Phân lập và xác định một số đặc tính sinh học của parvovirus (canine parvovirus) gây bệnh trên chó tại việt nam

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM CHU THỊ NGỌC XUÂN PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA PARVOVIRUS (CANINE PARVOVIRUS) GÂY BỆNH TRÊN CHÓ TẠI VIỆT NAM Ngành: Thú Y Mã số: 64 01 01 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Chu Đức Thắng NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2020 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu Nghiên cứu thực Công ty TNHH Dược Hanvet, hướng dẫn thầy giáo PGS.TS Chu Đức Thắng hỗ trợ đồng nghiệp công ty Hanvet Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng Tác giả luận văn Chu Thị Ngọc Xuân i năm LỜI CẢM ƠN Nhân dịp hoàn thành luận văn thạc sĩ, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới tổ chức, cá nhân tạo điều kiện thuận lợi trình thực luận văn Xin chân thành cảm ơn quý thầy, cô tận tình hướng dẫn, giúp đỡ, truyền đạt kiến thức chuyên môn kinh nghiệm quý báu cho suốt q trình học tập trường Bộ mơn Nội – Chẩn – Dược – Độc Chất – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi suốt q trình học tập, thời gian thực luận văn Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn đến PGS.TS Chu Đức Thắng, người hướng dẫn thời gian thực đề tài góp ý, chỉnh sửa q trình hồn thiện luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn anh chị em bạn bè đồng nghiệp Công ty TNHH Dược Hanvet tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi suốt q trình nghiên cứu hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới gia đình, cảm ơn bạn bè, anh, chị em người động viên, giúp đỡ tơi để tơi hồn thành luận văn tốt nghiệp Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng Tác giả luận văn Chu Thị Ngọc Xuân ii năm MỤC LỤC Lời cam đoan .i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình viii Trích yếu luận văn ix Thesis abstract x Phần Mở đầu .1 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài .2 1.3 Ý nghĩa đề tài Phần Tổng quan tài liệu .3 2.1 Tình hình nghiên cứu bệnh Parvovirus gây giới Việt Nam 2.1.1 Tổng quan bệnh Parvovirus .3 2.1.2 Tình hình nghiên cứu bệnh Parvovirus gây giới 2.1.3 Tình hình dịch bệnh Parvovirus gây Việt Nam .5 2.2 Đặc điểm sinh học Parvovirus 2.2.1 Đặc điểm hình thái, cấu trúc hệ gen Parvovirus 2.2.2 Phân loại phân bố type Parvovirus 2.2.3 Dịch tễ học 2.2.4 Sức đề kháng Parvovirus 2.2.5 Đặc tính ni cấy .9 2.2.6 Đặc tính kháng nguyên 2.2.7 Khả miễn dịch 2.2.8 Đường xâm nhập cách truyền bệnh 10 2.2.9 Biểu lâm sàng 12 2.2.10 Triệu chứng 13 2.3 Tổng quan nuôi cấy tế bào 15 2.3.1 Một số đặc điểm tế bào động vật 15 2.3.2 Thành phần dinh dưỡng môi trường nuôi cấy tế bào 16 iii 2.3.3 Điều kiện nuôi cấy 17 2.3.4 Sự tạp nhiễm cách hạn chế 17 2.4 Phân lập virus 18 2.4.1 Khái quát phân lập virus .18 2.4.2 Phân lập Parvovirus phục vụ nghiên cứu sản xuất vắc xin vô hoạt 19 2.4.3 Các phương pháp chẩn đoán .19 2.5 Kiểm soát phòng ngừa 24 Phần Nội dung phương pháp nghiên cứu 26 3.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu .26 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu .26 3.3 Nguyên vật liệu 26 3.3.1 Hóa chất - sinh phẩm 26 3.3.2 Vật tư thiết bị 26 3.4 Nội dung nghiên cứu 27 3.4.1 Sàng lọc đối tượng nghiên cứu 27 3.4.2 Phân lập virus tế bào MDCK .27 3.4.3 Giải trình tự gen định type 27 3.4.4 Một số đặc tính sinh học Parvovirus phân lập 27 3.5 Phương pháp nghiên cứu 27 3.5.1 Phương pháp xử lý mẫu 27 3.5.2 Phương pháp tách chiết DNA tổng số .27 3.5.3 Phương pháp PCR .28 3.5.4 Phương pháp giải trình tự gen VP2 định type 28 3.5.5 Phân lập virus CPV-2 tế bào MDCK 29 3.5.6 Xác định số đặc tính sinh học Parvovirus tế bào MDCK 33 3.5.7 Phương pháp xử lý số liệu 37 Phần Kết thảo luận .38 4.1 Kết chẩn đoán virus 38 4.1.1 Thông tin bệnh phẩm 38 4.1.2 Kết chẩn đoán PCR 39 4.2 Kết phân lập virus từ mẫu bệnh phẩm 40 4.2.1 Kết nuôi cấy tế bào MDCK 40 iv 4.2.2 Kết phân lập thích nghi Parvovirus tế bào MDCK .40 4.2.3 Kết kiểm tra virus mẫu phân lập phương pháp PCR 40 4.2.4 Kết xác định hiệu giá Parvovirus sau phân lập 42 4.3 Kết giám định virus giải trình tự gen 45 4.4 Một số đặc tính sinh học Parvovirus 49 4.4.1 Khả gây nhiễm Parvovirus tế bào MDCK 49 4.4.2 Kết xác định số MOI 51 4.4.3 Kết xác định đường cong sinh trưởng 52 Phần Kết