Nghiên cứu kỹ thuật phân lập và nhân giống nấm sò đùi gà (pleurotus eryngii)

LỜI CÁM ƠN Trong suốt năm học tập nghiên cứu trƣờng Đại học Lâm nghiệp, em đƣợc truyền thụ nhiều kiến thức quý báu nhƣ nhận đƣợc giúp đỡ tận tâm từ thầy giáo Nhân dịp hồn thành khóa luận tốt nghiệp, em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu trƣờng Đại học Lâm nghiệp, Ban lãnh đạo Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp cho phép nhƣ tạo điều kiện sở vật chất, phòng thí nghiệm,… giúp em thực tập Viện Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Thị Hồng Gấm tận tình giúp đỡ, bảo em suốt trình học tập đặc biệt khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn anh Nguyễn Phùng Huỳnh, Quản lý kiêm Kỹ thuật viên Trƣởng Trại nấm Hằng Ngọc (phƣờng Xuân Khanh, thị xã Sơn Tây, thành phố Hà Nội) truyền đạt cho em kinh nghiệm quý báu nghề trồng nấm nhƣ hỗ trợ em mặt tài chính, nguyên liệu Mặc dù cố gắng nỗ lực, nhƣng kiến thức chuyên môn nhƣ kinh nghiệm thực tiễn em chƣa nhiều nên q trình thực hồn thiện khóa luận tốt nghiệp khó tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận đƣợc đóng góp lời khuyên quý báu từ quý thầy cô để em hồn thiện khóa luận tốt nhƣ tích lũy thêm kiến thức cho cơng việc sau Cuối cùng, em xin kính chúc q thầy Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp thật dồi sức khỏe, có thêm nhiều thành tựu, thành cơng công “trồng cây”, “trồng ngƣời” Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 14 tháng năm 2018 Sinh viên thực Nguyễn Ngọc Đạt MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN 1: TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Giới thiệu chung nấm Sò Đùi gà 1.1.1 Nguồn gốc phân loại 1.1.1 Đặc điểm hình thái nấm Sị Đùi gà 1.1.2 Đặc tính sinh học 1.1.2.1 Yêu cầu dinh dƣỡng .3 1.1.2.2 Yêu cầu nhiệt độ 1.1.2.3 Yêu cầu độ ẩm 1.1.2.4 u cầu độ thơng thống .4 1.1.2.5 Yêu cầu ánh sáng 1.1.2.6 Độ pH……………… 1.1.3 Giá trị dinh dƣỡng nấm Sò Đùi gà 1.2 Tình hình phát triển ngành sản xuất nấm giới Việt Nam 1.2.1 Tình hình phát triển nấm trến giới 1.2.2 Tình hình ni trồng phát triển nấm Việt Nam .6 1.3 Tổng quan kỹ thuật phân lập, nhân giống nấm quy trình ni trồng nấm Sò Đùi gà túi mùn cƣa 1.3.1 Kỹ thuật phân lập nhân giống nấm Sò Đùi gà 1.3.1.1 Kỹ thuật phân lập giống gốc .8 1.3.1.2 Kỹ thuật nhân giống cấp 11 1.3.1.3 Kỹ thuật nhân giống cấp 12 1.3.1.4 Quy trình ni trồng nấm Sị Đùi gà chất mùn cƣa 13 1.4 Điều kiện tự nhiên khu vực nghiên cứu 18 1.4.1 Vị trí địa lý 18 1.4.2 Điều kiện tự nhiên 19 PHẦN 2: MỤC TIÊU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Mục tiêu đề tài 20 2.1.1 Mục tiêu chung 20 2.1.2 Mục tiêu cụ thể 20 2.2 Nội dung nghiên cứu 20 2.3 Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu 20 2.3.1 Đối tƣợng nghiên cứu 20 2.3.2 Phạm vi nghiên cứu 20 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 21 2.4.1 Phƣơng pháp luận 21 2.4.2 Phƣơng pháp bố trí thí nghiệm cụ thể 21 2.4.2.1 Phƣơng pháp phân lập giống gốc Sò Đùi gà từ thể 22 2.4.2.2 Phƣơng pháp nhân giống cấp nấm Sị Đùi gà mơi trƣờng thạch 23 2.4.2.3 Phƣơng pháp nhân giống nấm Sò Đùi gà môi nhân giống cấp 25 2.4.2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu đánh giá khả ăn lan hệ sợi hình thành thể giống nấm Sị Đùi gà chất nuôi trồng 25 2.5 Phƣơng pháp thu thập xử lý số liệu 27 2.5.1 Phƣơng pháp thu thập số liệu 27 2.5.2 Tính tốn tiêu 27 2.5.3 Xử lý số liệu 28 PHẦN 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 3.1 Kết phân lập giống gốc 29 3.2 Kết nhân giống cấp môi trƣờng thạch 31 3.2.1 Nghiên cứu ảnh hƣởng kháng sinh Cefotaxim đến tỷ lệ mẫu sau vào mẫu………… 31 3.2.2 Nghiên cứu ảnh hƣởng hàm