Nghiên cứu chiết xuất, phân lập và đánh giá tác dụng của saponin từ sâm vũ diệp tới chức năng ty thể tế bào cơ tim chuột h9c2

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC PHENIKAA DƯƠNG NGỌC THÀNH Nghiên cứu chiết xuất, phân lập đánh giá tác dụng saponin từ Sâm Vũ Diệp tới chức ty thể tế bào tim chuột H9C2 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Hà Nội – Năm 2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC PHENIKAA DƯƠNG NGỌC THÀNH Nghiên cứu chiết xuất, phân lập đánh giá tác dụng saponin từ Sâm Vũ Diệp tới chức ty thể tế bào tim chuột H9C2 Ngành: Dược lý – Dược lâm sàng Mã số: 8720205 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC LÝ VÀ DƯỢC LÂM SÀNG Người hướng dẫn khoa học: - PGS TS Vũ Thị Thu - PGS TS Nguyễn Hữu Tùng Hà Nội, ngày… tháng …năm 2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC PHENIKAA ¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯ LUẬN VĂN THẠC SĨ Nghiên cứu chiết xuất, phân lập đánh giá tác dụng saponin từ Sâm Vũ Diệp tới chức ty thể tế bào tim chuột H9C2 Họ tên: Dương Ngọc Thành Ngành/Chuyên ngành: Dược lý Dược lâm sàng Mã số: 8720205 Người hướng dẫn khoa học: - PGS TS Vũ Thị Thu - PGS TS Nguyễn Hữu Tùng Giảng viên hướng dẫn khoa học 1: Giảng viên hướng dẫn khoa học 2: (Ký ghi rõ họ tên) (Ký ghi rõ họ tên) Học viên: (Ký ghi rõ họ tên) HÀ NỘI – 2023 M ỤC L ỤC ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN TỔNG QUAN 1.1 Thiếu máu cục tim 1.1.1 Bệnh tim mạch mức độ nguy hiểm bệnh tim mạch 1.1.2 Bệnh thiếu máu cục tim 1.1.3 Tổn thương thiếu máu cục bộ-tái tưới máu 1.2 Ty thể 1.2.1 Cấu trúc ty thể 1.2.2 Chức ty thể 1.2.3 Phân tích số chức ty thể 1.3 Mơ Hình thiếu máu cục tim in vitro 12 1.4 Sâm vũ diệp 14 1.4.1 Thông tin chung Sâm vũ diệp 14 1.4.2 Đặc điểm thực vật, phận dùng 14 1.4.3 Địa điểm phân bố Việt Nam 15 1.4.4 Thành phần hóa học 15 1.4.5 Tác dụng sinh học dược lý 17 1.4.6 Công dụng theo y học cổ truyền 18 1.4.7 Saponin 18 PHẦN ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Đối tượng nghiên cứu 20 2.2.1 Hoá chất 21 2.2.1.1 Hóa chất sử dụng chiết xuất phân tích: 21 2.2.1.2 Hóa chất dùng nghiên cứu hoạt tính sinh học 21 Hóa chất dùng nghiên cứu hoạt tính sinh học saponin tách chiết từ SVD tế bào tim chuột H9C2 liệt kê Bảng 21 2.2.2 Dụng cụ thiết bị 23 2.3 Phương pháp nghiên cứu 24 2.3.1 Phương pháp chiết cao giàu saponin tinh chế saponin 24 2.3.1.1 Quy trình chiết xuất cao giàu saponin 24 2.3.1.2 Q trình tinh chế saponin 26 2.3.1.3 Định tính, định lượng: 26 2.3.2 Kiểm tra cấu trúc hóa học hợp chất 26 2.3.3 Xác định độc tính, tác dụng cao saponin SVD thành phần saponin lên tế bào H9C2 27 2.3.3.1 Sơ đồ nghiên cứu: 27 2.3.3.2 Nuôi cấy tế bào tim chuột H9C2 27 2.3.3.3 Xác định độc tính phân đoạn saponin SVD thành phần saponin lên tế bào H9C2 29 2.3.3.4 Gây mơ hình bệnh TM-TTM in vitro sử dụng tế bào H9C2 thử tác dụng saponin 29 2.3.3.5 Tỷ lệ sống tế bào H9C2 đánh giá Cell-couting kit-8 (CCK-8) 30 2.3.3.6 Xác định số số ty thể 31 2.3.3.7 Hình dạng tế bào H9C2 32 2.3.3.8 Chụp ảnh kính hiển vi đồng tiêu Apotome 32 2.3.3.9 Phương pháp thống kê phân tích số liệu 32 2.4 Địa điểm thời gian nghiên cứu 32 PHẦN 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 33 3.1 Chiết xuất cao saponin tinh chế thành phần saponin 33 3.1.1 Chiết xuất cao saponin từ SVD 33 3.1.1.1 Quy trình chiết cao saponin 33 3.1.1.2 Đặc điểm cao saponin SVD 34 3.1.2.1 Quá trình phân lập tinh chế 38 3.1.2.2 Kiểm tra định độ tinh khiết 39 3.1.2.3 Phân tích đặc điểm vật lý hóa lý 41 3.2 Tác dụng cao saponin saponin tới tế bào tim chuột H9C2 tổn thương HR 43 3.2.1 Độc tính cao saponin tinh chất tế bào H9C2 điều kiện thường 43 3.2.2 Tác dụng cao saponin tinh chất lên tế bào H9C2 tổn thương HR 44 3.2.2.1 Tác dụng cao saponin tinh chất lên khả sống tế bào H9C2 44 3.2.2.2 Tác dụng cao saponin ARA lên số chức ty thể tế bào H9C2 điều kiện HR 47 3.3 Bàn luận 54 3.3.1 Về chiết xuất cao saponin phân lập thành phần saponin 54 3.3.1.1 Về chiết xuất cao saponin 54 3.3.1.2 Về phân lập thành phần saponin 54 3.3.2 Về tác dụng sinh học dược lý cao saponin saponin 55 3.3.2.2 Tỷ lệ sống tế bào, tác dụng cao saponin saponin lên số chức ty thể tế bào H9C2 điều kiện HR 55 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 57 KẾT LUẬN 57 Sau thời gian nghiên cứu thực luận văn, chúng tơi hồn thành đầy đủ nội dung nghiên cứu đạt mục tiêu đề với kết sau: 57 - Đã xây dựng quy trình chiết suất cao giàu saponin hợp chất từ Sâm vũ diệp 57 KIẾN NGHỊ 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 60 LỜI CẢM ƠN Trong q trình nghiên cứu hồn thành luận văn này, nhận nhiều bảo, giúp đỡ cộng tác quý báu thầy cô, nhà khoa học bạn bè đồng nghiệp gia đình Trước hết, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Vũ Thị Thu PGS TS Nguyễn Hữu Tùng, người thầy ln tận tình hướng dẫn, bảo, giúp đỡ hỗ trợ tơi q trình học tập, nghiên cứu hoàn thiện luận văn Trường Đại học PHENIKAA mang đến cho môi trường học tập nghiên cứu tốt với triết lý giáo dục Tôn trọng – Sáng tạo – Phản biện Trong đó, tơi xin chân thành cám ơn Ban lãnh đạo Khoa tồn thể thầy cơ, cán Khoa Dược động viên tinh thần tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành luận văn Q trình thực nghiệm phịng thí nghiệm địi hỏi kĩ kỷ luật, xin trân trọng bày tỏ lịng cảm ơn tới TS Vũ Văn Tuấn, ThS Ngơ Thị Hải Yến, ThS Nguyễn Thị Hoàng Anh cán nghiên cứu, bạn bè đồng nghiệp Trung tâm thực hành nghiên cứu dược B3, Trường Đại học Phenikaa Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên-Đại học Quốc gia Hà Nội nhiệt tình giúp đỡ, tạo điều kiện cộng tác tơi q trình thực nghiệm Cuối cùng, tơi ln ghi nhớ công lao to lớn người thân gia đình, người thân bạn bè động viên tạo điều kiện cho trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn Một lần nữa, xin chân thành cảm ơn giúp đỡ quý báu đó! Hà Nội, ngày tháng năm 2023 Tác Giả Dương Ngọc Thành LỜI CAM ĐOAN