Phân lập và tuyển chọn một số chủng vi khuẩn vùng rễ có khả năng phân giải phosphate khó tan trên cây cà phê ở đắk lắk

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG VI KHUẨN VÙNG RỄ CÓ KHẢ NĂNG PHÂN GIẢI PHOSPHATE KHÓ TAN TRÊN CÂY CÀ PHÊ Ở ĐẮK LẮK GIẢNG VIÊN HƢỚNG DẪN : TS NGUYỄN THANH HẢO PGS.TS NGUYỄN VĂN GIANG SINH VIÊN THỰC HIỆN : NGUYỄN THỊ NGỌC ÁNH LỚP : K62 CNSHA HÀ NỘI - 2021 LỜI CAM ĐOAN Đây công trình nghiên cứu khoa học tơi thực thời gian từ tháng 08/2020- 01/2021 hướng dẫn TS Nguyễn Thanh Hảo PGS.TS Nguyễn Văn Giang Các số liệu kết nghiên cứu khóa luận trung thực chưa sử dụng để bảo vệ cơng trình nghiên cứu ngồi nước Khóa luận tốt nghiệp có tham khảo tài liệu, thơng tin trích dẫn rõ phần tài liệu tham khảo Hà Nội, ngày… tháng…năm 2021 Sinh viên i LỜI CẢM ƠN Sau thời gian thực tập Bộ môn Công nghệ vi sinh, quan tâm, giúp đỡ tận tình thầy giáo, cán phịng thí nghiệm Bộ mơn cố gắng nỗ lực thân, tơi hồn thành khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn thầy giáo ngồi Khoa Cơng nghệ sinh học truyền đạt cho kiến thức bổ ích; giúp tơi rèn luyện, học tập mái trường Học viện Nông nghiệp Việt Nam Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc lịng kính trọng tới TS Nguyễn Thanh Hảo PGS.TS Nguyễn Văn Giang- giảng viên khoa Công nghệ sinh học định hướng đề tài tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tơi suốt q trình thực khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới cán phịng thí nghiệm Bộ mơn Cơng nghệ vi sinh, anh chị, bạn bè phịng thí nghiệm giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian thực tập tốt nghiệp Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến bố mẹ, anh chị em người thân gia đình ln bên cạnh ủng hộ suốt thời gian qua Do thời gian thực đề tài có hạn nên đề tài tránh khỏi sai sót Tơi mong nhận góp ý quý thầy cô bạn để đề tài tơi hồn thiện Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày… tháng… năm 2021 ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH viii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT ix TÓM TẮT x PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Nội dung nghiên cứu PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu đất trồng cà phê Đắk Lắk 2.2 Các dạng phosphate đất 2.2.1 Phosphate hữu 2.2.2 Lân vô 2.2.3 Vòng tuần hoàn phosphate tự nhiên 2.3 Sự chuyển hóa phosphate đất 2.3.1 Đối với phosphate hữu 2.3.2 Đối với phosphate vô 2.3.2.1 Sự chuyển hóa phosphate đất chua 2.3.2.2 Sự chuyển hóa lân đất kiềm 11 2.4 Tổng quan vi sinh vật phân giải phosphate 11 2.4.1 Vi sinh vật phân giải phosphate hữu 12 2.4.2 Vi sinh vật phân giải phosphate vô 12 iii 2.4.3 Các điều kiện ảnh hưởng tới khả phân giải phosphat vi sinh vật 13 2.5 Tình hình nghiên cứu vi sinh vật có khả phân giải phosphate khó tan đất 14 2.5.1 Tình hình nghiên cứu giới 14 2.5.