lƣợng khoai tây đến khả ăn lan hệ sợi nấm Sò Đùi gà môi trƣờng nhân giống cấp 32 3.2.3 Nghiên cứu ảnh hƣởng hàm lƣợng đƣờng đến khả ăn lan hệ sợi nấm Sị Đùi gà mơi trƣờng nhân giống cấp 33 3.3 Kết nhân giống cấp giá thể hạt thóc 34 3.4 Kết nghiên cứu đánh giá khả ăn lan hệ sợi hình thành thể giống nấm Sị Đùi gà chất ni trồng 37 3.4.1 Nghiên cứu khả ăn lan hệ sợi giống nấm Sò Đùi gà bịch mùn cƣa…………………… 37 3.4.2 Nghiên cứu ảnh hƣởng thành phần hàm lƣợng chất,phụ gia đến khả hình thành thể nấm Sị Đùi gà 38 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43 Kết luận 43 Tồn 43 Kiến nghị 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Phân loại khoa học nấm Sò Đùi gà Bảng 2.1 CTTN nghiên cứu ảnh hƣởng thời gian khử trùng thể 22 Bảng 2.2 CTTN nghiên cứu ảnh hƣởng kháng sinh Cefotaxim 23 đến tỷ lệ mẫu bình sau vào mẫu 23 Bảng 2.3 CTTN nghiên cứu ảnh hƣởng hàm lƣợng khoai tây đến khả ăn lan hệ sợi nấm Sị Đùi mơi trƣờng nhân giống cấp 24 Bảng 2.4 CTTN nghiên cứu ảnh hƣởng hàm lƣợng đƣờng sucrose đến khả ăn lan hệ sợi nấm Sò Đùi gà môi trƣờng nhân giống cấp 24 Bảng 2.5 Ảnh hƣởng hàm lƣợng chất phụ gia đến khả ăn lan hệ sợi nấm Sị Đùi gà mơi trƣờng nhân giống cấp .25 Bảng 2.6 Nghiên cứu đánh giá khả ăn lan hệ sợi giống nấm Sò Đùi gà bịch mùn cƣa 26 Bảng 2.7 Ảnh hƣởng thành phần hàm lƣợng chất, phụ gia tới chất lƣợng hệ sợi nấm 26 Bảng 2.8 Ảnh hƣởng thành phần hàm lƣợng chất, phụ gia đến khả hình thành thể nấm Sò Đùi gà 27 Bảng 3.1 Ảnh hƣởng thời gian khử trùng thể đến 29 Bảng 3.2 Ảnh hƣởng kháng sinh Cefotaxim đến tỷ lệ mẫu bình sau vào mẫu 31 Bảng 3.3 Ảnh hƣởng hàm lƣợng khoai tây đến khả ăn lan hệ sợi nấm Sò Đùi gà môi trƣờng nhân giống cấp 32 Bảng 3.4 Ảnh hƣởng hàm lƣợng đƣờng sucrose đến khả 33 Bảng 3.5 Ảnh hƣởng hàm lƣợng chất phụ gia đến khả ăn lan hệ sợi nấm Sị Đùi gà mơi trƣờng nhân giống cấp .34 Bảng 3.6 Nghiên cứu đánh giá khả ăn lan hệ sợi giống nấm Sò Đùi gà bịch mùn cƣa 37 Bảng 3.7 Ảnh hƣởng thành phần hàm lƣợng chất,phụ gia tới chất lƣợng hệ sợi nấm 37 Bảng 3.8 Ảnh hƣởng thành phần hàm lƣợng chất,phụ gia đến khả hình thành thể nấm Sị Đùi gà 38 DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Quả thể nấm Sò Đùi gà Hình 1.2 Thành phần hàm lƣợng dinh dƣỡng có 100 g nấm Sị Đùi gà (Nguồn: http://www.hokto-kinoko.com/whats-kinoko/king-trumpet/) Hình 1.3 Biểu đồ sản lƣợng nấm số nƣớc giới năm 2015 Hình 1.4 Sơ đồ quy trình kỹ thuật phân lập nhân giống nấm Sị Đùi gà Hình 1.5 Phần mơ thể nấm Sò Đùi gà đƣợc dùng làm vật liệu phân lập giống gốc 10 Hình 1.6 Quy trình tổng quát kỹ thuật ni trồng nấm Sị Đùi gà chất mùn cƣa .13 Hình 1.7 Kỹ thuật sử dụng dùi cấy giống thóc lên bịch mùn cƣa .16 Hình 1.8 Giàn ni thể nấm Sị Đùi gà 17 Hình 2.1 Quy trình nhân giống tổng quát nấm Sò Đùi gà 21 Hình 3.1 Mẫu sau xử lý đƣợc cấy vào môi trƣờng thạch ống nghiệm 30 Hình 3.2 Hệ sợi nấm Sị Đùi gà công thức môi trƣờng nhân giống cấp sau 20 ngày 36 Hình 3.3 Bịch nấm Sò Đùi gà sau hệ sợi ăn lan kín cơng thức phối trộn khác 40 Hình 3.4 Hệ sợi nấm Sị Đùi gà bị già hóa tiết dịch màu vàng 41 Hình 3.5 Một số hình ảnh bịch bị nhiểm nấm Sị Đùi gà q trình ni trồng (B1: bịch bị rách dẫn đến nhiễm khuẩn, B2:bịch nấm bị ruồi gây hại làm chết dần hệ sợi, B3: bịch nấm bị nhiễm nấm mốc) 41 Hình 3.6 Giàn ni trồng nấm Sị Đùi gà giai đoạn thể phịng ni trồng nấm – Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp 42 Hình 3.7 Một số hình ảnh thể nấm Sị Đùi gà nuôi trồng từ giống nấm phân lập nhân giống đƣợc .42 DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt Nghĩa đầy đủ CTTN Công thức thí nghiệm CT Cơng thức PAG Potato Agar Glucose (Khoai tây – Thạch – Đƣờng) ĐẶT