(Luận văn) nghiên cứu ảnh hưởng của a mangostin từ vỏ quả măng cụt (garcinia mangostana l ) lên vi khuẩn streptococcus mutans trên biofilm và định hướng ứng dụng

VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT ***** NGUYỄN VŨ ANH lu an n va NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA αMANGOSTIN TỪ VỎ QUẢ MĂNG CỤT Garcinia mangostana L LÊN VI KHUẨN Streptococcus mutansTRÊN BIOFILM VÀ ĐỊNH HƢỚNG ỨNG DỤNG p ie gh tn to nl w Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm d oa Mã số: 60420114 nf va an lu lm ul z at nh oi LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC SINH HỌC z m co l gm @ Người hướng dẫn khoa học: TS NGUYỄN THỊ MAI PHƢƠNG an Lu n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.ltc.tnu.edu.vn ac th si HÀ NỘI - 2015 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.ltc.tnu.edu.vn ac th si LỜI CẢM ƠN - Trong quá trình thực hiê ̣n luận văn khoa học , đã nhận được r ất nhiều sự giúp đỡ, khích lệ và động viên Thầy, Cô giáo, bạn đồng nghiệp, bạn bè và người thân gia đình Qua đây, tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắ c đế n những cá nhân và tập thể đã hế t lịng giúp đỡ để tơi có th ể hoàn thành luận văn này Trước hế t , xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Ngũn Thi ̣ Mai lu Phương, phịng Sinh hóa Thực vật , Viê ̣n Công nghê ̣ sinh học , Viê ̣n Hàn lâm Khoa an học và Công nghệ Viê ̣t Nam đã tận tình hướng dẫn suố t quá trình học tập và n va thực hiê ̣n nghiên cứu tn to Tôi xin chân thành cảm ơn các cán bộ nghiên c ứu phòng Sinh hóa thực ie gh vật, Viê ̣n Cơng nghê ̣ sinh học , Viê ̣n Hàn lâm Khoa h ọc và Công nghệ Viê ̣t Nam , p ban lãnh đạo Viện Công nghệ sinh họcđã nhiê ̣t tình giúp đỡ và tạo điề u kiê ̣n thuận nl w lợi để hoàn thành luận văn này d oa Cuố i cùng , xin cảm ơn gia đình thân yêu , bạn bè , người thân và đ ồng an lu nghiệp - những người đã luôn bên tôi, động viên , khích lệ và là chỗ nf va dựa vững chắ c cho suố t quá trình học tập và nghiên cứu z at nh oi lm ul Hà Nội, 18tháng 12 năm 2015 Học viên z @ m co l gm Nguyễn Vũ Anh an Lu n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.ltc.tnu.edu.vn ac th si CÁC THUẬT NGỮ VIẾT TẮT lu an n va exopolysaccharide GTF glucosyltransferase HPLC high performance liquid chromatography NMR nuclear magnetic resonance NSM nước súc miệng PTS sugar-phosphotransferase system TLC thin layer chromatography tn to EPS tryptic soy agar p ie gh TSA d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.ltc.tnu.edu.vn ac th si MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Bệnh sâu vi khuẩn Streptococus mutans 1.1.1 Bệnh học sâu 1.1.1.1 Nguyên nhân gây sâu lu 1.1.1.2 Mảng bám (dental plaque) an va 1.1.1.3 Cơ chế gây sâu n 1.1.1.4 Vi khuẩn Streptococcus mutans gh tn to 1.1.2 Tình hình bệnh sâu giới Việt Nam p ie 1.1.3 Các biện pháp ngăn ngừa sâu 10 1.1.3.1 Sử dụng chất kháng khuẩn 10 oa nl w 1.1.3.2 Sử dụng chất thay thế đường 12 d 1.1.3.3 Liệu pháp thay thế (replacement therapy) 12 lu an 1.1.3.4 Vacxin 13 nf va 1.1.3.5 Kiể m soát sự hình thành biofilm 13 lm ul 1.2 Một số chế thích nghi acid vi khuẩn xoang miệng 15 z at nh oi 1.2.1 Bơm proton F-ATPase 16 1.2.2 Sự thay đổi màng tế bào vi khuẩn thích nghi acid 17 1.2.3 Sự sinh chất kiềm 18 z @ 1.2.3.1 Urease 18 gm 1.2.3.2 Hệ thống arginin deiminase (ADS) 19 co l 1.3 Giới thiệu măng cụt 20 m 1.3.1 Đặc điểm sinh học 20 an Lu 1.3.2 Các chất xathone măng cụt 20 n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.ltc.tnu.edu.vn ac th si 1.3.3 Sinh tổng hợp chất xanthone 21 1.3.4 Tác dụng sinh học chất xanthone măng cụt 23 1.3.4.1 Hoạt tính kháng khuẩn 23 1.3.4.2 Hoạt tính kháng nấm 23 1.3.4.3 Tác dụng chống oxi hóa 23 1.3.4.4 Tác dụng chống viêm (anti-inflamation) 24 1.3.4.5 Hoạt tính chống ung thư 24 Chƣơng : NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 25 2.1 Chủng vi sinh vật điều kiện nuôi cấy 26 2.2 Nguyên liệu thực vật 26 lu an 2.3 Hóa chất thiết bị 26 n va 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 27 2.4.1.1 Chuẩn bị dịch tế bào 27 gh tn to 2.4.1 Các phương pháp nghiên cứu tế bào 27 p ie 2.4.1.2 Đo mức độ sinh acid tế bào (pH drop) 27 w 2.4.2 Các phương pháp xác định hoạt đô ̣ enzyme 28 oa nl 2.4.2.1 Chuẩn bị tế bào thấm 28 d 2.4.2.2 Xác định hoạt độ enzyme phosphoryl hóa đường (PTS) 28 lu an 2.4.2.3 Xác định hoạt độ enzyme F – ATPase 29 nf va 2.4.2.4 Xác định hoạt độ enzyme glucosyltransferase (GTF) 29 lm ul 2.4.3 Các phương pháp nghiên cứu biofilm 30 z at nh oi 2.4.3.1 Tạo biofilm 30 2.4.3.2 Xác ̣nh thành phầ n biofilm 31 z 2.4.3.3 Quan sát cấu trúc biofilm dưới kính hiển vi huỳnh quang quét lase 31 @ gm 2.5 Đánh giá sƣ̣ tích lũy của α-mangostin biofilm 32 co l 2.6 Tinh hoạt chất khoáng khuẩn S mutans từ vỏ măng cụt 32 m 2.6.1 Tách hợp chất polyphenol phương pháp sắc ký lớp mỏng (TLC) 32 an Lu n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.ltc.tnu.edu.vn ac th si 2.6.2 Phân tích cấu trúc hóa học cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) 33 2.7 Xử lý số liệu 33 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 3.1 Nghiên cứu quy trình chiết xuất α-mangostin từ vỏ măng cụt 34 3.1.1 Tách chiết phân đoạn có chứa -mangostin từ vỏ măng cụt 34 3.1.2 Tinh -mangostin từ vỏ măng cụt 36 3.1.2.1 Lựa chọn ̣ dung môi thích hợp để chạy cột sắ c ký silica gel 36 3.1.2.2 Tinh -mangostin cột sắc ký silica gel sử dụng hệ dung môi n-hexane: acetone (3:1) 37 lu 3.2 Đánh giá tác dụng kháng khuẩn α-mangostin lên S mutans biofilm 44 an n va 3.2.1 -mangostin ức chế sinh acid vi khuẩn S mutans biofilm… 44 3.2.1.2 -mangostin ức chế hoạt tính enzyme liên quan đến trình sinh và chống chịu acid F-ATPase và PTS 45 p ie gh tn to 3.2.1.1 Ức chế sự giảm pH môi trường 44 oa nl w 3.2.2 Đánh giá tác dụng ức chế sự hiǹ h thành biofilm của vi khuẩ n S mutans 48 d 3.2.2.1 -mangostin ức chế sự sinhtổng hợp EPS ngoại bào 48 lu nf va an 3.2.2.2 -mangostin làm thay đổi cấu trúc biofilm S mutans 49 lm ul 3.2.2.3 -mangostin ức chế hoạt tính enzyme GTF liên quan đ ến sự hình thành biofilm của vi khuẩn S mutans 51 z at nh oi 3.3 Khả giết vi khuẩn biofilm α-mangostin 52 3.4 Khả tích lũy α-mangostin biofilm 53 z 3.4.1 Bước đầ u đánh giá tác du ̣ng chống sâu dung dịch nước súc miệng có chứa α-mangostin 54 @ l gm 3.4.1.1 Khả ức chế sự sinh acid 54 co 3.4.1.2 Khả ức chế sự hình thành biofilm (mảng bám răng) 55 m Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 57 an Lu TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.ltc.tnu.edu.vn ac th si PHỤ LỤC 67 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.ltc.tnu.edu.vn ac th si DANH MỤC CÁC BẢNG SỬ DỤNG TRONG LUẬN VĂN Trang Bảng Cơng thức hóa học số xanthone có vỏ măng cụt 21 Bảng 2.