực Ngô Thúy Quỳnh MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC KÝ HIỆU, TỪ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC BIỂU ĐỒ DANH MỤC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Tình hình sản xuất tiêu thụ bia giới việt nam 1.1.1 Tình hình sản xuất tiêu thụ bia giới 1.1.2 Tình hình sản xuất tiêu thụ bia Việt Nam 1.2 Quy Trình Sản xuất bia 1.3 Đặc tính nƣớc thải nhà máy bia 1.3.1 Các tiêu đánh giá độ nhiễm bẩn nƣớc thải 1.3.2 Các phƣơng pháp xử lý nƣớc thải 1.4 Các vi sinh vật ứng dụng khả phân giải hợp chất hữu nƣớc thải 12 1.5 Các chất hữu enzyme vi sinh vật phân giải 13 1.5.1 Tinh bột enzyme amylase 14 1.5.2 Cellulose enzyme cellulose 15 1.5.3 Các chất protein enzyme protease 16 CHƢƠNG 2: MỤC TIÊU, NỘI DUNG, PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Mục tiêu nghiên cứu 19 2.2 Nội dung nghiên cứu 19 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 19 2.3.1 Vật liệu nghiên cứu 19 2.3.2 Hóa Chất 19 2.3.3 Các trang thiết bị - dụng cụ 19 2.3.4 Phƣơng pháp tiến hành 22 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 3.1 Kết phân lập chủng vi sinh vật từ nƣớc thải nhà máy sản xuất bia 30 3.2 Kết xác định khả sinh enzyme ngoại bào phân giải hợp chất hữu 33 3.3 Kết xác định đặc tính sinh hóa chủng vi sinh vật 36 3.3.1 Kết nhuộm gram quan sát đặc điểm hình thái tế bào 36 3.3.2 Kết kiểm tra đặc tính sinh hóa chủng vi khuẩn 39 CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 4.1 Kết luận 44 4.2 Kiến nghị 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC KÝ HIỆU, TỪ VIẾT TẮT VSV: Vi sinh vật COD: Chemical Oxygen Demand BOD: Biochemical Oxygen Demand TSS: Total Suspended Solid LB: Môi trƣờng LB broth DS: Dissolved Solid DO: Dissolved Oxygen DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Các thông số nƣớc thải sản xuất bia Bảng 2.1: Các thiết bị sử dụng thí nghiệm 20 Bảng 2.2: Môi trƣờng nuôi cấy vi sinh vật 20 Bảng 3.1: Đặc điểm hình thái chủng vi sinh vật 30 Bảng 3.2: Đƣờng kính vịng phân giải chất chủng vi sinh vật 33 Bảng 3.3: Các đặc điểm sinh hóa chủng vi sinh vật 43 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 1: Tỉ trọng tiêu thụ bia theo khu vực năm 2011 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Sản lƣợng tiêu thụ bia từ năm 2010 - 2016 Hình 1.2: Quy trình sản xuất bia Hình 1.3 Sự chuyển amine 17 Hình 1.4 Sơ đồ phân huỷ protein bên bên tế bào vi khuẩn cách biến đổi axit amin 17 Hình 3.1: Vịng phân giải tinh bột chủng vi sinh vật 34 Hình 3.2: Vòng phân giải protein chủng vi sinh vật 35 Hình 3.3: Vịng phân giải cellulose chủng vi sinh vật 35 Hình 3.4: Hình thái khuẩn lạc (A) hình dạng tế bào (B) chủng 22.B2 37 Hình 3.5: Hình thái khuẩn lạc (A) hình dạng tế bào (B) chủng M 37 Hình 3.6: Hình thái khuẩn lạc (A) hình dạng tế bào (B) chủng B1 38 Hình 3.7: Hình thái khuẩn lạc (A) hình dạng tế bào (B) chủng CL2 38 Hình 3.8: Khả lên men đƣờng Saccharose chủng vi sinh vật 39 Hình 3.9: Khả lên men đƣờng Glucose chủng vi sinh