VẤN ĐỀ Từ ngàn xƣa, ngƣời biết sử dụng nấm làm thực phẩm ngày có mùi vị đặc trƣng riêng biệt kết hợp với sức hấp dẫn màu sắc Ngày nay, giá trị nấm đƣợc ngƣời biết đến nhiều với đặc tính ƣu việt dinh dƣỡng dƣợc liệu Không giàu hàm lƣợng hàm lƣợng protein, glucid, lipid mà nấm chứa nhiều chất khoáng, đặc biệt axit amin không thay thế, vitamin thiết yếu nhƣ A,B,C,D,E với hàm lƣợng protein đứng sau thịt, cá nấm ăn đƣợc biết đến sản phẩm “rau sạch, thịt sạch” Khơng nấm cịn đƣợc biết đến với tính biệt dƣợc, có khả phịng chữa bệnh nhƣ: hạ đƣờng huyết, giảm mỡ máu, phòng chống virus, hỗ trợ điều trị loại bệnh ung thƣ Trong loại nấm ăn nấm Sị Đùi gà đƣợc xem Nữ Hồng loại nấm, loại nấm cao cấp, ăn ngon, bổ dƣỡng thích hợp với vị nhiều ngƣời Nấm Sò Đùi gà giúp tăng cƣờng chức đƣờng ruột, dày, hỗ trợ tiêu hố, kích thích nhu cầu ăn làm cho ăn ngon miệng Cải thiện tuần hoàn máu, giảm mỡ máu, điều chỉnh huyết áp, điều tiết miễn dịch Nấm Sị Đùi gà ngồi việc loại nấm ăn ngon cịn có giá trị dinh dƣỡng cao Hàm lƣợng protein nấm Sò Đùi gà gấp – lần loại rau thông thƣờng khác Nấm Sị Đùi gà có chứa nhiều vitamin, amino acid thiết yếu cho thể khoáng chất giúp tăng cƣờng trí lực, lƣu thơng khí huyết Các nhà khoa học cho biết chiết xuất từ nấm Sị Đùi gà có tác dụng ngăn ngừa ung thƣ tốt Ở Việt Nam, nghề nấm ngày phát triển mạnh Việc áp dụng công nghệ nhân giống nấm khơng cịn xa lạ với sở nhân giống nuôi trồng nấm Nhƣng đa phần ngƣời làm nghề nấm chƣa nắm vững kiến thức khoa học, chủ yếu dựa kinh nghiệm truyền thống nên cơng nghệ nhân giống nấm cịn tồn số nhƣợc điểm nhƣ: chất lƣợng giống không ổn định, tỷ lệ giống nhiễm bệnh cao, khả thể nhƣ chất lƣợng thể nuôi trồng từ giống nấm nhân lên chƣa cao, chƣa tối ƣu đƣợc thời gian nhân giống cấp,… Nhằm góp phần khắc phục hạn chế trên, em tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu kĩ thuật phân lập nhân giống nấm Sò Đùi gà (Pleurotus eryngii)” để hoàn thiện kỹ thuật nhân giống cấp ứng dụng rộng rãi tới sở nhân giống nuôi trồng nấm nhƣ tạo giống nấm chất lƣợng phục vụ cho sản xuất PHẦN 1: TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Giới thiệu chung nấm Sò Đùi gà 1.1.1 Nguồn gốc phân loại Nấm Sị Đùi gà hay cịn có tên gọi khác nấm Bào ngƣ Nhật, nấm Bào ngƣ chân dày, nấm Sị Vua – lồi địa khu vực Địa Trung Hải Châu Âu, Trung Đông Bắc Phi nhƣng đƣợc trồng rộng rãi khắp Châu Á ảng 1.1 Phân loại khoa học nấm Sò Đùi gà Phân loại khoa học Tên tiếng Anh King Oyster Mushroom Giới Fungi Ngành Basidiomycota Lớp Agaricomycetes Bộ Agaricales Họ Pleurotaceae Chi Pleurotus Loài Pleurotus eryngii 1.1.2 Đặc điểm hình thái nấm Sị Đùi gà Hình 1.1 Quả thể nấm Sị Đùi gà (Nguồn: https://en.wikipedia.org/wiki/Pleurotus_eryngii) Nấm Sị Đùi gà lồi lớn chi Pleurotus Nấm mọc chùm mọc đơn Quả thể khác to, đƣờng kính trung bình từ – cm, trơn bóng có màu trắng trắng xám Cuống nấm hình đùi gà dài từ – 10 cm, mọc xiên Đƣờng kính mũ nấm từ – cm, sậm màu cuống nấm 1.1.3 Đặc tính sinh học Nấm Sị Đùi gà nói riêng chịu ảnh hƣởng lớn môi trƣờng sống đặc biệt nhân tố nhiệt độ độ ẩm Trong điều kiện tự nhiên ni trồng nấm Sị Đùi gà tốt vào mùa đông (từ tháng 12 đến tháng năm sau) Nếu có điều kiện đầu tƣ nhà lạnh, kho mát để nuôi trồng theo phƣơng pháp cơng nghiệp ni trồng quanh năm Các yếu tố ảnh hƣởng đến sinh trƣởng sợi nấm q trình hình thành thể nấm Sị Đùi gà nhƣ: yếu tố dinh dƣỡng, nhiệt độ, độ ẩm, ánh sáng, độ thơng thống, độ pH 1.1.3.1 u cầu dinh dƣỡng Trong tự nhiên nấm mọc loại phế thải có nguồn gốc từ thực vật, nấm có khả phân hủy chất hữu mà vi sinh vật khác khơng có khả này, đa số nấm ăn sinh vật dị dƣỡng nên cần đƣợc cung cấp nguồn