Nghiên cứu chiết tách các hoạt chất kháng khuẩn từ dịch chiết cây sim, ổi và ngải cứu

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC - - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH CÁC HOẠT CHẤT KHÁNG KHUẨN TỪ DỊCH CHIẾT CÂY SIM, ỔI VÀ NGẢI CỨU Hà Nội – 2022 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC - - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH CÁC HOẠT CHẤT KHÁNG KHUẨN TỪ DỊCH CHIẾT CÂY SIM, ỔI VÀ NGẢI CỨU Người thực : BÙI THỊ KHÁNH LY Mã sinh viên : 637048 Lớp : K63CNSHA Ngành : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Người hướng dẫn : PGS.TS VŨ VĂN HẠNH ThS TỐNG VĂN HẢI Hà Nội – 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu q trình nghiên cứu khóa luận tốt nghiệp “Nghiên cứu chiết tách hoạt chất kháng khuẩn từ dịch chiết Sim, Ổi Ngải cứu” trung thực, chưa công bố tài liệu khác Đây cơng trình từ thành lao động nghiên cứu khoa học cá nhân với hỗ trợ giáo viên hướng dẫn PGS.TS Vũ Văn Hạnh ThS Tống Văn Hải Những thơng tin luận văn có liên quan đến cơng trình, tác giả, quan, tổ chức khác thể phần Tài liệu tham khảo Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm theo quy định nghiên cứu khoa học nội dung luận văn Hà Nội, ngày 05 tháng 09 năm 2022 Sinh viên Bùi Thị Khánh Ly i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này, bên cạnh nỗ lực thân, em nhận hỗ trợ, giúp đỡ nhiều tổ chức, cá nhân Với tình cảm sâu sắc, chân thành, cho phép em bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến tất cá nhân, tổ chức tạo điều kiện giúp đỡ trình học tập nghiên cứu đề tài Trước tiên, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Vũ Văn Hạnh, Phòng Các chất chức sinh học, Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm khoa học công nghệ Việt Nam tận tình hướng dẫn, giúp đỡ em trình thực đề tài hồn thành luận văn Đồng thời, em xin cảm ơn chị: chị Nguyễn Thị Nguyệt, chị Nguyễn Thị Tuyền, chị Hoàng Ngọc Anh, chị Đặng Thị Hà Thu, làm việc phịng Các chất chức sinh học, Viện Cơng nghệ sinh học, Viện Hàn lâm khoa học công nghệ Việt Nam nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình làm luận văn Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy cô giáo đặc biệt ThS Tống Văn Hải tạo điều kiện cho em thử sức môi tường làm việc vô chuyên nghiệp, đại giúp em phát triển thân mở mang tầm hiểu biết toàn thể bạn bè giúp đỡ em suốt thời gian thực đề tài tốt nghiệp Dù cố gắng hồn thành tốt khóa luận giới hạn kiến thức khả lý luận thân cịn nhiều hạn chế, kính mong dẫn đóng góp thầy để khóa luận hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 05 tháng 09 năm 2022 Sinh viên Bùi Thị Khánh Ly ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH ẢNH viii PHẦN THỨ NHẤT – MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu 1.2.1 Mục tiêu chung 1.2.2 Mục tiêu cụ thể PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan dịch chiết thuốc 2.1.1 Sim 2.1.2 Ổi 2.1.3 Ngải cứu 2.2 Tổng quan kháng sinh thực vật 2.2.1 Khái niệm 2.2.2 Phân loại kháng sinh thực vật 2.2.3 Tiềm ứng dụng kháng sinh thực vật 2.2.4 Nhược điểm thách thức 2.3 Tổng