Các nội dung nghiên cứu luận văn khuôn khổ đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học Sâm Vũ Diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) Việt Nam” (Bộ Giáo dục Đào tạo, mã số: B2019_BKA.02) đề tài “Nghiên cứu tác dụng sản phẩm chiết từ Sâm Vũ Diệp lên tín hiệu điều hịa chuyển hóa lượng nội bào AMPK/PGC1α mơ hình bệnh nhồi máu tim in vitro” (QG.22.03) Tôi xin cam đoan luận văn cơng trình nghiên cứu tơi thực hướng dẫn Cô Vũ Thị Thu Thầy Nguyễn Hữu Tùng, số liệu kết nghiên cứu, bao gồm phần phụ lục luận văn, trung thực khách quan, đồng ý sở nơi nghiên cứu Nghiên cứu không trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Hà Nội, ngày tháng năm 2023 (Học viên ký, ghi rõ họ tên) Dương Ngọc Thành TÀI LIỆU THAM KHẢO A Tài liệu tiếng Việt: [1] Ngô Thị Hải Yến, Hồ Lý Phương, Nguyễn Thị Hà Ly, Phạm Thị Bích, Vũ Thị Thu, (2020), “Đánh giá khả bảo vệ hesperidin tế bào tim H9C2 tổn thương thiếu máu-tái tưới máu in vitro”, Báo cáo khoa học nghiên cứu giảng dạy sinh học Việt Nam-hội nghị khoa học quốc gia lần thứ 4, tr 631637 [2] Viện Dược liệu (2004), “Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam”, tập II, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, tr 704-714 [3] Nguyễn Lân Việt, Phạm Việt Tuân, Phạm Mạnh Hùng (2010) "Nghiên cứu mơ hình bệnh tật bệnh nhân điều trị nội trú Viện Tim mạch Việt nam thời gian 2003-2007" Tạp chí Tim mạch học Việt Nam số 52: tr 11-19 [4] Đỗ Tất Lợi, (2006), “Những thuốc vị thuốc Việt Nam”, Nhà xuất y học, tr 808-810 [5] Nguyễn Thượng Dong (2007), Sâm Việt Nam số thuốc họ nhân sâm, NXB Khoa học Kỹ thuật, tr 327-338 [6] Nguyễn Văn Tập (2005), "Các loài thuộc chi Panax L Việt Nam", Tạp chí dược liệu, 10(3), tr 71-76 [7] Trần Công Luận, Lưu Thảo Nguyên, Nguyễn Tập (2009), "Nghiên cứu thành phần hóa học số tác dụng dược lý hai loài Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) tam thất hoang (Panax stipuleanatus Tsai et Feng)", Tạp chí Dược liệu, 14(1), tr 17-23 [8] Đỗ Văn Hào,el at, “Thành phần hóa học phân đoạn ethyl acetat từ rễ Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidius Seem.) thu hái Sa Pa, Lào Cai” (2017), Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Y Dược, Tập 33, Số (2017) 50-55 [9] Nguyễn Thị Thu Thủy, el at, “Thành phần saponin thân rễ Sâm vũ diệp thu hái Sa Pa, Lào Cai’’ (2018), Tạp chí Dược liệu, tập 23, số 2, tr 82-88 60 [10] Trần Công Luận, Nguyễn Tập, Lưu Thảo Nguyên, (2009), Nghiên cứu thành phần hóa học hai lồi Sâm vũ diệp (panax bipinnatifidus seem.) Tam thất hoang (panax stipuleanatus tsai et feng), Tạp chí Dược liệu số 1, tr 17-23 [11] Lương Phú Hưng,el at, (2020), “Bước đầu nghiên cứu tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu số dược liệu Việt Nam”, VNU Journal of Science: Medical and Pharmaceutical Sciences, p36, tr: 1-8 [12] Trần Công Luận, el at, (2009), Nghiên cứu số tác dụng dược lý Tam thất hoang - Panax stipuleanatus tsai et feng, họ araliaceae, Tạp chí dược liệu số 2, tr 99-103 [13] Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1985), Phương pháp nghiên cứu hoá học thuốc, Nhà xuất Y học [14] Trần Văn Sung (2002), Phổ cộng hưởng từ hạt nhân hóa hữu cơ, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội, Tập I [15] Ngô Thị Hải Yến, el at, (2019), Thiết kế đánh giá hiểu buồng thiếu ơxi ứng dụng mơ hình bệnh thiếu máu cục bộ- tái tưới máu tim in vitro, , tập 23 N03 [16] Vũ Thị Thu, Phạm Thị Bích, 2022, Tác dụng bảo vệ tế bào HEK293 rutin điều kiện thiếu ôxi/tái cung cấp ôxi in vitro sử dụng buồng whitley H35 hypoxystation, Tạp chí Sinh lý học Việt Nam, số 2, tr 9-15 [17] Thu, V.T and L.T.L Kim Hyoung Kyu, Tô Thanh Thúy, et al Curcuminoids ức chế phát triển tế bào ung thư tủy KMS-20 cách làm thay đổi chức ty thể Tạp chí Sinh lý học Việt Nam, 2016 B Tài liệu tiếng Anh: [18] Eltzschig HK and Collard CD, Vascular ischaemia and reperfusion injury, (2004), British Medical Bulletin 70: p.71-86 [19] Nguyen Huu Tung, el at, (2011), “Oleanolic triterpenesaponins from the roots of Panax bipinnatifidus”, Chem Pharm Bull, p 59(11) 1417-1420 [20] Wang Daqi, Yang Chongren, et al, (1989), "Further study on dammarane saponins of leaves of Panax japonicus var major collected in Quinling Mountains China", Yao Xue Xue Bao, 24(8), pp 633 – 636 61 [21] Feng Baoshu, et al, (1989), "Studies on saponins from the leaves of Panax japonicus var bipinnatifidus (Seem.) Wu et Feng", Yao Xue Xue Bao, 24(8), pp 593-599 [22] Andrew M Walters, George A Porter, JR, and Paul S Brookes (2012), Mitochondria as a Drug Target in Ischemic Heart Disease and Cardiomyopathy, Circ Res, 111(9): p.1222-1236 [23] Marchetti, P., et al., Are mitochondria targets of anticancer drugs responsible for apoptosis? Ann Biol Clin, 2002 60(4): p 391-403 [24] Andrienko T, Kuznetsov AV, Kaambre T, Usson Y, Orosco1 A, Appaix1 F, Tiivel4 T, Sikk4 P, Vendelin6 M, Margreiter3 R and Saks1 V (2003), Metabolic consequences of functional complexes of mitochondria, myofibrils and sarcoplasmic reticulum in muscle cells, Journal of Experimental Biology, 206, 2059-2072 [25] Donna L Carden and D Neil Granger, (2000) Pathophysiology of ischaemia -reperfusion injury, Journal of Pathology, p 190: 255 - 266 [26] Andrew Halestrap P, (2010) A pore way to die: the role of mitochondria in reperfusion injury and cardioprotection, Biochemical Society Transactions, p38, 841 – 853 [27] Jin Han, Sung-Ji Park, Vu Thi Thu, Sung-Ryul Lee, Le Thanh Long, Hyoung Kyu Kim, Nari Kim, Seung Woo Park, Eun-Seok Jeon, Eun-Ji Kim, Chang-Hwan Yoon, Goo-Young Cho c, Dong-Ju Choi, (2013), Effects of the novel angiotensin II receptor type I antagonist, fimasartan on myocardial ischemia/reperfusion injury, International Journal of Cardiology p 168: 2851-2859 [28] Giovanni Benard, Nadège Bellance, Dominic James, Philippe Parrone, Helder Fernandez, Thierry Letellier and Rodrigue Rossignol, (2007) Mitochondrial