cacbon, nguồn cacbon thích hợp cho nấm phát triển gồm monosaccharide, oligosaccharide polysaccharide nhƣ: Glucose, saccharose, galactose, tinh bột, cellulose Nồng độ đƣờng thích hợp cho sợi nấm phát triển xấp xỉ 2% Nấm sử dụng cacbon khơng phải cacbonhydate nhƣ : ethanol, glycerin, giai đoạn mầm thể, sinh trƣởng phụ thuộc vào nguồn dinh dƣỡng cacbon Nấm Sò Đùi gà thƣờng mọc chất giàu cellulose Nguồn cacbon cần cho sinh trƣởng sợi nấm tán nấm tinh bột, đƣờng glucose, đƣờng maltose, đƣờng mía, cellulose, lignin 1.1.3.2 Yêu cầu nhiệt độ - Giai đoạn ƣơm sợi: Nhiệt độ thích hợp từ 20 – 28oC, nhiệt độ tối ƣu 22 – 25oC - Giai đoạn thể: Nhiệt độ thích hợp từ 12 – 20oC, nhiệt độ tối ƣu 14oC – 16oC Cần ý điều tiết nhiệt độ cho phù hợp với giai đoạn sinh trƣờng, phát triển nấm Sò Đùi gà 1.1.3.3 Yêu cầu độ ẩm - Độ ẩm chất từ 65 – 68% - Độ ẩm khơng khí lúc ni sợi 65 – 70% - Độ ẩm khơng khí lúc thể 85 – 95% dập nát Trong thể nấm Sò Đùi gà lại mềm không đƣợc cứng nhƣ loại nấm khác nên thực quy trình khử trùng lâu dẫn đến làm tổn thƣơng đến sợi nấm, làm chết sợi nấm nên sợi nấm không phát triển đƣợc gây tƣợng nhiễm khuẩn Từ đó, tỷ lệ nấm ăn lan thành công giảm thấp Cần cân đối chọn thời gian khử trùng tối ƣu với loại nấm kết tốt Vì lí mà cơng thức (T1) cơng thức tối ƣu đƣợc chọn A B Hình 3.1 Mẫu sau xử lý đƣợc cấy vào môi trƣờng thạch ống nghiệm “A bắt đầu cấy, hệ sợi ăn lan kín bình sau 12 ngày” Kết thu đƣợc bình mẫu sạch, mảnh nấm bình bung sợi đƣợc cấy chuyển sang môi trƣờng nhân giống Do thể nấm Sị Đùi gà vốn có cấu trúc mềm nhẹ dễ dập, tiến hành khử trùng làm dập dẫn đến nhiễm nấm mốc hay khử trùng kéo dài làm tổn thƣơng hệ sợi làm chết sợi nấm nên sợi nấm không phát triển đƣợc gây tƣợng nhiễm khuẩn Hoặc thao tác ngƣời cấy giống điều kiện nhà nuôi cấy không đƣợc bị nhiễm nấm mốc bên dẫn đến tƣợng mẫu hỏng Giống nấm đồng màu trắng môi trƣờng nuôi cấy Sợi nấm ăn lan khỏe, dày, thẳng, chia nhánh đều, ăn lan theo kiểu tia xạ khơng có tƣợng vết đậm, vết nhạt, khác hệ sợi, không tiết dịch màu vàng môi trƣờng nuôi sợi Vậy giống gốc nấm phân lập đƣợc từ thể nấm Sò Đùi gà tƣơi, đủ tiêu chuẩn chất lƣợng làm giống gốc để tiến hành nhân giống cấp 30 3.2 Kết nhân giống cấp môi trƣờng thạch Muốn nhân giống loại nấm nào, điều trƣớc tiên cần có mơi trƣờng dinh dƣỡng thích hợp Từng loại nấm khác nhu cầu dinh dƣỡng khác nhau, nhƣng phải đảm bảo đầy đủ nguồn dinh dƣỡng chủ yếu nhƣ: nguồn cacbon, nguồn nitơ, khoáng chất,… 3.2.1 Nghiên cứu ảnh hƣởng kháng sinh Cefotaxim đến tỷ lệ mẫu sau vào mẫu Môi trƣờng nhân giống cấp (môi trƣờng PAG) sau khử trùng, đƣa vào phịng cấy, cho nhiệt độ mơi trƣờng giảm xuống cịn 50 – 55 oC lúc bổ sung kháng sinh Cefotaxim ảng 3.2 Ảnh hƣởng kháng sinh Cefotaxim đến tỷ lệ mẫu bình sau vào mẫu CTTN Tỷ lệ bình mẫu (%) KS1 15 KS2 70 Từ bảng 3.2 ta thấy cơng thức (KS2): mơi trƣờng PAG có bổ sung kháng sinh Cefotaxim với tỷ lệ 400mg/1 lit mơi trƣờng cho tỷ lệ bình có hệ sợi nấm ăn lan cao (70%) cịn cơng thức (KS1): môi trƣờng PAG không bổ sung kháng sinh Cefotaxim cho tỷ lệ bình có hệ sợi nấm ăn lan thấp (15%) Tuy khử trùng môi trƣờng nhƣ dụng cụ thí nghiệm nhƣng số chủng vi khuẩn,nấm có sức chống chịu cao có khả sống sót mơi trƣờng, dụng cụ.Việc sử dụng kháng sinh giúp ngăn chặn lây nhiễm vi khuẩn, nấm mốc nấm men vào môi trƣờng nuôi cấy tế bào mô thực vật Do đó, tỷ lệ bình mẫu vƣợt trội so với mơi trƣờng khơng bổ sung kháng sinh Vì lí mà cơng thức (KS2) cơng thức tối ƣu đƣợc chọn 31 3.2.2 Nghiên cứu ảnh hƣởng hàm lƣợng khoai tây đến khả ăn lan hệ sợi nấm Sị Đùi gà mơi trƣờng nhân giống cấp Sợi giống gốc phân lập đƣợc từ phần đƣợc cấy vào công thức thí