quan các chủng lợi khuẩn 2.3.1 Khái niệm 2.3.2 Một số loại Probiotics phổ biến 10 2.4 Tổng quan vi khuẩn gây bệnh 11 2.4.1 Vibrio harveyi 11 2.4.2 Vibrio paraheamolyticus 12 2.4.3 Staphylococcus aureus 13 2.4.4 Escherichia coli 14 2.4.5 Aeromonas hydrophila 15 iii 2.4.6 Streptococcus 16 2.4.7 Flavobacterium 16 2.5 Tổng quan bacteriocin 17 2.5.1 Khái niệm bacteriocin 17 2.5.2 Đặc điểm, tính chất 18 2.5.3 Phân loại bacteriocin 18 2.5.4 Cơ chế hoạt động 19 2.5.5 Đặc tính Bacteriocin 19 2.6 Tổng quan tình hình nghiên cứu sử dụng dịch chiết thực vật phòng trị bệnh động vật, thuỷ sản 20 2.7 Cơ sở thực tiễn 21 PHẦN THỨ BA - ĐỐI TƯỢNG, PHẠM VI, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 3.1 Đối tượng nghiên cứu 22 3.1.1 Vật liệu nghiên cứu 22 3.1.2 Dụng cụ máy móc trang thiết bị, hóa chất 23 3.1.3 Môi trường nuôi cấy vi sinh vật 23 3.2 Nội dung nghiên cứu 24 3.3 Phương pháp nghiên cứu kĩ thuật sử dụng 24 3.3.1 Phương pháp chiết tách hợp chất kháng khuẩn từ thực vật 24 3.3.2 Đánh giá tác dụng diệt khuẩn dịch chiết thực vật 26 3.3.3 Phương pháp xác định hoạt tính kháng khuẩn 27 3.3.4 Định danh chủng vi sinh vật chọn lọc có khả sinh tổng hợp bacteriocin 27 3.4 Phương pháp sử lí số liệu 29 PHẦN THỨ – KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 4.1 Tiến hành chiết tách hợp chất kháng khuẩn từ Sim, ổi ngải cứu 30 4.2 Tiến hành chiết tách hợp chất kháng khuẩn từ Sim, Ổi phương pháp lên men với số chủng lợi khuẩn 33 iv 4.2.1 Tuyển chọn chủng lợi khuẩn có khả sinh tổng hợp bacteriocin để lên men với dịch chiết thực vật 33 4.2.2 Một số đặc tính sinh học chủng 34 4.2.3 Định danh đến loài chủng vi sinh vật tuyển chọn 36 4.2.4 Lên men dịch thực vật với số chủng lợi khuẩn 42 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO 56 PHỤC LỤC HÌNH ẢNH 59 v DANH MỤC VIẾT TẮT STT Kí hiệu Giải thích STT Kí hiệu Giải thích ĐC (-) Nước khử trùng 19 MRS De man rogosa and sharpe ĐC (+) Kháng sinh Streptomicin 20 Nem Nem chua Aero Aeromonas 21 NC Ngải cứu Chao Chao 22 NCBI National Center for Biotechnology Information Ca Cà muối 23 NCet Ngải cứu chiết ethanol CMC Carboxymethyl Cellulose 24 NCS Ngải cứu sắc CPTM Chế phẩm thương mại 25 Ô Ổi LMD14 Ngày thứ 14 26 Ô+S Ổi mix sim LMD3 Ngày thứ 27 ÔCet Ổi chiết ethanol 10 LMD4 Ngày thứ 28 ÔS Ổi sắc 11 LMD5 Ngày thứ 29 Rca Ruột cá 12 LMD7 Ngày thứ 30 S Sim 13 DM Dưa muối 31 14 ĐC Đối chứng 32 SCet Sim chiết ethanol 15 E coli Escherichia coli 33 SSac Sim sắc 16 Flavo Flavobacterium 34 Strep Streptococcus 17 KC Kim chi 35 Tbot Tinh bột 18 LB Luria Bertani 36 TCA Axit trichloroacetic S Staphylococcus aureus aureus vi DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Lên men dịch chiết thực vật với chủng vi khuẩn chọn lọc 25 Bảng 3.2 Môi trường thạch điều kiện nuôi cấy 26 Bảng 3.3 Trình tự mồi sử dụng nghiên cứu 29 Bảng 3.4 Thành phần phản ứng PCR 29 Bảng 3.5 Chu trình phản ứng PCR 29 Bảng 4.1 Khả kháng khuẩn mẫu thực vật 31 Bảng 4.2 Kết đo vòng kháng khuẩn số chủng lợi khuẩn 33 Bảng 4.3 Một số đặc điểm sinh học chủng chọn lọc 35 Bảng 4.4 Đặc điểm sinh hóa chủng tuyển chọn 36 Bảng 