Độ chế phẩ m α-mangostin so với chấ t chuẩ n 40 Bảng Độ sống sót S mutans biofilm xử lý với -mangostin53 Bảng Khả tích lũy của α-mangostin biofilm của vi khuẩ n S mutans53 Bảng Khả ức chế sinh a cid S mutans biofilm dung dịch nước súc miệng 55 lu an Bảng Ảnh hưởng của NSM chứa α-mangostin lên sự tić h lũy sinh khố i biofilm của vi khuẩ n S mutans56 n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.ltc.tnu.edu.vn ac th si DANH MỤC CÁC HÌNH SỬ DỤNG TRONG LUẬN VĂN Trang Hình 1.1.Cấu trúc Hình 1.2 Ba giai đoạn hình thành mảng bám Hình 1.3 Vi khuẩn Streptococcus mutans Hình 1.4 Quả măng cụt (Garcinia mangostana L.) 20 lu Hình 1.5 Quá trình hình thành xanthone thực vật 22 an n va Hình 2.1 Mơ hình ta ̣o biofilm S mutans bề mă ̣t điã hydroxyapatite 31 gh tn to Hình 3.1 Sắc ký đồ phân đoạn chiết vỏ măng cụt ethanol n-hexane sử dụng phương pháp sắc ký lớp mỏng 36 p ie Hình 3.2 Sắc ký đồ phân đoạn n-hexane sử dụng phương pháp sắc ký lớp mỏng 37 w d oa nl Hình 3.3 Sắc ký cột silica gel phân đoạn chiết n-hexane vỏ măng cụt với hệ dung môi rửa chiết n-hexane: acetone theo tỉ lệ (3:1) 38 nf va an lu Hình 3.4.A Sắc ký đồ α-mangostin tinh sa ̣ch từ v ỏ măng cụt với hệ dung môi Hexane: acetone (3:1 v/v) 38 z at nh oi lm ul Hình 3.4.B Sắc ký đồ α-mangostin tinh sa ̣ch từ vỏ măng cụt với hệ dung môi TEAF (5:3:1:1 v/v) 38 Hình 3.5 Phổ HPLC chất tinh (A) so với chấ t chuẩ n (B) sau qua cột sắc ký silica gel đo máy LC-MSD-Trap-SL 39 z Hình 3.6 Phổ Proton (A) 13C (B) chất -mangostin đo máy NMR Bruker, Avance 500 42 l gm @ Hình 3.7 Cấu trúc hóa học -mangostin (C24H26O6) co 43 m Hình 3.8 Sơ đồ qui trình tinh -mangostin từ vỏ măng cụt 43 an Lu n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.ltc.tnu.edu.vn ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học 150 M -mangostin Nguyễn Vũ Anh 29206 ± 3612,628 4,536 ± 0,01 3.4.1 Bƣớc đầ u đánh giá tác du ̣ng ch ống sâu dung dịch nƣớc súc miệng có chứa α-mangostin Dựa những kế t quả nghiên cứu thu đươ ̣c ,chúng tiến hành thử nghiệm chế ta ̣o nước súc miê ̣ng có chứa -mangostin ở nồ ng đô ̣ 150 M kế t hơ ̣p mô ̣t số chấ t hoa ̣t đô ̣ng bề mă ̣t khác , gồm methol,tinh dầu bạc hà, NaF nhằ m đánh giá khả ứng dụng chất làm nước súc miệng phịng chống sâu (Hình 3.14) Tác dụng dung dịch nước súc miệng đượ c đánh giá mơ hình biofilm so sánh với tác dụng nước súc miệng Listerin thương mại lu tiêu : i) Khả ức chế sinh acid ; ii) khả ức chế hình thành an n va biofilm S mutans p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi cụt α-mangostin tƣ̀ vỏ quả măng lm ul Hình 3.14 Chế phẩ m nƣớc súc miêng ̣ chƣ́a 3.4.1.1 Khả ức chế sự sinh acid z Khả ức chế sinh a cid vi khuẩn S mutans đươ ̣c đánh giá thông qua @ nước súc miê ̣ng (NSM) Kế t quả co l biofilm đã xử lý với các dung dich ̣ gm viê ̣c xác đinh ̣ khả ức chế sự giảm pH môi trường của các tế bào S mutans m