Phân lập và tuyển chọn một số chủng vi khuẩn có khả năng phân giải phosphate khó tan từ đất vùng rễ cây cà phê ở tây nguyên

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG VI KHUẨN CÓ KHẢ NĂNG PHÂN GIẢI PHOSPHATE KHÓ TAN TỪ ĐẤT VÙNG RỄ CÂY CÀ PHÊ Ở TÂY NGUYÊN   HÀ NỘI - 2021 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG VI KHUẨN CÓ KHẢ NĂNG PHÂN GIẢI PHOSPHATE KHÓ TAN TỪ ĐẤT VÙNG RỄ CÂY CÀ PHÊ Ở TÂY NGUYÊN   SINH VIÊN THỰC HIỆN : NGUYỄN THỊ NHUNG KHĨA : 62 NGÀNH : CƠNG NGHỆ SINH HỌC GIẢNG VIÊN HƯỚNG DẪN : TS NGUYỄN THANH HẢO HÀ NỘI - 2021 LỜI CAM ĐOAN   Tôi xin cam đoan đề tài: “Phân lập tuyển chọn số chủng vi khuẩn có khả phân giải phosphate khó tan từ đất vùng rễ cà phê Tây Ngun” cơng trình nghiên cứu độc lập thực thời gian từ tháng 03/2021- 09/2021 hướng dẫn giảng viên: TS Nguyễn Thanh Hảo TS Nguyễn Đình Luyện Đề tài, nội dung khóa luận sản phẩm mà tơi nỗ lực nghiên cứu trình học tập trường tham gia thực tập Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Các số liệu kết nghiên cứu khóa luận trung thực Khóa luận tốt nghiệp có tham khảo tài liệu, thơng tin trích dẫn đầy đủ, nguồn gốc rõ ràng, công bố rõ phần tài liệu tham khảo Hà Nội, ngày tháng năm Sinh viên thực Nguyễn Thị Nhung i LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành trân trọng đến T.S Nguyễn Đình Luyện, Viện Hóa học hợp chất Thiên nhiên, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, người hướng dẫn tận tình, chu đáo tạo điều kiện thuận lợi cho thực hồn thành đề tài khóa luận tốt nghiệp Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Thanh Hảo – Khoa Công nghệ Sinh học, thầy tận tình giúp đỡ, hướng dẫn khoa học định hướng nghiên cứu suốt q trình tơi học tập hồn thành khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn đến Thầy, Cô ngồi khoa Cơng nghệ sinh học, Trường Học viện Nơng nghiệp Việt Nam giảng dạy, cung cấp kiến thức để tơi hồn thành học phần chun đề chương trình đào tạo Tơi xin cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè ln quan tâm, hỗ trợ động viên suốt thời gian qua để tơi hồn thành tốt nhiệm vụ học tập q trình nghiên cứu Mặc dù tơi cố gắng thực trình thực tập cách hoàn thiện với điều kiện thời gian, kiến thức, kinh nghiệm hạn chế mình, báo cáo khơng thể tránh thiếu sót Tơi mong nhận đóng góp ý kiến Thầy, Cơ để tơi hồn thiện, nâng cao kiến thức phục vụ tốt cho công tác làm việc thực tế sau Xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm Sinh viên thực Nguyễn Thị Nhung ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT viii TÓM TẮT ix PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích nội dung nghiên cứu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Nội dung nghiên cứu PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tồng quan cà phê 2.2 Tình hình sản xuất tiêu thụ cà phê giới Việt Nam 2.2.1 Tình hình sản xuất tiêu thụ cà phê giới 2.2.2 Tình hình sản xuất tiêu thụ cà phê Việt Nam 2.3 Tổng quan đất trồng cà phê Tây Nguyên 2.3.1 Đất trồng cà phê 2.3.2 Các dạng phosphate đất 10 2.4 Tổng quan vi sinh vật phân giải phosphate 11 2.5 Tình hình nghiên cứu vi sinh vật có khả phân giải phosphate khó tan đất giới Việt Nam 14 2.5.1 Tình hình nghiên cứu giới 14 2.5.