Phân lập và nghiên cứu đặc điểm sinh học của các chủng xạ khuẩn nội sinh cây trinh nữ hoàng cung (crinum latifolium l) có khả năng đối kháng nấm phomopsis sp um254 gây bệnh thối quả xoài (khóa luận tốt nghiệp)

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC - - KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “PHÂN LẬP VÀ NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA CÁC CHỦNG XẠ KHUẨN NỘI SINH CÂY TRINH NỮ HỒNG CUNG (CRINUM LATIFOLIUM L.) CĨ KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG NẤM PHOMOPSIS SP UM254 GÂY BỆNH THỐI QUẢ XỒI” HÀ NỘI – 2022 HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC - - KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “PHÂN LẬP VÀ NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA CÁC CHỦNG XẠ KHUẨN NỘI SINH CÂY TRINH NỮ HOÀNG CUNG (CRINUM LATIFOLIUM L.) CÓ KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG NẤM PHOMOPSIS SP UM254 GÂY BỆNH THỐI QUẢ XOÀI” Sinh viên thực : TRẦN THỊ HỒNG ĐIỆP Lớp : K63-CNSHD Mã SV : 637313 Ngƣời hƣớng dẫn : ThS NGUYỄN THANH HUYỀN Bộ mơn : CƠNG NGHỆ VI SINH HÀ NỘI – 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu khóa luận trung thực chưa sử dụng công bố Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực khóa luận tốt nghiệp cảm ơn thông tin trích dẫn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 16 tháng 05 năm 2022 Sinh viên Trần Thị Hồng Điệp i LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin trân trọng cảm ơn ban Giám đốc Học viện, khoa Công nghệ Sinh học thầy, cô khoa tận tình giảng dạy, giúp đỡ tơi suốt trình học tập, rèn luyện Học viện Nông nghiệp Việt Nam, giúp trưởng thành nhân cách trình độ chun mơn Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn đến ThS Nguyễn Thanh Huyền – Bộ môn Công nghệ Vi sinh, khoa Công nghệ Sinh học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ, hướng dẫn tơi q trình triển khai đề tài, hồn thành khóa luận tốt nghiệp Nhân dịp tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới gia đình, người thân, bạn bè, người tạo điều kiện, động viên, giúp đỡ vượt qua khó khăn q trình học tập, nghiên cứu hồn thành khóa luận tốt nghiệp Tôi xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội, ngày 16 tháng 05 năm 2021 Sinh viên Trần Thị Hồng Điệp ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH vi TÓM TẮT ix MỞ ĐẦU Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan xạ khuẩn 1.1.1 Xạ khuẩn 1.1.2 Xạ khuẩn nội sinh 1.1.3 Sự phân bố xạ khuẩn nội sinh thực vật 10 1.1.4 Cách thức xâm nhập xạ khuẩn nội sinh 11 1.1.5 Vai trò xạ khuẩn nội sinh 13 1.2 Tình hình nghiên cứu xạ khuẩn nội sinh giới Việt Nam 18 1.2.1 Tình hình nghiên cứu xạ khuẩn nội sinh giới 18 1.2.2 Tình hình nghiên cứu xạ khuẩn nội sinh Việt Nam 21 1.3 Giới thiệu Trinh nữ hoàng cung 22 1.3.1 Cây Trinh nữ hoàng cung 22 1.3.2 Phân bố 23 1.3.4 Vai trò Trinh nữ hoàng cung 23 1.4 Tổng quan nấm Phomopsis sp (Diaporthe sp.) gây bệnh 25 1.4.1 Giới thiệu chung nấm Phomopsis sp 25 1.4.2 Cây chủ 25 1.4.3 Triệu chứng bệnh 25 1.4.3 Một số bệnh phổ biến Phomopsis sp gây trồng Việt Nam27 Chƣơng NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Vật liệu, thời gian địa điểm nghiên cứu 30 iii 2.1.1 Vật liệu nghiên cứu 30 2.1.2 Dụng cụ, thiết bị hóa chất thí nghiệm 30 2.1.3 Thời gian địa điểm nghiên cứu 32 2.2 Phương pháp nghiên cứu 32 