trình bày bảng cho thấ y dung dich ̣ NSM ta ̣o đươ ̣c ức chế rõ rê ̣t sự sinh a cid an Lu vi khuẩn S mutans biofilm Giá trị pH cuối thu với NSM n va 54 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Vũ Anh chứa -mangostin và Listerin lầ n lươ ̣t là 5,31 5,60, ở mẫu đố i chứng (không xử lý NSM ) 3,99 Như vâ ̣y, khả ức chế sinh a cid S mutans gần tương đương với tác dụng dung dịch NSM thương mại Listerin Bảng 5.Khả ức chế sinh a cidcủa S mutans biofilm của các dung dich ̣ nƣớc súc miêng ̣ Mẫu nghiên cƣ́u Giá trị pH môi trƣờng (sau 240 phút) lu an 3,99 NSM 5,31 Listerin 5,60 n va Đối chứng p ie gh tn to nl w d oa 3.4.1.2 Khả ức chế sự hình thành biofilm (mảng bám răng) an lu Nhằ m tim ̣ NSM ̀ hiể u khả h ạn chế tạo mảng bám của dung dich nf va chứa -mangostintạo mơ hình biofilm nhân t S mutans với các dung dich ̣ NSM , sau đó đo sinh lm ul hành xử lý biofilm ạo, tiến khố i các biofilm thu đươ ̣c sau ngày nuôi cấy Kế t quả thu đươ ̣c ở bảng cho z at nh oi - thấ y sinh khố i biofi lm trung biǹ h của các mẫu đươ ̣c xử lý với NSM chứa mangostin và NSM Listerin giảm tới 50% so với đố i chứng Trọng lượng z sinh khố i khô của mỗi biofilm lầ n lươ ̣t là 7,1 8,5 mg/biofilm so với đớ i chứng @ hình thành sinh khối biofim rõ rệt Listerin l gm 19,5 mg/biofilm NSM chứa -mangostin dường có tác du ̣ng ức chế sự co Như vâ ̣y , NSM chứa - m mangostin chế ta ̣o đươ ̣c có tiề m ức chế sự hiǹ h thành mảng bám an Lu n va 55 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Vũ Anh Bảng Ảnh hƣởng của NSM chứaα-mangostin lên sƣ̣ tích lũy sinh khố i biofilm của vi khuẩ n S mutans.Số liệu sau dấu ± giá trị đợ lệch chuẩn SD với n=3 Biofilm hình thành lam kính thủy tinh (3 x 12 cm) Mẫu xử lý Trọng lƣợng khô biofilm (mg/biofilm) 19,5  2,80 NSM -mangostin 7,1  1,10 NSM Listerin 8,5  0,81 lu Đối chứng an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va 56 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Vũ Anh Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Đã đưa qui trình tinh sạchα-mangostin đơn giản t vỏ măng cụt (Garcinia mangostanaL.) gồ m bước chiń h là : i) chiế t phân đoa ̣n với n hexane và ii) sắ c ký cột silica gel với ̣ dung môi n-hexane : accetone theo tỉ lê ̣ 3:1) Chất thu có ̣ tương đương với chấ t chuẩ n đa ̣t >83% 2.α-mangostinở nồng độ 150 M ức chế quá triǹ h sinh acid và sinh tổ ng hơ ̣p lu polysaccharide ngoa ̣i bào của S mutans biofilm an n va α-mangostin nồng độ 150 M ức chế hoa ̣t đô ̣ enzyme liên quan trực làF-ATPase phospho transferase system (PTS) với tỉ lệ ức chế đạt >70% gh tn to tiếp đến trình sinh chịu acid vi khuẩn S mutans màng tế bào p ie 50% theo thứ tự, enzyme liên quan đến trình sinh tổng hợp nl w biofilm GTFB (>83% ức chế) GTFC (>72% ức chế) d an lu µg/biofilm biofilm với hàm lượng đạt 4,5 oa 4.