(Luận văn) khảo sát thành phần hóa học của lá sen được thu hái ở huyện điện bàn, tỉnh quảng nam

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HĨA  VĂN QUỐC HỒNG lu an n va KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA LÁ SEN ĐƯỢC THU ie gh tn to Đề tài: p HÁI Ở HUYỆN ĐIỆN BÀN, TỈNH QUẢNG NAM d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN SƯ PHẠM n va ac th si ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐHSP Đôc lập – Tự – Hạnh phúc KHOA HÓA *** *** NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP lu an Họ tên sinh viên: Văn Quốc Hoàng n va Lớp: 08SHH tn to Tên đề tài: “Khảo sát thành phần hóa học sen thu hái huyện Điện Bàn, tỉnh Quảng Nam” gh p ie Nguyên liệu, dụng cụ thiết bị: - Nguyên liệu: sen lấy huyện Điện Bàn, tỉnh Quảng Nam nl w - Dụng cụ thiết bị: Máy đo quang phổ hấp thụ nguyên tử AAS, máy đo sắc kí d oa lỏng kết hợp khối phổ LC-MS, máy đo sắc kí khí kết hợp khối phổ GC-MS an lu Tủ sấy, lị nung, cân phân tích, cốc sứ, bình định mức, giấy lọc va Nội dung nghiên cứu: khảo sát thành phần hóa học sen với dung môi n- ul nf hexane, ethyl acetate, methanol oi lm Giáo viên hướng dẫn: Ths Giang Thị Kim Liên Ngày giao đề tài: 01/08/2011 Giáo viên hướng dẫn z Chủ nhiệm khoa z at nh Ngày hoàn thành: 20/05/2012 l gm @ m co Sinh viên hoàn thành nộp báo cáo cho khoa ngày tháng năm 2012 Kết đánh giá: an Lu Ngày tháng năm 2012 n va ac th si CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cám ơn thầy cô giáo khoa tạo điều kiện giúp đỡ để em hoàn thành luận văn Em xin cám ơn Cô Giang Thị Kim Liên người trực tiếp hướng dẫn em trình nghiên cứu đề tài lu Em xin chân thành cám ơn thầy quản lý phịng thí nghiệm tạo điều kiện an va cho em phịng thí nghiệm, dụng cụ trình làm thực nghiệm n Em mong muốn tiếp tục nhận giúp đỡ cô Giang Thị Kim Liên ie gh tn to thầy khoa q trình học tập nghiên cứu sau p Đà Nẵng, tháng năm 2012 d oa nl w Sinh viên thực lu oi lm ul nf va an Văn Quốc Hoàng z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si MỤC LỤC Trang lu an n va CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu sen 1.2 Các hợp chất hóa học có sen 1.3 Một số ứng dụng sen y học dân gian 10 1.4 Tình hình nghiên cứu loài sen giới 11 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.1 Nguyên liệu, dụng cụ hóa chất 13 2.1.1 Nguyên liệu 13 ie gh tn to MỞ ĐẦU 2.1.2 Xử lí nguyên liệu p 13 2.1.3 Thiết bị, dụng cụ hóa chất nl w 13 14 2.2.1 Các phương pháp xử lí mẫu 14 2.2.2 Xác định độ ẩm 15 d oa 2.2 Xác định số hóa lí va an lu 2.2.3 Xác định hàm lượng hữu tổng phương pháp tro hóa mẫu ul nf 15 2.2.4 Xác định hàm lượng kim loại phương pháp quang phổ hấp z at nh 2.3 Phương pháp ngâm chiết oi lm thụ nguyên tử AAS 16 17 2.4 Phương pháp sắc kí lỏng – khối phổ 18 z gm 2.4.2 Khối phổ (MS-mass spectrometry) 18 @ 2.4.1 Sắc kí lỏng (LC-Liquid Chromatography) 18 l 2.4.3 Sắc kí lỏng ghép khối phổ (LC/MS-liquid chromatography 19 an Lu 2.5 Phương pháp sắc kí khí – khối phổ m co mass spectrometry) 19 n va ac th si 2.5.1 Sắc ký khí (GC - Gas Chromatography) 20 2.5.2 Sắc kí khí