luận đề nghị 54 5.1 Kết luận .54 5.2 Kiến nghị 54 Tài liệu tham khảo 55 Phụ lục 63 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt µl Microliter CPE Cyto Pathogenic Effect CPV2 Canine Parvovirus type CRFK Crandell Rees Feline Kidney Cs Cộng DMEM Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium DMSO Dimethyl sulfoxide DNA Deoxyribonucleic acid ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay EMEM Eagle’s Minimum Essential Media FAO Food and Agriculture Organization of the United Nations FBS Fetal Bovine Serum HA Haemagglutination HI Haemagglutination Inhibition IPMA Immunoperoxidase monolayer assay MDCK Madin Darby Canine kidney MEM Modified Eagles medium MOI Multiplicity of Infection PBS Phosphate buffered saline PCR Polymerase chain reaction PFU Plaque forming unit RNA Ribonucleoic acid RT-PCR Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction TBE Tris/Borate/EDTA TCID50 50% Tissue Culture Infective Dose vi DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Thành phần chu kỳ nhiệt phản ứng PCR giám định CPV 28 Bảng 3.2 Thành phần phản ứng chu kỳ nhiệt phản 29 Bảng 3.3 Bố trí thí nghiệm xác định môi trường gây nhiễm 33 Bảng 3.4 Bố trí thí nghiệm xác định pH tối ưu cho nuôi cấy .33 Bảng 3.5 Bố trí thí nghiệm xác định nồng độ huyết 34 Bảng 3.6 Bố trí thí nghiệm xác định liều gây nhiễm thích hợp 35 Bảng 4.1 Thơng tin mẫu phân chó nghi mắc bệnh Parvovirus 38 Bảng 4.2 Kết giám định virus phản ứng PCR 41 Bảng 4.3 Hiệu giá virus CPV-2 qua đời cấy chuyển .43 Bảng 4.4 Mức đồng nucleotide tương đồng protein gen VP2 mẫu S04 so với mẫu CPV-2 công bố ngân hàng gen 46 Bảng 4.5 Kết hiệu giá virus CPV-2 loại môi trường nhiễm 49 Bảng 4.6 Kết hiệu giá virus CPV-2 điều kiện pH khác .50 Bảng 4.7 Kết hiệu giá virus CPV-2 liều gây nhiễm (MOI) 51 Bảng 4.8 Kết hiệu giá virus thời điểm thu hoạch khác .53 vii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Cấu trúc gen Parvovirus Hình 2.2 Sơ đồ cấu trúc CPV-2 phân tích tinh thể học Hình 2.3 Sự phân bố CPV-2a\2b\2c giới Hình 2.4 Tỷ lệ phần trăm xuất chủng CPV-2/CPV-2-like, CPV2a, CPV-2b, CPV-2c .8 Hình 2.5 Cơ chế sinh bệnh Parvovirus chó 11 Hình 2.6 Chó bị tiêu chảy cấp Parvovirus .15 Hình 2.7 Kit thử nhanh Canine Parvovirus (CPV) Ag .22 Hình 3.1 Buồng đếm tế bào 30 Hình 4.1 Kết chẩn đốn Parvovirus .39 Hình 4.2 Tế bào MDCK sau nuôi cấy 24, 48, 72, 96 40 Hình 4.3 Ảnh điện di mẫu S01, S04 đời P2 .41 Hình 4.4 Tế bào giếng đối chứng giếng thí nghiệm trước nhuộm IPMA .43 Hình 4.5 Tế bào giếng đối chứng giếng thí nghiệm sau nhuộm IPMA 43 Hình 4.6 Mật độ virus nội bào độ pha loãng khác 44 Hình 4.7 A Kết điện di sản phẩm PCR nhân toàn gen VP2 mẫu S04; B Một phần giản đồ tín hiệu giải trình tự gen VP2 mẫu S04 .45 Hình 4.8 Căn trình tự protein VP2 mẫu S04 so với kiểu gen CPV-2 công bố 47 Hình 4.9 Cây phát sinh lồi xây dựng dựa gen VP2 mẫu S04 .48 Hình 4.10 Đồ thị thể kết hiệu giá virus nồng độ huyết 51 Hình 4.11 Hiệu giá virus theo liều gây nhiễm khác 52 Hình 4.12 Đường cong sinh trưởng virus CPV-2 tế bào MDCK 53 viii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Chu Thị Ngọc Xuân Tên luận văn: “Phân lập xác định số đặc tính sinh học Parvovirus (Canine Parvovirus) gây bệnh chó Việt Nam” Ngành: Thú y Mã số: 64 01 01 Tên sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục tiêu nghiên cứu Nhằm phân lập số chủng Parvovirus thực địa môi trường nuôi cấy tế bào MDCK (Madin Darby Canine Kidney) xác định số đặc tính sinh học chủng Parvovirus phân lập, tiền đề nghiên cứu chuyên sâu tạo chế phẩm sinh học phòng chống dịch bệnh Phương pháp nghiên cứu  Phương pháp PCR, giải trình tự gen định type  Phương pháp nuôi cấy tế bào MDCK phân lập Parvovirus tế bào MDCK  Phương pháp xác định số TCID50 theo phương pháp Spearman & Karber  Phương pháp xác định liều MOI đường cong sinh trưởng Parvovirus  Số liệu thu thập xử lý phần mềm Excel 2010 Minitap 16 Kết đạt  Phân lập thành công chủng CPV- S04 tế bào MDCK, sau cấy chuyển 10 đời liên tục hiệu giá virus đạt 105,0 TCID50/ ml  Giám định chủng Parvovirus thuộc nhóm CPV-2c  Tối ưu quy trình gây nhiễm virus CPV tế bào MDCK  Thời điểm thu virus thích hợp để virus đạt hiệu giá cao 96 sau gây nhiễm ix Hình 4.10 Đồ thị thể kết hiệu giá virus nồng độ huyết Phân tích Hình 4.10 cho thấy, nồng độ huyết khác có kết hiệu giá