vật 39 Hình 3.10: Khả lên men đƣờng lactose chủng vi sinh vật 39 Hình 3.11: Phản ứng MR chủng vi sinh vật 40 Hình 3.12: Phản ứng VP chủng vi sinh vật 41 Hình 3.13: Phản ứng khả phân giải Urease 41 Hình 3.14: Khả khử Nitrate 42 ĐẶT VẤN ĐỀ Sự phát triển kinh tế dẫn đến thu nhập ngƣời dân ngày cao, nhu cầu sử dụng loại thức uống giải khát nhƣ bia ngày tăng Trong năm qua nhà máy sản xuất bia đƣợc đầu tƣ xây dựng ngày nhiều nhằm đáp ứng nhu cầu tiêu dùng Thị trƣờng mở rộng nhu cầu tiêu thụ bia lớn Sự xuất nhà máy sản xuất bia dẫn tới loại chất thải đƣợc thải quy trình sản xuất khơng ngừng tăng lên gây ô nhiễm môi trƣờng vấn đề cấp bách xã hội Vì việc nghiên cứu, thiết kế hệ thông xử lý nƣớc thải bia nhu cầu cần thiết để bảo vệ mơi trƣờng Dựa tính chất nƣớc thải nhà máy sản xuất chứa hàm lƣợng hợp chất hữu cao chủ yếu nhƣ tinh bột, cellulose, hemicellulose … chất dễ phân hủy, chuyển hóa sinh học Có nhiều biện pháp xử lý, dựa vào tinh chất nƣớc thải yếu tố sở để việc để đƣa biện pháp sinh học vào xử lý hiệu mà khơng tốn chi phí cao Chính mà việc tìm chủng vi sinh vật nƣớc thải của nhà máy sản xuất bia có khả phân giải hợp chất hữu đƣợc ngƣời ngày đƣợc quan tâm Cũng tiền đề để đƣa vi sinh vật vào xử lý phƣơng pháp sinh học ứng dụng sản xuất chế phẩm vi sinh góp phần đƣa vi sinh vật vào xử lý nguồn nƣớc thải bị nhiễm, giúp cho nguồn nƣớc chở tính chất ban đầu chúng, không gây ô nhiễm môi trƣờng Trên sở đó, mà tơi thực đề tài: “Nghiên cứu phân lập, tuyển chọn chủng vi sinh vật có khả phân giải hợp chất hữu nước thải nhà máy bia ” CHƢƠNG TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Tình hình sản xuất tiêu thụ bia giới việt nam 1.1.1 Tình hình sản xuất tiêu thụ bia giới Bia loại nƣớc giải khát sản xuất từ lâu đời giới Từ thời cổ đại, bia đƣợc chế biến từ lúc mạch nhƣng phải đến kỷ 19, Louis Pasteur thành công nghiên cứu vi sinh vật Christian Hansen (ngƣời Đan Mạch) phân lập đƣợc nấm men áp dụng vào sản xuất bia bia thực trở thành thứ đồ uống hảo hạng, đƣợc nhiều ngƣời khắp nơi giới ƣa chuộng Ƣớc tính sản lƣợng bia năm 2005 đạt 153 tỷ lít/năm Sản lƣợng bia giới thập kỷ tăng 35,6% Có sản lƣợng lớn phát triển Trung Quốc, Nga Brazil Trong năm 2001, Mỹ nƣớc dẫn đầu sản lƣợng bia giới với 23.300 triệu lít, đến năm 2011 giảm sản lƣợng cịn 22.546 triệu lít đứng vị trí thứ hai Việt Nam, Ukraina Trung Quốc có mức tăng trƣởng cao mƣời năm qua, lần lƣợt 240,4%, 132,9% 118% [15, 21] Trong năm 2011, mức tiêu thụ bia toàn cầu đạt 188,78 tỉ lít, tăng 3,8% so với năm 2010 Trong đó, lƣợng tiêu thụ Châu Á đứng đầu giới mức 66,2 tỉ lít, tiếp thị trƣờng truyền thống Châu Âu 51,2 tỉ lít Khu vực Trung Đơng khu vực tiêu thụ nhất, đạt 1,4 tỉ lít dù dân số ½ so với Châu Âu Các khu vực Mĩ La Tinh, Bắc Mĩ, Châu Phi Châu Đại Dƣơng đạt 30,8; 26,1; 10,8 2,2 tỉ lít Tổng thu nhập thị trƣờng bia năm 2011 đạt 500,24 tỉ đô la Mĩ Mức tiêu thụ bia châu lục khác đƣợc thể biểu đổ Series1, Châu Đại Dương, 1.17%, 1% Series1, Trung Đông, 0.75%, 