Phân lập và tuyển chọn vi sinh vật ưa nhiệt sinh protease ngoại bào (khóa luận tốt nghiệp)

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC -*** - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN VI SINH VẬT ƯA NHIỆT SINH PROTEASE NGOẠI BÀO” HÀ NỘI-2021 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC -*** - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “ PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN VI SINH VẬT ƯA NHIỆT SINH PROTEASE NGOẠI BÀO” Họ tên sinh viên : MAI ĐÌNH PHƯƠNG Mã sinh viên : 620658 Lớp : K62CNSHC Giảng viên hướng dẫn : ThS NGUYỄN QUỐC TRUNG HÀ NỘI-2021     LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan khóa luận hồn tồn hồn thiện tìm hiểu nghiên cứu khoa học thân hướng dẫn ThS Nguyễn Quốc Trung, giảng viên khoa Công nghệ Sinh học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam Tất số liệu, hình ảnh, kết trình bày khóa luận tốt nghiệp hồn tồn trung thực, khơng chép cơng trình nghiên cứu người khác mà không rõ nguồn tham khảo Các tài liệu tham khảo sử dụng khoá luận liệt kê danh mục tài liệu tham khảo khóa luận Tơi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan trước Hội đồng chấm khố luận tốt nghiệp Học viện Hà Nội, ngày 15 tháng năm 2021 Sinh viên Mai Đình Phương i     LỜI CẢM ƠN Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tri ân sâu sắc thầy cô trường Học viện nông nghiệp Việt Nam đặc biệt thầy cô khoa Công nghệ sinh học trường tạo điều kiện cho em thực tập khoa để có nhiều thời gian cho khóa luận tốt nghiệp Và em xin chân thành cám ơn thầy Nguyễn Quốc Trung nhiệt tình hướng dẫn hướng dẫn em hồn thành tốt khóa thực tập Trong trình thực tập làm báo cáo thực tập, kiến thức kinh nghiệm thực tế nhiều hạn chế nên báo cáo khơng thể tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận ý kiến đóng góp thầy, để em học hỏi nhiều kĩ năng, kinh nghiệm hoàn thành tốt báo cáo tốt nghiệp tới Em xin chân thành cảm ơn! ii     MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii Tóm tắt viii Phần 1: MỞ ĐẦU I Đặt vấn đề II Mục đích yêu cầu 1 Mục đích Yêu cầu Phần 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU I Các nguồn nước khống nóng Việt Nam Phân bố Ý nghĩa, khai thác II Vi khuẩn Khái niệm Phân loại Hình dạng, kích thước Phân bố Vi khuẩn ưa nhiệt 5.1 Khái niệm 5.2 Phân loại 5.3 Cơ chế chịu nhiệt vi khuẩn III Enzyme Khái niệm Phân loại enzyme 2.1 Dựa vào cấu trúc phân tử enzyme iii     2.2 Dựa vào phản ứng chế phản ứng 2.3 Dựa vào khả hòa tan enzyme Enzyme bền nhiệt 3.1 Khái niệm 3.2 Khai thác sản xuất enzyme bền nhiệt Ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt tính xúc tác enzyme 10 Enzyme protease 11 5.1 Khái niệm 11 5.2 Cấu tạo 12 5.3 Phân loại 13 IV Tình hình nghiên cứu 16 4.1 Trên giới 16 4.2 Ở Việt Nam 16 Phần III: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 I Vật liệu, địa điểm, thời gian tiến hành 18 II Phương pháp nghiên cứu 18 Phân lập chủng vi sinh vật 18 Phương pháp đánh giá khả ưa nhiệt chủng 18 Phương pháp đánh giá khả phân giải protein(Chantawannakula et al., 2002) 18 Xác định nhiệt độ tối ưu cho phát triển vi sinh vật 18 Xác định pH tối ưu cho phát triển vi sinh vật 19 Phương pháp xác định thời gian tối ưu cho chủng sinh enzyme protase ngoại bào(Đỗ thị Bích Thủy cs., 2015) 19 Phương pháp đo hoạt tính chủng