virus khác khác có ý nghĩa thống kê (P=0,009 < 0,05) Tại nồng độ huyết 5% cho hiệu giá trung bình lần cao đạt 105,06±0,17 TCID50 /ml Nồng độ huyết 3% cho hiệu giá trung bình đạt 104,43±0,09 TCID50/ ml, nồng độ huyết 8% cho hiệu giá trung bình đạt 104,67±0,12 TCID50/ ml Do vậy, lựa chọn nồng độ huyết 5% bổ sung vào môi trường gây nhiễm virus phù hợp 4.4.2 Kết xác định số MOI Để xác định liều gây nhiễm virus thích hợp tơi tiến hành thí nghiệm với liều MOI khác Kết theo dõi thí nghiệm trình bày Bảng 4.7 Bảng 4.7 Kết hiệu giá virus CPV-2 liều gây nhiễm (MOI) Thời gian gây nhiễm virus (giờ) Hiệu giá virus ( log10 TCID50/ ml) 0,01 0,005 0,001 24h 3,0 3,3 2,7 48h 3,5 3,9 3,2 72h 4,9 4,7 4,1 96h 4,3 5,3 4,6 120h 4,0 4,6 3,9 51 Từ bảng 4.7 đồ thị xây dựng hình 4.11 Liều gây nhiễm (MOI) Hiệu giá virus ( log10 TCID50/ml) 5.3 4.9 4.7 3.3 2.7 3.9 3.5 3.2 4.1 4.6 4.3 4.6 3.9 0.01 0.005 0.001 24h 48h 72h 96h 120h Hình 4.11 Hiệu giá virus theo liều gây nhiễm khác Ở liều gây nhiễm MOI 0,01 sau 72 gây nhiễm hiệu giá virus đạt cao nhất, trung bình 104,9 TCID50/ ml sau 96 gây nhiễm virus hiệu giá bắt đầu giảm đến 120 104,0 TCID50/ ml Ở liều gây nhiễm MOI 0,005 hiệu giá virus tăng dần theo thời gian gây nhiễm, sau 96 gây nhiễm hiệu giá virus đạt cao nhất, trung bình 105,3 TCID50/ ml theo dõi đến 120 sau nhiễm hiệu giá virus giảm 104,6 TCID50/ ml Ở liều gây nhiễm 0,001 hiệu giá đạt cao sau 96 gây nhiễm (104,6 TCID50/ ml), 120 sau nhiễm hiệu giá virus giảm 103,9 TCID50/ ml, khác biệt hiệu giá liều gây nhiễm có ý nghĩa thống kê (P=0,008< 0,05) Do vậy, chọn liều gây nhiễm 0,005 virus đạt hiệu giá cao thời điểm 96 thu hoạch 4.4.3 Kết xác định đường cong sinh trưởng 4.4.3.1 Kết chuẩn độ hiệu giá virus thời điểm khác Xác định xác thời điểm thu hoạch virus tối ưu, tiến hành lấy mẫu thời điểm 24, 36, 48, 60, 72, 80, 96, 108, 120 sau chuẩn độ hiệu giá xác định có mặt virus CPV phản ứng IPMA Kết theo dõi thí nghiệm trình bày bảng 4.8 52 Bảng 4.8 Kết hiệu giá virus thời điểm thu hoạch khác Thời điểm thu virus Lần 24h 36h 48h 60h 72h 84h 96h 108h 120h Lần 102,9 103,0 103,5 104,1 104,7 105,1 105,1 104,8 104,1 Hiệu giá Lần 102,9 103,1 103,5 104,0 104,5 104,9 105,3 104,7 104,0 virus (TCID50/ ml) Lần 102,7 102,9 103,1 103,9 104,3 104,9 105,3 104,3 103,9 Trung 102,83±0,12 103,0±0,1 103,37±0,23 104,0±0,1 104,7±0,2 104,6±0,3 104,0±0,1 104,97±0,12 105,23 ±0,11 bình 4.4.3.2 Đường cong sinh trưởng virus Sau tổng hợp kết chuẩn độ hiệu giá virus, đường cong sinh trưởng xây dựng có biến Log10 TCID50 thời điểm thu virus thể biểu đồ Hình 4.12 Đường cong sinh trưởng virus CPV-2 tế bào MDCK Qua bảng số liệu đồ thị sinh trưởng, phát triển virus CPV-2 cho thấy: Sau gây nhiễm 24 virus bắt đầu trình sinh trưởng, hàm lượng virus phát triển tăng dần theo thời gian nhiễm đạt cao vào khoảng 72 – 96 sau gây nhiễm (105,23 ±0,11TCID50/ ml) Sau thời điểm 96 giờ, hiệu giá virus giảm nhanh chóng Đến thời điểm 120 sau gây nhiễm hiệu giá virus cịn 104,0±0,1 TCID50/ ml Từ chúng tơi rút kết luận: thời điểm thu hoạch virus tốt 96 sau gây nhiễm Tại thời điểm hàm lượng virus đạt cao hiệu giá virus ổn định 53 PHẦN KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Bằng phương pháp PCR xác định 02 mẫu số mẫu phân chó thu thành phố Hà Nội Hưng Yên dương tính với Parvovirus Phân lập thành cơng chủng Parvovirus mơi trường tế bào MDCK chủng S04, hiệu giá virus đạt 105,0 TCID50/ ml Bằng giải trình tự gen xác định chủng S04 thuộc type CPV-2c Quy trình gây nhiễm Parvovirus tế bào MDCK thích hợp với yếu tố sau: DMEM high glucose + 5% FBS + 1% L-Glutamin 2M + 0,5% Hepes 1M + 0,1% Gentamicin 10%, pH 7,5±0,1 - Với liều MOI: 0,005 virus đạt hiệu giá cao sau 96 gây nhiễm: 105,3 TCID50/ ml - Kết phân tích đường cong sinh trưởng virus thực địa cho thấy, thời gian virus đạt hiệu giá cao từ 72 đến 96 sau gây nhiễm, hiệu giá cao đạt 105,23 TCID50/ ml vào giai đoạn 96 sau gây nhiễm Vì vậy, thời điểm thu virus thích hợp để virus đạt hiệu giá cao 96 sau gây nhiễm 5.2 KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu sâu đặc điểm sinh học phân tử virus để thấy rõ mức độ tương đồng tỉ lệ biến chủng virus phân lập với chủng lưu hành ngồi thực địa Từ hướng đến phát triển vaccine vơ hoạt phịng bệnh Parvovirus Do Parvovirus có tính biến chủng cao nên cần có nghiên cứu liên tục đặc điểm