Phân lập và tuyển chọn một số chủng vi nấm vùng rễ có khả năng phân giải phosphate khó tan trên cây cà phê

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG VI NẤM VÙNG RỄ CÓ KHẢ NĂNG PHÂN GIẢI PHOSPHATE KHÓ TAN TRÊN CÂY CÀ PHÊ SINH VIÊN THỰC HIỆN : ĐINH THỊ KIM OANH KHĨA : 62 NGÀNH CƠNG NGHỆ SINH HỌC GIẢNG VIÊN HƯỚNG DẪN : TS NGUYỄN THANH HẢO HÀ NỘI - 2021 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG VI NẤM VÙNG RỄ CÓ KHẢ NĂNG PHÂN GIẢI PHOSPHATE KHÓ TAN TRÊN CÂY CÀ PHÊ SINH VIÊN THỰC HIỆN : ĐINH THỊ KIM OANH KHĨA : 62 NGÀNH : CƠNG NGHỆ SINH HỌC GIẢNG VIÊN HƯỚNG DẪN : TS NGUYỄN THANH HẢO HÀ NỘI - 2021 LỜI CAM ĐOAN Đây cơng trình nghiên cứu khoa học thực thời gian từ tháng 03/2021- 09/2021 hướng dẫn TS Nguyễn Thanh Hảo Các số liệu kết nghiên cứu khóa luận trung thực chưa sử dụng để bảo vệ cơng trình nghiên cứu ngồi nước Khóa luận tốt nghiệp có tham khảo tài liệu, thơng tin trích dẫn rõ phần tài liệu tham khảo Hà Nội, ngày… tháng… năm 2021 Sinh viên Đinh Thị Kim Oanh i LỜI CẢM ƠN Trước hết, em xin gửi lời cảm ơn thầy hướng dẫn em TS Nguyễn Thanh Hảo thầy, cô trường Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình truyền đạt hướng dẫn em q trình học tập việc hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin trân trọng cảm ơn thầy cô, anh, chị bạn Viện hóa hợp chất thiên nhiên viện Hàn Lâm Khoa Học Cơng Nghệ  hướng dẫn tận tình, chu đáo tạo điều kiện thuận lợi cho em từ trang thiết bị đến tài liệu nghiên cứu suốt thời gian thực khóa luận Ngồi thầy anh chị cịn định hướng tư giúp em làm việc hiệu khoa học Và cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến gia đình bạn bè, người sẵn sàng sẻ chia giúp đỡ học tập sống, mong rằng, gắn bó bên Mặc dù em cố gắng thực trình thực tập cách hoàn thiện với điều kiện thời gian, kiến thức, kinh nghiệm hạn chế sinh viên, báo cáo tránh thiếu sót Em mong nhận bảo, đóng góp ý kiến thầy để em có điều kiện hồn thiện, nâng cao kiến thức, ý thức để phục vụ tốt cho công tác làm việc thực tế sau Hà Nội, ngày… Tháng.… năm 2021 Sinh viên thực Đinh Thị Kim Oanh ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT viii TÓM TẮT ix PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Nội dung nghiên cứu PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Cây cà phê 2.2 Phốt (P) đất 2.3 Vòng tuần hoàn phốt tự nhiên 2.4 Vi sinh vật phân giải hợp chất khó tan 2.5 Cơ chế phân giải hợp chất photpho khó tan nhờ vi sinh vật 2.5.1 Vi sinh vật tiết axit phân giải hợp chất photpho khó tan 2.5.2 Phân giải photphat khó tan nhờ phản ứng Cacbondioxit (CO2 H2S) 2.6 Tình hình nghiên cứu vi sinh vật có khả phân giải phosphate khó tan 2.6.1 Tình hình nghiên cứu giới 2.6.