1% Series1, Bắc Mĩ, 13.85%, 14% Series1, Châu Phi, 5.70%, 6% Series1, Châu Á, 35.06%, 35% Series1, Mĩ La Tinh, 16.31%, 16% Châu Á Châu Âu Mĩ La Tinh Bắc Mĩ Series1, Châu Âu, Châu Phi 27.15%, Trung Đông 27% Châu Đại Dương Biểu đồ 1: Tỉ trọng tiêu thụ bia theo khu vực năm 2011 Lƣợng tiêu thụ bia Châu Á ghi nhận mức tăng lớn 8.4% so với năm 2010 Châu Mĩ La Tinh Châu Phi tăng nhanh năm 2011 với mức tăng hàng năm 3.7% 6.9% Sự tăng trƣởng Châu Mĩ La Tinh tăng 3.5% so với 2010 Tại Châu Phi, tăng trƣởng chủ yếu Nam Phi, với mức tăng hàng năm đạt 2.5% Mức tiêu thụ hàng năm Châu Âu tăng 0.4%, lần năm Bắc Mĩ, khủng hoảng kinh tế, giảm 1,2% so với 2010 Vào cuối năm 2017, thị trƣờng bia khu vực Châu Á ngày phát triển nhƣ Trung Quốc, Nhật Bản Theo thông tin Việt Nam thức lọt vào Top 10 thị trƣờng lớn giới xét dung lƣợng bia tiêu thụ Dự kiến với mức tăng trƣởng kinh tế nhƣ nay, mức sống ngƣời dân giới ngày cao cơng nghiệp sản xuất bia phát triển mạnh, sản lƣợng tiêu thụ bia tiếp tục tăng cao năm tới 1.1.2 Tình hình sản xuất tiêu thụ bia Việt Nam Bia đƣợc đƣa vào Việt Nam từ năm nhƣ Bia Việt Nam có lịch sử 100 năm Hiện nay, nhu cầu thị trƣờng, thời gian ngắn, ngành sản xuất bia có bƣớc phát triển mạnh mẽ Do tác động nhiều yếu tố nhƣ tốc độ tăng trƣởng GDP, tốc độ tăng dân sơ, tốc độ thị hóa, tốc 1890 với xuất nhà máy Bia Sài Gòn nhà máy Bia Hà Nội, độ đầu tƣ Mà ngành công nghiệp bia phát triển với tốc độ tăng trƣởng cao Chẳng hạn nhƣ năm 2003, sản lƣợng bia đạt 1290 triệu lít, tăng 20,7% [21] Khuẩn màu trắng sữa , CL ròn trơn, đƣờng kính 12mm M M1 Sợi nấm xanh trắng, trịn, đƣờng kính - 3cm Sợi nấm xanh nhăn, trịn đƣờng kính - 3cm Khuẩn màu trắng, trơn 10 CL3 bề mặt, đƣờng kính 0,51,5mm 32 3.2 Kết xác định khả sinh enzyme ngoại bào phân giải hợp chất hữu Hoạt tính enzyme đa dạng chủng vi sinh vật đối tƣợng để tuyển chọn khả phân giải hợp chất hữu chủng phân lập đƣợc Hoạt tính enzyme mạnh đƣợc đo hiệu số D – d (trong D đƣờng kính phân giải vịng phân giải (mm), d đƣờng kính lỗ thạch (mm) Từ chủng tuyển chọn tiến hành nghiên cứu thử hoạt tính enzyme có khả phân giải tinh bột, cellulose, protein dƣới Bảng 3.2: Đƣờng kính vịng phân giải chất chủng vi sinh vật STT Ký hiệu chủng Đƣờng kính vịng phân giải D - d(mm) Tinh bột CMC Protein CL 0 29±0,01 CL2 24±0,01 21±0.01 25±0,01 51B2 22±0,01 23±0,01 28±0,01 22.B2 25±0,01 22±0,01 29±0,01 M2 16±0,01 22±0,01 25±0,01 M 18±0,01 30±0,01 32±0,01 M1 16±0,01 0±0,01 31±0,01 N 22±0,01 14±0,01 B1 21±0.01 30±0,01 32±0,01 10 Cl3 19±0,01 10±0,01 33 ĐC = CL3 22.B2 Cl3 CL CL Hình 3.1: Vịng phân giải tinh bột chủng vi sinh vật 34 M2 CL2 M CL M2 N ĐC ĐC CL3 51B2 B1 ĐC 22.B2 M2 Hình 3.2: Vịng phân giải protein chủng vi sinh vật CL2 22B2 ĐC M ĐC Hình 3.3: Vịng phân giải cellulose chủng vi sinh vật 35 Từ kết bảng hình phần 3.2 nhận thấy chủng vi sinh vật ta phân lập đƣợc có khả tiết enzyme ngoại bào phân giải hợp chất hữu có khả phân giải enzyme amylase, cellulose, protease - Thực theo phƣơng pháp