Khảo sát sự sinh trưởng của nấm vân chi (trametes versicolor) trong môi trường nuôi cấy dạng dịch thể

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC -  - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT SỰ SINH TRƢỞNG CỦA NẤM VÂN CHI (TRAMETES VERSICOLOR) TRONG MÔI TRƢỜNG NUÔI CẤY DẠNG DỊCH THỂ Hà Nội, tháng năm 2021 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC -  - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: KHẢO SÁT SỰ SINH TRƢỞNG CỦA NẤM VÂN CHI (TRAMETES VERSICOLOR) TRONG MÔI TRƢỜNG NUÔI CẤY DẠNG DỊCH THỂ Sinh viên thực : Nguyễn Thị Diệu Linh Mã sinh viên : 637331 Lớp : K63CNSHD Ngành : Công nghệ sinh học Giảng viên hƣớng dẫn :TS Nguyễn Trƣờng Sơn PGS TS Nguyễn Văn Giang Hà Nội, tháng năm 2021 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan khóa luận tốt nghiệp hoàn toàn thực từ tháng 02/2022 đến tháng 08/2022 hướng dẫn TS Nguyễn Trường Sơn – nghiên cứu viên Viện sinh thái Tài nguyên sinh vật - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam PGS.TS Nguyễn Văn Giang - giảng viên Khoa Công nghệ Sinh học – Học viện Nơng nghiệp Việt Nam Tất số liệu, hình ảnh kết nghiên cứu luận văn hồn tồn trung thực khơng chép kết báo cáo tốt nghiệp trước Khóa luận tốt nghiệp có tham khảo tài liệu, thơng tin trích dẫn ghi phần tài liệu tham khảo Tôi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan trước hội đồng Học viện Hà Nội, ngày 05 tháng 09 năm 2022 Sinh viên Nguyễn Thị Diệu Linh i LỜI CÁM ƠN Lời đầu tiên, xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu Học viện Nơng nghiệp Việt Nam tồn thể q thầy, giáo khoa Công nghệ Sinh học - Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình giảng dạy, tạo điều kiện giúp đỡ tơi suốt q trình nghiên cứu hồn thành khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến người hướng dẫn tôi: TS Nguyễn Trường Sơn PGS.TS Nguyễn Văn Giang hết lịng giúp đỡ, dạy bảo, động viên tơi suốt q trình nghiên cứu hồn thành khóa luận Tôi xin trân thành cảm ơn ThS Trần Thu Hà các Trung tâm Nghiên cứu Phát triển nấm – Viện Di truyền Nông nghiệp tạo điều kiện không gian thời gian, sở vật chất tốt để tơi thực hành thí nghiệm Cuối cùng, với lịng kính trọng biết ơn vơ hạn, tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến bố, mẹ, anh trai toàn thể người thân bạn bè giúp đỡ, động viên, tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 05 tháng 09 năm 2022 Sinh viên Nguyễn Thị Diệu Linh ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CÁM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT .vii TÓM TẮT KẾT QUẢ viii PHẦN I: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu 1.3 Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn đề tài 1.3.1 Ý nghĩa khoa học 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung nấm Vân chi (Trametes versicolor) 2.1.1 Nguồn gốc, vị trí phân loại nấm Vân chi (Trametes versicolor) 2.1.2 Đặc điểm hình thái 2.1.3 Chu kỳ sống nấm Vân chi 2.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng nấm Vân chi 2.2.1 Yếu tố ngoại cảnh 2.2.2 Yếu tố dinh dưỡng 2.3 Thành phần hóa học giá trị dược liệu nấm Vân chi 2.3.1 Thành phần hóa học 2.3.2 Giá trị dược liệu nấm Vân chi 11 2.4 Nghiên cứu sản xuất nấm Vân chi giới Việt Nam 14 2.4.1 Tình hình nghiên cứu sản xuất nấm Vân chi giới 14 2.4.2 Tình hình nghiên cứu sản xuất Việt Nam 16 Phần III: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 iii 3.1 Đối tượng, vật liệu nghiên cứu 17 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 17 3.1.2 Vật liệu thí nghiệm 17 3.1.3 Địa điểm thời gian thực 17 3.2 Nội dung nghiên cứu 17 3.3 Phương pháp nghiên cứu 18 3.3.1 Thiết kế thí nghiệm 18 3.3.2 Bố trí thí nghiệm 19 3.3.3 Chuẩn bị thí nghiệm 19 3.3.4 Các tiêu theo dõi 20 3.3.5 Phương pháp xử lý số liệu 20 Phần IV: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 