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 11 PHẦN 3: VẬT LIỆU PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 3.1 Địa điểm lấy mẫu nghiên cứu 13 3.2 Thời gian nghiên cứu Từ 03/2021 đến 09/2021 13 3.3 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 13 3.3.1 Dụng cụ thiết bị thí nghiệm 13 iii 3.3.2 Hóa chất pha thuốc thử 13 3.3.3 Hóa chất pha mơi trường 13 3.4 Nội dung nghiên cứu 14 3.4.1 Phương pháp lấy mẫu 14 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu 15 3.4.3 Phương pháp tiếp giống nuôi lỏng 16 3.4.4 Phương pháp xác định hoạt độ phân giải phosphate khó tan chủng vi sinh vật 16 3.4.5 Phương pháp quan sát hình thái khuẩn lạc tế bào 17 3.4.6 Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng đến khả phân giải phosphate khó tan chủng vi sinh vật tuyển chọn 18 3.4.7 Các phương pháp xác định yếu tố kích thích sinh trưởng thực vật 19 3.4.8 Khảo sát khả sinh enzyme ngoại bào 20 PHẦN 4: KẾT QUẢ THẢO LUẬN 22 4.1 Phân lập tuyển chọn chủng vi sinh vật có khả phân giải phosphate khó tan 22 4.1.1 Phân lập chủng vi nấm 22 4.1.2 Kết thử hoạt tính phân giải phosphate khó tan chủng vi sinh vật 24 4.2 Đặc điểm hình thái chủng nấm chọn 26 4.3 Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng đến khả phân giải phosphate khó tan chủng vi sinh vật tuyển chọn 29 4.3.1 Khảo sát ảnh hưởng nguồn C 29 4.3.2 Khảo sát ảnh hưởng nguồn N 31 4.3.3 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ 32 4.3.4 Khảo sát ảnh hưởng pH 34 4.4 Kết xác định khả sinh chất kích thích sinh trưởng IAA chủng sinh vật chọn lọc 36 4.4.1 Kết xây dựng đường chuẩn IAA cho phép phân tích 36 iv 4.5 Kết khảo sát khả sinh enzyme ngoại bào 38 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 40 5.1 Kết Luận 40 5.2 Đề nghị 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO 41 PHỤ LỤC 48 v DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Khả phân giải Phốt phát khó tan Bảng 2.2: Xây dựng dãy nồng độ đường chuẩn 17 Bảng 4.1: Hình thái khuẩn lạc chủng R2.12 môi trường PDA 27 Bảng 4.2: Hình thái khuẩn lạc chủng R1.21 mơi trường PDA 28 Bảng 4.3: Hình thái khuẩn lạc chủng R3.23 môi trường PDA 28 Bảng 4.4: Giá trị OD450 nồng độ khảo sát ảnh hưởng nguồn C chủng vi nấm có khả phân giải phosphate 30 Bảng 4.5: Giá trị OD450 nồng độ khảo sát ảnh hưởng nguồn N chủng vi nấm có khả phân giải phosphate 31 Bảng 4.6: Giá trị OD450 nồng độ khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ chủng vi nấm có khả phân giải phosphate 33 Bảng 4.7: Giá trị OD450 nồng độ khảo sát ảnh hưởng pH chủng vi nấm có khả phân giải phosphate 35 Bảng 4.8: Khả sinh enzyme ngoại bào vòng phân giải chất chủng tuyển chọn 38 vi DANH MỤC HÌNH Hình 2.1: sơ đồ vịng tuần hồn phosphat tự nhiên Hình 2.2: Sơ đồ chuyển hóa hợp chất hữu Hình 4.1: Các chủng vi nấm phân giải phosphate 24 Hình 4.2: Đồ thị đường chuẩn sử dụng phép phân tích vanadate-molybdate với chất khử molybphosphoric 25 Hình 4.3: Đồ thị hoạt độ phân giải phosphate chủng phân lập 26 Hình 4.4: Đĩa nấm nuôi cấy ngày (a) bào tử soi 100x chủng (b) 27 Hình 4.5: Đĩa nấm nuôi cấy ngày (a) bào tử soi 100x chủng (b) 28 Hình 4.6: Đĩa nấm nuôi cấy ngày (a) bào tử soi 100x chủng (b) 29 Hình 4.7: Đồ thị ảnh hưởng nguồn cacbon đến khả phân giải phosphate 30 Hình 4.8: Đồ thị ảnh hưởng nguồn N đến khả phân giải phosphate 32 Hình 4.9: Đồ thị ảnh hưởng nhiệt độ đến khả phân giải phosphate 33 Hình 4.10: Đồ thị ảnh hưởng pH đến khả phân giải phosphate 35 Hình 4.11: Đồ thị đường chuẩn IAA 36 Hình 4.12: Khả sinh IAA chủng tuyển chọn 37 Hình 4.13: Vịng phân giải cellulose chủng vi nấm 38 Hình 4.14: Vịng phân giải amylase chủng vi nấm 39 Hình 4.15: Vòng phân giải protase chủng R1.21 39 vii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt Giải nghĩa µl Microliter ĐC Đối chứng IAA Indole-3-acetic acid OD Optical Density nm Nanometer NXB Nhà xuất PDA Potato dextro agar C Cacbon N Nitrogen P Photpho viii cho kết dòng R29b1 tổng hợp IAA với hàm lượng cao 19,9 µg/ml vào ngày thứ Trong đó, nghiên cứu “Phân lập tuyển chọn số dòng vi khuẩn vùng rễ lúa có khả cố định đạm tổng hợp IAA” Nguyễn Phương Anh cộng (2013), chủng TV2B7 có hàm lượng IAA cao vào ngày thứ đạt 42,14 µg/mL So sánh với kết nghiên cứu thấy chủng vi nấm tuyển chọn nghiên cứu có khả tổng hợp IAA mức trung bình 4.5 Kết khảo sát khả sinh enzyme ngoại bào Khả sinh enzyme ngoại bào đánh giá qua vòng phân giải chất Kết thu có chủng có khả sinh enzyme ngoại bào Chủng R1.21 có đường kính vịng phân giải rộng cellulose 29 mm, protease 22 mm amylase mm Hai chủng cịn lại khơng có sinh enzyme phân giải protease vịng phân giải enzyme lại lớn amylase (Từ 10-12 mm) cellulose (Từ 14-26 mm) Bảng 4.8: Khả sinh enzyme ngoại bào vòng phân giải chất chủng tuyển chọn Hoạt tính enzyme xác định thơng qua STT đường kính vịng phân giải (D-d, mm) Tên chủng Amylase Cellulose Protease R2.12 10 14 R1.21 29 22 R3.32 12 26 Hình 4.13: Vịng phân giải cellulose chủng vi nấm 38 Hình 4.14: Vịng phân giải amylase chủng vi nấm Hình 4.15: Vịng phân giải protase chủng R1.21 39 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết Luận Từ nguồn mẫu rễ cà phê thu thập ta phân lập 10 chủng vi nấm có hoạt tính phân giải phosphate khó tan Trong tuyển chọn chủng có hoạt tính phân giải phosphate khó tan mạnh Điều kiện tối ưu cho chủng có khả phân giải phosphate khó tan là:  Nguồn Cacbon glucose  Nguồn N hữu thích hợp với chủng vi nấm casein, nguồn nitơ vô Cao nấm men  pH tối ưu ngưỡng 6,5-  Nhiệt độ ưa thích 30oC Cả chủng nấm có khả sinh IAA, chủng R1.21 có khả sinh IAA mạnh Chủng R1.21 có nhiều khả sinh enzyme ngoại bào chủng lại 5.2 Đề nghị Định danh chủng: R1.21, R2.12, R3.32 Đánh giá hiệu chủng trồng điều kiện in vtro khu vực nuôi cấy Nghiên cứu áp dụng thực tế tạo chế phẩm vi sinh đưa vào phân bón trồng 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Bạch Phương Lan (2004) Giáo trình vi sinh học ứng dụng, NXB Trường đại học Đà Lạt Nguyễn Văn Minh, Đỗ Thị Nga (2015), Ảnh hưởng phân bón tổng hợp đến sinh trưởng, suất hiệu kinh tế cà phê vối giai đoạn kinh doanh đất Bazan tỉnh Đắk Lắk, Tạp chí khoa học phát triển 2015, tập 13, số 7) Nguyễn Xuân Thành (2007) Thực tập vi sinh vật chuyên ngành, NXB ĐH Nông nghiệp Hà Nội Vũ Thị Minh Đức (2001) Thực tập vi sinh vật học, NXB đại học quốc gia Hà Nội, Hà Nội Đào Thị Lương Phạm Văn Tý (2007) Nghiên cứu đặc điểm sinh học khả sinh enzyme ngoại bào hai chủng nấm men sinh bào tử thuộc chi Bullera Tạp chí cơng nghệ sinh học Phạm Quang Thu, Lê Khánh Vân (2005) Bước đầu tuyển chọn vi sinh vật phân giải phốt phát khó tan để sản xuất phân vi sinh phục vụ cho Lâm nghiệp Tạp chí khoa học lâm nghiệp 15 Phạm Thanh Hà, Nguyễn Thị Phương Chi (1999) Ảnh hưởng nguồn nito lên khả phân giải photphat khó tan chủng nấm sợi MN1 ĐT1, Hội nghị công nghệ Sinh học toàn quốc, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, tr 434-440 Phạm Thế Trịnh (2012) Nghiên cứu đặc điểm sử dụng đất đỏ Bazan tỉnh Đắk Lắk, Tạp chí khoa học phát triển tập 10 năm 2012 Phạm Thị Ngọc Lan (2010) Thử nghiệm tạo chế phẩm sinh học đánh giá hiệu quà chế phẩm đến số tiêu lí hóa sinh lạc Arachis hypogaeaL Tạp chí Khoa học, đại học Huế, số 63 41 Phạm Thị Ngọc Lan, Trần Thị Thanh Nhàn (2008) Điều kiện nuôi cấy tối ưu cho sinh trưởng phát triển số chủng nấm mốc hịa tan phosphate vơ cơ, Tạp chí khoa học, đại học Huế, số 48 10 Phạm Văn Toản, Phạm Bích Hiên (2015) Nghiên cứu sử dụng vi sinh vật phân giải lân Việt Nam Viện khoa học Nông nghiệp Việt Nam 11 Phan Tuấn Triều (2009), Giáo trình tài ngun Đất Mơi trường, NXB ĐH Bình Dương 21 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 10784: 2015 Vi sinh vật - Xác định khả sinh tổng hợp axit 3-indol-axetic (IAA) 12 Bộ Tài Nguyên Môi trường (2010), Báo cáo môi trường Quốc gia 2010, Hà Nội 13 Trần Thị Huế, Tống Kim Thuần, Nguyễn Văn Giang, 2015 Phân lập tuyển chọn chủng vi sinh vật phân giải phốt phát sắt, phốt phát nhôm từ đất trồng chè Shan Yên Bái Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nơng nghiệp Việt Nam, Số 6(59), tr 97-102 14 Trần Thị Ngọc Sơn, Trần Thị Anh Thư, Cao Ngọc Điệp, Lưu Hồng Mẫn Nguyễn Ngọc Nam (2011) Hiệu phân hữu phân vi sinh sản xuất lúa trồng cạn Đồng sông Cửu Long, Hội thảo – Colloque – Đại học Mở HCM- Université Ouverte de HCM ville 26 Trần Thị Thu Hà (2009) Khoa học phân bón, Nhà xuất Nơng nghiệp Hà Nội 15 Trần Văn Chính (2010) Giáo trình thổ nhưỡng học NXB Đại học Nơng nghiệp Hà Nội 16 Võ Đình Quang (1999) Trạng thái lân đất Việt Nam Kết nghiên cứu khoa học, – Viện thổ nhưỡng nơng hóa, NXB Nơng nghiệp Hà Nội 17 Vũ Thúy Nga, Nguyễn Ngọc Quyên, Trần Tú Thủy, Phạm Văn Toàn (2003) Nghiên cứu khả sinh tổng hợp IAA phân giải phosphate vơ khó tan vi khuẩn Bradyrhizobium Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống Báo cáo hội nghị CNSH toàn quốc NXB KH&CN Hà