bioenergetics and structural network organization, Journal of Cell Science, p 120: 838-848 [29] Lima-Seolin, Ashley Nemec-Bakk, Heidi Forsyth, Stefanie Kirk, Alex Sander da Rosa Araujo, Paulo Cavalheir Schenkel Adriane Belló-Klein, Neelam Khaper, (2019), Bucindolol Modulates Cardiac Remodeling by Attenuating Oxidative 62 Stress in H9c2 Cardiac Cells Exposed to Norepinephrine, Oxidative Medicine and Cellular Longevity, p:1 – 11 [30] Vu Thi Thu, Ngo Thi Hai Yen, Nguyen Huu Tung, Pham Thi Bich, Jin Han, Hyoung Kyu Kim, (2021), Majonoside-R2 extracted from Vietnamese ginseng protects H9C2 cells against hypoxia/reoxygenation injury via modulating mitochondrial function and biogenesis, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 36, 127814 [31] Vu Thi Thom, Nguyen Huu Tung, Dang Van Diep, Dang Thi Thuy, Nguyen Thi Hue, Dinh Doan Long, Bui Thanh Tung, Pham Thanh Huyen, Duong Thi Ly Huong, (2018), Antithrombotic activity and saponin composition of the roots of Panax bipinnatifidus Seem growing in Vietnam, Pharmacognosy Research, p10:333-338 [32] Henze K, Martin W, Martin, William (2003), “Evolutionary biology: essence of mitochondria”, Nature, p426 (6963): 127–8 [33] Campbell, Neil A., Brad Williamson, Robin J, Heyden (2006), Biology: Exploring Life Boston, Massachusetts: Pearson Prentice Hall ISBN 0-13-2508826 [34] Wiemerslage L, Lee D (2016), “Quantification of mitochondrial morphology in neurites of dopaminergic neurons using multiple parameters”, J Neurosci Methods, p: 56-65 [35] Heidi M McBride, el at, (2006), “Mitochondria: more than just a powerhouse”, Curr Biol, 16 (14): R551–60 [36] Richard G Boles, el at, (2005), “Is a Mitochondrial Psychiatry' in the Future? A Review”, Curr Psychiatry Review, p1 (3): 255–271 [37] Lesnefsky EJ, Moghaddas S, Tandler B, Kerner B, Hoppel CL (2001), “Mitochondrial dysfunction in cardiac disease: ischemia—reperfusion”, Journal of Molecular and Cellular Cardiology, p33: 1065–1089 [38] Gerald W Dorn, el at, (2015), “Mitochondrial biogenesis and dynamics in the developing and diseased heart”, Genes Dev p29: 1981–1991 [39] Giuseppe Paradies, Valeria Paradies, Francesca M, Ruggiero, Giuseppe Petrosillo (2019), Role of Cardiolipin in Mitochondrial Function and Dynamics in 63 Health and Disease: Molecular and Pharmacological Aspects, National Center for Biotechnology information, p8: 2-21 [40] Ljubava D, Zorov, Vasily A Popkov, Egor Y Plotnikov, Denis N Silachev, Irina B Pevzner, Stanislovas S Jankauskas, Valentina A Babenko, Savva D Zorov, Anastasia V Balakireva, Magdalena Juhaszova, Steven J Sollott, Dmitry B Zorova (2018), Mitochondrial membrane potential, HHS Public Access, p552 tr: 50-59 [41] Wayel Jassem 1, Susan V Fuggle, Mohamed Rela, Dicken D H Koo, Nigel D Heaton (2002), The role of mitochondria in ischemia/reperfusion injury, Transplantation, p73 tr: 493-499 [42] Grigory G, Borisenko (2016), Mitochondrial phospholipid