2.2.1 Thu thập xử lý mẫu 32 2.2.2 Phương pháp xử lý bề mặt mẫu 32 2.2.3 Phương pháp phân lập chủng xạ khuẩn nội sinh 33 2.2.4 Đánh giá hoạt tính kháng nấm chủng xạ khuẩn nội sinh 33 2.2.5 Đánh giá đặc điểm hình thái xạ khuẩn đối kháng 34 2.2.6 Đánh giá đặc điểm sinh hóa xạ khuẩn đối kháng 34 2.2.7 Định danh chủng xạ khuẩn đối kháng tiềm dựa giải trình tự gen 16S rRNA 38 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 41 3.1 Phân lập chủng xạ khuẩn nội sinh từ Trinh nữ hoàng cung 41 3.2 Đánh giá khả đối kháng xạ khuẩn nội sinh với nấm Phomopsis sp 42 3.3 Đặc điểm sinh học chủng xạ khuẩn tuyển chọn 43 3.3.1 Đặc điểm hình thái 43 3.3.2 Đặc điểm sinh hóa hai chủng xạ khuẩn tuyển chọn 47 3.3.3 Khả sinh trưởng điều kiện nuôi cấy khác 51 3.3.4 Khảo sát khả sinh tổng hợp chất kích thích sinh trưởng (IAA) chủng xạ khuẩn nội sinh 53 3.3.6 Khả sinh kháng sinh thuộc nhóm Anthracycline HN04 HN05 55 3.3.5 Khả sinh enzyme ngoại bào 56 3.4 Định danh chủng xạ khuẩn HN05 dựa giải trình tự gen 16S rRNA 57 3.4.1 Tách chiết xác định nồng độ DNA tổng số 57 3.4.2 Khuếch đại trình tự gen 16S rRNA 58 3.4.3 Giải trình tự gen 16S rRNA xây dựng phát sinh loài 58 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 61 TÀI LIỆU THAM KHẢO 62 PHỤ LỤC 72 iv DANH MỤC BẢNG Bảng 1 Nghiên cứu giới loài xạ khuẩn nội cộng sinh thực vật năm gần 19 Bảng 2 Chỉ số OD 530nm nồng độ khác 36 Bảng Trình tự mồi cho phản ứng PCR 39 Bảng Thành phần cho phản ứng PCR 39 Bảng Đặc điểm hình thái chủng xạ khuẩn nội sinh môi trường Gause I (sau ngày nuôi cấy) 41 Bảng Đặc điểm hình thái khuẩn lạc xạ khuẩn HN04 44 Bảng 3 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc xạ khuẩn HN05 45 Bảng Khả sử dụng nguồn carbon khác hai chủng xạ khuẩn nội sinh HN04 HN05 49 Bảng Khả sử dụng nguồn nitro khác hai chủng xạ khuẩn HN04 HN05 50 Bảng Khả sinh IAA HN04 HN05 54 Bảng Hoạt tính enzyme hai chủng HN04 HN05 56 Bảng Tỷ số A260/A280 nồng độ DNA có mẫu HN05 57 v DANH MỤC HÌNH Hình Sơ đồ biểu diễn vòng đời xạ khuẩn Hình Quá trình xâm nhập vào lỗ khí gian bào S galbus MBR-5 đỗ quyên sau 60 ngày quan sát 11 Hình Các giai đoạn hình thành tế bào ung thư 14 Hình Cấu trúc số kháng sinh điển hình thuộc nhóm anthracycline: DOX, DNR, EPI IDA 16 Hình Cây Trinh nữ hoàng cung 22 Hình Cấu tạo Trinh nữ hoàng cung 23 Hình Một số bệnh loài Phomopsis gây trồng 26 Hình Đặc điểm nấm Phomopsis mangiferae gây thối cuống xoài (Galsurker et al., 2018) 27 Hình 10 Đặc điểm nấm Phomopsis asparagi gây bệnh khô than khô cành măng tây 28 Hình 11 Đặc điểm nấm Phomopsis longicolla gây bệnh đậu tương 29 Hình Đường chuẩn IAA 36 Hình Hình ảnh số chủng xạ khuẩn nội sinh phân lập môi trường Gause I sau ngày nuôi cấy 41 Hình Đánh giá khả đối kháng HN04 HN05 với nấm P01 sau ngày cấy nấm 42 Hình 3 Hiệu lực ức chế chủng xạ khuẩn đối kháng nấm kiểm định P01 sau ngày cấy nấm 43 Hình Hình thái khuẩn lạc chủng xạ khuẩn nội sinh HN04 môi trường 44 Hình Hình thái khuẩn lạc chủng xạ khuẩn nội sinh HN05 môi trường 45 Hình Hình thái hệ sợi (A), Cuống sinh bào tử bào tử (B C) xạ khuẩn HN04 46 vi Hình Hình thái hệ sợi (A), Cuống sinh bào tử bào tử (B C) xạ khuẩn HN05 47 Hình Hình Khả đồng hóa nguồn carbon chủng xạ khuẩn HN04 A Đối chứng dương; B Đối chứng âm; C D – Xylose 48 Hình Khả đồng hóa nguồn carbon chủng xạ khuẩn HN05 48 Hình 10 Khả đồng hóa nguồn nitơ chủng xạ khuẩn