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 16 3.1 Địa điểm lấy mẫu nghiên cứu 20 3.2 Thời gian nghiên cứu 20 3.3 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 20 3.3.1 Dụng cụ thiết bị thí nghiệm 20 3.3.2 Hóa chất 20 3.4 Nội dung nghiên cứu 21 3.5 Phương pháp nghiên cứu 21 3.5.1 Phương pháp lấy mẫu 21 3.5.2 Phương pháp nghiên cứu vi khuẩn 21 3.5.3 Phương phát tiếp giống nuôi lỏng 23 3.5.4 Phương pháp xác định hoạt độ phân giải phosphate khó tan chủng vi sinh vật 23 3.5.5 Phương pháp quan sát hình thái khuẩn lạc tế bào 25 3.5.6 Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng đến khả phân giải phosphate khó tan chủng vi sinh vật tuyển chọn 25 3.5.6.1 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ 26 3.5.6.2 Khảo sát ảnh hưởng pH 26 3.5.6.3 Khảo sát ảnh hưởng nguồn C 26 3.5.6.4 Khảo sát ảnh hưởng nguồn N 26 3.5.6.5 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ muối 27 3.5.6.6 Khảo sát ảnh hưởng thời gian nuôi cấy 27 3.5.7 Các phương pháp xác định yếu tố kích thích sinh trưởng thực vật 27 iv 3.5.8 Khảo sát khả đối kháng chủng vi sinh vật tuyển chọn với chủng vi sinh vật gây bệnh hại trồng 29 3.5.9 Xác định số đặc điểm sinh học chủng vi sinh vật tuyển chọn 29 PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31 4.1 Phân lập tuyển chọn chủng vi sinh vật có khả phân giải phosphate khó tan 312 4.1.1 Phân lập chủng vi sinh vật có khả phân giải phosphate khó tan 312 4.1.2 Kết thử hoạt tính phân giải phosphate khó tan chủng vi sinh vật 33 4.1.2.1 Kết dựng đường chuẩn nồng độ PO43- 33 4.1.2.2 Kết phân tích mẫu thử thực 34 4.2 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc 36 4.3 Kết xác định khả sinh chất kích thích sinh trưởng IAA chủng sinh vật chọn lọc 38 4.3.1 Kết xây dựng đường chuẩn IAA cho phép phân tích 38 4.3.2 Kết phân tích mẫu thực 40 4.4 Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng đến khả phân giải phosphate khó tan chủng vi sinh vật tuyển chọn 40 4.4.1 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ 40 4.4.2 Khảo sát ảnh hưởng pH 42 4.4.3 Khảo sát ảnh hưởng nguồn cacbon đến khả phân giải phosphate khó tan 44 4.4.4 Khảo sát ảnh hưởng nguồn nitrogen đến khả phân giải phosphate khó tan 46 _Toc633642274.4.5 Khảo sát ảnh hưởng thời gian nuôi cấy đến khả phân giải phosphate khó tan 48 4.4.6 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ muối đến khả phân giải phosphate khó tan 50 v 4.5 Khảo sát khả đối kháng chủng vi sinh vật tuyển chọn với chủng vi khuẩn gây bệnh thực vật 51 4.6 Kết xác định số đặc điểm hóa sinh xác định hoạt tính enzyme ngoại bào chủng vi khuẩn tuyển chọn 55 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 56 5.1 Kết luận 56 5.2 Đề nghị 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 60 PHỤ LỤC 70 vi DANH MỤC BẢNG Sơ đồ 1: Sơ đồ vòng tuần hoàn phospho tự nhiên Sơ đồ 2: Sơ đồ chuyển hóa hợp chất phosphate hữu 12 Bảng 1: Xây dựng dãy nồng độ đường chuẩn 25 Bảng 4.1.: Phân lập chủng vi khuẩn có khả phân giải phosphate khó tan 31 Bảng 4.2: Đặc điểm hình thái khuẩn lạc 36 Bảng 4.3: Giá trị OD820 nồng độ khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ chủng vi khuẩn có khả phân giải phosphate 41 Bảng 4.4: Giá trị OD820 nồng độ khảo sát ảnh hưởng pH chủng vi khuẩn có khả phân giải phosphate 41 Bảng 4.5 Giá trị OD820 nồng độ khảo sát ảnh hưởng C chủng vi khuẩn có khả phân giải phosphate 43 Bảng 4.6: Giá trị OD820 nồng độ khảo sát ảnh hưởng nguồn N chủng vi khuẩn có khả phân giải phosphate 46 Bảng 4.7: Giá trị OD820 nồng độ khảo sát ảnh hưởng thời gian nuôi cấy chủng vi khuẩn có khả phân giải phosphate 49 Bảng 4.8: Giá trị OD820 nồng độ khảo sát ảnh hưởng nồng độ muối chủng vi khuẩn có khả phân giải phosphate 50 Bảng 4.9 Khả đối kháng chủng vi sinh vật tuyển