nghiệm nhƣ sau: 6g/l Agar + 20g/l Đƣờng+ hàm lƣợng khoai tây thay đổi nhƣ bảng 3.3 ảng 3.3 Ảnh hƣởng hàm lƣợng khoai tây đến khả ăn lan hệ sợi nấm Sò Đùi gà mơi trƣờng nhân giống cấp Hàm CTTN Đƣờng kính hệ sợi nấm ăn lan (cm) lƣợng khoai tây(g/l) Đặc điểm hệ Sau ngày Sau ngày Sau ngày Sau 10 ngày Sau 12 ngày sợi Hệ sợi nấm KT1 200 0,9 1,5 3,3 4,7 5,8 to,khỏe,ăn lan Hệ sợi nấm KT2 KT3 250 300 1,2 0,7 2,5 1,4 4,1 2,8 5,3 4,2 6,4 5,3 to,dày,khỏe,ăn lan nhanh Hệ sợi nấm mảnh,ăn lan không Từ bảng 3.2 ta nhận thấy hàm lƣợng khoai tây có ảnh hƣởng khác biệt đến ăn lan hệ sợi nấm môi trƣờng nhân giống cấp Sau 12 ngày,ta thấy KT2 (250 g/l Khoai tây + 20 g/l Đƣờng + g/l Agar) cho đƣờng kính hệ sợi ăn lan lớn (6,4cm) có hệ sợi nấm to, dày, khỏe, ăn lan nhanh nhất, tiếp đến cơng thức KT1 (200g/l) khoai tây cho đƣờng kính ăn lan hệ sợi 5,8cm, cơng thức KT3 (300g/l) khoai tây cho đƣờng kính ăn lan hệ sợi thấp (5,3 cm) Kết cho thấy nhiều dinh dƣỡng hệ sợi nấm phát triển nhanh.Thực tế nấm cần lƣợng dinh dƣỡng vừa đủ cho trình sinh trƣởng hệ sợi nên đổ mơi trƣờng vào bình trụ thủy tinh ta cần đổ lƣợng mơi trƣờng vừa phải (35 ml/bình) Mơi trƣờng nhiều dinh dƣỡng lại phản tác dụng,khiến nấm bị thừa chất, hệ sợi nấm mảnh, ăn lan khơng Vì lí mà cơng thức (KT2) công thức tối ƣu đƣợc chọn 32 3.2.3 Nghiên cứu ảnh hƣởng hàm lƣợng đƣờng đến khả ăn lan hệ sợi nấm Sò Đùi gà môi trƣờng nhân giống cấp Sợi giống gốc phân lập đƣợc từ phần đƣợc cấy vào công thức: 250g/l Khoai tây + 6g/l Agar hàm lƣợng đƣờng thay đổi cho kết bảng 3.4 dƣới ảng 3.4 Ảnh hƣởng hàm lƣợng đƣờng sucrose đến khả ăn lan hệ sợi nấm Sò Đùi gà môi trƣờng nhân giống cấp Đƣờng kính hệ sợi ăn lan (cm) Hàm lƣợng CTTN đƣờng sucrose (g/l) Sau ngày Sau 5ngày Sau ngày Sau 10 ngày Sau 12 ngày Đặc điểm hệ sợi nấm Hệ sợi nấm to, dày, khỏe, ăn Đ1 20 1,5 2,6 4,1 5,4 6,8 Đ2 30 1,1 2,3 3,6 4,9 5,4 Sợi nấm to, dày, khỏe, ăn lan Đ3 40 1,3 2,2 3,4 4,1 5,1 Sợi nấm to, khỏe, ăn lan lan nhanh Từ bảng 3.4 ta thấy hàm lƣợng đƣờng có ảnh hƣởng khác biệt đến ăn lan hệ sợi nấm môi trƣờng nhân giống cấp Công thức Đ1 (hàm lƣợng đƣờng 20g/l) có đƣờng kính hệ sợi nấm ăn lan lớn nhất,nhanh (6,8 cm sau 12 ngày) có hệ sợi nấm to,dày,khỏe,ăn lan nhanh Cơng thức Đ2 (hàm lƣợng đƣờng 30g/l) hệ sợi nấm to, dày, khỏe,ăn lan đều;sau 12 ngày, đƣờng kính hệ sợi nấm ăn lan 5,4 cm Cơng thức Đ3 (hàm lƣợng đƣờng 40g/l) đƣờng kính hệ sợi nấm ăn lan bé chậm (5,1 cm sau 12 ngày) Kết cho thấy hệ sợi nấm cần lƣợng đƣờng dinh dƣỡng vừa đủ cho trình sinh trƣởng công thức (Đ1) công thức tối ƣu đƣợc chọn Từ kết nghiên cứu ảnh hƣơng kháng sinh,hàm lƣợng đƣờng,hàm lƣợng khoai tây đến sinh trƣởng hệ sợi nấm môi trƣờng nhân giống cấp 1, công thức tốt để nhân giống cấp nấm Sị Đùi gà cơng thức: 20 g/l Đƣờng sucrose 33 + 250 g/l Khoai tây + g/l Agar bổ sung thêm kháng sinh Cefotaxim với tỷ lệ 400mg/lit 3.3 Kết nhân giống cấp giá thể hạt thóc Mục đích nhân giống cấp nhân giống nấm với số lƣợng lớn để phục vụ sản xuất Giống cấp thƣờng đƣợc nhân bình trụ thủy tinh hay túi nilon có miệng nút nhựa làm nút bơng Giống nấm cấp bình Đ1 (20 g/l Đƣờng sucrose + 250 g/l Khoai tây + g/l Agar bổ sung thêm kháng sinh Cefotaxim với tỷ lệ 400 mg/lit) giống nấm đủ tiêu chuẩn (khả sinh trƣởng tốt, sợi to, chắc, khỏe, màu trắng khiết ăn lan kín bề mặt thạch) để nhân giống cấp Ở môi trƣờng nhân giống cấp đƣợc sử dụng thóc Khang Dân có bổ sung thêm phụ gia với tỷ lệ khác để công thức phối trộn thích hợp cho nhân giống cấp nấm Sò Đùi gà Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng chất phụ gia đến khả ăn lan hệ sợi nấm Sị Đùi gà mơi trường nhân giống cấp Chất phụ gia chất cho