α-mangostin có khả tić h lũy - nf va Bước đầ u đã chế ta ̣o và chứng minh đươ ̣c nước súc miê ̣ng có chứa z at nh oi biofilm nhân ta ̣o S mutans mô hin ̀ h lm ul mangostin có tác du ̣ng kháng vi khuẩ n sâu z gm @ ĐỀ NGHỊ m co mangostin α- l Cải tiến công thức để nâng cao hiệu NSM chứa an Lu Đánh giá đô ̣ an toàn của sản phẩ m n va 57 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Vũ Anh TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Trƣơng Văn Châu, Trần Hồng Quang, Đỗ Ngọc Liên, (2004), Đặc tính kháng khuẩn chất phenolic từ số loài thực vật thuộc chi Garcini str., Những vấn đề nghiên cứu khoa học sự sống, định hướng Y, Dược học, tr 50-53, Nhà xuất khoa học kỹ thuật Hà Nội Trịnh Đình Hải, (2004), Giáo trình dự phịng sâu răng, Nhà xuất Y học lu an va Trịnh Đình Hải, (2004), Giáo trình sử dụng flour chăm sóc n miệng, Nhà xuất Y học tn to gh Đỗ Văn Hòa, Lại Văn Hòa, Lê Hƣng, Bạch Vọng Hải, (2003), Về hàm p ie lượng canxi, phospho magie hàm lớn bình thường w sâu người trưởng thành, Thông báo khoa học trường Đại học Y d oa nl – Dược, tr 63-65 an lu Trần Văn Trƣờng, Trịnh Đình Hải, Spencer J A., Thomson R K., nf va (2002), “Điều tra sức khoẻ miệng toàn quốc Việt Nam 1999 - lm ul 2000”, Tạp chí Y học Việt Nam, 8, tr – 10 Y học z at nh oi Mai Đình Hƣng, (1998), Sâu răng, Bài giảng Răng Hàm Mặt, Nhà xuất z Đỗ Tất Lợi, (2000), “Những thuốc và vị thuốc Việt Nam”, NXB Y l gm @ học Hà Nội, tr.567-568 co Nguyễn Thị Mai Phƣơng, Phan Tuấn Nghĩa, Nguyễn Thị Ngọc Dao, m Đặng Minh Phƣơng, (2003), “ Tác dụng dịch chiết vỏ măng cụt an Lu n va 58 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Vũ Anh (Garcinia mangostana L.) lên vi khuẩn sâu Streptococcus mutans”, Hội nghị Khoa học Sự sống lần thứ 2, Huế, tr 983-986 Nguyễn Thị Mai Phƣơng, Phan Tuấn Nghĩa, Đỗ Ngọc Liên, Nguyễn Thị Ngọc Dao, (2004), “Thành phần polyphenol vỏ măng cụt (Garcinia mangostana L.) và tác dụng ức chế sự sinh acid vi khuẩn sâu Streptococcus mutans”, Tạp chí Dược học, (44), tr 18-21 10 Nguyễn Thị Mai Phƣơng, (2005), “Nghiên cứu ảnh hưởng một số chất kháng khuẩn lên q trình sinh lý và hóa sinh vi khuẩn gây sâu Streptococcus mutans”, Luận án tiến sỹ lu an 11 Nguyễn Thi Mai Phƣơng và Marquis R E, (2011) Hoạt tính kháng vi ̣ va n khuẩn Streptococcus xoang miệng -mangostin tinh từ vỏ gh tn to măng cụt (Garcinia mangostana L.) Tạp chí Dược liê ̣u 16(5): tr.298- p ie 303 nl w Tài liệu tiếng Anh d oa 12 Abdelal, T.T., (1979), Arginine catabolism by microorganisms, Ann Rev nf va an lu Microbiol 8, tr 139-168 13 Almeida L.S., Murata R.M., Yatsuda R., Dos Santos M.H., Nagem lm ul T.J., Alencar S.M., Koo H., Rosalen P.L., (2008), Antimicrobial activity z at nh oi of Rheedia brasiliensis and 7-epiclusiannone against Streptococcus mutans Phytomedicine., 15(10), tr 886-891 z 14 Arikado E., Ishihara H., Ehara T., (1999), Enzyme level of @ co l Eur J Biochem., 259, tr 262-268 gm enterococcal F1-F0 ATPase is regulated by pH at the step of assembly m 15 Bearon S., Bearson B., Foster J.W., (1997), Acid stress reponses in an Lu enterobacteria FEMS Microbiol Lett., 147, tr 173-180 n va 59 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Vũ Anh 16 Belli W.A., Marquis R.E., (1991), Adaptation of Streptococcus mutans and Enterococcus hirae to acid stress in continuous culture Appl Environ Microbiol., 57, tr 1134-1138 17 Bender G.R., and Marquis R.E., (1995), Membrane ATPases and acid tolerance of Actinomyces viscosus and Lactobacillus casei Appl Environ Microbiol , 53, tr 2124-2128 18 Bender G.R., Sutton S.V., and Marquis R.E., (1986), Acid