đục lỗ thạch chọn từ 10 chủng có chủng tạo vòng phân giải tinh bột, cellulose, protein lớn Cl2, 22.B2, M, B1 - Chủng B1 có hoạt tính enzyme amylase, cellulose, protease mạnh ổn định sau lần lặp với đƣờng kính vòng thủy phân tinh bột, CMC, protein lần lƣợt là 21mm, 30mm, 32mm - Có khả thủy phân tinh bột, CMC, protein cao sau chủng B1 M có đƣờng kính phân giải lần lƣợt 18mm, 30mm, 32mm - Hai chủng cịn lại có đƣờng kính phân giải cao 22.B3 Cl2 với đƣờng kính phân giải tinh bột tƣơng ứng lần lƣợt 25mm, 24mm, đƣờng kính phân giải cellulose lần lƣợt 22mm, 21mm đƣờng kính phân giải protein lần lƣợt 29mm, 25mm - Vì mà chọn chủng B1, M, 22.B2, CL2 để thực nghiên cứu 3.3 Kết xác định đặc tính sinh hóa chủng vi sinh vật 3.3.1 Kết nhuộm gram quan sát đặc điểm hình thái tế bào Sau thực phƣơng pháp nhuộm gram với Các chủng tuyển chọn 22.B2, B1, M, Cl2 quan sát dƣới kinh hiển vi điện tử cho thấy tế bào dạng hình que (ngắn dài, hình cầu) bắt màu hình dạng tế bào chủng điển hình, tế bào đƣợc chụp vật kính 100x 36 A B Hình 3.4: Hình thái khuẩn lạc (A) hình dạng tế bào (B) chủng 22.B2 Khuẩn lạc có màu trắng sữa, bề mặt lồi Tế bào có dạng hình que, gram dƣơng A B Hình 3.5: Hình thái khuẩn lạc (A) hình dạng tế bào (B) chủng M Khuẩn lạc có màu xanh trắng Tế bào có tử nấm đầu sợi nấm 37 A B Hình 3.6: Hình thái khuẩn lạc (A) hình dạng tế bào (B) chủng B1 Khuẩn lạc trắng đục, cấy trải có màu vàng sữa, tế bào hình cầu bắt gram dƣơng A B Hình 3.7: Hình thái khuẩn lạc (A) hình dạng tế bào (B) chủng CL2 Khuẩn lạc màu trắng, bề mặt nhăn bề mặt khơ Tế bào hình que, gram dƣơng 38 3.3.2 Kết kiểm tra đặc tính sinh hóa chủng vi khuẩn 3.3.2.1 Khả lên men loại đường Các chủng B1, CL2, 22.B2, M đƣợc nuôi lắc môi trƣờng dinh dƣỡng phù hợp sau cấy truyền sang môi trƣờng lên men loại đƣờng Sau nuôi vòng 24 ta thu đƣợc kết dƣới ĐC B1 22B2 M CL2 ĐC Cl2 B1 22B2 M Hình 3.8: Khả lên men đƣờng Hình 3.9: Khả lên men đƣờng Saccharose chủng vi sinh vật Glucose chủng vi sinh vật B1 Cl2 22.B2 M Hình 3.10: Khả lên men đƣờng lactose chủng vi sinh vật Quan sát màu sắc hình 3.8, hình 3.9, hình 3.10 thấy, ống nghiệm đối chứng giữ nguyên màu sắc không bổ sung vi sinh vật Các ống nghiệm chứa 39 vi sinh vật mơi trƣờng có chứa loại đƣờng saccharose, glucose, lactose thấy đổi màu từ màu đỏ sang màu vàng tức phản ứng dƣơng tính 3.3.2.2 Phản ứng MR Các chủng B1, CL2, 22.B2, M đƣợc nuôi lắc môi trƣờng dinh dƣỡng phù hợp sau tiến hành cấy chuyển nuôi lắc mơi trƣờng MR-VP Broth kết thu hình 3.11 B1 22B2 CL2 M Hình 3.11: Phản ứng MR chủng vi sinh vật Kết sau nuôi lắc vòng 24 - 48 nhỏ vài giọt thuốc thử Metyl Red tƣợng chủng B1 có tƣợng đổi màu đỏ tức phản ứng dƣơng tính Các chủng CL2, 22.B2, M khơng có tƣợng chuyển màu sang màu đỏ tức phản ứng âm tính 3.3.2.3 Phản ứng Voges - Prokaeur Ống nghiệm có chủng B1, CL2, 22.B2, M sau nuôi lắc với nhiệt độ thích hợp chủng 24-48 với mơi trƣờng MR-VP Broth Sau cho vài giọt với thuốc thử NaOH α-Naptol Thu đƣợc sau 20 phút kết