thêm vào mơi trƣờng giá thể ni cấy nhằm kích thích sinh trƣởng, phát triển hệ sợi nấm giai đoạn bung sợi Hệ sợi nấm sử dụng chất dễ lấy môi trƣờng nhân giống để kích thích hệ sợi nấm sinh trƣởng ổn định hệ thống tiết enzyme phân giải chất cellulose, lignin cám gạo, cám ngô nguồn cung cấp cacbon, đạm, vitamin cho sinh trƣởng hệ sợi nấm, làm giảm q trình lão hóa suy thối giống q trình cấy chuyển giống Chính vậy, việc nghiên cứu ảnh hƣởng chất bổ sung đƣa tỷ lệ phù hợp cho sinh trƣởng hệ sợi nấm cần thiết ý nghĩa Tiến hành nghiên cứu ảnh hƣởng hàm lƣợng chất phụ gia tới sinh trƣởng hệ sợi giống nấm Sò Đùi gà sử dụng nguyên liệu thóc thích hợp thí nghiệm thóc Khang Dân làm nguyên liệu Các thí nghiệm bố trí sử dụng loại thóc khang dân phối trộn với hàm lƣợng phụ gia khác để tìm cơng thức mơi trƣờng nhân giống cấp thích hợp Cơng thức : thóc Khang Dân + phụ gia Qua thời gian theo dõi kết đƣợc thống kê vào bảng 3.5 ảng 3.5 Ảnh hƣởng hàm lƣợng chất phụ gia đến khả ăn lan hệ sợi nấm Sị Đùi gà mơi trƣờng nhân giống cấp 34 CTTN Hàm lƣợng phụ Tỷ lệ (%) bịch có hệ sợi nấm ăn gia (%) lan đến Thóc Khang Dân (%) Cám Cám Bột gạo nhẹ ngơ ¼ bịch sau ngày ½ bịch sau 10 ngày Đặc điểm ¾ bịch Kín bịch sau 15 ngày sau 20 ngày hệ sợi nấm Hệ sợi CP1 100 0 45,8 58,3 54,2 62.5 nấm yếu, mảnh, ăn lan chậm CP2 95 0 58,3 62,5 50 58,3 Hệ sợi nấm mảnh, ăn lan chậm CP3 90 62,5 75 79,2 87,5 Hệ sợi nấm khỏe, dày, ăn lan nhanh Hệ sợi nấm khỏe, CP4 CP5 90 90 70,8 87,5 66,7 87,5 79,2 95,8 91,7 100 dày, ăn lan nhanh Hệ sợi nấm khỏe, dày, ăn lan nhanh 35 Theo bảng 3.5 cho ta thấy công thức (CP5) với tỷ lệ phối trộn nguyên liệu phụ gia là: 90% Thóc + 4% Cám ngô + 4% Cám gạo + 2% Bột nhẹ cho hiệu tốt đến khả ăn lan hệ sợi nấm Sò Đùi gà (hệ sợi nấm khỏe,dày,ăn lan nhanh;sau 20 ngày, 100% số bình có hệ sợi nấm ăn lan kín) Cịn cơng thức (CP2) với tỷ lệ phối trộn nguyên liệu phụ gia là: 95% Thóc + 5% Bột nhẹ cho kết thấp đến khả ăn lan hệ sợi nấm (hệ sợi nấm mảnh, ăn lan chậm không đều; sau 20 ngày có 58,3% số bình có hệ sợi ăn lan kính) Từ kết thống kê thấy rằng: + Hệ sợi nấm Sò Đùi gà ăn lan nhanh khỏe môi trƣờng đƣợc phối trộn hài hòa, cân đối tỷ lệ chất chất phụ gia + Cám ngô, cám gạo chất phụ gia quan trọng môi trƣờng nhân giống cấp nấm Sò Đùi gà Cung cấp nguồn dinh dƣỡng cần thiết cho sợ sinh trƣờng hệ sợi nấm + Phối trộn lƣợng lớn bột nhẹ vào chất khiến hệ sợi nấm ăn chậm không Do lƣợng bột nhẹ nhiều làm độ ẩm môi trƣờng nhân giống thấp, thay đổi độ pH khiến kìm hãm ăn lan hệ sợi nấm Vì lí mà cơng thức (CP5) công thức tối ƣu đƣợc chọn CP1 CP2 CP3 CP5 CP4 Hình 3.2 Hệ sợi nấm Sị Đùi gà cơng thức mơi trƣờng nhân giống cấp sau 20 ngày 36 3.4 Kết nghiên cứu đánh giá khả ăn lan hệ sợi hình thành thể giống nấm Sị Đùi gà chất nuôi trồng 3.4.1 Nghiên cứu khả ăn lan hệ sợi giống nấm Sò Đùi gà bịch mùn cƣa Tốc độ ăn lan hệ sợi nấm đƣợc đo ngày/lần kể từ cấy giống Tiến hành đo lần lƣợt công thức, công thức đo 20 bịch lấy giá trị trung bình Tốc độ ăn lan hệ sợi đƣợc tính theo số cm/ ngày Số liệu đƣợc thể bảng sau: ảng 3.6 Nghiên cứu đánh giá khả ăn lan hệ sợi giống nấm Sò Đùi gà bịch mùn cƣa Chiều dài hệ sợi nấm ăn lan bịch nguyên liệu (cm) CTTN ngày 10 ngày 15 ngày 20 ngày 25 ngày 30 ngày 35 ngày CT1 3,8 4,3 6,5 8,5 9,3 10,2 CT2 7,3 11,8 13,1 15,1 16,4 18 18,6 CT3 6,4 8,9 10,1 12,2 14 15,2 17,5 CT4 5,3 8,6 11,4 13,3 14,1 15 16,3 CT5 3,4 5,7 7,5 9,5 11,2 13,7 15,6 ảng 3.7 Ảnh hƣởng thành phần hàm lƣợng chất,phụ gia tới chất lƣợng hệ sợi nấm CTTN Chất lƣợng, đặc điểm hệ sợi Tỷ lệ nhiễm (%) CT1 Hệ sợi mảnh,ăn lan chậm không đồng 15 CT2 Hệ sợi khỏe,dày,ăn lan nhanh,đều CT3 Hệ sợi khỏe,dày,ăn lan nhanh,đều