tolerance, proton permeabilities, and membrane ATPases of oral steptococci Infect Immum., 53, tr 331-338 lu an 19 Badria, F.A., and Zidan, O.A., ( 2004) Natural products for dental caries va n prevention J Med Food7(3), tr.381–384 tn to gh 20 Bowen WH, Koo H.,(2011)Biology of Streptococcus mutans-derived p ie glucosyltransferases: role in extracellular matrix formation of cariogeneic w biofilms Caries Res; 45, tr 69-86 oa nl 21 Burne RA, Ahn SJ, Wen ZT, Zeng L, Lemos JA, Abranches J, d Nascimento M.,(2009) Opportunities for disrupting cariogenic biofilms lu nf va an Adv Dent Res; 21(1), tr 17-20 lm ul 22 Burne R.A., Marquis R.E, (2001), Biofilm acid /base physiology and gene expression in oral bacteria Methods Enzymol., 337, tr 403-415 z at nh oi 23 Burne R.A., Marquis R.E, (2000), Alkali production by oral bacteria and protection against dental caries, FEMS Microbiol Lett., 193, tr 1-6 z @ gm 24 Casiano-Colon A And Marquis R.E., (1988), Role of arginine co l deiminase system in protecing oral bacteria and an enzymatic basic for acid tolerance, Appl Environ Microbiol., 54, tr 1318-1324 m an Lu n va 60 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Vũ Anh 25 Chang Y-Y and Cronan J.E., (1999), Membrane cyclopropane fatty acid content is a major factor in acid resistance os Escherichia coli, Mol Microbiol., 33, tr 249-249 26 Chen Y-Y., Clancy K.A., and Burne R.A., (1996), Streptococcus salivarius urease: genetic biochemical charaterization and expression in a dental plaque streptococcus, Infect, Immun., 64,tr 585-592 27 Costerton J.W., Lewandowski Z., Caldwell D.E., Korber D.R and Lappin-Scoott H.M., (1995), Microbial biofilms, Ann Rev Microbiol., 49, tr 711-745 lu an 28 Cotter P.D and Hill C., (2003), surviving the acid test: responses of va n gram-positive bacteria to low pH, Microbiol Mol Bio Rev., 67, tr 429- gh tn to 453 p ie 29 Cunin R., Glansdorff N., Peirad A And slaton V., (1986), Biosynthesis nl w and metabolism of arginin in bacteria, Microbiol Rev., 50, tr 314-352 d oa 30 Curran T.M., Lieou J and Marquis R.E., (1995), Arginine deimiase an lu system and acid adaptation of oral streptococci, Appl Environ nf va Microbiol., 61, tr 4494-4496 lm ul 31 Curan T.M., Ma Y., Rutherford G.C and Marquis R.E., (1998), z at nh oi Turning on and turning off the arginine system in oral streptococci, Can J Microbiol., 44, tr 1078-1085 z 32 Dong Y., Chan M.Y.Y and Burne R.A., (2004) Control expression of @ m co l Bacteriol., 186 (8), tr 2511-2514 gm the arginine deimiase operon os Streptococcus gordonii by CcpA and, J an Lu n va 61 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Vũ Anh 33 Ho CH, Huang YL, Chen CC, (2002) Garcininne E, a xanthone derivatives, has potent cytotoxic effect against hepatocellular carcinoma cell lines Planta Med 68(11), tr 975-979 34 Hamada S., Kontani M., Hosono H., Ono H., Tanaka, T., Ooshima T., Mitsunaga T and Abe S.,(1996), Catechin inhibits glucosyltransferase from Streptococcus mutans,FEMS Microbiol Lett., 143, tr 35-40 35 Koo H, Duarte S, Muarata RM, Scott-Anne K, Gregoire S, Warson GE, Singh AP, Vorsa N., (2010) Influence of cranberry proanthocyanidins on formation of