sinh học sinh học phân tử chủng virus lưu hành ngồi thực địa, từ lựa chọn chủng Parvovirus thích hợp bổ sung vaccine phịng bệnh Parvovirus 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO Agbandje M., Mckenna R., Rossmann M G., Strassheim M L., Parrish C R J P S., Function, & Bioinformatics (1993) Structure determination of feline panleukopenia virus empty particles 16(2): 155-171 Agungpriyono D., Uchida K., Tabaru H., Yamaguchi R & Tateyama S J V p (1999) Subacute massive necrotizing myocarditis by canine parvovirus type infection with diffuse leukoencephalomalacia in a puppy 36(1): 77-80 Allen R., Pereira L., Raes D & Smith M (1998) Guidelines for computing crop water requirements-FAO Irrigation and drainage paper 56, FAO-Food and Agriculture Organisation of the United Nations, Rome (http://www fao org/docrep) ARPAV (2000), La caratterizzazione climatica della Regione Veneto, Quaderni per Geophysics 156: 178 Amrani N., Desario C., Kadiri A., Cavalli A., Berrada J., Zro K., Sebbar G., Colaianni M L., Parisi A & Elia G (2016) Molecular epidemiology of canine parvovirus in Morocco Infection, Genetics and Evolution 41: 201-206 Bích T N., Thảo T T., Và Nguyễn N T Y M & Việt Q (2013) KHẢO SÁT TỶ LỆ BỆNH DO PARVOVIRUS TRÊN CHÓ TỪ ĐẾN THÁNG TUỔI Ở THÀNH PHỐ CẦN THƠ Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ 28: 15-20 Bishop (1973) Effect of aortic stenosis on myocardial cell growth, hyperplasia, and ultrastructure in neonatal dogs 3: 637-656 Buonavoglia C., Martella V., Pratelli A., Tempesta M., Cavalli A., Buonavoglia D., Bozzo G., Elia G., Decaro N & Carmichael L (2001a) Evidence for evolution of canine parvovirus type in Italy Journal of General Virology 82(12): 3021-3025 Buonavoglia C., Martella V., Pratelli A., Tempesta M., Cavalli A., Buonavoglia D., Bozzo G., Elia G., Decaro N & Carmichael L J J o G V (2001b) Evidence for evolution of canine parvovirus type in Italy 82(12): 3021-3025 Buonavoglia D., Cavalli A., Pratelli A., Martella V., Greco G., Tempesta M & Buonavoglia C (2000) Antigenic analysis of canine parvovirus strains isolated in Italy The new microbiologica 23(1): 93-96 Burtonboy G., Coignoul F., Delferriere N & Pastoret P (1979) Canine hemorrhagic enteritis: detection of viral particles by electron microscopy Archives of virology 61(1-2): 1-11 55 Butler J (2004) Undoing gender routledge Carmichael L & Binn L (1981) New enteric viruses in the dog Advances in Veterinary Science and Comparative Medicine (USA) Carmichael L., Joubert J & Pollock R (1980) Hemagglutination by canine parvovirus: serologic studies and diagnostic applications American journal of veterinary research 41(5): 784-791 Carmichael L E., Schlafer D H & Hashimoto A J J o v d i (1994) Minute virus of canines (MVC, canine parvovirus type-1): pathogenicity for pups and seroprevalence estimate 6(2): 165-174 Carpenter J., Roberts R., Harpster N & King J N J J o t A V M A (1980) Intestinal and cardiopulmonary forms of parvovirus infection in a litter of pups 176(11): 1269-1273 Castanheira P., Duarte A., Gil S., Cartaxeiro C., Malta M., Vieira S & Tavares L J B v r (2014) Molecular and serological surveillance of canine enteric viruses in stray dogs from Vila Maio, Cape Verde 10(1): 91 Cavalli A., Bozzo G., Decaro N., Tinelli A., Aliberti A & Buonavoglia D J T n m (2001) Characterization of a canine parvovirus strain isolated from an adult dog 24(3): 239-242 Chất V Đ & Tài L T (2004) Bệnh chó mèo cách phịng trị Nhà xuất Nông nghiệp Chou S.-J., Lin H.-T., Wu J.-T., Yang W.-C & Chan K.-W J T V J (2013) Genotyping of canine parvovirus type VP2 gene in southern Taiwan in 2011 39(2): 81-92 Decaro N & Buonavoglia C (2012a) Canine parvovirus—a review of epidemiological and diagnostic aspects, with emphasis on type 2c Veterinary microbiology 155(1): 1-12 Decaro N & Buonavoglia C J V m (2012b) Canine parvovirus—a review of epidemiological and diagnostic aspects, with emphasis on type 2c 155(1): 1-12 Decaro N., Desario C., Addie D D., Martella V., Vieira M J., Elia G., Zicola A., Davis C., Thompson G & Thiry E (2007a) Molecular epidemiology of canine parvovirus, Europe Emerging infectious diseases 13(8): 1222 Decaro N., Desario C., Addie D D., Martella V., Vieira M J., Elia G., Zicola A., Davis C., Thompson G & Thiry E J E