Phân lập và tuyển chọn các chủng vi khuẩn ưa kiềm, sinh protease ngoại bào phân lập từ nguồn nước thải (khóa luận tốt nghiệp)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN CÁC CHỦNG VI KHUẨN ƯA KIỀM SINH PROTEASE NGOẠI BÀO TỪ NGUỒN NƯỚC THẢI Sinh viên thực : Vũ Thị Thùy Trang Lớp : K62CNSHC Khoa : Công nghệ sinh học Giảng viên hướng dẫn : ThS Nguyễn Quốc Trung TS Đinh Hồng Duyên HÀ NỘI – 2021 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN CÁC CHỦNG VI KHUẨN ƯA KIỀM, SINH PROTEASE NGOẠI BÀO PHÂN LẬP TỪ NGUỒN NƯỚC THẢI SINH VIÊN THỰC HIỆN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Vũ Thị Thùy Trang ThS Nguyễn Quốc Trung TS Đinh Hồng Duyên Msv: 620641 Lớp: K62CNSHC Khoa: Công nghệ sinh học HÀ NỘI - 2021 Khóa luận tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Sau thời gian thực tập khóa luận Bộ mơn sinh học phân tử CNSH ứng dụng - Khoa Công nghệ sinh học - Học viện Nông nghiệp Việt Nam Em xin chân thành cảm ơn quan tâm giúp đỡ thầy/cơ giáo, cán phịng thí nghiệm Bộ môn khoa Công nghệ sinh học truyền đạt cho em kiến thức vô quan trọng quý báu suốt thời gian học tập rèn luyện Học viện Nông nghiệp Việt Nam Với lòng biết ơn sâu sắc em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới: Th.S Nguyễn Quốc Trung - Bộ môn sinh học phân tử CNSH ứng dụng - Khoa Công nghệ sinh học TS Đinh Hồng Duyên – khoa Môi trường - Học viện Nông nghiệp Việt Nam, giảng viên trực tiếp hướng dẫn, tận tình bảo tạo điều kiện tốt cho em suốt trình học tập nghiên cứu Em xin chân thành cảm ơn thầy cô Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình dạy bảo em suốt năm qua Cuối cùng, em xin cảm ơn tới người thân gia đình ln chăm lo, động viên, toàn thể bạn bè cộng tác giúp đỡ em khoảng thời gian thực đề tài tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày …tháng … năm 2021 Sinh viên Vũ Thị Thùy Trang Vũ Thị Thùy Trang Lớp K62CNSHC i Khóa luận tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan tồn kết khóa luận tơi trực tiếp thực hướng dẫn ThS Nguyễn Quốc Trung, khoa Công nghệ sinh học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam Tất số liệu, hình ảnh, kết trình bày khóa luận hồn tồn trung thực, chưa cơng bố cơng trình khác Những tài liệu, thơng tin đăng tải tác phẩm, tạp chí website tham khảo khóa luận liệt kê danh mục tài liệu tham khảo khóa luận Tơi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan trước Hội đồng Học viện Hà Nội, ngày …tháng … năm 2021 Sinh viên Vũ Thị Thùy Trang Vũ Thị Thùy Trang Lớp K62CNSHC ii Khóa luận tốt nghiệp MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG BIỂU .vi DANH MỤC HÌNH ẢNH vii TÓM TẮT viii PHẦN 1: MỞ ĐẦU .1 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích đề tài .2 1.3 Yêu cầu PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tình hình ứng dụng enzyme tồn giới 2.1.1 Ứng dụng enzyme y dược 2.1.2 Ứng dụng enzyme hóa học 2.1.3 Ứng dụng enzyme công nghiệp thực phẩm 2.1.4 Ứng dụng enzyme công nghiệp thuộc da .5 2.1.5 Ứng dụng enzyme ngành chất tẩy rửa 2.1.6 Ứng dụng enzyme nông nghiệp .6 2.2 Enzyme chịu kiềm 2.2.1 Khái niệm, đặc điểm 2.2.2 Cơ chế chịu kiềm enzyme 2.2.3 Các nhóm enzyme ứng dụng phổ biến 10 A Protease 11 B Pectinase 11 C Cellulase 12 D Amylase 12 2.2.4 Các nghiên cứu sản xuất enzyme chịu kiềm 12 2.3 Sự đa dạng thành phần loài vi khuẩn 14 2.3.1 Các vi khuẩn sống môi trường cực đoan .14 Vũ Thị Thùy Trang Lớp K62CNSHC iii Khóa luận tốt nghiệp 2.3.2 Vi khuẩn ưa kiềm 16 2.3.3 Các nghiên cứu phân lập, đa dạng vi khuẩn ưa kiềm 18 PHẦN 3: VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 3.1 Đối tượng, vật liệu địa điểm phương pháp nghiên cứu 21 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 21 3.1.2 Dụng cụ thiết bị nghiên cứu 21 3.1.3 Hóa chất 21 3.1.4 Địa điểm lấy mẫu nghiên cứu 22 3.1.5 Thời gian nghiên cứu .23 3.1.6 Nội dung nghiên cứu .23 3.2 Phương pháp nghiên cứu 23 3.2.1 Phân lập vi sinh vật 23 3.2.2 Phương pháp làm giữ giống 24 3.2.3 Kĩ thuật nhuộm gram .25 3.2.4 Phương pháp định danh trình tự 16s