21 4.1 Khảo sát ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng carbon đến khả sinh trưởng hệ sợi chủng nấm Vân chi Tra-2 môi trường nuôi cấy dịch thể 21 4.2 Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng dinh dưỡng carbon đến khả sinh trưởng hệ sợi chủng nấm Vân chi Tra-2 môi trường nuôi cấy dịch thể 23 4.3 Khảo sát ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng nito đến khả sinh trưởng hệ sợi chủng nấm Vân chi Tra-2 môi trường nuôi cấy dịch thể 25 4.4 Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng dinh dưỡng nito đến khả sinh trưởng hệ sợi chủng nấm Vân chi Tra-2 môi trường nuôi cấy dịch thể 27 4.5 Khảo sát ảnh hưởng thời gian nuôi giống đến khả sinh trưởng hệ sợi chủng nấm Vân chi Tra-2 môi trường nuôi cấy dịch thể 29 4.6 Khảo sát ảnh hưởng tốc độ lắc đến khả sinh trưởng hệ sợi chủng nấm Vân chi Tra-2 môi trường nuôi cấy dịch thể 31 4.7 Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ giống cấy đến khả sinh trưởng hệ sợi chủng nấm Vân chi Tra-2 môi trường nuôi cấy dịch thể 33 Phần V: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 35 5.1 Kết luận 35 5.2 Kiến nghị 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO 36 PHỤ LỤC 39 iv DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Kết phân tích sơ thành phần hóa thực vật Bảng 4.1: Hệ sợi nấm Vân chi Tra-2 môi trường nuôi cấy dịch thể bổ sung nguồn carbon khác sau 96 nuôi, nhiệt độ 250C, pH 21 Bảng 4.2 Hệ sợi nấm Vân chi Tra-2 môi trường nuôi cấy dịch thể bổ sung hàm lượng carbon khác sau 96 nuôi, nhiệt độ 250C, pH 23 Bảng 4.3 Hệ sợi nấm Vân chi Tra-2 môi trường nuôi cấy dịch thể bổ sung nguồn nito khác sau 96 nuôi, nhiệt độ 250C, pH 25 Bảng 4.4 Ảnh hưởng hàm lượng nitơ đến sinh trưởng hệ sợi nấm Vân chi môi trường dịch thể 27 Bảng 4.5 Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy đến sinh trưởng hệ sợi nấm Vân chi môi trường dịch thể 29 Bảng 4.6 Ảnh hưởng tốc độ lắc đến sinh trưởng hệ sợi nấm Vân chi môi trường dịch thể 31 Bảng 4.7 Ảnh hưởng tỉ lệ giống đến sinh trưởng hệ sợi nấm Vân chi môi trường dịch thể 33 v DANH MỤC HÌNH Hình 2.1: Quả thể nấm Vân chi Hình 2.2: Chu kỳ phát triển nấm Vân chi Hình 2.3: Quả thể nấm Vân chi điều kiện ni trồng Hình 4.1: Hệ sợi nấm Vân chi Tra-2 môi trường nuôi cấy dịch thể bổ sung nguồn carbon khác sau 96 nuôi, nhiệt độ 250C, pH 22 Hình 4.2 Hệ sợi nấm Vân chi Tra-2 môi trường nuôi cấy dịch thể bổ sung hàm lượng carbon khác sau 96 nuôi, nhiệt độ 250C, pH 24 Hình 4.3 Hệ sợi nấm Vân chi Tra-2 môi trường nuôi cấy dịch thể bổ sung nguồn nito khác sau 96 nuôi, nhiệt độ 250C, pH 26 Hình 4.4 Ảnh hưởng hàm lượng nitơ đến sinh trưởng hệ sợi nấm Vân chi môi trường dịch thể 28 Hình 4.5 Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy đến sinh trưởng hệ sợi nấm Vân chi môi trường dịch thể 30 Hình 4.6 Ảnh hưởng tốc độ lắc đến sinh trưởng hệ sợi nấm Vân chi môi trường dịch thể 32 Hình 4.7 Ảnh hưởng tỉ lệ giống đến sinh trưởng hệ sợi nấm Vân chi môi trường dịch thể 34 vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Ý nghĩa LSD0.05 Sai số nhỏ có ý nghĩa 5% CV% Hệ số biến động PGA Potato Glucose Agar PA Potato Agar MT Môi trường CT Công thức LSD Least Significance Difference KLC Khuẩn lạc cầu MCM Mushroom complete medium vii TÓM TẮT KẾT QUẢ Đề tài nghiên cứu: “Khảo sát sinh trƣởng nấm Vân Chi (Trametes versicolor) môi trƣờng nuôi cấy dạng dịch thể” Nấm Vân chi (Trametes versicolor) biết đến lồi nấm có giá trị dược liệu q Trong nấm Vân chi có chứa hai loại hoạt chất sinh học polysaccharide peptide (PSP) polysaccharide krestin (PSK) chúng hợp chất polysaccharide liên kết với protein Hợp chất PSK chiết xuất từ nấm Vân chi chứng minh có khả kéo dài thời gian sống thêm năm cho bệnh nhân ung thư thuộc nhiều thể loại: ung thư dày, ung thư đại tràng, ung thư vòng