ghép khối phổ lu an (GC/MS_Gas Chromatography Mass Spectometry) 20 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22 3.1 Quy trình nghiên cứu 22 3.2 Kết xác định số tiêu hóa lí sen 23 3.2.1 Độ ẩm 23 3.2.2 Hàm lượng hữu 24 3.3 Xác định hàm lượng kim loại có sen phương pháp 26 va n quang phổ hấp thụ nguyên tử AAS 28 3.4.1 Thành phần hóa học dịch chiết sen n-hexane 28 ie gh tn to 3.4 Kết nghiên cứu thành phần hóa học dịch chiết sen 3.4.2 Thành phần hóa học dịch chiết sen ethyl acetate p 34 38 3.5 Hiệu suất chiết 40 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 3.4.3 Thành phần hóa học dịch chiết sen methanol d oa nl w lu TÀI LIỆU THAM KHẢO oi lm ul nf va an 42 z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT an n va GC Sắc ký khí LC Sắc ký lỏng MS Khối phổ GC-MS Sắc ký khí-khối phổ liên hợp LC-MS Sắc ký lỏng – khối phổ liên hợp LSH Dịch chiết sen n-hexane LSE Dịch chiết sen ethyl acetate LSM Dịch chiết sen methanol TR Thời gian lưu Công thức phân tử p ie gh tn to Phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử lu AAS d oa nl w CTPT oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH lu an n va Hình 1.2 Hoa sen Hình 1.3 Nhị sen Hình 1.4 Quả sen Hình 1.5 Hạt sen Hình 2.1 Sơ đồ cấu tạo máy quang phổ hấp thụ nguyên tử AAS 17 Hình 3.1.Sơ đồ quy trình nghiên cứu 22 Hình 3.2 Máy quang phổ hấp thụ nguyên tử AAS 26 ie gh tn to Hình 1.1 Lá sen Hình 3.3 Sắc kí đồ dịch chiết sen dung mơi n-hexan p 27 Hình 3.5 Phổ khối LSH2 31 Hình 3.6 Phổ khối LSH3 31 Hình 3.7 Phổ khối LSH4 32 va 32 w 30 nl Hình 3.4 Phổ khối LSH1 d oa an lu ul nf Hình 3.8 Phổ khối LSH5 32 oi lm Hình 3.9 Phổ khối LSH6 Hình 3.10 Sắc kí đồ dịch chiết sen etyl axetat 33 z at nh Hình 3.11 Phổ khối leucocyanidin 36 Hình 3.12 Sắc kí đồ dịch chiết sen methanol 37 z ethyl acetate, methanol gm @ Hình 3.13 Dịch chiết sen với dung mơi n-hexane, 39 m co l an Lu n va ac th si DANH MỤC CÁC BẢNG lu an n va 24 Bảng 3.2 Kết khảo sát hàm lượng tro 25 Bảng 3.3 Kết khảo sát hàm lượng kim loại 26 Bảng 3.4 Thành phần hóa học dịch chiết với dung môi n-hexane 28 Bảng 3.5 Thành phần hóa học dịch chiết với dung mơi ethyl acetate 34 gh tn to Bảng 3.1 Kết khảo sát độ ẩm Bảng 3.6 Thành phần hóa học dịch chiết với dung môi methanol p ie 38 Bảng 3.7 Kết xác định hiệu suất chiết d oa nl w 40 oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si MỞ ĐẦU Lí chọn đề tài Sen loài quen thuộc với người Việt Nam Sen biểu tượng tinh thần dân tộc Việt : “Gần bùn mà chẳng hôi mùi bùn” Cây sen thuộc loài Nelumbo nucifera Gaertn, ngành Ngọc Lan (magno liophyta), lớp Ngọc Lan (magno liopsida), phân lớp Sen (Nelumbonidae), Sen lu (Nelumbonales), họ Sen (nelumbonaceae), chi Nelumbo Adans an Ngồi cịn có tên khác như: Liên, Ngậu (Tày) va n Tên khoa học: Nelumbo nuciferagaertn tn to Tên nước ngoài: sacred lotus, chinese water-lily, Indian lotus, Egypian bean gh Khơng đẹp, hương thơm mà sen cịn có nhiều cơng dụng, tác dụng quý p ie báu Hải Thượng Lãn Ông viết sen sau: “cây sen mọc bùn đen mà w không ô nhiễm mùi bùn, đượm khí thơm lành đất trời; nên