Nội, tr 349-352 42 18 Trần Thị Phương Thu, Nguyễn Khởi Nghĩa (2018) Phân lập tuyển chọn số dòng nấm hòa tan lân từ đất trồng lúa khô ngập xen kẽ kết hợp bón phân hữu Tạp chí khoa học trường đại học Cần Thơ 19 Hồng Thị Thái Hịa (2011) Giáo trình phân bón Đại học Nơng lâm Huế NXB Nơng Nghiệp 20 Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty (2000) Vi sinh vật học NXB Giáo dục 21 Nguyễn Như Hà (2005) Giáo trình thổ nhưỡng, nơng hóa NXB Hà Nội 22 Nguyễn Văn Giang, Nguyễn Đức Thái (2017), Phân lập, tuyển chọn chủng vi sinh vật có khả phân giải phosphate khó tan từ đất rừng Xn Liên Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nơng nghiệp Việt Nam - Số (79) 23 Phan Trọng Nhật (2009) Đặc diểm hình thái hoạt tính số enzyme ngoại bào mẫu nấm sợi phân lập Hà Nội Tạp trí khoa học phát triển 24 Trần Hồng Anh ,Võ Đình Quang , Nguyễn Thị Liên Lương Thị Thu Hằng (2016) Phân lập tuyển chọn số dịng nấm có khả ức chế phát triển nấm gây bệnh cao su Khoa học nông nghiệp Chi nhánh Viện Ứng dụng Cơng nghệ Tp Hồ Ch íMinh Trường Đại học Quốc tế Hồng Bàng 25 Trân Thị Thu Hà, Phạm Thanh Hòa (2012), Khả đoi kháng nấm Trichoderma với nấm bệnh hại trông Sclerotium rolfsii sacc điều kiện in vitro, Tạp chí Khoa học, Đại Học Huế, Tập 75a, số 6, 49-55 26 Nguyễn Thị Phương Oanh, Trần Bửu Minh, Nguyễn Thị Pha (2013), Phân lập tuyển chọn số dòng vi khuẩn đất vùng rễ lúa có khả cố định đạm tổng hợp IAA Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ: p 82-88 Tài liệu tiếng anh 27 Antunes, P M., Schneiderb K., Hillisc, D., Klironomosa, J.N, (2007) Can the arbuscular mycorrhizal fungus Glomus intraradices actively mobilize P from rock phosphates Pedobiologia 51, pages 281-286 43 28 Adem Güneş, Nizamettin Ataoğlu, Mctin Turan, Ahmct Eşitken, Quirine M.Ketterings.(2009) Effects of phosphatc-solubilizing microorganisms on Strawberry yield and nutrient concentrations Journal of Plant Nutrition and Soil Science Volume Issue 3June, 2009 Pages 385-392 29 Amit Sagervanshi, Priyanka Kumari, Anju Nagee, Ashwani Kumar (2012) Media isolated from anad agriculture soil International journal of life science and pharma research (2012) Vol 2/Issue 3/Jul-Sept 2012 30 Amonette, J E., Russell, C K., Carosino, K A., Robinson, N L., & Ho, J T (2003) Toxicity of Al to Desulfovibrio desulfuricans Applied and Environmental Microbiology, 69(7), pages 4057-4066 31 Anita pandey, S Palnim, P Mulkalwar, M Nadeem (2002) Effect of temperature on solubilization of tricancicum phosphate by Pseudomonas corrugata Jounal of scientific & Industrial reseach Vol 61, June 2002, pages 457- 460 32 Becquer, A., Trap, J., Irshad, U., Ali, M A., & Claude, P (2014) From soil to plant, the journey of P through trophic relationships and ectomycorrhizal association Frontiers in Plant Science, 5, 548 33 Dalal RC (1977) Soil organic phosphorus Adv Agron 1977;29; pages 