họng, ung thư phổi Đề tài nhằm đánh giá ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy nguồn dinh dưỡng cacbon, nitơ, thời gian nuôi cấy, tốc độ lắc, tỷ lệ cấy giống đến khả tăng sinh trưởng khối sợi nấm Vân chi Tra-2 Kết nghiên cứu thu cho thấy: - Nguồn dinh dưỡng carbon thích hợp cho sinh trưởng hệ sợi nấm Vân chi Tra-2 môi trường nuôi cấy dịch thể glucose, với hàm lượng 20g/l môi trường Sinh khối sợi nấm đạt 9,61g/l - Nguồn dinh dưỡng nito thích hợp cho sinh trưởng hệ sợi nấm Vân chi Tra-2 môi trường nuôi cấy dịch thể cao nấm mem, với hàm lượng 2g/l môi trường Sinh khối sợi nấm đạt 9,58g/l - Thời gian ni cấy có ảnh hưởng đến khả sinh trưởng hệ sợi chủng nấm Vân chi Tra-2 môi trường nuôi cấy dạng dịch thể Thời gian nuôi tối ưu cho nhân nuôi chủng nấm Vân chi Tra-2 dạng dịch thể 96 giờ, sinh khối sợi nấm đạt 9,2g/l - Tốc độ lắc có ảnh hưởng đến khả sinh trưởng hệ sợi chủng nấm Vân chi Tra-2 môi trường nuôi cấy dạng dịch thể Tốc độ lắc tối ưu cho nhân nuôi chủng nấm Vân chi Tra-2 dạng dịch thể 160vòng/phút, sinh khối sợi nấm đạt 9,41g/l - Tỷ lệ giống cấy có ảnh hưởng đến khả sinh trưởng hệ sợi chủng nấm Vân chi Tra-2 môi trường nuôi cấy dạng dịch thể Tỷ lệ giống cấy tối ưu cho nhân nuôi chủng nấm Vân chi Tra-2 dạng dịch thể 10%, sinh khối sợi nấm đạt 9,25g/l viii trưởng chậm lại Do vậy, để tiết kiệm thời gian, chi phí tránh tạp nhiễm, tơi chọn mức ngày để bố trí thí nghiệm Từ kết thí nghiệm kiểm chứng song song với nhân giống cấp theo công nghệ cũ Kết cho thấy lượng giống gốc nhau, sau sử dụng cấy giống dịch thể thời gian sinh trưởng thời gian sinh trưởng giống dịch thể từ 3-5 ngày, nhanh nhiều so với sử dụng công nghệ cũ, thời gian nuôi sợi từ 16- 18 ngày 48h 72h 10g 96h 120h g Hình 4.5 Ảnh hƣởng thời gian nuôi cấy đến sinh trƣởng hệ sợi nấm Vân chi môi trƣờng dịch thể 30 4.6 Khảo sát ảnh hƣởng tốc độ lắc đến khả sinh trƣởng hệ sợi chủng nấm Vân chi Tra-2 môi trƣờng nuôi cấy dịch thể Lượng oxy hịa tan định mơi trường dịch thể ni giống nấm điều kiện thiếu trình ni giống nấm Trong q trình trao đổi chất sợi nấm không ngừng tiêu thụ oxy, khiến nồng độ oxy hịa tan ln có xu hướng giảm xuống, chế độ lắc thích hợp thúc đẩy hịa tan oxy, nâng cao mức độ tiếp xúc với oxy sợi nấm Tốc độ lắc ảnh hưởng nhiều đến sinh trưởng sợi nấm Vân chi Tra–2, thông thường giới hạn cho phép, chế độ lắc mạnh mật độ sợi nấm nhiều, sinh khối sợi tăng Tuy nhiên ngưỡng cho phép, chế độ lắc mạnh sinh khối sợi lại giảm, tốc độ lắc cao tạo lực tác động học lớn làm giảm tăng trưởng sợi nấm Kết theo dõi ảnh hưởng tốc độ lắc đến sinh trưởng phát triển giống nấm Vân chi trình bày Bảng 4.6 Hình 4.6 Bảng 4.6 Ảnh hƣởng tốc độ lắc đến sinh trƣởng hệ sợi nấm Vân chi môi trƣờng dịch thể Môi trường Đặc điểm Sinh khối sợi (g/100ml) CT 6.1 5,04 Dịch trong, KLC hình cầu có tua, mật độ thưa CT 6.2 6,05 Dịch trong, KLC hình cầu có tua, mật độ thưa CT 6.3 7,18 Dịch trong, KLC hình cầu có tua, mật độ trung bình CT 6.4 9,41 Dịch trong, KLC hình cầu có tua, mật độ dày CT 6.5 9,73 Dịch trong, KLC hình cầu có tua, mật độ dày LSD0,05 0,21 CV(%) 1,5 Ghi chú: CT 6.1: 100 vòng/ phút CT 6.2: 120 vòng/ phút CT 6.3: 140 vòng/ phút CT 6.4: 160 vòng/ phút CT 6.5: 180 vòng/ phút 31 Qua bảng 4.6 cho thấy nấm nấm Vân chi Tra-2 ni tốc độ lắc 180 vịng/phút mật độ hệ sợi nhiều, sinh khối sợi lớn (9,73g/l) Giống nấm Vân chi lắc chế độ 160vòng/phút cho mật độ KLC cao, viên sội to đẹp, có tua, sinh khối đạt 9,41g/l Khi cho giống nấm Tra-2 lắc tốc độ lắc 100-120vịng/phút sợi nấm khó bung, có xu hướng kết dính, cuận trịn lại, sinh khối sợi thấp đạt (5,04 – 6,05g/l) 100 120 140 vòng vịng vịng 160 180 vịng vịng Hình 4.6 Ảnh hƣởng tốc độ lắc đến sinh trƣởng hệ sợi nấm Vân chi môi trƣờng dịch thể Theo báo cáo We-Cheat Tan Cộng (2014) tốc độ lắc tối ưu để thu sinh khối nấm Linh chi 200 