cardiolipin and its triggering functions in the cells, lipid technology, p28 tr: 40-43 [43] Zhang S M, Xie1 Z P, Xu1 M L., and Shi2 L F, (2015), Cardioprotective effects of fucoidan against hypoxia-induced apoptosis in H9C2 cardiomyoblast cells, Pharmaceutical Biology, P 53: 1352-1357 [44] John Shi, Konesh Arunasalam, David Yeung, Yukio Kakuda, Gauri Mittal and Yueming Jiang (2004), JOURNAL OF MEDICINAL FOOD, p7: 67 – 78 [45] Honda, H.M., P Korge, and J.N Weiss, Mitochondria and ischemia/reperfusion injury Annals of the New York Academy of Sciences (2005), 1047(1): p 248-258 [46] Walters, A.M., G.A Porter Jr, and P.S Brookes, Mitochondria as a drug target in ischemic heart disease and cardiomyopathy Circulation research (2012), 111(9): p 1222-1236 [47] Nicholls, D.G., Mitochondrial membrane potential and aging Aging cell, 2004 3(1): p 35-40.] [48] D L Carden, et al, 2000, “Pathophysiology of ischaemia-reperfusion injury” J Pathol, 190(3): p 255-66 [49] Sihem Boudina, Muriel N Laclau, Liliane Tariosse, Danièle Daret, Gérard Gouverneur, Simone Bonoron-Adèle, Valdur A Saks, Pierre Dos Santos, Alteration of mitochondrial function in a model of chronic ischemia in vivo in rat heart Am J Physiol Heart Circ Physiol (2002), 282(3): p H821-31 64 [50] Giancarlo Solaini, David A Harris, et al Biochemical dysfunction in heart mitochondria exposed to ischaemia and reperfusion Biochem J (2005), 390(Pt 2): p 377-94 [51] Seth W Perry, John P Norman, Justin Barbieri, Edward B Brown, Harris A Gelbard, Mitochondrial membrane potential probes and the proton gradient: a practical usage guide Biotechniques (2011), 50(2): p 98-115 [52] Dariush Mozaffarian, Emelia J Benjamin, Alan S Go, Donna K Arnett, Michael J Blaha, Mary Cushman, Sandeep R Das, Sarah de Ferranti, Jean-Pierre Després, Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update, (2015), A Report from the American Heart Association, p 133: e38-e336 [53] Taeho Kim 1, Vu Thi Thu, Il-Yong Han, Jae Boum Youm, Euiyong Kim, Sun Woo Kang, Yang Wook Kim, Jae Hwa Lee, Hyun Joo, Does strong hypertrophic condition induce fast mitochondrial DNA mutation of rabbit heart? Mitochondrion (2008), 8(3): p 279-83 [54] Jin Han, Sung-Ji Park, Vu Thi Thu, Sung-Ryul Lee, Le Thanh Long, Hyoung Kyu Kim, Nari Kim, Seung Woo Park, Eun-Seok Jeon, Eun-Ji Kim, Chang-Hwan Yoon, Goo-Young Cho, Dong-Ju Choi, Effects of the novel angiotensin II receptor type I antagonist, fimasartan on myocardial ischemia/reperfusion injury Int J Cardiol (2013), 168(3): p 2851-9 [55] Vũ Thị Thu, et al., NecroX-5 exerts antiinflammatory and anti-fibrotic effects via modulation of the TNFα/Dcn/TGFβ1/Smad2 pathway in hypoxia/reoxygenation-treated rat hearts Official Journal of the Korean Physiological Society and the Korean Society of Pharmacology, The Korean Journal of Physiology & Pharmacology (2016), 20(3): p 305-314 [56] Steenbergen, C and N.G Frangogiannis, Ischemic heart disease, in