i d (2007b) Molecular epidemiology of canine parvovirus, Europe 13(8): 1222 Decaro N., Desario C., Amorisco F., Losurdo M., Colaianni M L., Greco M F., Buonavoglia C J J o f m & Surgery (2011) Canine parvovirus type 2c infection in a kitten associated with intracranial abscess and convulsions 13(4): 231-236 56 Decaro N., Desario C., Elia G., Martella V., Mari V., Lavazza A., Nardi M & Buonavoglia C (2008) Evidence for immunisation failure in vaccinated adult dogs infected with canine parvovirus type 2c Microbiologica-Quarterly Journal of Microbiological Sciences 31(1): 125-130 Decaro N., Elia G., Martella V., Campolo M., Desario C., Camero M., Cirone F., Lorusso E., Lucente M S & Narcisi D (2006) Characterisation of the canine parvovirus type variants using minor groove binder probe technology Journal of virological methods 133(1): 92-99 Decaro N., Martella V., Elia G., Desario C., Campolo M., Lorusso E., Colaianni M L., Lorusso A & Buonavoglia C J V m (2007c) Tissue distribution of the antigenic variants of canine parvovirus type in dogs 121(1-2): 39-44 Demeter Z., Palade E A., Soós T., Farsang A., Jakab C & Rusvai M J V g (2010) Misleading results of the MboII-based identification of type 2a canine parvovirus strains from Hungary reacting as type 2c strains 41(1): 37-42 Đoàn Thị Thanh Hương N T K., Phạm Hồng Ngọc, Nguyễn Hữu Đức, Đỗ Thị Roan, Lê Thị Kim Xuyến, Lê Thanh Hòa (2018) Phát Parvovirus type 2c chó Hà Nội năm 2017 phương pháp sinh học phân tử Khoa học kỹ thuật thú y XXV(8): 27-35 Dorlikar P., Warke S., Tumlam U & Ingle V (2019) Isolation and identification of canine parvovirus infection from around Nagpur region Eleraky N Z., Potgieter L N & Kennedy M A J J o t A A H A (2002) Virucidal efficacy of four new disinfectants 38(3): 231-234 Elia G., Cavalli A., Desario C., Lorusso E., Lucente M S., Decaro N., Martella V & Buonavoglia C (2007) Detection of infectious canine parvovirus type by mRNA real-time RT-PCR Journal of virological methods 146(1-2): 202-208 Fan X.-X., Gao Y., Shu L., Wei Y.-Q., Yao X.-P., Cao S.-Z., Peng G.-N., Liu X.-T & Sun S.-Q (2016) Transcriptome profiling indicating canine parvovirus type 2a as a potential immune activator Virus genes 52(6): 768-779 Favrot C., Olivry T., Dunston S., Degorce-Rubiales F & Guy J J V p (2000) Parvovirus infection of keratinocytes as a cause of canine erythema multiforme 37(6): 647-649 Glickman L T., Domanski L M., Patronek G J & Visintainer F J J o A V M A (1985) Breed-related risk factors for canine parvovirus enteritis 187(6) 57 Greene C E (2013) Infectious Diseases of the Dog and Cat-E-Book Elsevier Health Sciences trang trang Hoang M., Lin W.-H., Nga B T T., Chiou M.-T & Lin C.-N (2019) Molecular epidemiology of canine parvovirus type in Vietnam from November 2016 to February 2018 Virology journal 16(1): 52 Hoelzer K & Parrish C R J V r (2010) The emergence of parvoviruses of carnivores 41(6): 39 Hong C., Decaro N., Desario C., Tanner P., Pardo M C., Sanchez S., Buonavoglia C & Saliki J T (2007) Occurrence of canine parvovirus type 2c in the United States Journal of Veterinary Diagnostic Investigation 19(5): 535-539 Houston D., Ribble C & Head L (1996a) Risk factors associated with parvovirus enteritis in dogs: 283 cases (1982-1991) Journal of the American Veterinary Medical Association 208(4): 542-546 Houston D., Ribble C & Head L J J o t A V M A (1996b) Risk factors associated with parvovirus enteritis in dogs: 283 cases (1982-1991) 208(4): 542-546 Inthong N., Kaewmongkol S., Meekhanon N., Sirinarumitr K & Sirinarumitr T (2020) Dynamic evolution of canine parvovirus in Thailand Veterinary World 13(2): 245 Johnson R & Spradbrow P (1979) Isolation from dogs with severe enteritis of a parvovirus related to feline panleucopaenia virus Australian Veterinary Journal 55(3): 151-152 Kang J.-I., Park N.-Y & Cho H.