vòng/phút Tzu-Ching Wang Cộng (2012) chứng minh sinh khối nấm Lim xanh cao tốc độ lắc 100 vòng/phút Còn kết Nguyễn Thị Bích Thùy (2014) lại cho kết với tốc độ lắc 160 vịng/phút sinh khối nấm Sị vua đạt cực đại Như vậy, kết theo dõi tương tự phần với kết số nghiên cứu khác nấm Vân chi nuôi môi trường dịch thể 32 4.7 Khảo sát ảnh hƣởng tỷ lệ giống cấy đến khả sinh trƣởng hệ sợi chủng nấm Vân chi Tra-2 môi trƣờng nuôi cấy dịch thể Tỷ lệ giống gốc cấy vào môi trường dịch yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến tốc độ sinh trưởng giống, tới độ kích thước KLC Trong nghiên cứu giống trung gian nấm Vân chi, tỷ lệ giống cấy chúng tính theo tỷ lệ với môi trường nuôi cấy, giống nấm cấp nghiên cứu giai đoạn trước, tiếp tục thử nghiệm để giống trung gian Các tỷ lệ giống cấy nấm Vân chi cho môi trường là: 5%, 10%, 15%, 20% giống cấp so với môi trường nuôi Bảng 4.7 Ảnh hƣởng tỉ lệ giống đến sinh trƣởng hệ sợi nấm Vân chi môi trƣờng dịch thể Công thức Đặc điểm Sinh khối sợi (g/100ml) CT 7.1 6,34 Dịch trong, KLC hình cầu có tua, mật độ thưa CT 7.2 9,25 Dịch trong, KLC hình cầu có tua, mật độ dày CT 7.3 8,74 Dịch trong, KLC hình cầu có tua, mật độ trung bình CT 7.4 8,27 Dịch trong, KLC hình cầu có tua, mật độ trung bình LSD0,05 0,17 CV (%) 1,1 Ghi chú: CT 7.1: 5% giống/ chai CT 7.2: 10% giống/ chai CT 7.3: 15% giống/ chai CT 7.4: 20% giống/ chai Kết Bảng 7.1 cho thấy giống nấm Văn chi Tra-2 cấy với tỷ lệ giống thấp (5% giống so với môi trường) cho mật độ hệ sợi thấp, kích KLC lớn, sinh khối sợi thấp, kết thúc trình nước đạt 6.34g/l Khi cấy giống nấm với mức 10% giống cấp so với thể tích mơi trường nhân giống cấp cho sinh khối sợi cao đạt (9,25g/l) Khi tăng lượng giống cấy đến 15% dịch ni cấy dạng huyền phù, khí lưu thơng khó khăn, viên sợi có kích thước nhỏ, thường kết vón với nhau, sinh khối sợi nấm khơng tăng mà có xu hướng giảm đạt 8,27-8,74g/l 33 5% 15% 10% 20% Hình 4.7 Ảnh hƣởng tỉ lệ giống đến sinh trƣởng hệ sợi nấm Vân chi môi trƣờng dịch thể Theo báo cáo Hwang Cộng (2004), mật độ cấy q lớn, lưu thơng dịng chảy mơi trường lỏng bị ảnh hưởng mạnh số lượng sợi nấm Mơi trường q trình lên men làm cho q trình hấp thụ dinh dưỡng trao đổi oxy gặp nhiều khó khăn Đối với trạng thái cấu trúc sợi nấm có mơi trường, phát triển hạt có xu hướng nhớt so với dạng phát triển dạng sợi phân tán (Gibbs & cs., 2000) Các nghiên cứu trước phù hợp với phát tơi, thể tích chất cấy q lớn, đạt 15% mơi trường, dịch có dạng huyền phù cao, khó khăn cho lưu thơng dịch 34 Phần V: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Từ kết nghiên cứu, đề tài xác định được: - Nguồn dinh dưỡng carbon thích hợp cho sinh trưởng hệ sợi nấm Vân chi Tra-2 môi trường nuôi cấy dịch thể glucose, với hàm lượng 20g/l môi trường Sinh khối sợi nấm đạt 9,61g/l - Nguồn dinh dưỡng nito thích hợp cho sinh trưởng hệ sợi nấm Vân chi Tra-2 môi trường nuôi cấy dịch thể cao nấm mem, với hàm lượng 2g/l môi trường Sinh khối sợi nấm đạt 9,58g/l - Thời gian ni cấy có ảnh hưởng đến khả sinh trưởng hệ sợi chủng nấm Vân chi Tra-2 môi trường nuôi cấy dạng dịch thể Thời gian nuôi tối ưu cho nhân nuôi chủng nấm Vân chi Tra-2 dạng dịch thể 96 giờ, sinh khối sợi nấm đạt 9,2g/l - Tốc độ lắc có ảnh hưởng đến khả sinh trưởng hệ sợi chủng nấm Vân chi Tra-2 môi trường nuôi cấy dạng dịch thể Tốc độ lắc tối ưu cho nhân nuôi chủng nấm Vân chi Tra-2 dạng dịch thể 160vòng/phút, sinh khối sợi nấm đạt 9,41g/l - Tỷ lệ giống cấy có ảnh hưởng đến khả sinh trưởng hệ sợi chủng nấm Vân chi Tra-2 môi trường nuôi cấy dạng dịch thể Tỷ lệ giống cấy tối ưu cho nhân nuôi chủng nấm Vân chi Tra-2 dạng dịch thể 10%, sinh khối sợi nấm đạt 9,25g/l 5.2 Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu khảo sát khả sinh trưởng hệ sợi chủng nấm Vân chi Tra-2 môi trường dịch thể điều kiện nhân giống