củ, lá, hoa, tua, oa nl vỏ, quả, ruột thuốc hay” Nhưng từ trước đến nay, người ta ý đến sử d dụng hạt sen (liên nhục) để nấu chè, tâm sen (liên tâm) làm thuốc an thần, tua sen (liên lu an tu) dùng ướp chè, ngó sen (liên ngẫu) làm thực phẩm Cịn sen dùng để gói nf va thức ăn, người nghĩ sen có nhiều tác dụng quý để chữa bệnh oi lm ul Ngày nay, nhờ công nghệ đại, nhà khoa học phát chất đặc biệt sen, chất nuciferine có tác dụng chống viêm, giảm đau, trị béo phì, hạ z at nh cholesterol máu hoạt tính chống lại serotonin Lá sen chứa nhiều nuciferine Nuciferine chiết từ sen có cơng dụng kéo dài giấc ngủ Ngồi ra, sen cịn z chứa nhiều vitamin C, alkaloid tác dụng an thần mạnh tâm sen @ gm Về hóa học, sen chứa 0,2-0,3% tanin, 0,77-0,84% alkaloid có m co l nuciferine, nor-nuciferine, roemerine, anonain, liriodenin, pro-nuciferine, O-nornuciferine, armeparin, N-nor-amepavin, metyl-coclaurin, nepherin, dehydro roemerine, alkaloid [1] an Lu dehydro nuciferine, dehydro anonain, N-metyl lisococlaurin, Trong đó, nuciferine n va ac th si Về dược lý, sen nghiên cứu có tác dụng an thần, chống co thắt trơn, chống thoáng phản vệ, ức chế loạn nhịp tim, từ lâu y học cổ truyền dùng làm thuốc chữa bệnh Về sau bệnh béo phì trở nên phổ biến, sen sử dụng hiệu để chống lại bệnh Chính lý trên, tơi chọn đề tài “Khảo sát thành phần hóa học sen thu hái huyện Điện Bàn, tỉnh Quảng Nam” làm đề tài khoá luận tốt nghiệp cử nhân sư phạm Hố học lu an Mục đích nghiên cứu n va Xác định số tiêu hóa lý sen khảo sát thành phần hoá học tn to dịch chiết từ sen với dung môi khác Lá sen lấy từ huyện Điện Bàn, tỉnh Quảng Nam Dịch chiết sen p ie gh Đối tượng nghiên cứu w dung môi n-hexane, ethyl acetate, methanol oa nl Các phương pháp nghiên cứu d - Xác định hàm lượng hữu phương pháp tro hóa mẫu khơ ướt kết hợp lu nf va tử (AAS) an - Xác định hàm lượng kim loại phương pháp đo quang phổ hấp thụ nguyên acetate, methanol oi lm ul - Chiết phương pháp ngâm chiết tĩnh với dung môi n-hexane, ethyl z at nh - Xác định thành phần hóa học dịch chiết phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS), phương pháp sắc kí lỏng ghép khối phổ (LC-MS) z Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài @ gm Cung cấp thêm thông tin khoa học sen tạo sở nghiên cứu cho đề tài Bố cục đề tài m co l liên quan đến sen, ứng dụng sen lĩnh vực y học an Lu Luận văn gồm 44 trang có bảng 11 hình Phần mở đầu (3 trang), kết luận kiến nghị (1 trang), tài liệu tham khảo (2 trang), phụ lục (8 trang) n va ac th si 38 Bảng 3.6 Thành phần hóa học dịch chiết với dung môi methanol Từ bảng cho ta thấy dịch chiết methanol có hợp chất (LSM2) nuciferine dịch chiết n-hexane Thời gian lưu Công thức phân (TR) tử - Phân tử lượng 9.797 M= 256 7.860 STT Công thức cấu tạo- Tên gọi lu (LSM1): Chưa định danh an n va M=295 p ie gh tn to C19H21O2N nl w (LSM2): nuciferine oa O d H2C lu an C18H17O2N 10.354 va N CH3 O oi lm ul nf M=279 13.837 z at nh (LSM3): roemerine (LSM4): Chưa định danh M=278 z Trong dịch chiết cịn có chất (LSM3) - roemerine biết đến @ gm aporphine alkaloid, chất phân lập từ Annona senegalensis, có họat m co vinblastine [14] l tính gây độc tế bào ung thư biểu mô KB-V1 qua trung gian phản ứng gây độc tế bào ứng an Lu Ngồi ra, cịn chất chưa định danh, ký hiệu (LSM1) (LSM4) tương n va ac th si 39 3.5 Hiệu suất chiết Các dịch chiết thu đem cô quay đuổi dung môi, ta thu cặn chiết Các dịch chiết thu có màu sắc hình 3.13 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w an lu methanol ul nf va Hình 3.13 Dịch chiết sen với dung môi n-hexane, ethyl acetate oi lm Hiệu suất chiết tính theo cơng thức Trong đó: mC  100 mM z at nh Hiệu suất chiết = z gm @ mC: Khối lượng cặn khơ tính theo gam mM: Khối lượng mẫu khơ tính theo gam l methanol trình bày bảng 3.7 m co Kết xác định hiệu suất chiết dung môi n-hexane, ethyl acetate, an Lu Bảng 3.7 kết xác định hiệu xuất chiết n va ac th si 40 Khối lượng cặn chiết (g) Hiệu suất chiết (%) n-hexane 0,368 1,84 ethyl acetate 0,510 2,55 methanol 1,200 6,00 Từ bảng cho thấy hiệu suất chiết dung môi n-hexane thấp 1.84%, cịn dung mơi methanol cao 6.00% Từ dự đốn thành lu phần hóa học sen chứa lượng lớn chất tương đối phân cực an n va phân cực p ie gh tn to d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ l gm @ I Kết luận - Độ ẩm: 71,47% an Lu Kết xác định số tiêu hóa lí sen m co Qua q trình nghiên cứu thực nghiệm chúng tơi rút số kết luận sau: n va ac th si 41 - Hàm lượng tro vô cơ: 1,95% - Hàm lượng kim loại nặng không nhiều nằm giới hạn cho phép y tế rau sấy khơ Khảo sát thành phần hóa học dịch chiết sen n-hexane - Dịch chiết n-hexane: thu hợp chất 9,12,15-Octadecatrienoic acid, methyl ester ( 2.06%), Phytol ( 6.96%), nuciferine ( 45.9%) - Dịch chiết ethyl acetate: thu chất (LSE1) leucocyanidin flavonoid, lu an có nhiều ứng dụng quan trọng y học n va - Dịch chiết methanol: thành phần dịch chiết methanol ta thu tn to hợp chất nuciferine, hợp chất có tác dụng kéo dài giấc ngủ, dùng làm thuốc an thần Do thời gian điều kiện có hạn nên kết nghiên cứu p ie gh II Kiến nghị w kết khảo sát bước đầu thành phần hố học sen, thời gian tới oa nl tiếp tục nghiên cứu để cung cấp thêm thông tin khoa học sen d ứng dụng sen lĩnh vực y học an lu Tách nghiên cứu sâu thành phần dịch chiết từ sen oi lm ul phân lập từ nf va Thăm dị hoạt tính thú vị dịch chiết từ sen hợp chất z at nh TÀI LIỆU THAM KHẢO z gm @ Tiếng việt m co l [1] Đỗ Tất Lợi (2001), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, nhà xuất Y học [2] Hồ Viết Quý (1998), Các phương pháp phân tích đại ứng dụng hóa an Lu học, NXB Đại học Quốc gia, Hà Nội [3] Lê Thị Mùi (2009), Giáo trình hóa phân tích, Đại học sư phạm – Đại học Đà Nẵng n va ac th si 42 [4] Nguyễn Đình Triệu (2001), Các phương pháp phân tích vật lý hóa lý, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội [5] Nguyễn Kim Phi Phụng (2007), Các phương pháp cô lập hợp chất tự nhiên, NXB ĐHQG Tp HCM [6] Sách đỏ Việt Nam, Phần thực vật, Nhà xuất khoa học giáo dục Hà Nội [7] Từ Văn Mặc, Phân tích hóa lí – Phương pháp phổ nghiệm nghiên cứu cấu trúc phân tử, 2003 lu an [8] Võ Văn Chi, Phương Đức Tiến, Phân loại thực vật – thực