rDNA 25 3.2.5 Khảo sát khả sinh enzyme protease ngoại 30 3.2.6 Xác định ảnh hưởng pH đến sinh trưởng phát tiển vi sinh vật 30 3.2.7 Xác định ảnh hưởng nhiệt độ đến sinh trưởng phát triển chủng vi khuẩn sinh protease ngoại bào 30 3.2.8 Đo hoạt độ enzyme protease ngoại bào phương pháp Anson cải tiến 31 PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33 4.1 Kết phân lập vi khuẩn ưa kiềm 33 4.2 Kết xác định gram hình thái tế bào 36 4.3 Kết định danh dựa trình tự 16s rDNA 38 4.4 Kết khảo sát khả sinh enzyme protease ngoại bào 41 4.5 Kết xác định nhiệt độ pH tối ưu cho sinh trưởng phát triển chủng vi khuẩn .42 4.5.1 Kết xác định pH tối ưu 42 4.5.2 Kết xác định nhiệt độ tối ưu cho chủng sinh protrase ngoại bào.46 4.6 Kết đo hoạt độ enzyme protease ngoại bào 48 Vũ Thị Thùy Trang Lớp K62CNSHC iv Khóa luận tốt nghiệp 4.7 Thảo luận 50 5.1 Kết luận 51 5.2 Kiến nghị 51 PHẦN 6: TÀI LIỆU THAM KHẢO .52 6.1 Tài liệu tiếng Việt .52 6.2 Tài liệu tiếng Anh 52 PHẦN 7: PHỤ LỤC Vũ Thị Thùy Trang Lớp K62CNSHC v Khóa luận tốt nghiệp DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 3.1: Hướng dẫn đo hoạt độ enzyme 32 Bảng 4.1: Bảng mơ tả hình thái tế bào vi khuẩn 37 Bảng 4.2: Bảng định danh 39 Vũ Thị Thùy Trang Lớp K62CNSHC vi Khóa luận tốt nghiệp DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 3.1 Cách pha lỗng mẫu đất để phân lập 24 Hình 4.1 Kết phân lập 33 Hình 4.2 Hình thái 11 chủng vi khuẩn sau phân lập 35 Hình 4.3 Hình ảnh nhuộm gram tế bào vi khuẩn 37 Hình 4.4 Sản phẩm PCR 11 chủng vi sinh vật 39 Hình 4.5 Cây phát sinh chủng loại 40 Hình 4.6 Khả sinh protease ngoại bào 41 Hình 4.7 Ảnh hưởng pH đến sinh trưởng 11 chủng vi khuẩn KTB 45 Hình 4.8 Ảnh hưởng nhiệt độ đến phát triển chủng KTB sau 48h nuôi cấy 47 Hình 4.9 Đường chuẩn Tyrosine 48 Hình 4.10 Hoạt độ enzyme 11 chủng vi khuẩn KTB 49 Vũ Thị Thùy Trang Lớp K62CNSHC vii Khóa luận tốt nghiệp TĨM TẮT Trong năm gần có gia tăng đáng kể việc sử dụng protease kiềm làm chất xúc tác công nghiệp Các enzym mang lại lợi so với việc sử dụng chất xúc tác hóa học thơng thường Vì việc nghiên cứu, sản xuất enzyme chịu kiềm thu hút quan tâm lớn nhà khoa học Trong đó, protease ba nhóm enzyme cơng nghiệp quan trọng chiếm 60 – 65% tổng lượng enzyme toàn giới Enzyme ứng dụng rộng rãi công nghiệp thực phẩm, thức ăn gia súc, thuộc gia, y học, mỹ phẩm xử lí mơi trường Trong khoảng 3000 loại enzyme protease nghiên cứu phần lớn trung tính hoạt động nhiệt độ thường Những enzyme hoạt động tốt khoảng pH hạn chế, chúng chưa nguồn enzyme lý tưởng cho sản xuất cơng nghiệp Chính lẽ tìm kiếm enzyme có khả chịu dải pH rộng xu hướng quan tâm giới Việt Nam Mục tiêu nghiên cứu phân lập đánh giá đa dạng thành phần lồi vi khuẩn có khả sinh tổng hợp protease kiềm định hướng ứng dụng rộng rãi nhiều lĩnh vực công nghiệp Trong nghiên cứu tiến hành phân lập chủng vi khuẩn môi trường NB mẫu đất nước thu thập từ nguồn nước thải, phân lập 11 chủng vi sinh vật đặt tên theo thứ tự từ KTB1 – KTB11 có chủng gram (+) chủng gram (-) Kết định danh trình tự 16s rDNA xác định 11 chủng vi sinh vật thuộc thuộc loài khác nhau: Bacillus, Stenotrophomonas, Pseudomonas, Bacterium từ vẽ phát sinh chủng loại Qua khảo sát nghiên cứu cho thấy chủng sinh trưởng tốt dải pH từ 7-11 Từ 11 chủng sau phân lập, thử nghiệm môi trường skim milk chọn lọc chủng có khả sinh enzyme protease ngoại bào bao gồm : KTB2, KTB3, KTB4, KTB6, KTB7 Đo hoạt độ sinh protease ngoại bào phương pháp Anson cải tiến ta nhận thấy hai chủng có khả sinh protease ngoại bào cao KTB6 KTB7 Qua trình tìm hiểu, khảo cho thấy chủng vi sinh vật chịu kiềm nguồn vật liệu quan trọng đáng để tiếp tục nghiên cứu khai thác Vũ Thị Thùy Trang Lớp K62CNSHC viii Khóa luận tốt nghiệp Bảng số liệu ảnh hưởng pH đến sinh trưởng chủng KTB sau 72h Chủng KTB1 pH pH7 pH8 pH9 pH10 pH11 pH12 0.15 0.14 0.14 0.15 0.14 0.15 0.21 0.24 0.23 0.25 0.17 0.16 12 0.4 0.47 0.45 0.4 0.2 0.17 16 0.72 0.69 0.7 0.65 0.24 0.15 20 0.95 0.96 0.89 0.79 0.21 0.17 24 1.37 1.46 1.44 0.85 0.23 0.18 28 1.52 