CT4 Hệ sợi khỏe,dày,ăn lan nhanh,đều 10 CT5 Hệ sợi khỏe,dày,ăn lan chậm,không 37 Theo kết thống kể bảng 3.6 ta nhận thấy CT2: 39% Mùn cƣa + 39% Bông + 15% Cám mỳ + 5% Cám ngô + 1% Đƣờng + 1% Bột nhẹ có hệ sợi ăn lan nhanh tốt (18,6 cm 35 ngày), CT1: 99% Mùn cƣa + 1% Bột nhẹ có hệ sợi ăn lan chậm (10,2 cm 35 ngày), CT3 CT4 cho kết ăn lan hệ sợi tƣơng đồng Kết bảng 3.7 cho thấy + Chất lƣợng, đặc điểm hệ sợi có khác nhua công thức nuôi trồng CT2: 39% Mùn cƣa + 39% Bông + 15% Cám mỳ + 5% Cám ngô + 1% Đƣờng + 1% Bột nhẹ cho hệ sợi nấm khỏe, dày, ăn lan nhanh, nhất, CT1: 99% Mùn cƣa + 1% Bột nhẹ cho hệ sợi nấm mảnh, ăn lan chậm không + Tỷ lệ bịch nấm bị nhiễm bệnh thấp tất công thức Từ kết trên,ta thấy rằng: + Các chất phụ gia nhƣ cám ngô, cám mỳ, đƣờng,chứa nhiều dinh dƣỡng cần thiết cho sinh trƣởng hệ sợi nấm Sò Đùi gà + Hệ sợi nấm Sò Đùi gà ăn lan nhanh tốt môi trƣờng đƣợc phối trộn cân đối tỷ lệ chất chất phụ gia + Nếu tuân thủ quy trình thực khoa học vệ sinh tỷ lệ bịch nhiễm thấp chí khơng có bịch bị nhiễm 3.4.2 Nghiên cứu ảnh hƣởng thành phần hàm lƣợng chất,phụ gia đến khả hình thành thể nấm Sò Đùi gà ảng 3.8 Ảnh hƣởng thành phần hàm lƣợng chất,phụ gia đến khả hình thành thể nấm Sò Đùi gà CTTN Tỷ lệ nhiễm (%) CT1 CT2 15 Tỷ lệ bịch Tỷ lệ bịch không thể thể (%) (%) 25 75 80 20 38 Thời gian bắt đầu thể (ngày) Chất lƣợng thể 41 Quả thể nhỏ,mũ biến dạng ,hơi sậm màu 32 Quả thể to,dài,chắc,sáng màu,mũ phẳng Quả thể CT3 65 35 35 to,dài,chắc,sáng màu,mũ phẳng CT4 10 50 50 34 Quả thể to,dài,chắc,sáng màu,mũ phẳng CT5 40 60 37 Quả thể bình thƣờng, ,chắc,sáng màu,mũ phẳng Kết bảng 3.7 cho thấy: + Tỷ lệ bịch nuôi trồng thể tốt phạm vi nghiên cứu CT2 có tỷ lệ qua thể cao (80%), CT1 có tỷ lệ thể thấp (25%),các công thức ni trồng cịn lại có tỷ lệ qua thể tƣơng đồng + Tỷ lệ bịch nấm bị nhiễm bệnh thấp tất công thức + Thời gian trung bình thể có thay đồi công thức nhƣng dao động từ 30 – 41 ngày điều kiện nuôi trồng phịng thí nghiệm nấm Viện Cơng nghệ Sinh học Sớm CT2 (ngày 32), muộn CT1 (ngày 41) + Chất lƣợng thể sau nuôi trồng có khác cơng thức CT2 cho chất lƣợng thể tốt (quả thể to,dài,chắc,sáng màu,mũ phẳng), CT1 cho chất lƣợng thể (quả thể nhỏ, mũ biến dạng, sậm màu), công thức ni trồng cịn lại cho thể với chất lƣợng tốt, khơng có khác biệt nhiều với CT2 Từ kết trên, ta thấy + Bông hạt phế liệu loại chất giàu dinh dƣỡng,khi đƣợc phối trộn với chất mùn cƣa truyền thống cho suất chất lƣợng nấm Sò Đùi gà tốt + Các chất phụ gia nhƣ cám ngô, cám mỳ, lõi ngô, đƣờng, bột nhẹ chứa nhiều dinh dƣỡng cần thiết cho sinh trƣởng phát triển thể nhƣ cân mơi trƣờng giá thể ni cấy Vì vậy, để đạt suất cao ni trồng nấm Sị Đùi gà việc bổ sung chất phụ gia vào mơi trƣờng chất thiếu 39 + Hệ sợi nấm Sò Đùi gà ăn lan nhanh tốt môi trƣờng đƣợc phối trộn cân đối tỷ lệ chất chất phụ gia + Tỷ lệ bịch nhiễm thấp có quy trình thực khoa học vệ sinh Vì lí mà công thức (CT2) công thức tối ƣu đƣợc chọn để ni trồng nấm Sị Đùi gà CT3 CT1 CT4 CT5 CT2 Hình 3.3 ịch nấm Sị Đùi gà sau hệ sợi ăn lan kín cơng thức phối trộn khác 40 Hình 3.4 Hệ sợi nấm Sị Đùi gà bị già hóa tiết dịch màu vàng Trong q trình ni trồng nấm Sị Đùi gà, ta cấy chuyển mơi trƣờng nhiều, giữ hệ sợi khoảng thời gian dài thời gian sinh trƣởng hệ sợi hay khơng loại bỏ kịp thời phần sợi già xảy tƣợng già hóa tiết dịch vàng Những bịch nấm xảy tƣợng ăn lan chậm, không thể dễ bị nhiễm bệnh nên cần ý thao tác nhƣ loại bỏ kịp thời B1 B2 B3 Hình 3.5 Một số hình ảnh bịch bị nhiểm nấm Sị Đùi gà q trình ni trồng ( 1: bịch bị rách dẫn đến nhiễm khuẩn, 2:bịch nấm bị ruồi gây hại làm chết dần hệ sợi, B3: bịch nấm bị nhiễm nấm mốc) 41 Việc