HN04 49 Hình 11 Khả đồng hóa nguồn nitơ chủng xạ khuẩn HN05 50 Hình 12 Khả sinh trưởng chủng xạ khuẩn nội sinh HN04 HN05 nhiệt độ 25oC, 35oC 45oC 52 Hình 13 Khả sinh IAA chủng xạ khuẩn tuyển chọn 54 Hình 14 Kết đánh giá khả sinh anthracycline chủng HN04 55 Hình 15 Khả sinh enzyme ngoại bào HN04 HN05 56 Hình 16 Kết điện di sản phẩm PCR chủng xạ khuẩn HN05 gel agarose 1.5 % 58 Hình 17 Cây phát sinh chủng loại dựa trình tự gen 16S rRNA 59 vii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Tên đầy đủ Chữ viết tắt CMC Carboxymethyl Cellulose Cs., Cộng DNA Deoxyribonucleic Acid et al et alii et aliae ISP International Streptomyces Project (Hệ thống phân loại xạ khuẩn quốc tế) OD Optical density (mật độ quang) PDA Potato Dextrose Agar PIRG Percentage inhibition of radial growth (Phần trăm ức chế phát triển) rRNA Ribosomal Ribonucleic Acid SCA Starch Casein Agar SFM Mannitol Soya Flour sp Species ssp Subspecies viii infection by Phomopsis mangiferae Postharvest Biology and Technology 55(2): 71-77 25.Dharumadurai D., Thajuddin N & Annamalai P (2012) Applications of Actinobacterial Fungicides in Agriculture and Medicine 26.Dochhil H., Dkhar M S & Barman D (2013) Seed germination enhancing activity of endophytic Streptomyces isolated from indigenous ethnomedicinal plant Centella asiatica Int J Pharm Biol Sci 4(1): 256-262 27.El-Tarabily K A., St J Hardy G E & Sivasithamparam K (2010) Performance of three endophytic actinomycetes in relation to plant growth promotion and biological control of Pythium aphanidermatum, a pathogen of cucumber under commercial field production conditions in the United Arab Emirates European journal of plant pathology 128(4): 527-539 28.Farhad Masoomi-Aladizgeh L J., Reza Khayam Nekouei et al (2019) A Simple and Rapid System for DNA and RNA Isolation from Diverse Plants Using Handmade Kit PROTOCOL (Version 2) 29.Galsurker O., Diskin S., Feygenberg D., Feygenberg O & Alkan N (2018) Fruit Stem-End Rot Horticulturae 4: 50 30.Gangwar M., Khushboo S P & Saini P (2014) Diversity of endophytic actinomycetes in Musa acuminata and their plant growth promoting activity J Biol Chem Sci 1(1): 13-23 31.Garcia-Reyne A., López-Medrano F., Morales J M., García Esteban C., Martín I., Era I., Meije Y., Lalueza A., Alastruey-Izquierdo A., Rodríguez-Tudela J L & Aguado J M (2011) Cutaneous infection by Phomopsis longicolla in a renal transplant recipient from Guinea: first report of human infection by this fungus Transpl Infect Dis 13(2): 204-7 32.González I., Ayuso-Sacido A., Anderson A & Genilloud O (2005) Actinomycetes isolated from lichens: evaluation of their diversity and detection of biosynthetic gene sequences FEMS Microbiol Ecol 54(3): 40115 65 33.Ghosal S., Rao P H & Saini K S (1985) Natural Occurrence of 11-OAcetylambelline and 11-O-Acetyl-l ,2-β-epoxyambelline in Crinum latifolium: Immuno-regulant Alkaloids Pharm Res 2(5): 251-2 34.Golinska P., Wypij M., Agarkar G., Rathod D., Dahm H & Rai M (2015) Endophytic actinobacteria of medicinal plants: diversity and bioactivity Antonie Van Leeuwenhoek 108(2): 267-89 35.Hosseini B., El-Hasan A., Link T & Voegele R (2020) Analysis of the species spectrum of the Diaporthe/Phomopsis complex in European soybean seeds Mycological Progress 19: 455-469 36.Igarashi Y., Iida T., Sasaki T., Saito N., Yoshida R & Furumai