vật bậc cao, Nhà xuất n va đại học trung học chuyên nghiệp Hà Nội tn to Tiếng anh gh [9] Harborne J B., Williams C A Advances in flavonoid research since 1992 p ie Phytochemistry 55, 481 - 504 (2000) w [10] Huang CF, Chen YW, Yang CY, Lin HY, Way TD, Chiang W Liu SH(2011), oa nl Extract of lotus leaf ( Nelumbo nucifera ) and its active constituent catechin with insulin secretagogue activity, Journal of Agricultural and Food Chemítry d lu an [11] Lin HY, Kuo YH, Lin YL Chiang W (2009), Antioxidative effect and nf va active components from leaves of Lotus ( Nelumbo nucifera ), Graduate oi lm ul Institute of Food Science and Technology [12] Ohkoshi E , Miyazaki H , K Shindo , Watanabe H , Yoshida A Yajima H z at nh (2007), Constituents from the Leaves of Nelumbo nucifera Stimulate Lipolysis in the White Adipose Tissue of Mice, planta medica z @ [13] Takefumi Sagara, Naoyoshi Nishibori, Manami Sawaguchi, Takara Hiro, Mari causes protective l gm Itoh, Song Her, Kyoji Morita (2012), Lotus root (Nelumbo nucifera rhizome) extract effect against iron-induced toxic damage to C6 glioma cell, m co Inforesights Publishing UK, 179-189 an Lu n va ac th si 43 [14] You M, Wickramaratne DB, Silva GL, Chai H, Chagwedera TE, Farnsworth NR, Cordell GA, Kinghorn AD, Pezzuto JM (1995), (-)Roemerine, an aporphine alkaloid from Annona senegalensis that reverses the multidrug-resistance phenotype with cultured cells [15] Zeng-Xiang Dong, Xin Zhao, Dong-Fang Gu, Yuan-Qi Shi, Jia Zhang, Xing-Xia Hu, Mei-Qin Hu, Bao-Feng Yang, Bao-Xin Li (2012), Comparative Effects of lu Liensinine and Neferine on the Human Ether-a-go-go-related Gene Potassium Channel an and Pharmacological Activity Analysis va n Internet tn to [16]http://www.hoahocngaynay.com/vi/hoa-hoc-va-doi-song/hoa-thuc-pham/251- ie gh cong-dung-cua-flavonoid.html p [17]http://thucphamvadoisong.vn/thuc-pham-doi-song/104-thuc-pham-cua-tuong- lai/539 cay-sen-nguon-nguyen-lieu-san-xuat-thuc-pham-chuc-nang-va-thuoc.html w oa nl [18] http://www.hoalinhthoai.com/forum/showthread.php?t=8219 d [19] http://www.naturalwellbeing.com/learning-center/Phytol oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si 44 lu an PHỤ LỤC n va p ie gh tn to d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si 45 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ Phụ lục Phổ khối LSE2 an Lu n va ac th si 46 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ Phụ lục Phổ khối LSE3 an Lu n va ac th si 47 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ Phụ lục Phổ khối LSE4 an Lu n va ac th si 48 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ Phụ lục Phổ khối LSE5 an Lu n va ac th si 49 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ Phụ lục Phổ khối LSE6 an Lu n va ac th si 50 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ Phụ lục Phổ khối LSM1 an Lu n va ac th si 51 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ Phụ lục phổ khối LSM3 an Lu n va ac th si 52 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ Phụ lục phổ khối LSM4 an Lu n va ac th si