4.5 Kết thử nghiệm kháng khuẩn mẫu dịch Ổi lên men với chủng lợi khuẩn sau ngày 44 Bảng 4.6 Kết thử nghiệm kháng khuẩn mẫu dịch Sim lên men với chủng lợi khuẩn sau ngày 47 Bảng 4.7 Kết thử nghiệm kháng khuẩn mẫu dịch Sim+Ổi lên men với chủng lợi khuẩn sau ngày 50 Bảng 4.8 Kết thử nghiệm kháng khuẩn mẫu dịch kết hợp với số chủng lợi khuẩn khác 53 vii DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 2.1 Vibrio harveyi 11 Hình 2.2 Vibrio paraheamolyticus 12 Hình 2.3 Staphylococcus aureus 13 Hình 2.4 Escherichia coli 14 Hình 2.5 Aeromonas hydrophila 15 Hình 2.6 Streptococcus 16 Hình 2.7 Flavobacterium 16 Hình 4.1 Khả kháng khuẩn dịch chiết thực vật 30 Hình 4.2 Đồ thị khả kháng khuẩn mẫu thực vật 31 Hình 4.1 Khuẩn lạc hình thái tế bào chủng Chao7 32 Hình 4.2 Khuẩn lạc hình thái tế bào chủng Nem7 32 Hình 4.3 Khuẩn lạc hình thái tế bào chủng Nem4 33 Hình 4.6 Thử hoạt tính Catalase 35 Hình 4.7 Kết điện di sản phẩm PCR 36 Hình 4.8 Cây phát sinh chủng loại chủng vi khuẩn chọn lọc Chao7 với trình tự gen GenBank có mức độ tương đồng cao 37 Hình 4.9 Cây phát sinh chủng loại chủng vi khuẩn chọn lọc Nem7 với trình tự gen GenBank có mức độ tương đồng cao 39 Hình 4.10 Cây phát sinh chủng loại chủng vi khuẩn chọn lọc Nem4 với trình tự gen GenBank có mức độ tương đồng cao 41 Hình 4.11 Kết thử nghiệm kháng khuẩn mẫu dịch Ổi lên men với chủng lợi khuẩn sau ngày 43 Hình 4.12 Kết thử nghiệm kháng khuẩn mẫu dịch Sim lên men với chủng lợi khuẩn sau ngày 46 Hình 4.13 Kết thử nghiệm kháng khuẩn mẫu dịch Sim+Ổi lên men với chủng lợi khuẩn sau ngày 49 Hình 4.14 Kết thử nghiệm kháng khuẩn mẫu dịch kết hợp với số chủnglợi khuẩn khác 52 viii V V harveyi parahaemolyticus C7N7N4 C7 N7 10 N4 10 LMD14 C7N4 N7C7 N4N7 C7N7N4 Sim 11 12 ĐC(+) 27 23 ĐC(-) Ghi (-): khơng có vịng kháng khuẩn Sim S aureus 12 24 - E coli 26 - Kết thử nghiệm khả ức chế chủng vi khuẩn kiểm định tổ hợp dịch chiết sim lên men với chủng lợi khuẩn bảng 4.6 cho thấy nồng độ 100mg/ml, CT4 ngày lên men thứ tất tổ hợp có khả ức chế vi khuẩn gây bệnh đặc biệt chủng vi khuẩn gây bệnh đường ruột V parahaemolyticus tổ hợp SimC7, SimC4, SimN4C7, SimN7C7N4 cho đường kính vòng kháng khuẩn cao 11mm với đối chứng dịch chiết sim Có thể thấy hoạt tính ức chế chủng vi khuẩn gây bệnh tổ hợp khác ngày khác khác nhau, tốt tổ hợp SimN4 ngày lên men thứ (cho vòng ức chế vi khuẩn V parahaemolyticus: 12mm; S aureus: 16mm) Cụ thể là, khả ức chế vi khuẩn V parahaemolyticus tổ hợp SimN4, SimN7 ngày lên men thứ SimN4N7 ngày lên men thứ cho đường kính vịng kháng khuẩn 12mm; vi khuẩn S aureus tổ hợp SimC7N7N4 ngày lên men thứ cho đường kính vịng kháng khuẩn cao 20mm Các tổ hợp có chứa chủng lợi khuẩn Nem4, Nem7 cho vòng ức chế vi khuẩn mức trung bình cho vịng ức chế cao S aureus 48 Sim+Ổi LMD3 LMD4 LMD5 LMD7 LMD14 V harveyi V parahaemolyticus S aureus E coli Hình 4.13 Kết thử nghiệm kháng khuẩn mẫu dịch Sim+Ổi lên men với chủng lợi khuẩn sau ngày 49 Bảng 4.7 Kết thử nghiệm kháng khuẩn mẫu dịch Sim+Ổi lên men với chủng lợi khuẩn sau ngày Đơn vị đo đường kính vịng vơ khuẩn: mm V V S harveyi parahaemolyticus