khác pH, dinh dưỡng khoáng, nhiệt độ cấp giống cao (cấp trung gian, cấp thương phẩm) Thử nghiệm nuôi trồng nấm Vân chi Tra-2 giá thể nuôi trồng sử dụng nguồn giống nấm dạng dịch thể, theo dõi, đánh giá khả hình thành thể, suất chủng giống nấm Vân chi Tra-2 so sánh với đối chứng (sử dung giống chất rắn) để đánh giá hiệu giống nấm Vân chi dạng dịch thể 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Đinh Xuân Linh, Thân Đức Nhã, Nguyễn Hữu Đống, Nguyễn Thị Sơn, Nguyễn Duy Trình, Ngơ Xn Nghiễn (2012) Kĩ thuật trồng, chế biến nấm ăn nấm dược liệu, Nhà Xuất Nông nghiệp (Tái lần thứ nhất) Lê Xuân Thám, Nguyễn Lê Quốc Hùng, Trương Thị Hồng, Hồng Thị Hoan,Phạm Ngọc Dương, Trương Bình Ngun (2010) Nghiên cứu đa dạng loài nấm hương Lentinula edodes Sapa, Lentinula cf lateritia, Đà Lạt Lentinula sp tìm thấy Cát Tiên – Việt Nam Tạp chí Cơng nghệ Sinh học 8(1): 87-101 Nguyễn Đức Lượng (2003) Vi sinh học công nghiệp, tập Nhà xuất Đại học Quốc Gia TP.HCM Nguyễn Lân Dũng (2003) Công nghệ nuôi trồng nấm, Tập Nhà xuất Nông nghiệp Trịnh Tam Kiệt (2012) Nấm lớn Việt Nam, Tập 2, NXB Khoa học Tự nhiên Công nghệ Hà Nội Vân, C T T (2015) Nghiên cứu qui trình phần lập, nhân giống dạng dịch thể để nuôi trồng nấm đầu khỉ (Hericium erinaceus (Bull.: FR.) Pers.) tách chiết số polysaccharide có hoạt tính sinh học (Doctoral dissertation, Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội) Nguyễn Thị Bích Thùy (2014), Nghiên cứu đặc điểm sinh học công nghệ nhân giống, ni trồng nấm sị vua (Pleurotus eryngii) nấm vân chi (Trametes versicolor) Việt Nam, Luận án tiến sĩ nông nghiệp, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Lê Xuân Thám (1996), Nấm linh chi – dược liệu quý Việt Nam, NXB Mũi Cà Mau Phan Huy Dục (2002), “Nấm Vân chi-nguồn dược liệu quý” Tạp chí Dược liệu, Số 5, tr.155; 132 10 Nguyễn Thị Chính (2011), Hồn thiện cơng nghệ sản xuất nấm dược liệu theo hướng công nghiệp để tạo thực phẩm chức hỗ trợ diều trị bệnh viêm gan, tiểu đường, khối u ung thư, nâng cao sức khỏe, Báo cáo tổng kết dự án khoa học công nghệ, quỹ phát triển khoa học công nghệ 11 Lê Xuân Thám, Trần Hữu Độ, Tamikazu Kume (1999), “Bổ sung vào nhóm nấm chống ung thư Việt Nam: Nấm vân chi Trametes versicolor (L.:Fr) Pilát”, Tạp chí dược học, số 2: 13-15 36 12 Lê Thị Tuyết Vân (2004), Tiêu chuẩn hoá nấm Vân chi Trametes versicolor (L.:Fr) Pilát, Coriolus vesicolor (L.: Fr) Quél, Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Dược học, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Tài liệu tiếng Anh Kidd, P.M (2000) The use of mushroom glucans and proteoglycans in cancer treatment Altern Med Rev, 5(1): p 4-27 Ooi, V E., & Liu, F (2000) Immunomodulation and anti-cancer activity of polysaccharide-protein complexes Current medicinal chemistry, 7(7), 715-729 Lin J.H and Yang S.S (2006), Mycelium and polysaccharide production of Agaricus blazei Murrill by submerged fermentation, J Microbiol Immunol Infect., 39(2): 98-108 Liu P., Li G and Wen S (2010), “Study for the liquid culture conditions of laccase production in Flammulina velutipes LP03”, Food Science: 31 -36 Wang, H., & Ng, T B (2006) Ganodermin, an antifungal protein from fruiting bodies of the medicinal mushroom Ganoderma lucidum Peptides, 27(1), 27-30 Hassan, Z K., Elobeid, M A., Virk, P., Omer, S A., ElAmin, M., Daghestani, M H., & AlOlayan, E M (2012) Bisphenol A induces hepatotoxicity through oxidative stress in rat model Oxidative medicine and cellular longevity Boa, E R (2004) Wild edible fungi: a global overview of their use and importance to people Miles, P W., & Oertli, J J (1993) The significance of antioxidants in the aphid‐plant interaction: the redox hypothesis Entomologia Experimentalis et Applicata, 67(3), 275283 Munro, E., Nance, J., & Priess, J R (2004) Cortical flows powered by asymmetrical contraction transport PAR proteins to establish and maintain anterior-posterior polarity in the early C elegans embryo Developmental cell, 7(3), 413-424 10 Collins, A., Dušinská, M., Franklin, M., Somorovská, M., Petrovská, H., Duthie, S., & Vaughan, N (1997) Comet assay in human biomonitoring studies: reliability, validation, and applications Environmental and molecular mutagenesis, 30(2), 139-146 11 Kawai G., Kobayashi H., Fukushima Y., Ohsaki K (1995), “Liquid culture induces early fruiting in Shiitake (Lentinula edodes)”, Mushroom Science, 14(2): 787-793 12 Jonathan S.G., Bawo D.D.S., Adejoye D.O and Briyai O.F (2009), “Studies on Biomass Production in Auricularia polytricha Collected from Wilberforce Island, Bayelsa State, Nigeria”, American Journal of Applied Sciences, 6(1): 182-186 37 13 Sukumar M., Sivasamy A and Swaminathan G (2008), Biological Decolorization of Dye House Effluent by Trametes sp.isolated from Contaminated Soil, Res J Biotech, 3(3): 53-58 14 Bolla K., Gopinath B V., Shaheen S.Z., Charya M.A.S (2010), “Optimization of carbon and nitrogen sources ofsubmerged culture process for the production of mycelial biomass and exopolysaccharides by Trametes versicolor”, International Journal for Biotechnology and Molecular Biology Research,1(2):15-21 15 Adebayo-Tayo B.C, Ugwu E.E (2011), “Influence of Different Nutrient Sources on Exopolysaccharide Production and Biomass Yield by Submerged Culture of Trametes versicolor and Coprinussp”, Australian Journal of Biotechnology,15(2): 63-69 16 Lee B.C., Bae J.T., Pyo H.B., Choe T.B., Kim S.W., Hwang H.J and Yun J.W., (2004), Submerged culture conditions for the production of mycelial biomass and exopolysaccharides by the edible Basidiomycetes Grifola frondosa, Enzyme and Microbial Technology, (35): 369-376 17 Lee B.C., Bae J.T., Pyo H.B., Choe T.B., Kim S.W., Hwang H.J and Yun J.W., (2004), Submerged culture conditions for the production of mycelial biomass and exopolysaccharides by the edible Basidiomycetes Grifola frondosa, Enzyme and Microbial Technology, (35): 369-376 18 Karaman M., Matavulj M Janjic L (2013), Antibacterial Agents from Lignicolous Macrofungi, University of Novi Sad, Department of Biology and Ecology, Novi Sad Serbia 19 Yan C W., Chen H., Qin J.Z., Chen Y D (2003), Studies on Liquid Inoculum Filtration and Cultivated Condition of Flammulina velutipes, Edible Fungi of China 20 Tzu-Ching W., Ta-Chen L., Jia-Hsin G (2012), Optimal conditions for mycelia biomass and extracellular polysaccharides of Grifola frondosa: Effect of agitation speed, inoculum ratio and initial pH, African Journal of Biotechnology, 11(23): 6317-6326 38 PHỤ LỤC Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hƣởng nguồn dinh dƣỡng carbon đến khả sinh trƣởng hệ sợi chủng nấm Vân chi Tra-2 môi trƣờng nuôi cấy dịch thể BALANCED ANOVA FOR VARIATE SK FILE CARBON 9/ 9/22 8:49 :PAGE Phan tich du lieu nguon Carbon cua nam Van chi VARIATE V003 SK LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 108501E-01 542503E-02 1.34 0.332 MT 7.44900 2.48300 611.84 0.000 * RESIDUAL 243493E-01 405822E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 7.48420 680382 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE CARBON 9/ 9/22 8:49 :PAGE Phan tich du lieu nguon Carbon cua nam Van chi MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 4 SK 8.69750 8.76000 8.76250 SE(N= 4) 0.318521E-01 5%LSD 6DF 0.110181 MEANS FOR EFFECT MT MT NOS 3 3 SK 9.61000 9.40000 7.73000 8.22000 SE(N= 3) 0.367796E-01 5%LSD 6DF 0.127227 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE CARBON 9/ 9/22 8:49 :PAGE Phan tich du lieu nguon Carbon cua nam Van chi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SK GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 8.7400 