83–117 34 Dave A, Patel HH (2003) Impact of different carbon nitrogen sources on phosphate solubilization by Psedomonas fluorescens Indian J Microbiol 43; pages 33-36 35 Ely Nahas (2007) Phosphate solubilizing microorganisms: Effect of carbon, nitrogen, and phosphorus sources First International Meeting on Microbial Phosphate Solubilization Volume 102 of the series Developments in Plant and Soil Sciences pages 111-115 36 Goldstein, A H (1986) Bacterial solubilization of mineral phosphates: höstorical perspective and future prospects American Journal of Alternative Agricuiture, 1(02), pages 51-57 44 37 Gunes A, Ataoglu N, Turan M, Esitken A, Ketterings QM (2009) Effects of phosphate-solubilizing microorganisms on strawberry yield and nutrient concentrations J Plant Nutr Soil Sci 2009, 172; pages 385-392 38 Hamdali H, Bouizgarne B, Hafidi M, Lebrihi A, Virolle MJ, Ouhdouch Y (2008)Screening for rock phosphate solubilizing Actinomycetes from Moroccan phosphate mines Appl Soil Ecol 2008, 38; pages 12-19 39 Havlin, J.L., Beaton, J.D., Tisdale, S.L and Nelson, W.L (1999), Soil fertilizer ans fertilizer, Prentice Hall 40 Ilham Mardad, Aurelio Serrano, Abdelaziz Soukri (2014) Effect of Carbon, Nitrogen Sources and Abiotic Stress on Phosphate Solubilization by Bacterial Strains Isolated from a Moroccan Rock Phosphate Deposit J Adv Chem Eng 1:102 doi:10.4172/2090-4568.1000102 41 Khan M.S et al (2014), Phosphate Solubilizing Microorganisms Springer International Publishing Switzerland 2014 42 Khan MS, Zaidi A, Wani PA (2009).: Role of phosphate solubilising microorganisms in sustainable agriculture In Sustainable Agriculture springer; 2009:552 43 Kucey RMN (1983): Phosphate solubilizing bacteria and fungi in various cultivated and virgin Alberta soils Can J Soil Sci 1983, 63: 671-678 10.4141/cjss83-068 44 Leandro M Marra, Silvia M de Oliveira-Longatti, Cláudio R.F.S Soares, José M de Lima, Fabio L Olivares, Fatima M.S Moreira (2015) Initial pH of medium affects organic acids production but not affect phosphate solubilization Braz J Microbiol vol.46 no.2 São Paulo Apr./June 2015 45 Mardad I, Serrano A, Soukri A., 2014 Effect of Carbon, Nitrogen Sources and Abiotic Stress on Phosphate Solubilization by Bacterial Strains Isolated from a Moroccan Rock Phosphate Deposit J Adv Chem Eng1:102 45 46 Sharma S B., Sayyed R Z., Trivedi M H., and Gobi T A.,“Phosphate solubilizing microbes: sustainable approach for managing phosphorus deficiency in agricultural soils,”SpringerPlus, vol 2, 2013, pages 587 47 Talat Yasmeen Mujahid, Syed Abdus Subhan, Abdul Wahab, Javeria Masnoon, Nuzhat Ahmed and Tanveer Abbas, 2015 Effects of Different Physical and Chemical Parameters on Phosphate Solubilization Activity of Plant Growth Promoting Bacteria Isolated from Indigenous Soil Journal of Pharmacy and Nutrition Sciences, pages 64-70 