bị nhiễm bệnh, nấm mốc hay côn trùng gây hai điều không mong muốn nhƣng khó tránh khỏi ni trồng nấm Sị Đùi gà nói riêng loại nấm nói chung Các bệnh thƣờng gặp nhƣ hình 3.5 Vì vậy, cần đặc biệt tuân thủ quy trình nhân giống nuôi trồng nấm, đảm bảo quy tắc vệ sinh, khử trùng nguyên liệu, dụng cụ nhƣ hoàn thiện thao tác để tránh gây nhiễm bịch làm ảnh hƣởng trực tiếp đến suất chất lƣợng nấm ni trồng Hình 3.6 Giàn ni trồng nấm Sò Đùi gà giai đoạn thể phòng nuôi trồng nấm – Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp Hình 3.7 Một số hình ảnh thể nấm Sị Đùi gà ni trồng từ giống nấm phân lập nhân giống đƣợc Từ kết hình ảnh trên, ta thấy giống nấm Sị Đùi gà phân lập nhân giống đƣợc có khả thể cao, tỷ lệ nhiễm thấp Quả thể nấm thu đƣợc to, dài, chắc, sáng màu, mũ phẳng ăn ngon, có mùi thơm đặc trƣng chế biến, chất lƣợng tốt không thua sản phẩm nấm Sò Đùi gà thị trƣờng 42 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Qua trình thực nghiên cứu em thu đƣợc số kết nhƣ sau: - Công thức khử trùng thể tốt để phân lập giống nấm Sò Đùi gà khử trùng cồn 70º lần sau rửa lại nƣớc cất - Cơng thức tốt để phân lập nhân giống cấp nấm Sị Đùi gà mơi trƣờng PAG: 20 g/l Đƣờng sucrose + 250 g/l Khoai tây + g/l Agar bổ sung thêm kháng sinh Cefotaxim với tỷ lệ 400mg/lit Công thức tốt để nhân giống cấp nấm Sị Đùi gà là: 90% Thóc Khang Dân + 4% Cám ngô + 4% Cám gạo + 2% Bột nhẹ - Cơng thức phối trộn ngun liệu đóng bịch ni trồng nấm Sò Đùi gà tốt là: 39% Mùn cƣa + 39% Bông + 15% Cám mỳ + 5% Cám ngô + 1% Đƣờng + 1% Bột nhẹ Tồn - Do thời gian thực tƣơng đối ngắn nên thí nghiệm khơng thể lặp lại nhiều lần kết tốt - Điều kiện ni trồng phịng thí nghiệm chƣa thực tối ƣu nên ảnh hƣởng phần đến kết nghiên cứu Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu hoàn thiện kỹ thuật phân lập,nhân giống nhƣ nuôi trồng nấm Sò Đùi gà nhằm nâng cao ứng dụng đề tài vào thực tế sản xuất 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt: Nguyễn Lân Dũng (2010), Công nghệ nuôi trồng nấm, tập 1, Nhà xuất Nông nghiệp Nguyễn Lân Dũng (2010), Công nghệ nuôi trồng nấm, tập 2, Nhà xuất Nông nghiệp Nguyễn Lân Dũng (2009), Tự học nghề trồng nấm, Nhà xuất Nông nghiệp Nguyễn Hữu Đống, Đinh Xuân Linh, Nguyễn Thi Sơn, Zani Federico (2006), Nấm ăn – Cơ sở khoa học công nghệ nuôi trồng, Nhà xuất Nơng nghiệp Giang Văn Tồn (2016), Kỹ thuật trồng nấm hữu an toàn, Nhà xuất Hồng Đức Nguyễn Thị Hồng (2014), Kỹ thuật trồng nấm, Nhà xuất Thanh Hóa Nguyễn Văn Tuyến (2012), Kỹ thuật trồng loại nấm, Nhà xuất Âm nhạc Tài liệu tiếng Anh: Paul Stamets (1993), Growing Gourmet and Medicinal Mushrooms, Ten Speed Press, New York, United states S T Chang & T H Quimio (1989), Tropical Mushrooms Biological Nature and Cultivation Methods, The Chinise University Press, Hong Kong, China Tài liệu web: 10 https://dulichnhatrang234.wordpress.com/2013/06/30/tinh-hinh-san-xuat-vatieu-thu-nam-tren-the-gioi/ 11 http://www.hokto-kinoko.com/whats-kinoko/king-trumpet/ 12 https://www.myfitnesspal.com/food/calories/mushroom-king-oystermushroom-pleurotus-eryngii-mushrooms-188350478 13 https://en.wikipedia.org/wiki/Pleurotus_eryngii 14 http://biovegi.com.vn/tac-dung-cua-nam-dui-ga-229-vn.htm 15 http://nutritiondata.self.com/facts/vegetables-and-vegetable-products/3050/2 16 http://www.medicalmushrooms.net/pleurotus-eryngii/ 17 https://www.sparkpeople.com/myspark/Calorie_Finder.asp?FoodID=51223174 18 http://www.huongnghiep.com.vn/Trong-trot/Ky-Thuat-Nuoi-Trong-Nam-BaoNgu-Nhat-(Pleurotus-Eryngii).html 19 https://www.researchgate.net/publication/296686925_Chemical_analysis_of_ki ng_oyster_mushroom_Pleurotus_eryngii_fruitbodies