dƣới 40 B1 CL2 M 22b2 Hình 3.12: Phản ứng VP chủng vi sinh vật Kết sau ni lắc vịng 24 – 28 nhỏ vài giọt thuốc thử tƣợng chủng CL2 có tƣợng đổi màu đỏ tức phản ứng dƣơng tính Các chủng B1, 22.B2, M khơng có tƣợng chuyển màu sang màu đỏ tức phản ứng âm tính 3.3.2.4 Khả phân giải Urease Ống nghiệm có chủng B1, 22.B2, M, CL2 sau ni lắc với nhiệt độ thích hợp chủng 24 - 48 với môi trƣờng Urea Broth, thu đƣợc kết dƣới ĐC B1 22B2 M CL2 Hình 3.13: Phản ứng khả phân giải Urease 41 Kết thí nghiệm hình 3.13 thấy ống thí nghiệm có chủng CL2, 22.B2, M, B1 chuyển từ màu vàng sang môi trƣờng đỏ hồng cánh sen tức kết dƣơng tính 3.3.2.5 Phản ứng Nitrate Ống nghiệm có chủng CL2, 22.B2, M, B1 sau ni lắc với nhiệt độ thích hợp 24 - 48 với với môi trƣờng khử nitrate Sau thử thuốc vào mơi trƣờng ni ta đƣợc kết (hình 3.14) sau ĐC 22B2 B1 M Cl2 Hình 3.14: Khả khử Nitrate Kết phản ứng hình 3.14 thấy ống thí nghiệm có chủng CL2, 22.B2, M, B1 phản ứng dƣơng tính ống nghiệm khơng đổi màu Chứng tỏ chủng có khả khử Nitrate cao 42 Sau làm phản ứng ta có bảng tổng hợp đặc điểm sinh hóa chủng vi sinh vật (CL2, 22.B2, M, B1) qua lần lặp lại kết bảng 3.3 sau Bảng 3.3: Các đặc điểm sinh hóa chủng vi sinh vật Stt Ký Khả lên men loại Phản Phản Phản Phản hiệu đƣờng ứng ứng ứng ứng MR VP khả Nitrate chủng Glucose Saccharose Lactose Urease CL2 + + + - + + + M + + + - - + + 22.B2 + + + - - + + B1 + + + + - + + Trong (+) : dƣơng tính (-) âm tính Bảng 3.3 thấy chủng CL2, 22.B2, M, B1 có khả lên men đƣờng có khả phân giải Urease khử Nitrate cao Riêng chủng B1 có phản ứng MR dƣơng tính có khả tạo trì acid đƣợc tạo trình lên men glucose vi sinh vật, chủng có làm cho mơi trƣờng pH giảm chủng CL2 có phản ứng dƣơng tính với phản ứng VP 43 CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Từ mẫu nƣớc thải chƣa qua xử lý nhà máy bia Sài Gòn - Đồng Xuân huyện Mê Linh, Hà Nội phân lập tuyển chọn từ mơi trƣờng LB, Hansen, PAD chủng có hình thái khuẩn lạc khác riêng biệt Kết chọn 10 chủng riêng biệt có chủng vi khuẩn CL, CL2, M2, 22.B2, 51B2, B1 chủng nấm M, M1 chủng nấm men N, CL3 Thực theo phƣơng pháp đục lỗ thạch từ 10 chủng có chủng tạo vịng phân giải tinh bột, cellulose, protein lớn Cl2, 22.B2, M, B1 + Chủng B1 có hoạt tính enzyme amylase, cellulose, protease mạnh ổn định sau lần lặp với đƣờng kính vịng thủy phân tinh bột, CMC, protein lần lƣợt là 21mm, 30mm, 32mm + Sau chủng B1 chủng M, CL2, 22.B2 có vịng thủy phân lớn đƣợc tuyển chọn + Các hoạt tính sinh hóa từ bốn chủng Cl2, B1, M, 22.B2 thấy bốn chủng có khả lên men đƣờng, có khả phân giải Urease khả khử Nitrate Riêng có chủng CL2 có phản ứng dƣơng tính với phản ứng VP chủng B1 có phản ứng dƣơng với phản ứng MR 4.2 Kiến nghị Do không đủ thời gian đề tài đƣa kiến nghị sau: - Định danh chủng vi sinh vật phƣơng pháp sinh học phân tử - Lựa chọn chủng với điều kiện ni cấy thích hợp - Do thời gian chƣa có lên chƣa đƣa chủng trực tiếp vào xử lý nƣớc thải, đo số nhƣ BOD,COD,OD, 