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 15 PHẦN 3: VẬT LIỆU PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 3.1 Địa điểm lấy mẫu nghiên cứu 18 3.2 Dụng cụ, hoá chất thiết bị 18 iii 3.3 Nội dung nghiên cứu 19 3.4 Phương pháp nghiên cứu 19 3.4.1 Phương pháp thu thập mẫu 19 3.4.2 Phương pháp phân lập mẫu 19 3.5 Phương pháp xác định hoạt độ phân giải phosphate khó tan chủng vi sinh vật 21 3.6.Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng đến khả phân giải phosphate khó tan chủng vi sinh vật tuyển chọn 22 3.6.1 Khảo sát ảnh hưởng pH 22 3.6.2 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ 22 3.6.3 Khảo sát ảnh hưởng nguồn Cacbon (C) 23 3.6.4 Khảo sát ảnh hưởng nguồn N 23 3.6.5 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ muối 23 3.6.6 Khảo sát khả sinh enzyme ngoại bào chủng vi khuẩn 24 3.7 Xác định khả kích thích sinh trưởng thực vật chủng vi khuẩn vùng rễ có khả phân giải phosphate khó tan 25 3.8 Khảo sát khả đối kháng chủng vi sinh vật tuyển chọn với chủng vi sinh vật gây bệnh hại trồng 26 PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 4.1 Phân lập tuyển chọn chủng vi sinh vật có khả phân giải phosphate khó tan 27 4.1.1 Phân lập chủng vi sinh vật 27 4.1.2 Tuyển chọn chủng phân lập 28 4.2 Kết thử hoạt tính phân giải phosphate khó tan chủng vi sinh vật 30 4.2.1 Kết dựng đường chuẩn nồng độ PO43- 30 4.2.2 Định lượng khả phân giải phốt phát khó tan 31 4.3 Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng đến khả phân giải phosphate khó tan chủng vi sinh vật tuyển chọn 32 4.3.1 Khảo sát ảnh hưởng pH 32 iv 4.3.2 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ 33 4.3.3 Khảo sát ảnh hưởng nguồn cacbon đến khả phân giải phosphate khó tan 34 4.3.4 Khảo sát ảnh hưởng nguồn nitrogen đến khả phân giải phosphate khó tan 36 4.3.5 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ muối đến khả phân giải phosphate khó tan 37 4.3.6 Kết khả sinh enzyme ngoại bào chủng vi khuẩn 38 4.4 Xác định khả sinh chất kích thích sinh trưởng IAA chủng sinh vật chọn lọc 40 4.4.1 Kết xây dựng đường chuẩn IAA cho phép phân tích 40 4.4.2 Phân tích mẫu thực 41 4.5 Khảo sát khả đối kháng chủng vi sinh vật tuyển chọn với chủng vi sinh vật gây bệnh thực vật 43 4.6 Đặc điểm sinh học chủng vi khuẩn tuyển chọn 45 4.6.1 Chủng vi khuẩn CN1.2 45 4.6.2 Chủng vi khuẩn CN1.10 48 4.6.3 Chủng vi khuẩn CN2.15 50 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 52 5.1 Kết luận 52 5.2 Kiến nghị 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 PHỤ LỤC 61 v DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Axit hữu sản xuất PSMES 12 Bảng 2.2 Xây dựng dãy nồng độ đường chuẩn 22 Bảng 4.1 Phân lập chủng vi khuẩn có khả phân giải phosphate khó tan 27 Bảng 4.2 Giá trị OD450 nồng độ khảo sát ảnh hưởng pH chủng vi khuẩn có khả phân giải phosphate 33 Bảng 4.3 Giá trị OD450 nồng độ khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ chủng vi khuẩn có khả phân giải phosphate 34 Bảng 4.4 Giá