T (2002) Isolation of actinomycetes from live plants and evaluation of antiphytopathogenic activity of their metabolites Actinomycetologica 16(1): 9-13 37.Ilic S.B., Konstantinovic S.S., Todorovic Z.B., Lazic M.L., Veljkovic V.B., Jokovic N., and Radovanovic B.C (2007) Characterization and antimicrobial activity of the bioactive metabolites in Streptomycete isolates Mikrobiologiia 76: 480 – 487 38.Kaewkla O & Franco C M M (2016) Kribbella pittospori sp nov., an endophytic actinobacterium isolated from the surface-sterilized stem of an Australian native apricot tree, Pittosporum angustifolium Int J Syst Evol Microbiol 66(6): 2284-2290 39.Kaewkla O., Thamchaipinet A & Franco C M M (2017) Micromonospora terminaliae sp nov., an endophytic actinobacterium isolated from the surface-sterilized stem of the medicinal plant Terminalia mucronata Int J Syst Evol Microbiol 67(2): 225-230 40.Kaishing T, Khunjamayum R and DS N (2018) Plant growth promotion by endophytic actinobacteria associated with medicinal plants Adv Biot, 5, 113 66 41.Khamna S., Yokota A., Peberdy J F & Lumyong S (2010) Indole-3-acetic acid production by Streptomyces sp isolated from some Thai medicinal plant rhizosphere soils EurAsian Journal of BioSciences 42.Kumamoto T (2010) Synthetic studies on kinamycin antibiotics., Yakugaku Zasshi 130(11): 1535-41 43 Loria R., Bukhalid R A., Fry B A & King R R (1997) Plant pathogenicity in the genus Streptomyces Plant Dis 81(8): 836-846 44 Matsukawa E., Nakagawa Y., Iimura Y & Hayakawa M (2007) Stimulatory effect of indole-3-acetic acid on aerial mycelium formation and antibiotic production in Streptomyces spp Actinomycetologica 21(1): 3239 45 Malfanova N., Lugtenberg B., and Berg G (2013) Chapter 2, in “Molecular microbial ecology of the rhizosphere”, de Bruijn FJ (ed), Wiley Blackwell 46.Minotti G., Menna P., Salvatorelli E., Cairo G & Gianni L (2004) Anthracyclines: molecular advances and pharmacologic developments in antitumor activity and cardiotoxicity Pharmacological reviews 56(2): 185229 47.Nalini M & Prakash H (2017) Diversity and bioprospecting of actinomycete endophytes from the medicinal plants Letters in applied microbiology 64(4): 261-270 48 Nguyen Huu Lac Thuy, Vo Thi Bach Hue & Le Quang Hanh Thu (2011) Antioxidant activity of extracts from Crinum latifolium L., Amaryllidaceae Proceeding of The 7th Indochina Conference on Pharmaceutical Sciences 607-611) 49.Nimnoi P., Pongsilp N & Lumyong S (2010) Endophytic actinomycetes isolated from Aquilaria crassna Pierre ex Lec and screening of plant growth promoters production World Journal of Microbiology and Biotechnology 26(2): 193-203 67 50.Patten C L & Glick B R (2002) Role of Pseudomonas putida indoleacetic acid in development of the host plant root system Applied and Environmental Microbiology 68(8): 3795-3801 51.Pimentel M R., Molina G., Dionísio A P., Maróstica Junior M R & Pastore G M (2011) The use of endophytes to obtain bioactive compounds and their application in biotransformation process Biotechnol Res Int 2011: 576286 52.Pridham T & Gottlieb D (1948) The utilization of carbon compounds by some Actinomycetales as an aid for species determination Journal of Bacteriology 56(1): 107-114 53 Phan T., Ng H., Hong Lien N & Linh N (2016) Biological characteristics and production of plant growth regulator