1.55 1.57 1.24 0.3 0.21 32 1.68 1.7 1.62 1.41 0.36 0.25 36 1.76 1.81 1.74 1.62 0.39 0.31 40 1.8 1.89 1.79 1.79 0.68 0.3 44 1.87 1.93 1.83 1.81 0.28 48 1.95 2.1 1.84 1.82 0.98 0.27 52 1.99 2.17 1.92 1.88 1.2 0.38 56 2.05 2.23 1.91 1.89 1.29 0.42 60 2.03 2.21 1.91 1.87 1.27 0.41 64 2.03 2.2 1.9 1.88 1.27 0.4 68 2.02 2.2 1.91 1.89 1.26 0.39 Chủng KTB2 pH pH7 pH8 pH9 pH10 pH11 pH12 0.13 0.13 0.14 0.13 0.13 0.14 0.2 0.22 0.21 0.21 0.14 0.13 12 0.38 0.4 0.42 0.42 0.14 0.13 16 0.65 0.67 0.69 0.6 0.17 0.17 20 0.92 0.95 0.97 0.9 0.18 0.19 24 1.22 1.26 1.3 0.93 0.2 0.19 28 1.47 1.45 1.49 1.35 0.42 0.21 32 1.68 1.63 1.68 1.5 0.55 0.21 36 1.74 1.83 1.81 1.69 0.76 0.23 40 1.85 1.86 1.88 1.71 1.16 0.22 44 1.91 1.89 1.89 1.76 1.35 0.2 48 1.92 1.9 1.91 1.78 1.56 0.18 Vũ Thị Thùy Trang Lớp K62CNSHC Khóa luận tốt nghiệp 52 1.91 1.92 1.8 1.7 0.19 56 1.93 2.1 1.9 1.81 0.2 60 1.92 2.01 2.12 1.89 1.8 0.2 64 1.91 2.12 1.89 1.8 0.18 68 1.9 1.98 2.09 1.87 1.75 0.17 pH pH7 pH8 pH9 pH10 pH11 pH12 0.1 0.1 0.11 0.1 0.11 0.1 0.12 0.13 0.14 0.13 0.12 0.11 12 0.39 0.42 0.44 0.15 0.13 0.11 16 0.57 0.67 0.65 0.2 0.18 0.13 20 0.81 0.89 0.86 0.22 0.16 0.15 24 1.1 1.15 1.13 0.31 0.17 0.16 28 1.39 1.48 1.49 0.52 0.17 0.16 32 1.54 1.62 1.58 0.69 0.18 0.17 36 1.85 1.88 1.84 0.81 0.18 0.16 40 2.01 2.02 1.97 1.12 0.17 0.14 44 2.05 2.04 2.08 1.4 0.16 0.15 48 2.09 2.09 2.12 1.9 0.21 0.16 52 2.1 2.11 2.1 1.89 0.24 0.19 56 2.17 2.19 2.17 1.87 0.31 0.18 60 2.16 2.21 2.16 1.88 0.3 0.18 64 2.16 2.2 2.17 1.86 0.3 0.17 68 2.15 2.18 2.17 1.84 0.29 0.16 pH pH7 pH8 pH9 pH10 pH11 pH12 0.1 0.1 0.11 0.1 0.11 0.1 0.12 0.13 0.14 0.13 0.12 0.11 12 0.39 0.42 0.44 0.15 0.13 0.11 16 0.57 0.67 0.65 0.2 0.18 0.13 20 0.81 0.89 0.86 0.22 0.16 0.15 24 1.1 1.15 1.13 0.31 0.17 0.16 28 1.39 1.48 1.49 0.52 0.17 0.16 Chủng KTB3 Chủng KTB4 Vũ Thị Thùy Trang Lớp K62CNSHC Khóa luận tốt nghiệp 32 1.54 1.62 1.58 0.69 0.18 0.17 36 1.85 1.88 1.84 0.81 0.18 0.16 40 2.01 2.02 1.97 1.12 0.17 0.14 44 2.05 2.04 2.08 1.4 0.16 0.15 48 2.09 2.09 2.12 1.9 0.21 0.16 52 2.1 2.11 2.1 1.89 0.24 0.19 56 2.17 2.19 2.17 1.87 0.31 0.18 60 2.16 2.21 2.16 1.88 0.3 0.18 64 2.16 2.2 2.17 1.86 0.3 0.17 68 2.15 2.18 2.17 1.84 0.29 0.16 pH pH7 pH8 pH9 pH10 pH11 pH12 0.15 0.16 0.16 0.17 0.16 0.17 0.21 0.24 0.23 0.2 0.16 0.18 12 0.49 0.45 0.38 0.23 0.18 0.17 16 0.73 0.7 0.69 0.35 0.18 0.19 20 0.98 0.89 0.87 0.45 0.18 0.19 24 1.24 1.26 1.25 0.78 0.19 0.19 28 1.41 1.47 1.4 1.13 0.27 0.24 32 1.72 1.75 1.72 1.25 0.31 0.28 36 1.98 1.94 1.89 1.44 0.45 0.31 40 2.12 2.1 2.09 1.69 0.57 0.3 44 2.24 2.23 2.11 1.74 0.71 0.28 48 2.28 2.25 2.15 1.72 0.83 0.25 52 2.3 2.28 2.19 1.78 0.9 0.24 56 2.32 2.3 2.2 1.88 0.95 0.23 60 2.33 2.31 2.2 1.86 0.96 0.23 64 2.31 2.29 2.18 1.85 0.96 0.21 68 2.31 2.29 2.17 1.86 0.94 0.22 Chủng KTB5 Vũ Thị Thùy Trang Lớp K62CNSHC Khóa luận tốt nghiệp Chủng KTB6 pH pH7 pH8 pH9 pH10 pH11 ph12 0.14 0.14 0.15 0.14 0.14 0.14 0.27 0.24 0.25 0.21 0.14 0.15 12 0.46 0.42 0.43 0.34 0.15 0.15 16 0.71 0.73 0.75 0.68 0.17 0.17 20 0.89 0.92 0.87 0.81 0.26 0.18 24 1.18 1.21 1.14 0.99 0.28 0.18 28 1.34 1.39 1.46 1.12 0.34 0.19 32 1.52 1.55 1.59 1.3 0.34 0.18 36 1.79 1.8 1.83 1.66 0.35 0.18 40 1.88 1.83 1.84 1.73 0.37 0.17 44 1.89 1.85 1.86 1.76 0.62 0.18 48 1.9 1.91 1.93 1.72 0.61 0.19 52 1.92 1.94 2.02 1.89 0.7 0.19 56 1.94 1.97 2.05 1.93 0.81 0.19 60 1.95 2.04 1.9 0.82 0.18 64 1.94 1.98 2.03 1.87 0.81 0.18 68 1.94 1.99 2.03 1.88 0.8 0.17 pH pH7 pH8 pH9 pH10 pH11 pH12 0.15 0.14 0.14 0.15 0.14 0.15 0.28 0.26 0.25 0.21 0.14 0.16 12 0.43 0.47 0.41 0.25 0.15 0.17 16 0.69 0.73 0.72 0.29 0.19 0.17 20 0.84 0.9 0.93 0.32 0.24 0.17 24 1.15 1.14 0.56 0.27 0.17 28 1.23 1.27 1.29 0.74 0.26 0.16 32 1.47 1.45 1.46 0.82 0.25 0.18 36 1.53 1.69 1.7 0.98 0.25 0.18 40 1.89 1.7 1.89 1.28 0.24 0.16 44 1.99 1.84 1.95 1.3 0.23 0.15 48 1.9 1.37 0.21 0.16 Chủng KTB7 Vũ Thị Thùy Trang Lớp K62CNSHC Khóa luận tốt nghiệp 52 2.04 2.06 2.09 1.41 0.25 0.18 56 2.11 2.07 2.1 1.5 0.31 0.2 60 2.1 2.1 2.11 1.51 0.32 0.21 64 2.1 2.09 2.09 1.5 0.32 0.19 