trị OD450 nồng độ khảo sát ảnh hưởng nguồn C chủng vi khuẩn có khả phân giải phosphate 35 Bảng 4.5 Giá trị OD450 nồng độ khảo sát ảnh hưởng nguồn N chủng vi khuẩn có khả phân giải phosphate 36 Bảng 4.6 Giá trị OD450 nồng độ khảo sát ảnh hưởng nồng độ muối chủng vi khuẩn có khả phân giải phosphate 38 Bảng 4.7 Khả sinh emzyme ngoại bào chủng vi khuẩn 39 Bảng 4.8 Khả đối kháng chủng vi sinh vật tuyển chọn với chủng vi khuẩn gây bệnh thực vật 44 Bảng 4.9 Bảng đặc điểm sinh lý/tế bào chủng vi khuẩn CN1.2 46 Bảng 4.10 Khả lên men loại đường khác chủng vi khuẩn CN1.2 46 Bảng 4.11 Đặc điểm sinh lý/ sinh hóa vi khuẩn CN1.10 48 Bảng 4.12 Đặc đặc điểm sinh lý/sinh hóa chủng CN2.15 50 vi DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Cây cà phê Hình 2.2 Sản lượng tiêu thụ cà phê toàn cầu (nguồn: ICO) Hình 4.1 Chủng vi khuẩn mẫu Cà phê 28 Hình 4.2 Chủng vi khuẩn mẫu cà phê 29 Hình 4.3 Chủng vi khuẩn mẫu Cà phê 29 Hình 4.4 Chủng vi khuẩn mẫu Cà phê 30 Hình 4.5 Đồ thị đường chuẩn sử dụng phép phân tích Vanadate-molybdate với chất khử molybphosphoric 31 Hình Đồ thị hoạt độ phân giải phosphate chủng phân lập 31 Hình 4.7 Vịng phân giải amylase chủng vi khuẩn 39 Hình 4.8 Vịng phân giải cellulose chủng vi khuẩn 39 Hình 4.9 Vịng phân giải protease chủng vi khuần 40 Hình 4.10 Đồ thị đường chuẩn IAA 41 Hình 4.11 Khả sinh IAA chủng tuyển chọn 42 Hình 4.12 Bảng khả đối kháng chủng vi sinh vật tuyển chọn với chủng vi khuẩn gây bệnh thực vật 44 Hình 4.13 Đặc điểm khuẩn lạc (A), hình thái tế bào (B), nhuộm Gram vi khuẩn CN1.2 (C) 45 Hình 4.14 Hình dạng khuẩn lạc, tế bào nhuộm Gram vi khuẩn CN1.10 48 Hình 4.15 Khuẩn lạc (A) nhuộm Gram vi khuẩn CN2.15 50 vii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt Giải nghĩa µl Microliter ĐC Đối chứng IAA Indole-3-acetic acid OD Optical Density CMC Carboxymethyl cellulose nm Nanometer NXB Nhà xuất PSM Phosphate Solubilizing Microorganisms Sp Species UV Ultra Violet CFU Colony Formig Unit PCR Polymerase Chain Reaction C Cacbon N Nito P Phospho rDNA Ribosomal DNA ICO International Coffee Organization mm Millimeter mg Miligram ATP Adenosine triphotphat ADP Adenosine diphosphat AMP Adenosine monophosphate viii D-galactose - D-glucose + D-fructose + D-mannose + L-sorbose - L-rhamnose - Dulcitol - Inositol - D-mannitol + Methyl-alpha-Dmannopyranoside - Methyl-alpha-Dglucopyranoside + N-acetylglucosamine - Amygdalin + Arbutin + Salicin + D-cellobiose + D-melibiose + D-trehalose + Inulin - Vi khuẩn CN2.15 nhân gen 16S rDNA phân tích dựa tương đồng cao với liệu ngân hàng gen NCBI Kết tương đồng gen vi khuẩn với vi khuẩn khác phân loại thể Kết BlAST trình tự gen 16S rDNA dài 1450nu với 1000 trình tự gen ngân hàng NCBI, cho thấy CN2.15 tương đồng cao 100% với nhiều loài thuộc chi Bacillus B subtilis (ID-MT641205.1), B amyloliquefaciens (ID-MT613661.1), B tequilensis (ID-MT704510.1), B velezensis (IDMT299679.1) Kết khẳng định vi khuẩn C2.15 thuộc chi Bacillus 51 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Từ nguồn mẫu đất trồng cà phê Tây Nguyên phân lập 21 chủng có hoạt tính phân giải