IAA by endophytic Streptomyces hebeniensis TQR8-7 54: 31-39 54 Phuakjaiphaeo C., Chang C I., Ruangwong O & Kunasakdakul K (2016) Isolation and identification of an antifungal compound from endophytic Streptomyces sp CEN26 active against Alternaria brassicicola Letters in applied microbiology 63 55.Prudence S M M., Addington E., Castaño-Espriu L., Mark D R., PintorEscobar L., Russell A H & McLean T C (2020) Advances in actinomycete research: an ActinoBase review of 2019 Microbiology (eading) 166(8): 683-694 56 Qin S., Zhao G Z., Klenk H P., Li J., Zhu W Y., Xu L H & Li W J (2009) Nonomuraea antimicrobica sp nov., an endophytic actinomycete isolated from a leaf of Maytenus austroyunnanensis Int J Syst Evol Microbiol 59(Pt 11): 2747-51 57 Qin S., Xing K., Jiang J H., Xu L H & Li W J (2011) Biodiversity, bioactive natural products and biotechnological potential of plant-associated endophytic actinobacteria Appl Microbiol Biotechnol 89(3): 457-73 68 58.Rahman M.A., Begum M.F and Alam M.F (2009) Screening of Trichoderma Isolates as a Biological Control Agent Against Ceratocystis paradoxa Causing Pineapple Disease of Sugarcane Mycobiology Vol 37(4) pp 277-285 59 Salam N., Khieu T N., Liu M J., Vu T T., Chu-Ky S., Quach N T., Phi Q T., Narsing Rao M P., Fontana A., Sarter S & Li W J (2017) Endophytic Actinobacteria Associated with Dracaena cochinchinensis Lour.: Isolation, Diversity, and Their Cytotoxic Activities Biomed Res Int 2017: 1308563 60 Sardi P., Saracchi M., Quaroni S., Petrolini B., Borgonovi G & Merli S (1992) Isolation of endophytic Streptomyces strains from surface-sterilized roots Applied and Environmental Microbiology 58(8): 2691-2693 61 Sasaki, T., Igarashi, Y., Saito, N & Furumai, T 2001 Cedarmycins A and B, new antimicrobial antibiotics from Streptomyces sp TP-A0456 J Antibiot 54(7): 567-72 62.Shenoy B D., Jeewon R., Wang H., Amandeep K., Ho W H., Bhat D J., Crous P W & Hyde K D (2010) Sequence data reveals phylogenetic affinities of fungal anamorphs Bahusutrabeeja, Diplococcium, Natarajania, Paliphora, Polyschema, Rattania and Spadicoides Fungal Diversity 44(1): 161-169 63.Shirling E.B., Gottlieb D (1966) Methods for characterization of Streptomyces species Int J Syst Bacteriol Vol 16 pp 313-40 64.Shutsrirung A., Chromkaew Y., Pathom-Aree W., Choonluchanon S & Boonkerd N (2013) Diversity of endophytic actinomycetes in mandarin grown in northern Thailand, their phytohormone production potential and plant growth promoting activity Soil Science and Plant Nutrition 59(3): 322-330 65 Shimizu M (2011) Endophytic Actinomycetes: Biocontrol Agents and Growth Promoters In: Bacteria in Agrobiology: Plant Growth Responses 69 Maheshwari, D K (ed.) Springer Berlin Heidelberg Berlin, Heidelberg: 201-220 pages 66.Stanley T Williams M E Sharpe, J G Holt (1989) Bergey’s Mannual of Systematic bacteriology, Williams & Wilkins, 4: 2452-2492 67 Staniek A., Woerdenbag H J & Kayser O (2008) Endophytes: exploiting biodiversity for the improvement of natural product-based drug discovery Journal of Plant Interactions 3(2): 75-93 68 Subbulakshmi G., Thalavaipandian A., Ramesh V & Rajendran A (2012) Bioactive endophytic fungal isolates of Biota orientalis (L) Endl., Pinus excelsa Wall and Thuja occidentalis L International Journal of Advanced Life Sciences (IJALS) 4: 9-15 69 