68 2.08 2.09 2.07 1.5 0.31 0.19 pH pH7 pH8 pH9 pH10 pH11 pH12 0.2 0.19 0.2 0.21 0.2 0.2 0.34 0.35 0.33 0.37 0.26 0.21 12 0.47 0.41 0.45 0.43 0.36 0.21 16 0.65 0.68 0.61 0.59 0.37 0.23 20 0.91 0.92 0.99 0.78 0.43 0.23 24 1.17 1.2 1.07 0.95 0.72 0.21 28 1.38 1.37 1.23 1.1 1.05 0.22 32 1.52 1.59 1.49 1.23 1.22 0.25 36 1.76 1.7 1.65 1.48 1.32 0.26 40 1.89 1.84 1.73 1.67 1.46 0.29 44 2.09 2.04 1.87 1.88 1.63 0.3 48 2.1 2.09 1.92 1.93 1.63 0.34 52 2.22 2.15 2.1 1.65 0.37 56 2.3 2.19 2.1 2.04 1.75 0.38 60 2.32 2.2 2.09 2.03 1.77 0.37 64 2.32 2.18 2.08 2.03 1.75 0.36 68 2.31 2.19 2.08 2.02 1.74 0.36 pH pH7 pH8 pH9 pH10 pH11 pH12 0.18 0.19 0.19 0.18 0.17 0.18 0.32 0.31 0.34 0.2 0.17 0.19 12 0.45 0.44 0.47 0.41 0.19 0.18 16 0.69 0.7 0.75 0.52 0.22 0.2 20 0.81 0.85 0.88 0.7 0.23 0.19 Chủng KTB8 Chủng KTB9 Vũ Thị Thùy Trang Lớp K62CNSHC Khóa luận tốt nghiệp 24 0.99 1.04 0.92 0.28 0.19 28 1.16 1.17 1.19 1.05 0.27 0.2 32 1.32 1.35 1.37 1.25 0.25 0.2 36 1.48 1.46 1.5 1.39 0.24 0.21 40 1.67 1.7 1.72 1.57 0.25 0.2 44 1.86 1.85 1.86 1.63 0.24 0.22 48 1.9 1.84 1.9 1.74 0.23 0.21 52 1.94 1.89 1.92 1.8 0.31 0.22 56 1.93 1.95 1.92 0.3 0.23 60 2.05 1.94 1.9 0.3 0.2 64 2.04 1.93 1.87 0.29 0.19 68 2.04 1.98 1.92 1.86 0.29 0.19 pH pH7 pH8 pH9 pH10 pH11 pH12 0.11 0.12 0.12 0.1 0.11 0.1 0.28 0.26 0.3 0.24 0.14 0.11 12 0.43 0.41 0.45 0.39 0.16 0.12 16 0.67 0.63 0.69 0.46 0.22 0.17 20 0.85 0.82 0.86 0.63 0.21 0.2 24 1.14 1.16 1.18 0.92 0.26 0.21 28 1.34 1.35 1.4 1.25 0.36 0.21 32 1.52 1.56 1.62 1.5 0.41 0.2 36 1.61 1.68 1.74 1.68 0.54 0.19 40 1.77 1.74 1.85 1.77 0.64 0.18 44 1.79 1.87 1.97 1.88 0.17 48 1.83 1.89 1.96 1.89 1.06 0.15 52 1.87 1.9 1.89 1.1 0.18 56 1.89 1.9 2.1 1.91 1.16 0.21 60 1.9 1.89 2.07 1.9 1.16 0.2 64 1.88 1.86 2.08 1.89 1.14 0.19 68 1.87 1.86 2.08 1.87 1.13 0.18 Chủng KTB10 Vũ Thị Thùy Trang Lớp K62CNSHC Khóa luận tốt nghiệp Chủng KTB11 pH pH7 pH8 pH9 pH10 pH11 pH12 0.14 0.15 0.14 0.14 0.15 0.14 0.25 0.27 0.29 0.22 0.16 0.15 12 0.41 0.43 0.44 0.23 0.17 0.15 16 0.56 0.51 0.6 0.35 0.16 0.13 20 0.73 0.74 0.79 0.42 0.19 0.18 24 0.96 0.9 0.89 0.86 0.2 0.19 28 1.13 1.17 1.2 1.11 0.21 0.15 32 1.32 1.4 1.47 1.29 0.21 0.15 36 1.57 1.59 1.52 1.44 0.2 0.16 40 1.7 1.73 1.78 1.46 0.2 0.18 44 1.89 1.9 1.99 1.49 0.22 0.19 48 2.03 2.02 2.13 1.55 0.24 0.2 52 2.09 2.09 2.18 1.68 0.25 0.2 56 2.05 2.11 2.2 1.7 0.28 0.2 60 2.06 2.1 2.19 1.68 0.27 0.19 64 2.04 2.1 2.18 1.66 0.25 0.19 68 2.03 2.08 2.18 1.67 0.25 0.18 Bảng số liệu ảnh hưởng nhiệt độ đến sinh trưởng chủng KTB sau 48h 35oC 45oC 55oC 65oC KTB2 2.09 0.75 0.38 0.18 KTB3 2.07 1.76 0.42 0.25 KTB4 2.24 0.7 0.37 0.46 KTB6 2.04 0.49 0.40 0.65 KTB7 2.16 0.57 0.61 0.22 Bảng số liệu đo hoạt độ enzyme chủng sinh protease ngoại bào Chủng KTB2 8h 16h 24h 32h Vũ Thị Thùy Trang Lớp K62CNSHC Thật 0.41 0.89 1.34 1.85 Thử 0.02 0.06 0.11 0.13 Hoạt Độ (U/ml) 0.66 1.34 1.95 2.71 Khóa luận tốt nghiệp 40h 48h 56h 64h 2.27 2.63 2.88 2.82 0.19 0.25 0.3 0.38 3.26 3.72 4.03 3.81 8h 16h 24h 32h 40h 48h 56h 64h Thật 0.21 0.52 0.97 1.44 1.75 2.58 2.77 2.26 Thử 0.03 0.05 0.1 0.12 0.16 0.24 0.27 0.2 Hoạt Độ (U/ml) 0.34 0.78 1.4 2.09 2.51 3.66 3.9 3.23 8h 16h 24h 32h 40h 48h 56h 64h Thật 0.34 0.71 1.22 1.58 1.93 2.83 2.9 2.47 Thử 0.03 0.05 0.09 0.14 0.15 0.29 0.33 0.2 Hoạt Độ (U/ml) 0.54 1.08 1.8 2.28 2.8 3.97 4.01 3.55 8h 16h 24h 32h 40h 48h 56h Thật 0.25 0.77 1.36 1.71 2.01 2.39 2.94 Thử 0.02 0.03 0.07 0.11 0.15 0.17 0.21 Hoạt Độ (U/ml) 0.42 1.22 2.04 2.52 2.92 3.47 4.26 8h 16h 24h 32h 40h 48h 56h 64h Thật 0.23 0.82 1.47 1.89 2.31 2.85 2.76 Thử 0.04 0.07 0.08 0.13 0.18 0.24 0.25 0.2 Hoạt Độ (U/ml) 0.35 1.21 2.2 2.77 3.6 4.3 4.06 4.0 Chủng KTB3 Chủng KTB4 Chủng KTB6 Chủng KTB7 Vũ Thị Thùy Trang Lớp K62CNSHC Khóa luận tốt nghiệp Trình tự gen mẫu từ KTB1 – KTB11 Trình tự ITS mẫu KTB CTAAAGGTTACCTCACCGACTTCGGGTGTTGCAACTCTCGTGGTGTGACGGGCGGGGTGTACAAGG CCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCAACTTCACGGAGTCG AGTTGCAGACTGCGATCCGAACTGAGAACAGATTTGTGGGATTGGCTAAACCTTGCCGGCTCGCAG CCCTTTGTTCTGTCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCA TCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCACCTTAGAGTGCCCAACTAAATGCTGGGAACTAA AATCAAGGGGTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCAT GCACCACCTGTCACTCTGTCCCCGAAGGGAAAGCCCTATCTCTAGGGTTGTCTGAGGATGTCAAGA CCTGGTAAGGTGCTTCTCGTTGCTTCTAATAAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGGCCCCCCC AATTCTTTTGAGTTTTAGTCTTGCGACCGTACTCCCCACGCGGAGTGCTTAATGCGTTATCTGCTGCA CTAAGGGGGGGAAACCCCCTCACACTTATCACTCATCGTTTACAGCGTGGACTACCACGGGATCTA ATCCTGTTCGCTCTCCACGCTTTNNCTCCTCAGCGTCAGTTACAGACCACAGAGACGCCTTCTCCAC TGGTGTTCCTCCACATCTCTACGCATATCACCGCTACACGTGAAATTCCACTCTCCTCTTCTGCACTC AAGTTTCCCAGTTTCTAATGANCATCCCCGGTTGAGCCGGGGGCTTTCACATCAGACTNATGAAACC GCCTGCGAGCCCTTTACGCCCNCTAATNCTGGACAACACTTGTNACCTACGTATTACTGCGGCTGCT GGCGCGTAGTTAGTCGTGGCTTTTCNGGTTATGTACCGCCAAGGTGCAAGCAGTTACTCTTGCACTT GTTCTTCTCTCACAACAGAGCTTTATAATCCGCNAAAACTTTTTCATTCACGCGGCGGTTGTTCCGTC AGACATATTGTCCCTTGTGGAAGATTACCTACTGCTGCCTCCCCCAGGAGAATGGGGCAGGGTTTC Trình tự ITS mẫu KTB CTGGCTCCAAAAGGTTACCCCACCGACTTCGGGTGTTACAAACTCTCGTGGTGTGACGGGCGGTGT GTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCA TGTAGGCGAGTTGCAGCCTACAATCCGAACTGAGAACGGTTTTATGAGATTAGCTCCACCTCGCGG TCTTGCAGCTCTTTGTACCGTCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATT TGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCACCTTAGAGTGCCCAACTTAATGATG GCAACTAAGATCAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACG ACAACCATGCACCACCTGTCACTCTGCTCCCGAAGGAGAAGCCCTATCTCTAGGGTTTTCAGAGGAT GTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGC CCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGCCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTAA CTTCAGCACTAAAGGGCGGAAACCCTCTAACACTTAGCACTCATCGTTTACGGCGTGGACTACCAG GGTATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGCGCCTCAGTGTCAGTTACAGACCAGAAAGTCGCC TTCGCCACTGGTGTTCCTCCATATCTCTACGCATTTCACCGCTACACATGGAATTCCACTTTCCTCTT CTGCACTCAAGTCTCCCAGTTTCCAATGACCCTCCACGGTTGAGCCGTGGGCTTTCACATCAGACTT Vũ Thị Thùy Trang Lớp K62CNSHC Khóa luận tốt nghiệp AAGAAACCACCTGCGCGCGCTTTACGCCCAATAATTCCGGATAACGCTTGCCACCTACGTATTACCG CGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTGGTTAGGTACCGTCAAGGTGCCAGCTTATTCAAC TAGCACTTGTTCTTCCCTAACAACAGAGTTTTACGACCCGAAAGCCTTCATCACTCACGCGGCGTTG CTCCGTCAGACTTTCGTCCATTGCGGAAGATTCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAATCTGGGCCGGGT CTCAGTCCCAGGGTGGCCGATCACCCTTTCAGGTCGGCTAC Trình tự ITS mẫu KTB CCCTCCCGAAGGTTAAGCTACCTGCTTCTGGTGCACAAACTCCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTAC AAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCAGCAATGCTGATCTGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCATGG AGTCGAGTTGCAGACTCCAATCCGGACTGAGATAGGGTTTCTGGGATTGGCTTACCGTCGCCGGCTT GCAGCCCTCTGTCCCTACCATTGTAGTACGTGTGTAGCCCTGGCCGTAAGGGCCATGATGACTTGAC GTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCGGTCTCCTTAGAGTTCCCACCATTACGTGCTGGCA ACTAAGGACAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACA GCCATGCAGCACCTGTGTTCGAGTTCCCGAAGGCACCAATCCATCTCTGGAAAGTTCTCGACATGTC AAGGCCAGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCATCGAATTAAACCACATACTCCACCGCTTGTGCGGGCCCC CGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGTCTTGCGACCGTACTCCCCAGGCGGCGAACTTAACGCGTTAGCTT CGATACTGCGTGCCAAATTGCACCCAACATCCAGTTCGCATCGTTTAGGGCGTGGACTACCAGGGT ATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGTGCCTCAGTGTCAGTGTTGGTCCAGGTAGCTGCCTTCG CCATGGATGTTCCTCCTGATCTCTACGCATTTCACTGCTACACCAGGAATTCCGCTACCCTCTACCAC ACTCTAGTCGCCCAGTATCCACTGCAGTTCCCAGGTTGAGCCCAGGGCTTTCACAACGGACTTAAAC GACCACCTACGCACGCTTTACGCCCAGTAATTCCGAGTAACGCTTGCACCCTTCGTATTACCGCGGC TGCTGGCACGAAGTTAGCCGGTGCTTATTCTTTGGGTACCGTCATCCCAACCGGGTATTAACCAGCT GGATTTCTTTCCCAACAAAAGGGCTTTACAACCCGAAGGCCTTCTTCACCNACGCGGTATGGCTGGA TCAGGCTTGCGCCCATTGTCCAATATTCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAATCTGGACCGGGTCTCAT TTCCAGGGGGCTGATCTCCTCTCAGACAGCTACGGATCGTCCCTTGGTGGGCTTTACCCGCCACTAG CTAATCGAAATCGGTCATTAATCCGCAAGGGCCAAAACCCTGGNTCCCCCAAGGCGANNGCGAATA ANNGAAATTTCCCACTTTTCCCCCCAAAAAAAAATTCATTTTTCCCCCC