aureus C7 10 - 10 - N7 11 - 12 - N4 13 - 10 - C7N4 12 - 11 - N7C7 17 - 11 - N4N7 10 - - C7N7N4 10 - 11 - C7 - 11 - - N7 - 11 - - N4 - 12 - - C7N4 - 13 - - N7C7 - 13 - - N4N7 - 11 - - C7N7N4 - - - C7 - - - - N7 - - - - N4 - - - - C7N4 - - - - N7C7 - - - - N4N7 - - - - C7N7N4 - - - - C7 - - - - N7 - - 10 - Sim+Ổi LMD3 LMD4 LMD5 LMD7 E coli 50 V V S harveyi parahaemolyticus aureus N4 - - - - C7N4 - - - - N7C7 - - - - N4N7 - - - - C7N7N4 - - - - C7 - - - - N7 - - 10 - N4 - - - - LMD14 C7N4 - - - - N7C7 - - - - N4N7 - - - - C7N7N4 - - - - Sim+Ổi 16 17 14 - ĐC(+) 24 24 25 27 ĐC(-) - - - - Sim+Ổi E coli Ghi (-): khơng có vịng kháng khuẩn Kết thử nghiệm khả ức chế chủng vi khuẩn kiểm định tổ hợp dịch chiết Sim+Ổi lên men với chủng lợi khuẩn bảng 4.7 cho thấy nồng độ 100mg/ml, CT4, ngày lên men thứ tất tổ hợp có khả ức chế vi khuẩn gây bệnh đặc biệt chủng vi khuẩn gây bệnh đường ruột V parahaemolyticus chủng vi khuẩn S.aureus; ngày lên men thứ tất tổ hợp có khả ức chế chủng vi khuẩn gây bệnh đường ruột Vibrio harveyi Có thể thấy hoạt tính ức chế chủng vi khuẩn gây bệnh tổ hợp khác ngày khác khác nhau, tốt tổ hợp S+ÔN7C7 ngày lên men thứ (cho vòng ức chế vi khuẩn V harveyi: 17mm; S aureus: 51 11mm).Cụ thể là, tổ hợp S+ƠN7C7 cho đường kính vịng kháng khuẩn cao với V harveyi 17mm lớn đối chứng dịch chiết sim (17>16) Khả ức chế vi khuẩn V parahaemolyticus tổ hợp S+ÔN4C7 S+ÔN7C7 ngày lên men thứ cho đường kính vịng kháng khuẩn 13mm nhỏ đối chứng dịch chiết Sim Ổi (1313) Có 9/48 tổ hợp có khả kháng vi khuẩn kiểm định V parahaemolyticus tổ hợp dịch chiết ổi với vi khuẩn TR34, dịch chiết sim với vi khuẩn TR34 cho vòng kháng khuẩn cao 24mm > đối chứng dịch chiết ổi sim 24>12; 16 Tổ hợp TR34 kết hợp với loại dịch chiết cho khả kháng khuẩn tốt Bình luận: Sự khác biệt hoạt tính sinh học ức chế chủng vi khuẩn gây bệnh tổ hợp ảnh hưởng nhiều yếu tố là: khả phân giải hợp chất hữu thành chất ức chế vi khuẩn chủng lợi khuẩn; ức chế dịch chiết thực vật tới việc tổng hợp hợp chất kháng khuẩn chủng lợi khuẩn; ức chế lẫn chủng lợi khuẩn bổ trợ lẫn chủng lợi khuẩn 54 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận: Nghiên cứu tách chiết hợp chất kháng khuẩn từ dịch chiết ổi, sim đạt kết khả quan khả kháng khuẩn loại dịch chiết (Sim, ổi, ngải cứu), phương pháp chiết khác (chiết dung môi nước, đun sôi, chiết dung môi ethanol, lên men dịch chiết với chủng lợi khuẩn) khác từ thấy dịch chiết thực vật chiết ethanol cho vòng kháng khuẩn tốt Dịch chiết CT3 cho khả kháng khuẩn tốt cho đường kính vịng kháng khuẩn với V harveyi, V parahaemolyticus, S.aureus, Aeromonas 19, 17, 17, 12 mm Ngoài mẫu dịch chiết ổi lên men với chủng TR33 TR34 CT5 cho đường kính vịng kháng khuẩn tốt với vi khuẩn V harveyi, V parahaemolyticus TR33 (20, 18), TR33 (21, 24) Định tính, định danh chủng Chao7, Nem7, Nem4 Trong chủng Nem4 có quan hệ gần gũi với Bacillus subtilis strain JRX-YJF1 Nem7 có quan hệ gần gũi với Bacillus subtilis strain MS00903 Chao7 có quan hệ gần gũi với Bacillus velezensis Đề nghị: Tiếp tục thực nghiên cứu thu nhận hoạt chất kháng khuẩn cụ thể Với