chọn với chủng vi khuẩn gây bệnh thực vật 52 Bảng 4.10 Kết đối kháng chủng vi sinh vật tuyển chọn với chủng vi khuẩn gây bệnh thực vật 52 Bảng 4.11 Hình ảnh khả đối kháng chủng vi sinh vật tuyển chọn với chủng vi khuẩn gây bệnh thực vật 54 Bảng 4.12 Xác định số đặc điểm hóa sinh xác định hoạt tính enzyme ngoại bào chủng vi khuẩn tuyển chọn 55 vii DANH MỤC HÌNH Sơ đồ 1: Sơ đồ vịng tuần hồn phosphate tự nhiên Sơ đồ 2: Sơ đồ chuyển hóa hợp chất phosphate hữu 12 Hình 4.1 Đồ thị đường chuẩn sử dụng phép phân tích Xanh molybdate chất khử axit ascorbic 34 Hình 4.2 Đồ thị hoạt độ phân giải phosphate chủng phân lập 35 Hình 4.3 Đồ thị đường chuẩn IAA 38 Hình 4.4 Khảo sát khả sinh IAA chủng tuyển chọn 39 Hình 4.5 Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả phân giải phosphate khó tan 41 Hình 4.6 Ảnh hưởng pH đến khả phân giải phosphate khó tan 43 Hình 4.7 Ảnh hưởng C đến khả phân giải phosphate khó tan 45 Hình 4.8 Ảnh hưởng N đến khả phân giải phosphate khó tan 47 Hình 4.9 Ảnh hưởng thời gian ni cấy đến khả phân giải phosphate khó tan 48 Hình 4.10 Ảnh hưởng nồng độ muối đến khả phân giải phosphate khó tan 51 viii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt Giải nghĩa µl Microliter ĐC Đối chứng IAA Indole-3-acetic acid OD Optical Density LB Luria and bertain nm Nanometer NXB Nhà xuất PDA Potato dextro agar Sp Species UV Ultra Violet CFU Colony Formig Unit rpm Revolutions per minute C Cacbon N Nito P Phospho ix 28 Võ Đình Quang (1999) Trạng thái lân đất Việt Nam Kết nghiên cứu khoa học, – Viện thổ nhưỡng nơng hóa, NXB Nơng nghiệp Hà Nội 29 Vũ Duy Nhàn, Vũ Văn Dũng (2020), Phân lập đánh giá khả phân giải phosphate khó tan chủng vi sinh vật chịu mặn phân lập từ đất quần đảo Trường Sa Tạp chí Nghiên cứu KH&CN quân sự, Số Đặc san Hội thảo Quốc gia FEE 30 Vũ Thúy Nga, Nguyễn Ngọc Quyên, Trần Tú Thủy, Phạm Văn Toàn (2003) Nghiên cứu khả sinh tổng hợp IAA phân giải phosphate vơ khó tan vi khuẩn Bradyrhizobium Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống Báo cáo hội nghị CNSH toàn quốc NXB KH&CN Hà Nội, tr 349-352 T i liệu tiếng anh 31 Adem Güneş, Nizamettin Ataoğlu, Mctin Turan, Ahmct Eşitken, Quirine M.Ketterings.(2009) Effects of phosphatc-solubilizing microorganisms on Strawberry yield and nutrient concentrations Journal of Plant Nutrition and Soil Science Volume Issue 3June, 2009 Pages 385-392 32 Ajay Veer Singh, S Shah, B Prasad (2010) Effect of phosphate solubilizing bacteria on plant growth promotion and nodulation in soybean (Glycine max (L.) Merr.) Journal of Hill Agriculture 1(1) Pages :35-39 January-June 2010 33 Alvaro Peixa, Elke Langb, Susanne Verbargb, Cathrin Spro"er, Rau'1 Rivas, Ignacio Santa-Reginaa, Pedro F Mateosc, Eustoquio Mart'ınezMolinac, Claudino Rodr'iguez-Barruecoa, Encarna Vela'zquezc (2009) Acinetobacter strains IH9 and OCI1, two rhizospheric phosphate solubilizing isolates able to promote plant growth, constitute a new 63 genomovar of Acinetobacter calcoaceticus Systematic and Applied Microbiology 32 (2009) pages 334-341 34 Alvaro, P., Lang, E.,Verbarg, S., CaSproăer, C., Rivas, R.J.,(2009) Acinetobacter strains IH9 and OCI1, two rhizospheric phosphate solubilizing isolates able to promote plant growth, constitute a new genomovar of Acinetobacter calcoaceticus