-S J J o v d i (2006) Detection of canine parvovirus in fecal samples using loop-mediated isothermal amplification 18(1): 81-84 Kelly W (1978) An enteric disease of dogs resembling feline panleucopaenia Australian Veterinary Journal 54(12): 593-593 Khan A., Rabbni M., Muhammad K., Murtaza N., Nazir J J I J o A & Biology (2006) Isolation and characterization of canineparvo virus Kumar M., Chidri S & Nandi S (2011) A sensitive method to detect canine parvoviral DNA in faecal samples by nested polymerase chain reaction Kumar M., Nandi S & Chidri S (2010a) Development of a polyclonal antibody-based AC-ELISA and its comparison with PCR for diagnosis of canine parvovirus infection Virologica Sinica 25(5): 352-360 Kumar M., Nandi S J T & Diseases e (2010b) Molecular typing of canine parvovirus variants by polymerase chain reaction and restriction enzyme analysis 57(6): 458-463 58 Lăng P S (2006) Kỹ thuật ni chó phịng chống bệnh cho chó NXB Lao động xã hội, Hà Nội Lê Minh Thành (2009) Nghiên cứu bệnh viêm ruột Parvovirus chó hiêu điều trị bệnh xá thú y Trường Đại học Cần Thơ, Luận văn Thạc sĩ, Trường Đại học Cần Thơ, trang Markovich J E., Stucker K M., Carr A H., Harbison C E., Scarlett J M & Parrish C R J J o t A V M A (2012) Effects of canine parvovirus strain variations on diagnostic test results and clinical management of enteritis in dogs 241(1): 66-72 Martella V., Cavalli A., Pratelli A., Bozzo G., Camero M., Buonavoglia D., Narcisi D., Tempesta M & Buonavoglia C (2004) A canine parvovirus mutant is spreading in Italy Journal of clinical microbiology 42(3): 1333-1336 Mccandlish (1998) Canine Parvovirus infection Trong: Canine Medicine and Therapeutics Gorman N T (ed.) 127-130 trang Mcree A., Wilkes R P., Dawson J., Parry R., Foggin C., Adams H & Kennedy M A J J o t S A V A (2014) Serological detection of infection with canine distemper virus, canine parvovirus and canine adenovirus in communal dogs from Zimbabwe 85(1): 01-02 Meers J., Kyaw‐Tanner M., Bensink Z & Zwijnenberg R J A v j (2007) Genetic analysis of canine parvovirus from dogs in Australia 85(10): 392-396 Meunier P., Cooper B., Appel M & Slauson D J V p (1984) Experimental viral myocarditis: parvoviral infection of neonatal pups 21(5): 509-515 Mittal M., Chakravarti S., Mohapatra J., Chug P., Dubey R., Upmanuyu V., Narwal P., Kumar A., Churamani C & Kanwar N (2014) Molecular typing of canine parvovirus strains circulating from 2008 to 2012 in an organized kennel in India reveals the possibility of vaccination failure Infection, Genetics and Evolution 23: 1-6 Mochizuki M., Harasawa R & Nakatani H (1993) Antigenic and genomic variabilities among recently prevalent parvoviruses of canine and feline origin in Japan Veterinary microbiology 38(1-2): 1-10 Mochizuki M., Ohshima T., Une Y & Yachi A (2008) Recombination between vaccine and field strains of canine parvovirus is revealed by isolation of virus in canine and feline cell cultures Journal of Veterinary Medical Science 70(12): 1305-1314 Moraillon R (1993) Les vomissements des carnivores Orientaton diagnostique et conduite a tenir Recueil de Medecine Veterinaire 169: 963-967 59 Nakamura M., Tohya Y., Miyazawa T., Mochizuki M., Phung H., Nguyen N., Huynh L., Nguyen L., Nguyen P & Nguyen P J A o v (2004) A novel antigenic variant of canine parvovirus from a Vietnamese dog 149(11): 2261-2269 Nandi S & Kumar M J I J o v (2010) Canine parvovirus: current perspective 21(1): 31-44 Nelson D., Eustis S., Mcadaragh J & Stotz I J V p (1979) Lesions of spontaneous canine viral enteritis 16(6): 680-686 Nguyễn Hồng Lộc (2007) Giáo trình Cơng nghệ tế bào, Nxb Đại học Huế Ohshima T., Hisaka M., Kawakami K., Kishi M., Tohya Y & Mochizuki M (2008) Chronological analysis of canine parvovirus type isolates in Japan Journal of Veterinary Medical Science 70(8): 769-775 Parrish C & Carmichael L J V (1983) Antigenic structure and variation of canine parvovirus type-2, feline panleukopenia virus, and mink enteritis virus 129(2): 401-414 Parrish C R (1990) Emergence, natural history, and variation of canine, mink, and feline parvoviruses Trong: Advances in virus research Elsevier: 403-450 trang Parrish C R (1991) Mapping specific functions in the capsid structure of canine parvovirus and feline panleukopenia virus using infectious plasmid clones Virology 183(1): 195-205 Parrish C R (1995) Pathogenesis of feline panleukopenia virus and canine parvovirus Ballière’s Clinical Haematology 8(1): 57-71 Parrish C R (1999) Host range relationships and the evolution of canine parvovirus Veterinary microbiology 69(1-2): 29-40 Parrish C R., Aquadro C F., Strassheim M., Evermann J., Sgro J & Mohammed H (1991) Rapid antigenic-type replacement and DNA sequence