Trình tự ITS mẫu KTB CCCCCGAAGGTTAGACTAGCTACTTCTGGAGCACCCACTCCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACA AGGCCCGGGAACGTATTCACCGTGACATTCTGATTCACGATTACTAGCGATTCCGACTTCACGCAGT CGAGTTGCAGACTGCGATCCGGACTACGATCGGTTTTATGGGATTAGCTCCACCTCGCGGCTTGGCA ACCCTTTGTACCGACCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGCCGTAAGGGCCATGATGACTTGACGTC ATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCCTTAGAGTGCCCACCTTAACGTGCTGGTAAC TAAGGACAAGGGTTGCGCTCGTTACGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGC CATGCAGCACCTGTGTCAGAGTTCCCGAAGGCACCAATCCATCTCTGGAAAGTTCTCTGCATGTCAA Vũ Thị Thùy Trang Lớp K62CNSHC Khóa luận tốt nghiệp GGCCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCG TCAATTCATTTGAGTTTTAACCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGTCGACTTAATGCGTTAGCTGCG CCACTAAGATCTCAAGGATCCCAACGGCTAGTCGACATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATC TAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGCACCTCAGTGTCAGTATTAGCACAGGTGGTCGCCTTCGCC ACTGGTGTTCCTTCCTATATCTACGCATTTCACCGCTACACAGGAAATTCCACCACCCTCTGCCATA CTCTAGCTCGCCAGTTTTGGATGCAGTTCCCAGGTTGAGCCCGGGGCTTTCACATCCAACTTAACGA ACCACCTACGCGCGCTTTACGCCCAGTAATTCCGATTAACGCTTGCACCCTTCGTATTACCGCGGCT GCTGGCACGAAGTTAGCCGGTGCTTATTCTGTTGGTAACGTCAAAACAGCAAGGTATTAACTTACTG CCCTTCCTCCCAACTTAAAGTGCTTTACAATCCGAGAACTTCTTCACCCCGCGGCATGGCTGGATCA GGCTTTCGCCCATTGTCCAAAATTCCCCCTGCTGCCTCCCGAAGGAAT Trình tự ITS mẫu KTB CCCCCGAAGGTTAGACTAGCTACTTCTGGAGCACCCACTCCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACA AGGCCCGGGAACGTATTCACCGTGACATTCTGATTCACGATTACTAGCGATTCCGACTTCACGCAGT CGAGTTGCAGACTGCGATCCGGACTACGATCGGTTTTATGGGATTAGCTCCACCTCGCGGCTTGGCA ACCCTTTGTACCGACCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGCCGTAAGGGCCATGATGACTTGACGTC ATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCCTTAGAGTGCCCACCTTAACGTGCTGGTAAC TAAGGACAAGGGTTGCGCTCGTTACGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGC CATGCAGCACCTGTGTCAGAGTTCCCGAAGGCACCAATCCATCTCTGGAAAGTTCTCTGCATGTCAA GGCCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCG TCAATTCATTTGAGTTTTAACCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGTCGACTTAATGCGTTAGCTGCG CCACTAAGATCTCAAGGATCCCAACGGCTAGTCGACATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATC TAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGCACCTCAGTGTCAGTATTAGCCCAGGTGGTCGCCTTCGCCA CTGGTGTTCCTTCCTATATCTACGCATTTCACCGCTACACAGGAAATTCCACCACCCTCTGCCATACT CTAGCTCGCCAGTTTTGGATGCAGTTCCCAGGTTGAGCCCGGGGCTTTCACATCCAACTTAACGAAC CACCTACGCGCGCTTTACGCCCAGTAATTCCGATTAACGCTTGCACCCTTCGTATTACCGCGGCTGC TGGCACGAAGTTAGCCGGTGCTTATTCTGTTGGTAACGTCAAAACAGCAAGGTATTAACTTACTGCC CTTCCTCCCAACTTAAAGTGCTTTACAATCCGAAGAACTTTCTTCCCCCCGCGGCATGGCTGGATCA GGCTTTCGCCCATTGTCCAATATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAATCTGGACCGGGTCTCAATT CCAGGGGGAATGATNATCCCTCCAAACNNNAACNNATCGTCCCTTGGGGACCCTTACCCCCCCAAC TACCTATCNACCNNAGCCATCGAAN Trình tự ITS mẫu KTB CTCCCGAAGGTTAAGCTACCTGCTTCTGGTGCAACAAACTCCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTAC AAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCAGCAATGCTGATCTGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCATGG AGTCGAGTTGCAGACTCCAATCCGGACTGAGATAGGGTTTCTGGGATTGGCTTACCGTCGCCGGCTT Vũ Thị Thùy Trang Lớp K62CNSHC Khóa luận tốt nghiệp GCAGCCCTCTGTCCCTACCATTGTAGTACGTGTGTAGCCCTGGCCGTAAGGGCCATGATGACTTGAC GTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCGGTCTCCTTAGAGTTCCCACCATTACGTGCTGGCA ACTAAGGACAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACA GCCATGCAGCACCTGTGTTCGAGTTCCCGAAGGCACCAATCCATCTCTGGAAAGTTCTCGACATGTC AAGGCCAGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCATCGAATTAAACCACATACTCCACCGCTTGTGCGGGCCCC CGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGTCTTGCGACCGTACTCCCCAGGCGGCGAACTTAACGCGTTAGCTT CGATACTGCGTGCCAAATTGCACCCAACATCCAGTTCGCATCGTTTAGGGCGTGGACTACCAGGGT ATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGTGCCTCAGTGTCAGTGTTGGTCCAGGTAGCTGCCTTCG CCATGGATGTTCCTCCTGATCTCTACGCATTTCACTGCTACACCAGGAATTCCGCTACCCTCTACCAC