48 Bill Griffith (2011) Phosphorous, The Efficient Fertilizer Use Manual 49 Pradyot Patnaik Handbook of Environmental Analysis: Chemical Pollutants in Air, Water and Solid Wastes CMC Press Taylor and Francis Group Boca Raton London New York 50 Kitson, R.E & M.G Mellon 1944 Colorimetric determination of phosphorus as molybdovanadophosphoric acid Ind Eng Chem., Anal Ed 16:379 51 Proft, G 1964 Determination of total phosphorus in water and wastewater as molybdovanadophosphoric acid Limnologica 2:407 52 American Water Works Association 1958 Committee report Determination of orthophosphate, hydrolyzable phosphate, and total phosphate in surface waters J Amer Water Works Assoc 50:1563 53 Delelegn Woyessa, Firew Elias, Diriba Muleta (2016) Phosphate Solubilization Potential of Rhizosphere Fungi Isolated from Plants in Jimma Zone, Southwest Ethiopia, International Joural of Microbiology 54 Papa Saliou Sarr et all (2020) Phosphate-Solubilizing Fungi and Alkaline Phosphatase Trigger the P Solubilization During the Co-composting of Sorghum Straw Residues With Burkina Faso Phosphate Rock Frontiers in envirimental science 55 Yang Zhang et all (2018) Isolation and characterization of two phosphate-solubilizing fungi from rhizosphere soil of moso bamboo and their 46 functional capacities when exposed to different phosphorus sources and pH environments PloS One 56 Chunkai Li ,Qisheng Li ,Zhipeng Wang ,Guanning Ji ,He Zhao ,Fei Gao ,Mụ Su ,Jiaguo Jiao ,Zhen Li and Huixin Li (2019) Environmental fungi and bacteria facilitate lecithin decomposition and the transformation of phosphorus to apatite Scientific Report 57 Mohammad Saghir Khan, Almas Zaidi, Munees Ahemad, Mohammad Oves and Pervaze Ahmad Wani (2009) Plant growth promotion by phosphate solubilizing fungi – current perspective Agronomy and soil science Taylor and Francis 47 PHỤ LỤC Bảng I: Ảnh hưởng nguồn C đến khả phân giải phosphate chủng vi nấm tuyển chọn R1.21 DC Dextrin Lactose D-sobitol Tinh bột Maltose Sucrose D-glucose R2.12 DC Dextrin Lactose D-sobitol Tinh bột Maltose Sucrose D-glucose DC Dextrin Lactose D-sobitol Tinh bột Maltose Sucrose D-glucose R3.32 48 Bảng II: Ảnh hưởng nguồn N đến khả phân giải phosphate chủng vi nấm tuyển chọn R1.21 DC (NH4)2SO4 Cao nấm KNO3 Casein (NH4)2SO4 NH4Cl NaNO3 Pepton NH4Cl men R2.12 DC KNO3 Pepton Cao nấm Casein NaNO3 men R3.32 DC Cao nấm KNO3 Casein NH4Cl (NH4)2SO4 Pepton NaNO3 men 49 Bảng III: Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả phân giải phosphate chủng vi nấm tuyển chọn R1.21 DC 38oC 30oC 25oC 35oC DC 25oC 30oC 28oC 35oC 38oC 30oC 35oC R2.12 R3.32 DC 25oC 50 Bảng IV: Ảnh hưởng pH đến khả phân giải phosphate chủng vi nấm tuyển chọn R1.21 DC pH 5.5 pH 6.5 pH DC pH 5.5 pH 6.5 pH pH 7.5 pH 8.5 R2.12 pH 7.5 pH 8.5 R3.32 DC pH 5.5 pH 6.5 pH pH 7.5 pH 8.5 51 DC R3.32 R2.12 R1.21 Hình I: Khả sinh Iaa 52