evolution of canine parvovirus Journal of Virology 65(12): 6544-6552 Parrish C R., Have P., Foreyt W J., Evermann J F., Senda M & Carmichael L E (1988) The global spread and replacement of canine parvovirus strains Journal of General Virology 69(5): 1111-1116 Parrish C R & Kawaoka Y (2005) The origins of new pandemic viruses: the acquisition of new host ranges by canine parvovirus and influenza A viruses Annual review of microbiology 59 Pei Z., Weijie Zeng, Xin Zhang & Shoujun Li (2017) The genetic evolution of canine parvovirus – A new perspective PLoS One 12(3): e0175035 60 Pérez R., Bianchi P., Calleros L., Francia L., Hernández M., Maya L., Panzera Y., Sosa K & Zoller S J V m (2012) Recent spreading of a divergent canine parvovirus type 2a (CPV-2a) strain in a CPV-2c homogenous population 155(2-4): 214-219 Pérez R., Francia L., Romero V., Maya L., López I & Hernández M (2007) First detection of canine parvovirus type 2c in South America Veterinary microbiology 124(1-2): 147-152 Pho N N (2003) Bệnh Parvovirus Care chó NXB Nơng Nghiệp Phong T T (1996) Một số bệnh truyền nhiễm chó Đại Học Nơng Lâm Thành phố Hồ Chí Minh Tủ sách trường Đại học Nông Lâm 69-79 Pintos A B., Larrama C B N., Baratta E E R., Barthe M B B & Rodonz J R A (2011) Isolation and characterization of canine parvovirus type 2c circulating in Uruguay Ciência Rural 41(8): 1436-1440 Pollock R (1982) Experimental canine parvovirus infection in dogs The Cornell veterinarian 72(2): 103 Pollock R & Coyne M J J T V c o N A S a p (1993) Canine parvovirus 23(3): 555-568 Prittie J J J o V E & Care C (2004) Canine parvoviral enteritis: a review of diagnosis, management, and prevention 14(3): 167-176 Puentes R., Eliopulos N., Pérez R., Franco G., Sosa K., Bianchi P., Furtado A., Hübner S & Esteves P (2012) Isolation and characterization of canine parvovirus type 2c (CPV-2c) from symptomatic puppies Brazilian Journal of Microbiology 43(3): 1005-1009 Qing X & Michael S C (1996) Canine Parvovirus Capsid Structure, Analyzed at 2.9 Å Resolution Journal of Molecular Biology 264(3): 497-520 Reed A P., Jones E V & Miller T J J J o v (1988) Nucleotide sequence and genome organization of canine parvovirus 62(1): 266-276 Robinson W., Huxtable C & Pass D J V p (1980) Canine parvoviral myocarditis: a morphologic description of the natural disease 17(3): 282-293 Saasa N., Nalubamba K S., M’kandawire E & Siwila J (2016) Seroprevalence of canine parvovirus in dogs in Lusaka District, Zambia Journal of veterinary medicine 2016 Scott F J A j o v r (1980) Virucidal disinfectants and feline viruses 41(3): 410-414 Sime T A., Powell L L., Schildt J C., Olson E J J J o V E & Care C (2015) Parvoviral myocarditis in a 5‐week‐old Dachshund 25(6): 765-769 Stann Se D R., Giddens WE, Evermann JF (1984) Clinical and pathological features of parvoviral diarrhoea in dogs J Am Vet Med Assoc (185): 651-654 61 Steinel A., Munson L., Van Vuuren M & Truyen U (2000) Genetic characterization of feline parvovirus sequences from various carnivores Journal of General Virology 81(2): 345-350 Steinel A., Venter E., Van Vuuren M., Parrish C & Truyen U J O J o V R (1998) Antigenic and genetic analysis of canine parvoviruses in southern Africa 65: 239-242 Strassheim M L., Gruenberg A., Veijalainen P., Sgro J.-Y & Parrish C R J V (1994) Two dominant neutralizing antigenic determinants of canine parvovirus are found on the threefold spike of the virus capsid 198(1): 175-184 Tô Du X G (2006) Kỹ thuật ni chó mèo phịng bệnh thường gặp Lao Động-Xã Hội Truyen U (2006) Evolution of canine parvovirus—a need for new vaccines? Veterinary microbiology 117(1): 9-13 Truyen U., Evermann J F., Vieler E & Parrish C R J V (1996) Evolution of canine parvovirus involved loss and gain of feline host range 215(2): 186-189 Truyen U., Steinel A., Bruckner L., Lutz H & Möstl K (2000) Distribution of antigen types of canine parvovirus in Switzerland, Austria and Germany Schweizer Archiv Fur Tierheilkunde 142(3): 115-119 Tsao J., Chapman M S., Agbandje M., Keller W., Smith K., Wu H., Luo M., Smith T J., Rossmann M G & Compans R W J S (1991) The three-dimensional structure of canine parvovirus and its functional implications 251(5000): 1456-1464 Van Dung N (2017) Characterization of canine enteric viruses in Vietnam, 