ACTCTAGTCGCCCAGTATCCACTGCAGTTCCCAGGTTGAGCCCAGGGCTTTCACAACGGACTTAAAC GACCACCTACGCACGCTTTACGCCCAGTAATTCCGAGTAACGCTTGCACCCTTCGTATTACCGCGGC TGCTGGCACGAAGTTAGCCGGTGCTTATTCTTTGGGTACCGTCATCCCAACCGGGTATTAACCAGCT GGATTTCTTTCCCAACAAAAGGGCTTTACAACCCGAAGGCCTTCTTCACCNACGCGGTATGGCTGGA TCAGGCTTGGCCCCATTGTCCAATATTCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAATCTGGACCGGGTCTCAG TTCCAGGGTGGCTGATCTTCCTTCAGACAGCTACGGATCG Trình tự ITS mẫu KTB CCTCCCGAAGGTTAAGCTACCTGCTTCTGGTGCAACAAACTCCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTAC AAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCAGCAATGCTGATCTGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCATGG AGTCGAGTTGCAGACTCCAATCCGGACTGAGATAGGGTTTCTGGGATTGGCTTACCGTCGCCGGCTT GCAGCCCTCTGTCCCTACCATTGTAGTACGTGTGTAGCCCTGGCCGTAAGGGCCATGATGACTTGAC GTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCGGTCTCCTTAGAGTTCCCACCATTACGTGCTGGCA ACTAAGGACAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACA GCCATGCAGCACCTGTGTTCGAGTTCCCGAAGGCACCAATCCATCTCTGGAAAGTTCTCGACATGTC AAGGCCAGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCATCGAATTAAACCACATACTCCACCGCTTGTGCGGGCCCC CGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGTCTTGCGACCGTACTCCCCAGGCGGCGAACTTAACGCGTTAGCTT CGATACTGCGTGCCAAATTGCACCCAACATCCAGTTCGCATCGTTTAGGGCGTGGACTACCAGGGT ATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGTGCCTCAGTGTCAGTGTTGGTCCAGGTAGCTGCCTTCG CCATGGATGTTCCTCCTGATCTCTACGCATTTCACTGCTACACCAGGAATTCCGCTACCCTCTACCAC ACTCTAGTCGCCCAGTATCCACTGCAGTTCCCAGGTTGAGCCCAGGGCTTTCACAACGGACTTAAAC GACCACCTACGCACGCTTTACGCCCAGTAATTCCGAGTAACGCTTGCACCCTTCGTATTACCGCGGC TGCTGGCACGAAATTAGCCGGTGCTTATTCTTTGGGTACCGTCATCCCAACCGGGTATTAACCAGCT GGATTTCTTTCCCAACAAAAGGGCTTTACAACCCGAAGGCCTTCTTCACCCACGCGGTATGGCTGGA TCAGGCTTGCGCCCATTGTCCAATATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAATCTGGAACGGGTCTCA TTTCCAGTGGGGCTGATCATCCTCTAGAACAACTACGGATCGTCGCCTTGGTGGGGCTTTACCCCGN Vũ Thị Thùy Trang Lớp K62CNSHC Khóa luận tốt nghiệp CAANNAAGTTAANNNNNNNCGGGCNNNNNAAATCCCGCAAGGCCAAAAATCCCCTNNTTTTTCCC CTAGGGGTANATGGGNNTTAAGGGA Trình tự ITS mẫu KTB GTTCCCCCGAAGGTTAGACTCAGCTACTTCTGGAGCNCCCACTCCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGT ACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGTGACATTCTGATTCACGATTACTAGCGATTCCGACTTCACGC AGTCGAGTTGCAGACTGCGATCCGGACTACGATCGGTTTTATGGGATTAGCTCCACCTCGCGGCTTG GCAACCCTTTGTACCGACCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGCCGTAAGGGCCATGATGACTTGA CGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCCTTAGAGTGCCCACCTTAACGTGCTGGT AACTAAGGACAAGGGTTGCGCTCGTTACGGGACTTAACCCAACATCTCAAGACACGAGCTGACGAC AGCCATGCAGCACCTGTGTCAGAGTTCCCGAAGGCACCAATCCATCTCTGGAAAGTTCTCTGCATGT CAAGGCCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCC CCGTCAATTCATTTGAGTTTTAACCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGTCGACTTAATGCGTTAGCT GCGCCACTAAGATCTCAAGGATCCCAACGGCTAGTCGACATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGT ATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGCACCTCAGTGTCAGTATTAGCACAGGTGGTCGCCTTCG CCACTGGTGTTCCTTCCTATATCTACGCATTTCACCGCTACACAGGAAATTCCACCACTCTCTGCCAT ACTCTAGCTCGCCAGTTTTGGATGCANTTCCCAGGTTGAGCCCGGGGCTTTCACATCCAACTTAACG AAGCCACCTACGCGCGCTTTACGCCCAGTAATTCCGATTAACGCTTGCACCCTTCGTATTACCGCGG CTGCTGGCACGAAGTTAGCCGGTGCTTATTCTGTTGGTAACGTCAAAACAGCAAGGTATTAACTTAC TGCCCTTCCTCCCATCTTAAAGTGCTTTACAATCCGAAAAACTTTCTTCCANCACGCGGCATGGCTG GATCAGGCTTTCGCCCATT Trình tự ITS mẫu KTB CCCGAAGGTTAAGCTACCTGCTTCTGGTGCAACAAACTCCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAA GGCCCGGGAACGTATTCACCGCAGCAATGCTGATCTGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCATGGAG TCGAGTTGCAGACTCCAATCCGGACTGAGATAGGGTTTCTGGGATTGGCTTACCGTCGCCGGCTTGC AGCCCTCTGTCCCTACCATTGTAGTACGTGTGTAGCCCTGGCCGTAAGGGCCATGATGACTTGACGT CATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCGGTCTCCTTAGAGTTCCCACCATTACGTGCTGGCAA CTAAGGACAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAG CCATGCAGCACCTGTGTTCGAGTTCCCGAAGGCACCAATCCATCTCTGGAAAGTTCTCGACATGTCA AGGCCAGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCATCGAATTAAACCACATACTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCC GTCAATTCCTTTGAGTTTCAGTCTTGCGACCGTACTCCCCAGGCGGCGAACTTAACGCGTTAGCTTC GATACTGCGTGCCAAATTGCACCCAACATCCAGTTCGCATCGTTTAGGGCGTGGACTACCAGGGTA TCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGTGCCTCAGTGTCAGTGTTGGTCCAGGTAGCTGCCTTCGC CATGGATGTTCCTCCTGATCTCTACGCATTTCACTGCTACACCAGGAATTCCGCTACCCTCTACCAC ACTCTAGTCGCCCAGTATCCACTGCAGTTCCCAGGTTGAGCCCAGGGCTTTCACAACGGACTTAAAC Vũ Thị Thùy Trang Lớp K62CNSHC Khóa luận tốt nghiệp GACCACCTACGCACGCTTTACGCCCAGTAATTCCGAGTAACGCTTGCACCCTTCGTATTACCGCGGC TGCTGGCACGAAGTTAGCCGGTGCTTATTCTTTGGGTACCGTCATCCCAACCGGGTATTAACCAGCT GGATTTCTTTCCCAACAAAAGGGCTTTACAACCCGAAGGCCTTCTTCACCNACGCGGTATGGCTGGA TCAGGCTTGCGCCCATTGTCCAATATTCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAATCTGGACCGGGTCTCAG TTCCAGGGTGGCTGATCTTCCTCTCAGACAGCTACGGATCGTCGCCTTGGTGGGCCTTTACCCNNCA AATAACTAATCCAAAATCGGCCCATTAATCCCCCCAAGGGCCAAAAANNCCCTNNTNNCCCNGAGG GNNATNNNGGTNTANNGGAAATTTCCCCNGTTTTCCCCCANAAAAANNAAANNCAATTTTTTC Trình tự ITS mẫu KTB 10 CTCCCGAAGGTTAAGCTACCTGCTTCTGGTGCACAAACTCCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACA AGGCCCGGGAACGTATTCACCGCAGCAATGCTGATCTGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCATGGA GTCGAGTTGCAGACTCCAATCCGGACTGAGATAGGGTTTCTGGGATTGGCTTACCGTCGCCGGCTTG CAGCCCTCTGTCCCTACCATTGTAGTACGTGTGTAGCCCTGGCCGTAAGGGCCATGATGACTTGACG TCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCGGTCTCCTTAGAGTTCCCACCATTACGTGCTGGCAA CTAAGGACAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAG CCATGCAGCACCTGTGTTCGAGTTCCCGAAGGCACCAATCCATCTCTGGAAAGTTCTCGACATGTCA AGGCCAGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCATCGAATTAAACCACATACTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCC GTCAATTCCTTTGAGTTTCAGTCTTGCGACCGTACTCCCCAGGCGGCGAACTTAACGCGTTAGCTTC GATACTGCGTGCCAAATTGCACCCAACATCCAGTTCGCATCGTTTAGGGCGTGGACTACCAGGGTA TCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGTGCCTCAGTGTCAGTGTTGGTCCAGGTAGCTGCCTTCGC CATGGATGTTCCTCCTGATCTCTACGCATTTCACTGCTACACCAGGAATTCCGCTACCCTCTACCAC ACTCTAGTCGCCCAGTATCCACTGCAGTTCCCAGGTTGAGCCCAGGGCTTTCACAACGGACTTAAAC GACCACCTACGCACGCTTTACGCCCAGTAATTCCGAGTAACGCTTGCACCCTTCGTATTACCGCGGC TGCTGGCACGAAGTTAGCCGGTGCTTATTCTTTGGGTACCGTCATCCCAACCGGGTATTAACCAGCT GGATTTCTTTCCCAACAAAAGGGCTTTACAACCCGAAGGCCTTCTTCACCCACGCGGTATGGCTGGA TCAGGCTTGCGCCCATTGTCCAATATTCCCCCTGCTGCCTCCCGTAGGAATCTGGACGTGNCTCAGT TCCAGGNGGCTGATCATCCTCTCAGACANCTACGGATCGTCCCTTGGTGGGCCTTTACCCGCCACTA GCTAATCCAACTCGGCCATTCAATCCCCAAGGCCAAAATCCNGCTNCCCCGAGGGTAAGGGGNTAA GGAAATTCCCCACTTTCCCCAAAAAAAATTCANNNTTCCC Trình tự ITS mẫu KTB 11 GTCCCCCGAAGGTTAGACTAGCTACTTCTGGAGCAACCCACTCCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGT ACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGTGACATTCTGATTCACGATTACTAGCGATTCCGACTTCACGC AGTCGAGTTGCAGACTGCGATCCGGACTACGATCGGTTTTATGGGATTAGCTCCACCTCGCGGCTTG GCAACCCTTTGTACCGACCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGCCGTAAGGGCCATGATGACTTGA CGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCCTTAGAGTGCCCACCTTAACGTGCTGGT Vũ Thị Thùy Trang Lớp K62CNSHC Khóa luận tốt nghiệp AACTAAGGACAAGGGTTGCGCTCGTTACGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGAC AGCCATGCAGCACCTGTGTCAGAGTTCCCGAAGGCACCAATCCATCTCTGGAAAGTTCTCTGCATGT CAAGGCCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCC CCGTCAATTCATTTGAGTTTTAACCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGTCGACTTAATGCGTTAGCT GCGCCACTAAGATCTCAAGGATCCCAACGGCTAGTCGACATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGT ATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGCACCTCAGTGTCAGTATTAGCACAGGTGGTCGCCTTCG CCACTGGTGTTCCTTCCTATATCTACGCATTTCACCGCTACACAGGAAATTCCACCACCCTCTGCCAT ACTCTAGCTCGCCAGTTTTGGATGCAGTTCCCAGGTTGAGCCCGGGGCTTTCACATCCAACTTAACG AACCACCTACGCGCGCTTTACGCCCAGTAATTCCGATTAACGCTTGCACCCTTCGTATTACCGCGGC TGCTGGCACGAAGTTAGCCGGTGCTTATTCTGTTGGTAACGTCAAAACAGCAGGTATTACTTACTGC CCTTCCTCCCACTTAAAGTGCTTTACAATCCGAAAACTTCTTCCCCACGCGGCATGGCTGGATCAGG CTTTCGCCATTGTCAATATTCCCCATGCTGCCTCCCGAAGA Vũ Thị Thùy Trang Lớp K62CNSHC