khả sinh kháng sinh từ thực vật đem lại nhiều tiềm mang tính ứng dụng việc tạo chế phẩm sinh học có tiêm đời sống 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO  Tài liệu tiếng Việt Đặng Thị Lụa, Lại Thị Ngọc Hà & Nguyễn Thanh Hải (2015) Tác dụng diệt khuẩn dịch chiết sim hạt sim (Rhodomyrtus tomentosa) vi khuẩn gây hại vi khuẩn gây bênh hoại tử gan tụy gấp Tạp chí Khoa học Phát triển (7):1101-1108 Đặng Thị Lụa, Nguyễn Thị Hạnh, Hoàng Hải Hà, Trường Thị Mỹ Hạnh & Phan Thị Vân (2015) Tác dụng diệt khuẩn in vitro dịch chiết trầu không (Piper betle L.) dịch chiết ổi (Psidium guajava) vi khuẩn gây bệnh hoại tử gan tụy cấp tính tơm ni nước lợ Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển Nơng thơn (11): 92-97 Đỗ Tất Lợi (2006) Những vị thuốc Việt Nam Nhà xuất Y học, Hà Nội Dương Nhật Linh, Nguyễn Tấn Phát, Nguyễn Đoàn Thanh Liêm, Trần Thị Á Ni, Nguyễn Thanh Duy & Nguyễn Văn Minh (2019) Khảo sát tiềm kháng khuẩn từ cao chiết ổi (Psidium guajava L.) Tạp chí Khoa học Đại học Mở Thành phố Hồ Chí Minh 14(1):84-94 Lê Trọng Bằng (2021) Nghiên cứu phân lập sàng lọc chủng vi khuẩn biển có khả sinh tổng hợp Bacteriocin Lê Văn Phủng (2012) Vi khuẩn Y học , NXB Y Học, Hà Nội Nguyễn Hồng Loan (2010) Sử dụng chất chiết từ hồng kỳ (Astragalus membranaceus) để phịng bệnh mủ gan vi khuẩn Edwardsiella ictaluri cá tra Nguyễn Thị Vân Thái, Nguyễn Minh Phúc, Ngô Thị Kim, Nguyễn Kim Đô & Lưu Thị Dung (2003) Bàn tiềm phòng chữa trị bệnh nhiễm khuẩn kháng sinh thảo dược nuôi trồng thủy sản Báo cáo cơng trình khoa học Nhà xuất Nơng nghiệp Nguyễn Thu Sang (2015) Quy trình sản xuất Bacteriocin ứng dụng 10 Nguyễn Trọng Tuân & Phạm Thị Sánh (2019) Hoạt tính kháng oxy hóa cao chiết ethanol thân rễ Ngải tím (Kaempferia parviflora Wall Ex Baker), Ngải trắng (Curcuma aromatica Salisb.), Gừng gió (Zingiber zerumbet Sm.) 11 Nguyễn Văn Thanh & Nguyễn Thanh Hải (2014) Nghiên cứu tác dụng diệt khuẩn in vitro dịch chiết mò hoa trắng (Clerodendron fragrans Vent.) 56 vi khuẩn E coli, Salmonella spp phân lập từ phân lợn theo mẹ mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy thử nghiệm điều trị Tạp chí Khoa học Phát triển 12(5): 683 - 689 12 Trần Vinh Phương, Hoàng Thị Ngọc Hân, Đặng Thanh Long, Phạm Thị Hải Yến & Nguyễn Quang Linh (2019) Hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết chó đẻ thân (Phyllanthus amarus) vi khuẩn Vibrio parahaemolitycus Vibrio sp Gây bệnh hoại tử gan cấp tơm chân trắng (Litopenaeus vannamei) Tạp chí Khoa học Đại học Huế: Khoa học Tự nhiên 128(1):99–106 13 Tu, K M (2007) Kỹ thuật sản xuất dược phẩm [Pharmaceutical production techniques] NXB Y học  Tài liệu tiếng anh Abdeirahirn S I., Almadboul A Z., Omer M E A., & Elegami A (2002) Antimicrobial activity of Psidium guajava L Fitoterapia 73(7/8):713-715 Ahmed Y., Sohrab M H., Al-Reza S M., Tareq F S., Hasan C M., & Sattar M A (2010) Antimicrobial and cytotoxic constituents from leaves of Sapium baccatum Food and Chemical Toxicology 48(2):549-552 Arya V (2011) A review on antituberculosis plants Int J PharmaTech Res 3(2):872-880 Centers for Disease