山口大学, trang Vieira M J., Silva E., Oliveira J., Vieira A L., Decaro N., Desario C., Muller A., Carvalheira J., Buonavoglia C & Thompson G J J o v d i (2008) Canine parvovirus 2c infection in central Portugal 20(4): 488-491 Wang D., Yuan W., Davis I & Parrish C R J V (1998) Nonstructural protein-2 and the replication of canine parvovirus 240(2): 273-281 Woods C., Pollock R & Carmichael L (1980) Canine parvoviral enteritis Journal of the American Animal Hospital Association 16(2): 171-179 Xie Q & Chapman M S J J o m b (1996) Canine parvovirus capsid structure, analyzed at 2.9 Å resolution 264(3): 497-520 Zhou P., Zeng W., Zhang X & Li S (2017) The genetic evolution of canine parvovirus– A new perspective PloS one 12(3): e0175035 62 PHỤ LỤC Bảng: Các trình tự gen sử dụng nghiên cứu STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 Quốc gia Trung Quốc Trung Quốc Trung Quốc Trung Quốc Trung Quốc Pháp Ấn Độ Ý Singapore Thái Lan Thái Lan Thái Lan Uruguay Uruguay Việt Nam Trung Quốc Trung Quốc Trung Quốc Trung Quốc Ý Thái Lan Thái Lan Việt Nam USA Argentina Trung Quốc Trung Quốc Trung Quốc Trung Quốc Trung Quốc Croatia Ecuador Đức Đức Hy Lạp Indonesia Ý Singapore Mã Genbank MF467224 FJ435343 FJ435345 GU380304 GU569936 DQ026002 KX469433 FJ005259 KY083098 GQ379047 GQ379045 GQ379046 KM457139 JF906788 LC214970 GU569937 GU569938 GU569944 JQ743891 FJ005263 FJ869123 FJ869124 AB120724 JX475261 KM236569 KF482468 KT162005 KT162016 KP260509 KY937641 KP859576 KF149984 FJ005202 FJ005204 GQ865518 LC216905 HQ025913 KY083092 Năm phân lập 2015 2008 2008 2009 2008 2015 2008 2014 2009 2009 2009 2011 2010 2013 2002 2002 2002 2010 2005 2008 2008 2013 2010 2013 2009 2014 2014 2014 2016 2014 2012 1997 1999 2008 2013 2010 2014 63 Kiểu gen 2a 2a 2a 2a 2a 2a 2a 2a 2a 2a 2a 2a 2a 2a 2a 2b 2b 2b 2b 2b 2b 2b 2b 2b 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 Uruguay Trung Quốc Trung Quốc Thái Lan Thái Lan Trung Quốc Trung Quốc Trung Quốc Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam - KM457112 MK518008 MG013488 MH711902 MH711894 MH476587 MH476583 MT010564 MK357726 MK357730 MK357737 MK357729 MK357728 MK357732 MK357725 MK357736 MK357731 MK357723 MK357722 MK357721 MK357726 MK357735 MK357727 MK357734 M74849 M24003 M38245 FJ405225 2008 2017 2017 2016 2016 2017 2017 2018 2017 2017 2018 2017 2017 2017 2017 2018 2017 2016 2016 2016 2017 2018 2017 2017 - 64 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2c 2b 2a FPV Trình tự gen mã hóa VP2 mẫu S04 >S04 ATGAGTGATGGAGGAGTTCAACCAGACGGTGGTCAACCTGCTGTCAGAAA TGAAAGAGCTACAGGATCTGGGAACGGGTCTGGAGGCGGGGGTGGTGGTG GTTCTGGGGGTGTGGGGATTTCTACGGGTACTTTTAATAATCAGACGGAA TTTAAATTTTTGGAAAACGGATGGGTGGAAATCACAGCAAACTCAAGCAG ACTTGTGCATTTAAATATGCCAGAAAGTGAAAATTATAGAAGAGTGGTTG TAAATAATTTGGATAAAACTGCAGTTAACGGAAACATGGCTTTAGATGAT ACTCATGCACAAATTGTAACACCTTGGTCATTGGTTGATGCAAATGCTTG GGGAGTTTGGTTTAATCCAGGAGATTGGCAACTAATTGTTAATACTATGA GTGAGTTGCATTTAGTTAGTTTTGAACAAGAAATTTTTAATGTTGTTTTA AAGACTGTTTCAGAATCTGCTACTCAGCCACCAACTAAAGTTTATAATAA TGATTTAACTGCATCATTGATGGTTGCATTAGATAGTAATAATACTATGC CATTTACTCCAGCAGCTATGAGATCTGAGACATTGGGTTTTTATCCATGG AAACCAACCATACCAACTCCATGGAGATATTATTTTCAATGGGATAGAAC ATTAATACCATCTCATACTGGAACTAGTGGCACACCAACAAATATATACC ATGGTACAGATCCAGATGATGTTCAATTTTACACTATTGAAAATTCTGTG CCAGTACACTTACTAAGAACAGGTGATGAATTTGCTACAGGAACATTTTA TTTTGATTGTAAACCATGTAGACTAACACATACATGGCAAACAAATAGAG CATTGGGCTTACCACCATTTCTAAATTCTTTGCCTCAAGCTGAAGGAGGT ACTAACTTTGGTTATATAGGAGTTCAACAAGATAAAAGACGTGGTGTAAC TCAAATGGGAAACACAAACATTATTACTGAAGCTACTATTATGAGACCAG CTGAGGTTGGTTATAGTGCACCATATTATTCTTTTGAGGCGTCTACACAA GGGCCATTTAAAACACCTATTGCAGCAGGACGGGGGGGAGCGCAAACAGA TGAAAATCGAGCAGCAGATGGTGATCCAAGATATGCATTTGGTAGACAAC ATGGTCAAAAAACTACCACAACAGGAGAAACACCTGAGAGATTTACGTAT ATAGCACATCAAGATACAGGAAGATATCCAGAAGGAGATTGGATTCAAAA TATTAACTTTAACCTTCCTGTAACAGAAGATAATGTATTGCTACCAACAG ATCCAATCGGAGGTAAAACAGGAATTAACTATACTAATATGTTTAATACT TATGGTCCTTTAACTGCATTAAATAATGTACCACCAGTTTATCCAAATGG TCAAATTTGGGATAAAGAATTTGATACTGACTTAAAACCAAGACTTCATG TAAATGCACCATTTGTTTGTCAAAATAATTGTCCTGGTCAATTATTTGTA AAAGTTGCACCTAATTTGACAAATGAATATGATCCTGATGCATCTGCTAA TATGTCAAGAATTGTAACTTACTCAGATTTTTGGTGGAAAGGTAAATTAG TATTTAAAGCTAAACTAAGAGCCTCTCATACTTGGAATCCAATTCAACAA ATGAGTATCAATGTAGATAACCAATTTAACTATGTACCAAGTAATATTGG AGGTATGAAAATTGTATATGAAAAATCTCAACTAGCACCTAGAAAATTAT ATTAA 65