biofilms by Streptocoocus mutans on lu an saliva-coated apatitic surface and on dental caries development in vivo n va Caries Res 44(2), tr 116-126 gh tn to 36 Jeon JG, Klein MI, Xiao J, Gregoire S, Rosalen PL, Koo H, (2009), Influences of naturally occurring agents in combination with fluoride on p ie gene expression and structural organization of Streptococcus mutans in oa nl w biofilms,BMC Microbiol., 9, tr 228-232 d 37 Koo H, Xiao J, Klein MI, (2009), Extracellular polysaccharides matrix lu 1(4), tr 229-234 nf va an an often forgotten virulence factor in oral biofilm research, Int J Oral Sci., lm ul 38 Loesche W.J., (1986), Role of Streptococcus mutans in human dental z at nh oi decay, Microbiol Rev., 50, tr 353-380 39 Ma Y., Rutherford G.C., Curran T.M., Reimiller J.S., Marquis R.E., z gm @ (1999), Menbrane locus and pH sensitivity of paraben inhibition of alkali production by oral streptococci, Oral Microbiol Immunol., 14, tr 244- m co l 249 an Lu n va 62 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Vũ Anh 40 Mahabusarakam W., Proudfoot J., Taylor W., Croft K., (2000), "Inhibition of lipoprotein oxidation by prenylated xanthones derived from mangostin", Free Rad Res., 33(5), tr 643-659 41 Makimura M, Hirasawa M, Kobayashi K, Indo J, Sakanaka S, Taguchi T, Otake S, ( 1993), Inhibitory effect of tea catechins on collagenease activity,J Periodontol., 64(7), tr 630-636 42 Matsumoto K., Akao Y., Kobayashi E., Ohguchi K., Ito T., Tanaka T., Iinuma M., Nozawa Y., (2003), "Induction of apoptosis by xanthones from mangosteen in human leukemia cell lines", J Nat Prod., 66(8), lu an tr.l124-1127 va n 43 Marsh P., Martin M.V., (2000), Oral microbiology, 4lh edition, Reed gh tn to Educational and Professional Publishing Ltd USA p ie 44 Murata RM, Branco-de-Almeida LS, Franco EM, Yatsuda R, dos w Santos MH, de Alencar SM, Koo H, Rosalen PL, (2010), Inhibition of oa nl Streptococcus mutans biofilm accumulation and development of dental d caries in vivo by 7-epiclusianone and fluoride,Biofouling, 26(7), tr 865- nf va an lu 872 lm ul 45 Nakatani K., Yamakuni T., Kondo N., Arakawa T., Oosawa K., Shimura S., Inoue H., Ohizumi Y., (2004), "Gamma-mangostin inhibits z at nh oi inhibitor-kappaB kinase activity and decreases lipopolysaccharideinduced cyclooxygenase-2 gene expression in C6 rat glioma cells", Mol z Pharmacol., 66(3), tr.667-747 gm @ 46 Nguyen P.T.M and Marquis R.E.,(2011) Antimicrobial actions of l 217-25 m co alpha-mangostin against oral Streptococci, Can J Microbiol., 57(3), tr an Lu n va 63 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Vũ Anh 47 Peres V., Nagem T.J and Oliveira F.F., (2000), Tetraoxygenated naturally occurring xanthones, Phytochem., 55(7), tr 28-33 48 Quivey R.G., Faustoferri R.C., Monahan K and Marquis R.E., (2000), Shifts in membrane fatty acid profiles associated with acid adaptation of Streptococcus mutans, FEMS Microbiol Lett., 189, tr 8992 49 Quivey R.G., Kuhnert W.L and Hahn K., (2000), Adaptation of oral streptococci to low pH, Adv Microbiol Physiol., 42, tr 239-274 lu 50 Quivey R.G., Kuhnert W.L and Hahn K., (2001), Genetics of acid an adaptation of oral streptococci, Crit