Control and Prevention (CDC) (2003) Outbreaks of community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus skin infections-Los Angeles County, California 52(5):88 Csurhes S., Hankamer C (2016) Ceylon Hill Cherry (DownyRose Myrtle): Rhodomyrtus tomentosa Brisbane, Queensland, Australia: Biosecurity Queensland Dachriyanus S., Sargent M V., Skelton B W., Soediro I., Sutisna M., White A H & Yulinah E (2002) Rhodomyrtone, an antibotic from Rhodomyrtus tomentosa Australian Journal of Chemistry 55(3):229 – 232 Deok J., Woo S.Y., Yanyan Y., Gyeongsug N., Ji H K., Deok H Y., Hyung J N., Sukchan L., Tae W K., Gi-Ho S & Jae Y C (2013) In vitro and in vivo antiinflammatory effect of Rhodomyrtus tomentosa methanol extract Journal of Ethnopharmacology 146(1): 205-213 Wei F (2006) Manufacture of Oral Liquid Containing Traditional Chinese Medicine Extract for Treating Gynecopathy (Guangxi Huahong Pharmaceutical Co., Ltd., People’s Republic of China; Shanghai Fosun Pharmaceutical (Group) Co., Ltd.), 57 Faming Zhuanli Shenqing Gongkai Shuomingshu People’s Republic of China Patent CN1846715 FAO (2013) Report of the FAO/MARD Technical Workshop on Early Mortality Syndrome (EMS) or Acute Hepatopancreatic Necrosis Syndrome (AHPND) of Cultured Shrimp (under TCP/VIE/3304) FAO Fisheries and Aquaculture Report No Ha Noi, Viet Nam (54):1053 10 Limsuwan S., Hesseling-Meinders A., Voravuthikunchai S.P., Van Dijl J.M., Kayser O (2011) Potential antibiotic and anti-infective effects of rhodomyrtone from Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk on Streptococcus pyogenes as revealed by proteomics Phytomedicine 18(11):40-934 11 Lim T (2012) Rhodomyrtus tomentosa Edible medicinal and nonmedicinal plants New York (7):7-732 12 Lowy FD (1998) Staphylococcus aureus infections, 339(8):32-520 13 Ong H & Nordiana M (1999) Malay ethno medico botany in Machang, Kelantan, Malaysia Fitoterapia 70(5):13-502 14 Rasigade P & Vandenesch F (2014) Staphylococcus aureus: a pathogen with still unresolved issues (21):4-510 15 Tokin B P (1951) Fitontsidy, 2nd ed Moscow 16 Tokin, B P (1974) Tselebnye iady rastenii: Povest’ o fitontsidakh, 2nd ed Leningrad, 17 Fitontsidy: Eksperiment, issledovaniia, voprosy teorii i praktiki  Trang web https://en.wikipedia.org/wiki/Vibrio_parahaemolyticus https://en.wikipedia.org/wiki/Vibrio_harveyi https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6470737/ https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Taxonomy/Browser/wwwtax.cgi?mode=Info &id=1423&lvl=3&keep=1&srchmode=1&unlock&mod=1&log_op=modifier_toggle https://www.nature.com/articles/s41598-017-01940-9 https://encyclopedia2.thefreedictionary.com/Phytoncides https://yhocbandia.vn/thuc-vat-nguon-khang-sinh-thien-nhien-phongphu.html 58 PHỤC LỤC HÌNH ẢNH STT TÊN MẪU Dưa muối chua Nem chua VI KHUẨN KIỂM ĐỊNH VH VP S.aureus E.coli 59 Chao Ruột cá Chế phẩm thương mại 60 Kim chi Cà muối Hình Kết thử hoạt tính kháng khuẩn 57 chủng Dịch chiết Dịch sắc Dịch chiết ethanol Hình Các loại dịch chiết 61 LMD3 LMD4 LMD5 LMD7 Ổi Sim Sim+Ổi Hình Các tổ hợp lên mem 62