phosphate khó tan Trong số tuyển chọn chủng có hoạt tính phân giải phosphate khó tan mạnh nhất: CN1.2, CN1.10, CN2.15 Điều kiện tối ưu cho chủng phân giải phosphate khó tan là:  Nguồn cacbon glucose sucrose  Nguồn N hữu thích hợp với chủng vi khuẩn là: casein, pepton, cao nấm men  pH tối ưu ngưỡng 6.5-7  Nhiệt độ ưa thích 35oC  Chịu nồng độ muối NaCl khoảng 0-2 % Cả chủng có hoạt tính sinh IAA, chủng CN1.10 có khả sinh IAA mạnh Các chủng có khả sinh enzyme ngoại bào Cả chủng vi khuẩn lựa chọn có khả đối kháng với chủng Xanthomonas axonopodis gây bệnh trồng Riêng chủng CN1.2 CN2.15 có khả đối kháng với chủng Bacillus subtilis 5.2 Kiến nghị Đánh giá hiệu chủng trồng điều kiện in vitro khu vực nuôi cấy Nghiên cứu áp dụng thực tế tạo chế phẩm vi sinh đưa vào phân bón trồng 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Cẩm nang trồng (2016), Cà phê Bạch Phương Lan (2004) Giáo trình vi sinh học ứng dụng, NXB Trường đại học Đà Lạt Bộ Tài Nguyên Môi trường (2010), Báo cáo môi trường Quốc gia2010, Hà Nội Hồng Thị Thái Hịa (2011) Giáo trình phân bón Đại học Nơng lâm Huế NXB Nơng Nghiệp Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty (2000) Vi sinh vật học NXB Giáo dục Nguyễn Như Hà (2005) Giáo trình thổ nhưỡng, nơng hóa NXB Hà Nội Nguyễn Xuân Thành (2007) Thực tập vi sinh vật chuyên ngành, NXB ĐH Nông nghiệp Hà Nội Nguyễn Thị Phương Chi, Phạm Thanh Hà (1999), Phối hợp chủng vi khuẩn cố định nitơ vi khuẩn hòa tan photphate để nâng cao hiệu phân vi sinh vật Báo cáo khoa học Hội nghị Công nghệ Sinh học Toàn Quốc Hà Nội 1999 Nxb KHKT Tr 428 – 433 Nguyễn Thu Hương, Trần Thị Thúy Hà, Nguyễn Văn Giang, “Phân lập, tuyển chọn vi khuẩn có khả phân giải phosphate khó tan từ đất vùng rễ lúa tỉnh Hải Dương” Tạp chí Khoa học Công nghệ Việt Nam, 60(8), 2018, Tr 8-15 10 Nguyễn Thị Dơn, Nguyễn Thị Kiều Diễm, Cao Ngoc Điệp (2012) Phân lập nhận diện vi khuẩn hòa tan lân kali từ mẫu vật liệu phong hóa đá hoa cương Núi Sâp, tỉnh An Giang Tạp chí Khoa học 2012:24a, tr 179- 186 11 Nguyễn Thị Phương Oanh, Trần Bửu Minh, Nguyễn Thị Pha (2013), Phân lập tuyển chọn số dòng vi khuẩn đất vùng rễ lúa có khả cố định đạm tổng hợp IAA Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, tr 82-88 53 12 Nguyễn Văn Giang, Hoàng Thị Vân, Trần Thị Đào, Trần Thị Huế, 2015 Phân lập nghiên cứu đặc điểm số chủng vi khuẩn có khả phân giải phốt phát khó tan đất Tạp chí Cơng nghệ Sinh học 13(2A), tr 753-762 13 Nguyễn Văn Minh, Đỗ Thị Nga (2015), Ảnh hưởng phân bón tổng hợp đến sinh trưởng, suất hiệu kinh tế cà phê vối giai đoạn kinh doanh đất Bazan tỉnh Đắk Lắk, Tạp chí khoa học phát triển 2015, tập 13, số 7) 14 Nguyễn Văn Giang, Nguyễn Đức Thái (2017), Phân lập, tuyển chọn chủng vi sinh vật có khả phân giải phosphate khó tan từ đất rừng Xn Liên Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nơng nghiệp Việt Nam - Số (79) 15 Phan Tuấn Triều (2009), Giáo trình tài ngun Đất Mơi trường, NXB ĐH Bình Dương 16 Phạm Văn Toản, Phạm Bích Hiên (2015) Nghiên cứu sử dụng vi sinh vật phân giải lân Việt Nam Viện khoa học Nông nghiệp Việt Nam 17 Phạm Quang Thu, Lê