STANDARD DEVIATION C OF V |NL SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.82485 0.63704E-01 0.7 0.3317 |MT | | | 0.0000 | | | | Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hƣởng hàm lƣợng dinh dƣỡng carbon đến khả sinh trƣởng hệ sợi chủng nấm Vân chi Tra-2 môi trƣờng nuôi cấy dịch thể BALANCED ANOVA FOR VARIATE SK FILE HLC 9/ 9/22 8:57 :PAGE Phan tich du lieu ham luong Carbon cua nam Van chi 39 VARIATE V003 SK LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 244000E-02 122000E-02 0.27 0.770 MT 9.12864 2.28216 510.57 0.000 * RESIDUAL 357584E-01 446980E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 9.16684 654774 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE HLC 9/ 9/22 8:57 :PAGE Phan tich du lieu ham luong Carbon cua nam Van chi MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 5 SK 8.70800 8.71000 8.73600 SE(N= 5) 0.298992E-01 5%LSD 8DF 0.974982E-01 MEANS FOR EFFECT MT MT NOS 3 3 3 SK 7.46000 8.30000 9.58000 9.45000 8.80000 SE(N= 3) 0.385997E-01 5%LSD 8DF 0.125870 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE HLC 9/ 9/22 8:57 :PAGE Phan tich du lieu ham luong Carbon cua nam Van chi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SK GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 8.7180 STANDARD DEVIATION C OF V |NL SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.80918 0.66857E-01 0.8 0.7701 |MT | | | 0.0000 | | | | Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hƣởng nguồn dinh dƣỡng nito đến khả sinh trƣởng hệ sợi chủng nấm Vân chi Tra-2 môi trƣờng nuôi cấy dịch thể BALANCED ANOVA FOR VARIATE SK FILE NITO 9/ 9/22 9: :PAGE Phan tich du lieu nguon Nito cua nam Van chi VARIATE V003 SK LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 520003E-02 260002E-02 1.60 0.248 MT 51.6972 10.3394 ****** 0.000 * RESIDUAL 10 162043E-01 162043E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 51.7186 3.04227 - 40 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NITO 9: :PAGE Phan tich du lieu nguon Nito cua nam Van chi 9/ 9/22 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 6 SK 7.10333 7.11333 7.14333 SE(N= 6) 0.164339E-01 5%LSD 10DF 0.517837E-01 MEANS FOR EFFECT MT MT NOS 3 3 3 SK 9.51000 9.01000 7.61000 5.80000 5.48000 5.31000 SE(N= 3) 0.232410E-01 5%LSD 10DF 0.732332E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NITO 9/ 9/22 9: :PAGE Phan tich du lieu nguon Nito cua nam Van chi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SK GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 7.1200 STANDARD DEVIATION C OF V |NL SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.7442 0.40255E-01 0.6 0.2483 |MT | | | 0.0000 | | | | Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hƣởng hàm lƣợng dinh dƣỡng nito đến khả sinh trƣởng hệ sợi chủng nấm Vân chi Tra-2 môi trƣờng nuôi cấy dịch thể BALANCED ANOVA FOR VARIATE SK FILE HLNITO 9/ 9/22 9: :PAGE Phan tich du lieu ham luong Nito cua nam Van chi VARIATE V003 SK LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 584998E-02 292499E-02 2.32 0.178 MT 2.27963 759875 603.88 0.000 * RESIDUAL 754997E-02 125833E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 2.29303 208457 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE HLNITO 9/ 9/22 9: :PAGE Phan tich du lieu ham luong Nito cua nam Van chi MEANS FOR EFFECT NL 41 NL NOS 4 SK 8.95000 8.91250 8.96500 SE(N= 4) 0.177365E-01 5%LSD 6DF 0.613532E-01 MEANS FOR EFFECT MT MT NOS 3 3 SK 8.31000 9.47000 9.19000 8.80000 SE(N= 3) 0.204803E-01 5%LSD 6DF 0.708446E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE HLNITO 9/ 9/22 9: :PAGE Phan tich du lieu ham luong Nito cua nam Van chi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SK GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 8.9425 STANDARD DEVIATION C OF V |NL SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.45657 0.35473E-01 0.4 0.1784 |MT | | | 0.0000 | | | | Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hƣởng thời gian nuôi giống đến khả sinh trƣởng hệ sợi chủng nấm Vân chi Tra-2 môi trƣờng nuôi cấy dịch thể BALANCED ANOVA FOR VARIATE SK FILE TGIAN 9/ 9/22 9:10 :PAGE Phan tich du lieu thoi gian nuoi cay cua nam Van chi VARIATE V003 SK LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 843498E-01 421749E-01 1.89 0.231 MT 8.54482 2.84827 127.49 0.000 * RESIDUAL 134050 223417E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 8.76322 796657 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TGIAN 9/ 9/22 9:10 :PAGE Phan tich du lieu thoi gian nuoi cay cua nam Van chi MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 4 SK 8.45750 8.60500 8.65500 SE(N= 4) 0.747357E-01 5%LSD 6DF 0.258523 MEANS FOR EFFECT MT 42 MT NOS 3 3 SK 7.16000 8.69000 9.20000 9.24000 SE(N= 3) 0.862974E-01 5%LSD 6DF 0.298516 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TGIAN 9/ 9/22 9:10 :PAGE Phan tich du lieu thoi gian nuoi cay cua nam Van chi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SK GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 8.5725 STANDARD DEVIATION C OF V |NL SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.89256 0.14947 1.7 0.2310 |MT | | | 0.0000 | | | | Thí nghiệm 6: Khảo sát ảnh hƣởng tốc độ lắc đến khả sinh trƣởng hệ sợi chủng nấm Vân chi Tra-2 môi trƣờng nuôi cấy dịch thể BALANCED ANOVA FOR VARIATE SK FILE TTLAC 9/ 9/22 9:13 :PAGE Phan tich du lieu toc lac cua nam Van chi VARIATE V003 SK LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 670801E-01 335400E-01 2.63 0.131 MT 50.6276 12.6569 993.50 0.000 * RESIDUAL 101918 127398E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 50.7966 3.62833 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TTLAC 9/ 9/22 9:13 :PAGE Phan tich du lieu toc lac cua nam Van chi MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 5 SK 7.39400 7.55600 7.49600 SE(N= 5) 0.504772E-01 5%LSD 8DF 0.164601 MEANS FOR EFFECT MT MT NOS 3 3 SK 5.04000 6.05000 7.18000 9.41000 9.73000 SE(N= 3) 0.651658E-01 5%LSD 8DF 0.212499 - 43 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TTLAC 9/ 9/22 9:13 :PAGE Phan tich du lieu toc lac cua nam Van chi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SK GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 7.4820 STANDARD DEVIATION C OF V |NL SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.9048 0.11287 1.5 0.1314 |MT | | | 0.0000 | | | | Thí nghiệm 7: Khảo sát ảnh hƣởng tỷ lệ giống cấy đến khả sinh trƣởng hệ sợi chủng nấm Vân chi Tra-2 môi trƣờng nuôi cấy dịch thể BALANCED ANOVA FOR VARIATE SK FILE TLGIONG 9/ 9/22 9:15 :PAGE Phan tich du lieu ty le giong cay cua nam Van chi VARIATE V003 SK LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 464991E-02 232496E-02 0.30 0.754 MT 14.5458 4.84860 622.28 0.000 * RESIDUAL 467502E-01 779169E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 14.5972 1.32702 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TLGIONG 9/ 9/22 9:15 :PAGE Phan tich du lieu ty le giong cay cua nam Van chi MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 4 SK 8.16750 8.16000 8.12250 SE(N= 4) 0.441353E-01 5%LSD 6DF 0.152671 MEANS FOR EFFECT MT MT NOS 3 3 SK 6.34000 9.25000 8.74000 8.27000 SE(N= 3) 0.509630E-01 5%LSD 6DF 0.176289 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TLGIONG 9/ 9/22 9:15 :PAGE Phan tich du lieu ty le giong cay cua nam Van chi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SK GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 8.1500 STANDARD DEVIATION C OF V |NL SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.1520 0.88271E-01 1.1 0.7544 44 |MT | | | 0.0000 | | | |