Rev Oral Biol Med., 12, tr 301- va n 314 tn to gh 51 Rogers A.H., Zilm P.S., Gully N.J and Pfenning A.L., (1988), p ie Response of a Streptococcus sanguis strain to arginine-containing nl w peptides Infect Iniinun., 56, tr 687-692 d oa 52 Sato A., Fujiwara H., Oku H., Ishiguro K., Ohizumi Y., (2004), Alpha- an lu mangostin induces Ca(2+)-ATPase-dependent apoptosis via mitochondrial nf va pathway in PC 12 cells J Pharmacol Sci., 95(1), tr 33- 40 lm ul 53 Scheie A.A., (1989), Modes of action of currently known chemical anti- z at nh oi plaque agents other than chlorohexidine, J Dent Res., 68, tr 1609-1616 54 Schilling K.M., Bowen W.H., (1992) Glucans synthesized in situ in z experimental salivary pellicle function as specific binding sites for @ l gm Streptococcus mutans, Infect Immun 60, tr 284-295 co 55 Stur M.G and Marquis R.E., (1992), Comparative acid tolerances and m inhibitor sensitivities of isolated F-ATPases of oral lactic acid bacteria, an Lu Appl Environ Microbiol., 58, tr 2287-2291 n va 64 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học 56 Venkitaraman L.K., Nguyễn Vũ Anh A.R., Vacca-Smith (1995), A.M., and Kopec Characterization of glucosyltransferase B, GtfC, and GtfD in solution and on the surface of hydroxyapatite, J Dental Res., 74, tr 1695-1701 57 Wilson M., (1996), Susceptibility of oral bacterial biofilms to antimicrobial agents, J Med Microbiol., 44, tr 79-87 58 Williams P., Ongsakul M., Proudfoot J., Croft K., Beilin L., (1995), Mangostin inhibits the oxidative modification of human low density lu an lipoprotein, Free Rad Res., 23(2), tr 175-841 n va Tài liệu khác tn to gh 59 http://nld.com.vn/hoi-nhap/song-chung-voi-sau-rang- p ie 20150322170059182.htm w 60 http://news.zing.vn/Can-benh-khien-moi-nguoi-Viet-Nam-mat-hon-6- d oa nl chiec-rang-post546699.html nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỚ CỦA TÁC GIẢ n va 65 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Vũ Anh - Nguyễn Thi ̣Mai Phương ,Bạch Như Quỳnh , Trầ n Thi ̣Nhung , Nguyễn Công Thành, Quách Thị Liên , Nguyễn Vũ Anh, Phạm Văn Liệu (2015) Dịch chiết sim (Rhodomyrtus tomentosa (Aliton) Hassk) ức chế sinh acid hình thành biofilm vi khuẩn Streptcocccus mutans Tạp chí Y ho ̣c Viê ̣t Nam 433: tr 177-183 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va 66 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Vũ Anh lu an n va PHỤ LỤC p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z co l gm @ m Phổ Proton 13C chất -mangostin an Lu n va 67 ac th si Luận văn Thạc sỹ Khoa học Pos Nguyễn Vũ Anh Chem.shif-1H (ppm) Group Chem.shif-13C (ppm) lu an n va C 156.57 C 102.72 C=O 183.02 C 125.03 C 138.34 CH C-OH 156.05 C 144.67 10 C 112.12 11 CH 12 C-OH 161.43 13 C 111.35 14 C-OH 163.49 18 O-CH3 3.72, 3H, s 61.26 19 CH2 4.01, 2H, d(J=5.6 27.04 6.63, 1H, s CH 5.19,1H, d(J=5.6 125.04 Hz) oa nl w C 131.70 d 21 93.14 Hz) p 20 103.67 6.19, 1H, s ie gh tn to CH3 1.62, 3H, s 25.89 24 CH2 3.23, 2H, d(J=5.6 22.14 Hz) lm ul CH nf va an 25 lu 22 5.19,1H, d(J=5.6 123.81 z at nh oi Hz) C 131.61 27 CH3 1.63, 3H, s 25.91 29 CH3 1.74, 3H, s 17.86 30 CH3 1.78, 3H, s z 26 @ m co l gm 18.26 an Lu n va 68 ac th si