Khánh Vân (2005) Bước đầu tuyển chọn vi sinh vật phân giải phốt phát khó tan để sản xuất phân vi sinh phục vụ cho Lâm nghiệp Tạp chí khoa học lâm nghiệp 18 Phạm Thanh Hà, Nguyễn Thị Phương Chi (1999) Ảnh hưởng nguồn nito lên khả phân giải photphat khó tan chủng nấm sợi MN1 ĐT1, Hội nghị cơng nghệ Sinh học tồn quốc, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, tr 434-440 19 Phạm Thị Ngọc Lan, Trần Thị Thanh Nhàn (2008) Điều kiện nuôi cấy tối ưu cho sinh trưởng phát triển số chủng nấm mốc hòa tan phosphate vơ cơ, Tạp chí khoa học, đại học Huế, số 48 20 Phạm Thế Trịnh (2012) Nghiên cứu đặc điểm sử dụng đất đỏ Bazan tỉnh Đắk Lắk, Tạp chí khoa học phát triển tập 10 năm 2012 21 Trần Đức Quỳnh, Hoàng Thị Kiều Chinh (2010), Báo cáo cà phê 2020 22 Trần Thị Giang, Nguyễn Thị Quyên, Cao Ngọc Điệp (2014) Phân lập 54 nhận diện vi khuẩn vùng rễ kích thích sinh trưởng (PGPR) từ số loại rau ăn trồng thành phố Cần Thơ Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Phần B: Nông nghiệp, Thủy sản Công nghệ Sinh học: 35 (2014), tr 65-73 23 Trần Thị Huế, Tống Kim Thuần, Nguyễn Văn Giang, 2015 Phân lập tuyển chọn chủng vi sinh vật phân giải phốt phát sắt, phốt phát nhôm từ đất trồng chè Shan n Bái Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nơng nghiệp Việt Nam, Số 6(59), tr 97-102 24 Trần Văn Chính (2010) Giáo trình thổ nhưỡng học NXB Đại học Nông nghiệp Hà Nội 25 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 10784: 2015 Vi sinh vật - Xác định khả sinh tổng hợp axit 3-indol-axetic (IAA) 26 Trần Thị Ngọc Sơn, Trần Thị Anh Thư, Cao Ngọc Điệp, Lưu Hồng Mẫn Nguyễn Ngọc Nam (2011) Hiệu phân hữu phân vi sinh sản xuất lúa trồng cạn Đồng sông Cửu Long, Hội thảo – Colloque – Đại học Mở HCM- Université Ouverte de HCM ville 27 Vũ Duy Nhàn, Vũ Văn Dũng (2020), Phân lập đánh giá khả phân giải phosphate khó tan chủng vi sinh vật chịu mặn phân lập từ đất quần đảo Trường Sa Tạp chí Nghiên cứu KH&CN quân sự, Số Đặc san Hội thảo Quốc gia FEE 28 Vũ Thúy Nga, Nguyễn Ngọc Quyên, Trần Tú Thủy, Phạm Văn Toàn (2003) Nghiên cứu khả sinh tổng hợp IAA phân giải phosphate vơ khó tan vi khuẩn Bradyrhizobium Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống Báo cáo hội nghị CNSH toàn quốc NXB KH&CN Hà Nội, tr 349-352 29 Võ Đình Quang (1999) Trạng thái lân đất Việt Nam Kết nghiên cứu khoa học, – Viện thổ nhưỡng nơng hóa, NXB Nơng nghiệp Hà Nội 55 Tài liệu tiếng anh 30 Ajay Veer Singh, S Shah, B Prasad (2010) Effect of phosphate solubilizing bacteria on plant growth promotion and nodulation in soybean (Glycine max (L.) Merr.) Journal of Hill Agriculture 1(1) Pages:35-39 JanuaryJune 2010 31 Amit Sagervanshi, Priyanka Kumari, Anju Nagee, Ashwani Kumar (2012) Media isolated from anad agriculture soil International journal of life science and pharma research (2012) Vol 2/Issue 3/Jul-Sept 2012 32 Alvaro, P., Lang, E.,Verbarg, S., CaSproăer, C., Rivas, R.J.,(2009) Acinetobacter strains IH9 and OCI1, two rhizospheric phosphate solubilizing isolates able to promote plant growth, constitute a new genomovar of Acinetobacter calcoaceticus