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Nguyễn Ngọc Ánh(2016), Nghiên cứu tuyển chọn số chủng vi sinh vật bổ sung vào q trình tạo bùn tạo hiếu khí để xử lý nƣớc thải chế biến tinh bột, luận văn thạch sĩ khoa học [2] Kiều hữu Ảnh (1999), Giáo trình vi sinh cơng nghiệp, NXB Khoa học kỹ thuật Hà Nội [3] Nguyễn Lân Dũng, Đoàn Xuân Mƣợu, Nguyễn Phùng Tiến, Đặng Đức Trạch, Phạm Văn Ty, Một số phƣơng pháp nghiên cứu vỉ sinh vật học, Tập I, II, III, Nxb Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, 1972, 1976, 1978 [4] Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty, Vi sinh vật học, Nxb Giáo dục: tr 224 - 230, 1997 [5] Trƣơng thị Mỹ Hạnh, Vũ Thị Hƣơng Lan(2011), Nguyên cứu tuyển chọn số chủng vi sinh vật có khả xử lý Protein ứng dụng xử lý nƣớc thải nhà má chế biến thủy sản, Đại học kỹ thuật Công nghệ HCM [6] Nguyễn Văn Hạnh (2011), phản ứng sinh hoá, Viện Hàn Lâm Khoa học xã hội Việt Nam [7] Lê Thị Bích Hằng (2010), Nghiên cứu chế phẩm xử lý nƣớc thải nhà máy rƣợu Đồng Xuân tỉnh Phú Thọ, Luận Văn Thạch sĩ [8] Nguyễn Thị Mỹ lệ (2015), nghiên cứu, phân lập tuyển chọn vi khuẩn có khả chuyển hóa tinh bột nƣớc thải làng nghề sản xuất tinh bột dong riềng, Khóa luận tốt nghiệp, trƣờng đại học lâm nghiệp việt nam [9] Võ Văn Nhân, Trƣơng Quang Bình (2011), Thử Nghiệm xử lý nƣớc thải nhà máy chế biến thủy sản vi sinh vật, Trƣờng Đại học Nông lâm TP.HCM [10] Trần Thanh Thủy (2008), Hƣớng dẫn thực hành vi sinh vật học, NXB Giáo dục [11] Hà Thanh Toàn, Mai Thu Thảo (2008), Phân lập vi khuẩn phân giải Cellulose, tinh bột, Protein nƣớc rỉ từ bãi rác thành phố cần thơ, Tạp chí Khoa Học -Trƣờng Đại Học Cần Thơ, báo khoa học trẻ [12] Trần Thị Hải Yến (2012), xác định hoạt tính enzyme ngoại bào số chủng vi sinh vật, Khóa luận tốt nghiệp, trƣờng Đại học lâm nghiệp Việt Nam Tài liệu tiếng anh [13] Binne and Partners (1986), Water and wastewater management in the malt brewing industry.Water research commison project report no 45 [14].Chaitanya kumar, Syeda Azeem Unnisa, Bhupattthi Rao, "Effeciency Assessment of combined treatment technology," Indian Journal of fundamental and Applied life science, pp 138-145, 2011 [15] Kirin (2012), Global Beer Consumption by Country in 2011 Kirin Institute of Food and Lifestyle Report Vol [16] M.Filomena de J.Raposo, Susana E.Oliveura (2010), on the Utilization of microalgae for Brewery Effluent Treatment and Possible Applications of the Produced biomass [17] 394484 Methy red Voges Proskauer Broth (MR VP Broth; Buffered Glucose Broth) [18].F.Ramukhwatho (2015), A.Seetal& H.Pienaar, Water and wastewater management in the malt brewing Industry [19] Rajashekar Bodike (2014), Biotreatment Brewary Effluent using Pseudomonas species [20] 346584 Urea Broth Base Tài liệu wed [21] Tình tiêu thụ bia giới việt nam 301739.html [22] Quy trình xử lý nƣớc thải nhà máy sản xuất bia.33889.html [ 23] https://tailieu.vn/tag/cong-nghe-hoa-sinh.html [24] https://tailieu.vn/tag/tinh- chat-nuoc-thai-bia.html