Muscle (2012), Elsevier Inc p 495-521 [57] Palasubramaniam, J., X Wang, and K Peter, Myocardial Infarction—From Atherosclerosis to Thrombosis: Uncovering New Diagnostic and Therapeutic Approaches Arteriosclerosis, thrombosis and vascular biology, (2019), 39(8): p e176-e185 65 [58] Berliner, J.A., et al., Atherosclerosis: basic mechanisms: oxidation, inflammation, and genetics Circulation, (1995), 91(9): p 2488-2496 [59] Kalogeris, T., et al., Ischemia/reperfusion Comprehensive Physiology, 2016 7(1): p 113-170 [60] Vu Thi Thi, Ngo Thi Hai Yen, Evaluating the protective effects of Panax bipinnatifidus Seem Extracts on hypoxia/reoxygenation-subjected cardiomyocytes life sciences | PharmaCology, BioteChnology (2022) p 76-81 [61] Lu, L., et al., Myocardial infarction: symptoms and treatments Cell biochemistry and biophysics (2015), 72(3): p 865-867 [62] European Journal of Trauma and Emergency Surgery Bernhard Dorweiler, Diethard Pruefer, Terezia B Andrasi, Sasa M Maksan, Walther Schmiedt, Achim Neufang, Christian F, European Journal of Trauma and Emergency Surgery, Vahl Pathophysiology and Clinical Implications Ischemia-Reperfusion Injury (2007), p tr; 600-612 [63] Yellon, D.M and D.J Hausenloy, Myocardial reperfusion injury New England Journal of Medicine (2007), 357(11): p 1121-1135 [64] Paradies, G., et al., Mitochondrial bioenergetics and cardiolipin alterations in myocardial ischemia-reperfusion injury: implications for pharmacological cardioprotection American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology (2018), 315(5): p H1341-H1352 [65] Vu Thi Thom, Nguyen Huu Tung, Dang Van Diep, Dang Thi Thuy, Nguyen Thi Hue, Dinh Doan Long, Bui Thanh Tung, Pham Thanh Huyen, Duong Thi Ly Huong Antithrombotic Activity and Saponin Composition of the Roots of Panax bipinnatifidus Seem Growing in Vietnam Pharmacognosy Research (2018), Volume 10, Issue C Trang Web: [66] www medlatec.vn (10h, 20/7/2022) [67] www.bvnguyentriphuong.com.vn/duoc-lieu/sam-vu-diep(5h, 10/8/2022) [68] www.caythuoc.org/tam-that-hoang.html (16h20p, 10/8/2022) [69] who.int, 2023 66 [70] robocon.com.vn/sinh-hoc (2023) [71] WHO, Cardiovascular diseases (CVDs), (2022) [72].www.who.int/vietnam/vi/health-topics/cardiovascular-disease/cardiovasculardisease (10h40p, 25/7/2022) 67 Phụ lục: 68 Hình S1.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, C5D5N) hợp chất Stipuleanosid R2 69 Hình S1.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, C5D5N) hợp chất Stipuleanosid R2 70 Hình S1.3 Phổ HSQC (500 MHz, C5D5N) hợp chất Stipuleanosid R2 Hình S1.4 Phổ HMBC (500 MHz, C5D5N) hợp chất Stipuleanosid R2 71 Hình S2.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, C5D5N) hợp chất aralosid A 72 Hình S2.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, C5D5N) hợp chất aralosid A 73 Hình S2.3 Phổ HSQC (500 MHz, C5D5N) hợp chất aralosid A Hình S2.4 Phổ HMBC (500 MHz, C5D5N) hợp chất aralosid A 74