Microbiol (in Press) 33 Anita pandey, S Palnim, P Mulkalwar, M Nadeem (2002) Effect of temperature on solubilization of tricancicum phosphate by Pseudomonas corrugata Jounal of scientific & Industrial reseach Vol 61, June 2002, pages 457- 460 34 Azziz G., Bajsa N., Haghjou T., Taulé C., Valverde A., Igual J., et al (2012) Abundance, diversity and prospecting of culturable phosphate solubilizing bacteria on soils under crop–pasture rotations in a no-tillage regime in Uruguay Appl Soil Ecol 61, page 320–326 35 Alvaro Peixa, Elke Langb, Susanne Verbargb, Cathrin Spro"er, Rau'1 Rivas, Ignacio Santa-Reginaa, Pedro F Mateosc, Eustoquio Mart'ınezMolinac, Claudino Rodr'iguez-Barruecoa, Encarna Vela'zquezc (2009) Acinetobacter strains IH9 and OCI1, two rhizospheric phosphate solubilizing isolates able to promote plant growth, constitute a new 36 Amonette, J E., Russell, C K., Carosino, K A., Robinson, N L., & Ho, J T (2003) Toxicity of Al to Desulfovibrio desulfuricans Applied and Environmental Microbiology, 69(7), pages 4057-4066 37 Bruce N Ames (1966) Assay of inorganic phosphate, total phosphate and 56 phosphatases Methods in Enzymology, Volume 8, 1966, Pages 115–118 38 Becquer, A., Trap, J., Irshad, U., Ali, M A., & Claude, P (2014) From soil to plant, the journey of P through trophic relationships and ectomycorrhizal association Frontiers in Plant Science, 5, 548 39 Belimov, A A.,, A P Kojemiakov and C V Chuvarliyeva (1995) Interaction between barley and mixed cultures of nitrogen fixing and phosphate- solubilizing bacteria Plant Soil 173: pages 29-37 40 Contribution from the Dep of Agronomy, University of Illinois, Urbana Presented before Div S-2, Soil Sci Soc of Amer Stillwater, Okla Aug 24, 1966 41 Chung H, Park M, Madhaiyan M, Seshadri S, Song J, Cho H, Sa T, 2005 Isolation and characterization of phosphate solubilizing bacteria from the rhizosphere of crop plants of Korea Soil Biol Biochem 37 (10): 1970- 1974 42 Dighton J., Boddy L (1989) “Role of fungi in nitrogen, phosphorus and sulfur cycling in temperate forest ecosystems,” in Nitrogen, Phosphorus and Sulfur Utilization by Fungi eds Boddy L., Marchant R., Read D (Cambridge: Cambridge University Press) 269–298 43 David P., Raj R S., Linda R., Rhema S B., “Molecular characterization of phosphate solubilizing bacteria (PSB) and plant growth promoting rhizobacteria (PGPR) from pristine soils”.Int J Innov Sci Eng Technol.,2014, pages 317–324 44 Ely Nahas (2007) Phosphate solubilizing microorganisms: Effect of carbon, nitrogen, and phosphorus sources First International Meeting on Microbial Phosphate Solubilization Volume 102 of the series Developments in Plant and Soil Sciences pages 111-115 45 Goldstein A H (1994) “Involvement of the quinoprotein glucose dehydrogenase in the solubilization of exogenous phosphates by gramnegative bacteria,” in Phosphate in Microorganisms: Cellular and Molecular Biology eds Torriani-Gorini A., Yagil E., Silver S (Washington, 57 DC: ASM Press) 197–20 46 Gunes A, Ataoglu N, Turan M, Esitken A, Ketterings QM (2009) Effects of