Microbiol (in Press) 35 Amit Sagervanshi, Priyanka Kumari, Anju Nagee, Ashwani Kumar (2012) Media isolated from anad agriculture soil International journal of life science and pharma research (2012) Vol 2/Issue 3/Jul-Sept 2012 36 Amonette, J E., Russell, C K., Carosino, K A., Robinson, N L., & Ho, J T (2003) Toxicity of Al to Desulfovibrio desulfuricans Applied and Environmental Microbiology, 69(7), pages 4057-4066 37 Anita pandey, S Palnim, P Mulkalwar, M Nadeem (2002) Effect of temperature on solubilization of tricancicum phosphate by Pseudomonas corrugata Jounal of scientific & Industrial reseach Vol 61, June 2002, pages 457- 460 38 Antunes, P M., Schneiderb K., Hillisc, D., Klironomosa, J.N, (2007) Can the arbuscular mycorrhizal fungus Glomus intraradices actively mobilize P from rock phosphates Pedobiologia 51, pages 281-286 39 Becquer, A., Trap, J., Irshad, U., Ali, M A., & Claude, P (2014) From soil to plant, the journey of P through trophic relationships and ectomycorrhizal association Frontiers in Plant Science, 5, 548 40 Belimov, A A.,, A P Kojemiakov and C V Chuvarliyeva (1995) Interaction between barley and mixed cultures of nitrogen fixing and phosphate- solubilizing bacteria Plant Soil 173: pages 29-37 41 Betty Natalie Fitriatin, Anny Yuniarti, Tien Turmuktini, Fadilah Kennedy Ruswandi (2014) The effect of phosphate solubilizing microbe producing growth regulators on soil phosphate, growth and yield of maize and 64 fertilizer efficiency on Ultisol Eurasian Journal of Soil Science (2014) pages 101 – 107 42 Bruce N Ames (1966) Assay of inorganic phosphate, total phosphate and phosphatases Methods in Enzymology, Volume 8, 1966, Pages 115–118 43 Chung H, Park M, Madhaiyan M, Seshadri S, Song J, Cho H, Sa T, 2005 Isolation and characterization of phosphate solubilizing bacteria from the rhizosphere of crop plants of Korea Soil Biol Biochem 37 (10): 19701974 44 Dalal RC (1977) Soil organic phosphorus Adv Agron 1977;29; pages 83–117 45 Dave A, Patel HH (2003) Impact of different carbon nitrogen sources on phosphate solubilization by Psedomonas fluorescens Indian J Microbiol 43; pages 33-36 46 David P., Raj R S., Linda R., Rhema S B., “Molecular characterization of phosphate solubilizing bacteria (PSB) and plant growth promoting rhizobacteria (PGPR) from pristine soils”.Int J Innov Sci Eng Technol.,2014, pages 317–324 47 Ely Nahas (2007) Phosphate solubilizing microorganisms: Effect of carbon, nitrogen, and phosphorus sources First International Meeting on Microbial Phosphate Solubilization Volume 102 of the series Developments in Plant and Soil Sciences pages 111-115 48 Goldstein, A H (1986) Bacterial solubilization of mineral phosphates: höstorical perspective and future prospects American Journal of Alternative Agricuiture, 1(02), pages 51-57 49 Gunes A, Ataoglu N, Turan M, Esitken A, Ketterings QM (2009) Effects of phosphate-solubilizing microorganisms on strawberry yield and nutrient concentrations J Plant Nutr Soil Sci 2009, 172; pages 385-392 65 50 Hamdali H, Bouizgarne B, Hafidi M, Lebrihi A, Virolle MJ, Ouhdouch Y (2008)Screening for rock phosphate solubilizing Actinomycetes from Moroccan phosphate mines Appl Soil Ecol 2008, 38; pages 12-19 51 Havlin, J.L., Beaton, J.D., Tisdale, S.L and Nelson, W.L (1999), Soil fertilizer ans fertilizer, Prentice Hall 52 Higgins, N F., & Crittenden, P D (2015) Phytase activity in lichens The New Phytologist, 208(2), 544-554 http://doi.org/10.1111/nph.13454 53 Ilham Mardad, Aurelio Serrano, Abdelaziz Soukri (2014) Effect of Carbon, Nitrogen Sources and Abiotic Stress on Phosphate Solubilization by Bacterial Strains Isolated from a Moroccan Rock Phosphate Deposit J Adv Chem Eng 1:102 doi:10.4172/2090-4568.1000102 54 Jorquera MA, Hernandez MT, Rengel Z, Marschner P, Mora MD (2008): Isolation of culturable phosphor bacteria with both phytate-mineralization and phosphate-solubilization activity from the rhizosphere of plants grown in a volcanic soil Biol Fertif Soils 2008, 44;pages 1025-1034 55 Katznelson H and B Bose (1959) Metabolic activity and phosphate Iving capability of bacterial isolates from wheat roots, rhizosphere and non- rhizosphere soil Can J.Microbiol 5,pages 79-85 56 Khan M.S et al (2014), Phosphate Solubilizing Microorganisms Springer International Publishing Switzerland 2014 57 Khan MS, Zaidi A, Wani PA (2009).: Role of phosphate solubilising microorganisms in sustainable agriculture In Sustainable Agriculture springer; 2009:552 58 Kloepper, J W., R Lifshitz, & R M Zablotowicz (1989) Free-living bacterial inocula for enhancing Biotechnology, pages 39-44 66 crop productivity Trends in 59 Kucey RMN (1983): Phosphate solubilizing bacteria and fungi in various cultivated and virgin Alberta soils Can J Soil Sci 1983, 63: 671-678 10.4141/cjss83-068 60 Leandro M Marra, Silvia M de Oliveira-Longatti, Cláudio R.F.S Soares, José M de Lima, Fabio L Olivares, Fatima M.S Moreira (2015) Initial pH of medium affects organic acids production but not affect phosphate solubilization Braz J Microbiol vol.46 no.2 São Paulo Apr./June 2015 61 Lowell Busman, John Lamb, Gyles Randall, George Rehm, and Michael Schmitt (2009) The nature of phosphorus in soils University of Minnesota http://www.extension.umn.edu/ 62 Mardad I, Serrano A, Soukri A., 2014 Effect of Carbon, Nitrogen Sources and Abiotic Stress on Phosphate Solubilization by Bacterial Strains Isolated from a Moroccan Rock Phosphate Deposit J Adv Chem Eng1:102 63 Marra LM, Soares CRFSS, de Oliveira SM, Ferreira PAAA, Soares BL,Carvalho RF, Lima JM, Moreira FM (2012) Biological nitrogen fixation and phosphate solubilization by bacteria isolated from tropical soils Plant Soil 357: pages 289-307 64 Metin Turan, Medine Gulluce, Nicolaus von Wirén, Fikrettin Sahin.(2012) 65 Rajkumar M, Ae N, M.N.V Prasad, H Freitas (2010) Potential of siderophore-producing bacteria for improving heavy metal phytoextraction Trends Biotechnol., 28 (2010), pages 142-149 66 Satyaprakash M., Nikitha T., Reddi E U B., Sadhana B., and Vani S S., “A review on phosphorous and phosphate solubilising bacteria and their role in plant nutrition,”International Journal of Current Microbiology and Applied Scences, vol 6, 2017, pages 2133–2144 67 67 Satyaprakash M., Nikitha T., Reddi E U B., Sadhana B., and Vani S S., “A review on phosphorous and phosphate solubilising bacteria and their role in plant nutrition,”International Journal of Current Microbiology and Applied Scences, vol 6, 2017, pages 2133–2144 68 Sharma S B., Sayyed R Z., Trivedi M H., and Gobi