sinh enzyme protease 19 Phương pháp tách chiết 21 Phương pháp định danh 21 10 Phương pháp xử lí số liệu 22 Phần 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 23 4.1 Kết phân lập 23 4.2 Kết xác định hoạt tính protease 26 4.2.1 Kết xác định khả sinh enzyme proteast 26 iv     4.2.2 Xác định hoạt độ enzyme dựa phương pháp Asson cải tiến 28 4.3 Kết định danh chủng vi khuẩn 38 4.3.1 Kết tách chiết ADN nhân dòng đoạn 16s rDNA sử dụng cặp mồi 27F 1492R 39 4.3.2 Kết giải trình tự 39 4.3.3 Kết so sánh GeBank 39 4.3.4 Kết xây dựng phát sinh chủng loại chủng vi khuẩn 40 4.4 Xác định ảnh hưởng nhiệt độ đến phát triển vi sinh vật 29 4.5 Xác định ảnh hưởng pH đến phát triển vi sinh vật 29 Kết xác định động thái sinh enzyme protease chủng 36 Phần 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 I Kết luận 41 II Kiến nghị 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 Phụ lục 45 Phụ lục 1: Hình ảnh hình thái khuẩn lạc 22 chủng phân lập 45 Phụ lục 2: Hình thái tế bào 22 chủng vi khuẩn 47 Phụ lục 3: Hình ảnh vịng phân giải 22 chủng vi khuẩn 48 Phụ lục 4: Trình tự chủng vi khuẩn phân lập 49 Phụ lục 5: Hình ảnh poster hội thảo cơng nghệ sinh học toàn quốc Huế 52 v     DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1.1: Bảng thống kê đặc điểm sinh học 22 chủng phân lập .23 Bảng 4.2.1 Bảng thống kê đường kính vịng phân giải 11 chủng 27 Bảng 4.3.3: Kết định danh chủng vi khuẩn 39 Bảng 4.5: pH thích hợp chủng vi khuẩn 35 Bảng 5: Động thái sinh protease chủng vi khuẩn 36 vi     DANH MỤC HÌNH Hình 4.1.1:Hình ảnh khuẩn lac 22 chủng phân lập 25 Hình 4.1.2: Hình ảnh tế bào 22 chủng phân lập 25 Hình 4.2.1 Hình ảnh vòng phân giải protein 11 chủng vi khuẩn 27 Hình 4.3.1: Hình ảnh điện di sản phẩm PCR mẫu so sánh với DNA ladder 100bp 39 Hình 4.3.4: Hình ảnh phát sinh chủng loại 40 Hình 4.5: Ảnh hưởng pH đến khả sinh trưởng chủng vi khuẩn 35 Hình 5: Biểu đồ động thái sinh protease chủng vi khuẩn 38 vii     Tóm tắt Protease nhóm enzyme cắt liên kết peptide (-CO~NH-) thủy phân protein thành peptid phân tử thấp axit amin Protease ứng dụng rộng rãi ngành công nghiệp thuộc da, chất tẩy rửa… protease bền nhiệt nhóm enzyme có ưu điểm vượt trội có tiềm ứng dụng cao Việt Nam có nguồn nước khống nóng phong phú cung cấp nguồn tài nguyên vi sinh vật ưa nhiệt đa dạng để khai thác enzyme bền nhiệt Nghiên cứu tiến hành phân lập vi khuẩn ưa nhiệt suối nước nóng Uva, Hua pe Tuần Giáo tỉnh Điện Biên Sử dụng môi trường NB nuôi cấy 50oC để phân lập mẫu bùn nước nóng thu 22 chủng vi khuẩn gồm 13 chủng gram âm, chủng gram dương 11/22 chủng xác định sinh enzyme protease ngoại bào Kết định danh trình tự 16S rADN xác định chủng NTG1, NNU1 NBU2 thuộc loài Baccillus sp.; chủng NBU6 NBN2 thuộc loài Paenibacillus dendririformis Các chủng vi sinh vật ưa nhiệt phân lập nghiên cứu tiếp tục nghiên cứu khai thác enzyme bền nhiệt viii     Hình 5: Biểu đồ động thái sinh protease chủng vi khuẩn Kết quả: Có chủng sinh protease cao thời điểm 18h NHP1, NBN1 NHP2, chủng NNU3 sinh nhiều protease vào thời điểm 42h, chủng NBU6 sinh nhiều protease vào thời điểm 30h Động thái sinh protease chủng thay đổi biểu đồ vi sinh vật thích ứng với điều kiện nuôi cấy nên sau thời gian sinh trưởng vi khuẩn thích nghi với mơi trường từ sinh nhiều protease Kết định danh chủng vi khuẩn 38     