phosphate-solubilizing microorganisms on strawberry yield and nutrient concentrations J Plant Nutr Soil Sci 2009, 172; pages 385-392 47 Goldstein, A H (1986) Bacterial solubilization of mineral phosphates: höstorical perspective and future prospects American Journal of Alternative Agricuiture, 1(02), pages 51-57 48 H Rodríguez and R Fraga, “Phosphate solubilizing bacteria and their role in plant growth promotion” Biotechnology Advances, vol 17, pp 319–339, 1999 49 Havlin, J.L., Beaton, J.D., Tisdale, S.L and Nelson, W.L (1999), Soil fertilizer ans fertilizer, Prentice Hall 50 Higgins, N F., & Crittenden, P D (2015) Phytase activity in lichens The New Phytologist, 208(2), 544-554 http://doi.org/10.1111/nph.13454 51 Hamdali H, Bouizgarne B, Hafidi M, Lebrihi A, Virolle MJ, Ouhdouch Y (2008) Screening for rock phosphate solubilizing Actinomycetes from Moroccan phosphate mines Appl Soil Ecol 2008, 38; pages 12-19 52 Ilham Mardad, Aurelio Serrano, Abdelaziz Soukri (2014) Effect of Carbon, Nitrogen Sources and Abiotic Stress on Phosphate Solubilization by Bacterial Strains Isolated from a Moroccan Rock Phosphate Deposit J Adv Chem Eng 1:102 doi:10.4172/2090-4568.1000102 53 Jorquera MA, Hernandez MT, Rengel Z, Marschner P, Mora MD (2008): Isolation of culturable phosphor bacteria with both phytate-mineralization and phosphate-solubilization activity from the rhizosphere of plants grown in a volcanic soil Biol Fertif Soils 2008, 44; pages 1025-1034 54 Kang S C., Ha G C., Lee T G., Maheshwari D K (2002) Solubilization of insoluble inorganic phosphates by a soil inhabiting fungus sp Ps 102 Curr Sci 79 439–442 55 K B Selvi, J J A Paul, V Vijaya, and K Saraswathi, “Analyzing the 58 efficacy of phosphate solubilizing microorganisms by enrichment culture techniques,” Biochemistry and Molecular Biology Journal, vol 3, p 1, 2017 56 Katznelson H and B Bose (1959) Metabolic activity and phosphate Iving capability of bacterial isolates from wheat roots, rhizosphere and nonrhizosphere soil Can J Microbiol 5, pages 79-85 57 Khan M.S et al (2014), Phosphate Solubilizing Microorganisms Springer International Publishing Switzerland 2014 58 Khan MS, Zaidi A, Wani PA (2009).: Role of phosphate solubilising microorganisms in sustainable agriculture In Sustainable Agriculture springer; 2009:552 59 Kloepper, J W., R Lifshitz, & R M Zablotowicz (1989) Free-living bacterial inocula for enhancing crop productivity Trends in Biotechnology, pages 39-44 60 Lowell Busman, John Lamb, Gyles Randall, George Rehm, and Michael Schmitt (2009) The nature of phosphorus in soils University of Minnesota http://www.extension.umn.edu/ 61 Leandro M Marra, Silvia M de Oliveira-Longatti, Cláudio R.F.S Soares, José M de Lima, Fabio L Olivares, Fatima M.S Moreira (2015) Initial pH of medium affects organic acids production but not affect phosphate solubilization Braz J Microbiol vol.46 no.2 São Paulo Apr./June 2015 62 Mardad I, Serrano A, Soukri A., 2014 Effect of Carbon, Nitrogen Sources and Abiotic Stress on Phosphate Solubilization by Bacterial Strains Isolated from a