Suzuki T., Shimizu M., Meguro A., Hasegawa S., Nishimura T & Kunoh H (2005) Visualization of infection of an endophytic actinomycete Streptomyces galbus in leaves of tissue-cultured rhododendron Actinomycetologica 19(1): 7-12 70.Taechowisan T., Peberdy J F & Lumyong S (2003) Isolation of endophytic actinomycetes from selected plants and their antifungal activity World Journal of Microbiology and Biotechnology 19(4): 381-385 71 Taechowisan T., Chanaphat S., Ruensamran W & Phutdhawong W S (2014) Antibacterial and Anticandidal Activities of New Flavonoids from Streptomyces sp HK17; an Endophyte in Curcuma longa Linn 72 Tam H., Thanh D & Tram T (2021) Isolation and Characterization of Actinobacteria in Rhizosphere of Crinum latifolium (L.) Cultivated in Tay Ninh Province, Vietnam International Journal of Innovations in Engineering and Technology 13: 26-33 73 Tan H., Cao L., He Z., Su G., Lin B & Zhou S (2006) Isolation of endophytic actinomycetes from different cultivars of tomato and their activities against Ralstonia solanacearum in vitro World Journal of Microbiology and Biotechnology 22(12): 1275-1280 70 74.Tamura K., Stecher G., Peterson D., Filipski A & Kumar S (2013) MEGA6: Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 6.0 Molecular biology and evolution 30(12): 2725-2729 75.Thao L D & Matsumoto M (2020) Genetic diversity and pathogenic characteristics of Phomopsis asparagi obtained from Asparagus officinalis and A kiusianus in Japan Journal of Plant Diseases and Protection 127(6): 843-853 76.Trease GE, Evans WC (1996) A textbook of Pharmacognosy 14th ed Bailliere Tindall Ltd, London, 832 77 Udayanga D., Liu X., McKenzie E., Chukeatirote E., Bahkali A & Hyde K (2011) The genus Phomopsis: Biology, applications, species concepts and names of common phytopathogens Fungal Diversity 50: 189-225 78.Verma V C., Gond S K., Kumar A., Mishra A., Kharwar R N & Gange A C (2009) Endophytic actinomycetes from Azadirachta indica A Juss.: isolation, diversity, and anti-microbial activity Microbial ecology 57(4): 749-756 79 Zhao K., Penttinen P., Guan T., Xiao J., Chen Q., Xu J., Lindström K., Zhang L., Zhang X & Strobel G A (2011) The diversity and antimicrobial activity of endophytic actinomycetes isolated from medicinal plants in Panxi plateau, China Current microbiology 62(1): 182-190 71 PHỤ LỤC Phụ lục Các xạ khuẩn nội sinh phân lập từ mẫu rễ, thân, Trinh nữ hoàng cung HN01 HN02 HN03 HN04 HN05 HN06 72 Phụ lục Các thử nghiệm đánh giá hoạt tính kháng nấm chủng xạ khuẩn nội sinh sau ngày cấy nấm HN01 HN02 HN03 HN04 HN05 HN06 73 Phụ lục Khả đồng hóa nguồn đường hai chủng xạ khuẩn nội sinh HN04 HN05 * HN04 D- xylose Fructose Lactose Dextrin * HN05 Phụ lục Khả đồng hóa nguồn nitro hai chủng xạ khuẩn nội sinh HN04 HN05 * HN04 KNO3 (NH4)2SO4 Urae * HN05 74 Meat extract Phụ lục Ảnh hưởng nhiệt độ tới khả sinh trưởng hai chủng xạ khuẩn nội sinh HN04 HN05 * HN04 25oC 40oC * HN05 30oC 45oC 35oC 50oC 25oC 30oC 40oC 45oC 75 35oC 50oC Phụ lục Ảnh hưởng pH tới khả sinh trưởng hai chủng xạ khuẩn nội sinh HN04 HN05 * HN04 pH4 pH5 pH7 pH8 pH9 pH10 pH11 pH12 pH13 76 pH6 * HN05 pH3 pH4 pH5 pH6 pH7 pH8 pH9 pH10 pH11 pH12 pH13 77 Phụ lục Ảnh hưởng nồng độ NaCl tới khả sinh trưởng hai chủng xạ khuẩn nội sinh HN04 HN05 * HN04 0% 0.5% 3% 5% 9% 11% 1% 7% 78 * HN05 0% 0.5% 1% 3% 5% 7% 9% 11% 79