T A.,“Phosphate solubilizing microbes: sustainable approach for managing phosphorus deficiency in agricultural soils,”SpringerPlus, vol 2, 2013, pages 587 69 Talat Yasmeen Mujahid, Syed Abdus Subhan, Abdul Wahab, Javeria Masnoon, Nuzhat Ahmed and Tanveer Abbas, 2015 Effects of Different Physical and Chemical Parameters on Phosphate Solubilization Activity of Plant Growth Promoting Bacteria Isolated from Indigenous Soil Journal of Pharmacy and Nutrition Sciences, pages 64-70 70 Teng, Z., Chen, Z., Zhang, Q et al.,“Isolation and characterization of phosphate solubilizing bacteria from rhizosphere soils of the Yeyahu Wetland in Beijing, China”, Environ Sci Pollut Res 26, 2019, pages 33976–33987 71 Yield promotion and phosphorus solubilization by plant growthpromoting rhizobacteria in extensive wheat production in Turkey Journal of Plant Nutrition and Soil Science Volume 175, Issue December, 2012 pages 818-826 68 PHỤ LỤC Bảng I Ảnh hƣởng nguồn C đến khả phân giải phosphate chủng tuyển chọn CS3.6 CS3.7 CS5.4 CS9.6 CS10.2 69 Bảng II Ảnh hƣởng nhiệt độ đến khả phân giải phosphate chủng tuyển chọn CS3.6 CS3.7 CS5.4 CS9.6 CS10.2 70 Bảng III Ảnh hƣởng pH đến khả phân giải phosphate chủng tuyển chọn CS3.6 CS3.7 CS5.4 CS9.6 CS10.2 71 Bảng IV Ảnh hƣởng nồng độ muối đến khả phân giải phosphate chủng tuyển chọn CS3.6 CS3.7 CS5.4 CS9.6 CS10.2 72 Bảng V Ảnh hƣởng thời gian đến khả phân giải phosphate chủng tuyển chọn CS3.6 CS3.7 CS5.4 CS9.6 CS10.2 73 Bảng VI Ảnh hƣởng nguồn N đến khả phân giải phosphate chủng tuyển chọn CS3.6 CS3.7 CS5.4 CS9.6 CS10.2 74 ĐC CS10.2 CS9.6 CS5.4 CS3.7 CS3.6 Hình i Khả sinh IAA Biến dƣỡng citrate Phản ứng khử citrate nhằm xác định khả sử dụng citrate nguồn C trình biến dưỡng vi sinh vật với nguồn nitro NH4H2PO4 Khi acid hữu citrate sử dụng nguồn carbon lượng, muối cacbonat kiềm bicacbonat sản phẩm cuối Amonium hydroxide sản suất muối amoni môi trường được sử dụng nguồn nito Do có khả sử dụng citrate vi sinh vật cất lên mơi trường cimmons làm đỏi màu môi trường sang xanh dương Hình ii Khả biến dƣỡng citrate Sử dụng citrte ngoại sinh cần có diện protein vận chuyển citrate Do khơng phải vi khuẩn phản ứng citrate Kết có chủng CS3.6, CS9.6, CS10.2 có khả sử dụng citrate nguồn C 75 Phản ứng MR (Đỏ methy- Methy Red) Chủng vi sinh vật nuôi môi trường Clark- Lubs, ni ngày 37oC Sau nhỏ giọt thuốc thử methy red 0,5% (trong cồn 60%) vào dịch nuôi cấy, dịch chuyển hồng phản ứng dương tính chứng tỏ chất có tính acid khơng bị chuyển hóa- mơi trường có tính acid Hình iii Khả phản ứng Methy Red Khả sinh siderophore Khả sinh siderphore xác định theo phương pháp O-CAS (PerezMiranda et al., 2007) vi sinh vật cấy vào môi trường dinh dưỡng cho phát triển sau phủ lên lớp mơi trường CAS Chủng có khả sinh siderphore sau thời gian màu lớp phủ CAS từ màu xanh sang màu vàng, cam màu tía tùy thuộc vào dạng siderphore Hình iv Khả sinh siderophore 76 Phản ứng catalase Hidro peoxit (H2O2) chất độc tế bào vi khuẩn sinh trình trao đổi chất tế bào Khi tiếp xúc với chất điện tử màng tế bào bị hút giống vi khuẩn lớp màng bị bóc tách Để chống lại H2O2 số vi khuẩn có chế sinh sản enzyme catalase Để nhận biết vi khuẩn có khả sinh catalase tiến hành nhỏ H2O2 (30%) lên tế bào chúng Kết chủng sinh catalase CS3.6 CS3.7 CS9.6 CS5.4 CS10.2 77