Moroccan Rock Phosphate Deposit J Adv Chem Eng1:102 63 Metin Turan, Medine Gulluce, Nicolaus von Wirén, Fikrettin Sahin (2012) 64 S B Sharma, R Z Sayyed, M H Trivedi, and T A Gobi, “Phosphate solubilizing microbes: sustainable approach for managing phosphorus deficiency in agricultural soils,” SpringerPlus, vol 2, p 587, 2013 65 S A Sane and S K Mehta, “Isolation and evaluation of rock phosphate 59 solubilizing fungi as potential bio-fertilizer,” Journal of Fertilizers & Pesticides, vol 6, p 156, 2015 66 S Singh and K K Kapoor, “Inoculation with phosphate solubilizing microorganisms and a vesicular arbuscular mycorrhizal fungus improves dry matter yield and nutrient uptake by wheat grown in a sandy soil,” Biology and Fertility of Soils, vol 28, pp 139–144, 1999 67 S Mehrvarz, M R Chaichi, and H A Alikhani, “Effects of phosphate solubilizing microorganisms and phosphorus chemical fertilizer on yield and yield components of barely (hordeum vulgare L.),” American-Eurasian Journal of Agricultural and Environmental Science, vol 3, pp 822–828, 2008 68 Thiago Ferreira, Joel Shuler, Rubens Guimarães and Adriana Farah, CHAPTER 1: Introduction to Coffee Plant and Genetics, in Coffee: Production, Quality and Chemistry, 2019, pp 1-25 69 Teng, Z., Chen, Z., Zhang, Q et al, “Isolation and characterization of phosphate solubilizing bacteria from rhizosphere soils of the Yeyahu Wetland in Beijing, China”, Environ Sci Pollut Res 26, 2019, pages 33976– 33987 70 Talat Yasmeen Mujahid, Syed Abdus Subhan, Abdul Wahab, Javeria Masnoon, Nuzhat Ahmed and Tanveer Abbas, 2015 Effects of Different Physical and Chemical Parameters on Phosphate Solubilization Activity of Plant Growth Promoting Bacteria Isolated from Indigenous Soil Journal of Pharmacy and Nutrition Sciences, pages 64-70 71 Yield promotion and phosphorus solubilization by plant growth- promoting rhizobacteria in extensive wheat production in Turkey Journal of Plant Nutrition and Soil Science Volume 175, Issue December, 2012 pages 818-826 60 PHỤ LỤC Bảng I: Ảnh hưởng nguồn C đến khả phân giải phosphate CN1.2 Đc Tinh bột Sucrose D-glucose Lactose Maltose Maltose Sucrose Lactose Tinh bột Sucrose Lactose Tinh bột CN1.10 Đc D-glucose CN2.15 Đc D-glucose Maltose 61 Bảng II: Ảnh hưởng nguồn N đến khả phân giải phosphate chủng tuyển chọn CN1.2 Đc Cao nấm Pepton Casein KNO3 NaNO3 NH2SO4 men CN1.10 Đc Pepton Casein Cao KNO3 NH2SO4 NaNO3 nấm men CN2.15 Đc Pepton Casein Cao nấm KNO3 NaNO3 NH2SO4 men 62 Bảng III: Ảnh hưởng pH đến khả phân giải phosphate chủng tuyển chọn CN1.2 Đc pH 5.5 pH 6.5 pH Đc pH 5.5 pH 6.5 pH Đc pH pH 6.5 pH 5.5 pH 7.5 pH CN1.10 pH 7.5 pH CN2.15 pH 7.5 pH 63 Bảng IV: Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả phân giải phosphate chủng tuyển chọn CN1.2 Đc 25oC 30oC 35oC 40oC Đc 25oC 25oC 25oC 25oC Đc 35oC 30oC 25oC 40oC CN1.10 CN2.15 64 Bảng V: Ảnh hưởng muối đến khả phân giải phosphate chủng tuyển chọn CN1.2 Đc 2.5% 2.0% 1% 0.5% 0% Đc 0% 0.5% 1% 2.0% 2.5% Đc 0.5% 1.5% 0% 2.0% 2.5% CN1.10 CN2.15 Bảng VI: Khả sinh IAA chủng tuyển chọn Đc CN2.15 CN1.2 CN1.10 65