6.1 Kết tách chiết ADN nhân dòng đoạn 16s rDNA sử dụng cặp mồi 27F 1492R Hình 6.1: Hình ảnh điện di sản phẩm PCR mẫu so sánh với DNA ladder 100bp Kết quả: mẫu DNA vi khuẩn tách chiết PCR thành công cho băng vạch rõ ràng 6.2 Kết giải trình tự Đã giải trình tự chủng vi khuẩn NTG1, NBU2, NBU6, NNU1, NBN2 6.3 Kết so sánh GeBank Bảng 4.3.3: Kết định danh chủng vi khuẩn Straing Gene bank strain Accession code Identily(%) NTG1 Bacillus subtilis strain ANA12 MT122826.1 94.22% NBU2 Bacillus sp RHH24 HQ202546.1 98.84% MN055964.1 97.55% KX506706.1 95.27% LT732643.1 95,54% NBU6 NNU1 Paenibacillus dendritiformis strain ClaCZ203 Bacillus subtilis strain DB22 Paenibacillus dendritiformis partial NBN2 16S rRNA gene, strain MarseilleP568 Kết quả: Kết giải trình tự Blast để định danh, trình tự chủng vi khuẩn có độ tương đồng cao với chủng nghiên cứu để phân loại vi khuẩn Kết cho thấy chủng vi khuẩn thuộc lồi Bacillus, có chủng thuộc chi 39     Bacillus subtilis NTG1 NNU1, có chủng thuộc chi Bacillus sp NBU2, có lồi thuộc chi Paenibacillus NBN2 NBU6 6.4 Kết xây dựng phát sinh chủng loại chủng vi khuẩn Danh sách chủng vi khuẩn lấy trình tự để xây dựng phát sinh chủng loại là: MT122826.1, GQ340471.1, KX506706.1, JN972432.1, HQ202546.1, MT379483.1, MN055964.1, HM071942.1, LT732643.1 Hình 4.3.4: Hình ảnh phát sinh chủng loại Nhận xét: Từ phát sinh chủng loại cho ta thấy chủng NTG1 NNU1 có trình tự giống giống chủng Bacillus subtilis strain DB22 nhất, chủng NBU2 có trình tự giống với chủng Bacillus sp RNH24 Bacillus stratosphericus stain NNA3, chủng NBN2 có trình tự giống chủng Paenibacillus dendritiformis strain ClaCZ203 nhất, chủng NBU6 có trình tự giống với chủng Paenibacillus dendritiformis partial 16S rRNA gene strain Marseille-P568 40     Phần 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ I Kết luận Thí nghiệm phân lập 22 chủng vi khuẩn từ suối nước nóng Tuần Giáo, HuaPe Uva Trong có 11 chủng có khả sinh enzyme protease ngoại bào Có chủng sinh protease cao thời điểm 18h NHP1, NBN1 NHP2, chủng NNU3 sinh nhiều protease vào thời điểm 42h, chủng NBU6 sinh nhiều protease vào thời điểm 30h Kết cho thấy chủng vi khuẩn thuộc lồi Bacillus, có chủng thuộc chi Bacillus subtilis NTG1 NNU1, có chủng thuộc chi Bacillus sp NBU2, có lồi thuộc chi Paenibacillus NBN2 NBU6 Các chủng NHP1, NBN1 NBU7 có khả sinh trưởng phát triển mức pH=12 Các chủng vi khuẩn sinh trưởng phát triển tốt 50oC II Kiến nghị Do thời gian điều kiện nghiên cứu có hạn nên chúng tơi chưa thể sâu vào nghiên cứu, chúng tơi có số kiến nghị sau: - Tiếp tục nghiên cứu khả sinh loại en zyme khác Amylase, lipase… - Nghiên cứu khả thu enzyme thô chủng số lượng lớn để ứng dụng vào ngành công nghiệp 41     TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Lân Dũng (2006) Giáo trình vi sinh vật học NXB giáo dục Nguyễn Lân Dũng, Phạm Thị Trân Châu (1978) Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học- Tập III NXB khoa học kỹ thuật, Hà Nội Lương Đức Phẩm (2004) Công nghệ vi sinh vật NXB Nông nghiệp, Hà Nội Lê Ngọc Tú, La Văn Chử, Phạm Thị Trân Châu (1982), “Vi Sinh Vật, tập 1” NXB khoa học kỹ thuật Hà Nội 1982 Lương Đức Phẩm (2006) Công nghệ sinh học bảo quản chế biến thực phẩm Tài liệu dùng lớp cao học sinh học Viện KHCN Việt Nam Giáo trình hố sinh_ Nguyễn Thị Ngọc Hà_ ĐH Nơng Nghiệp Hà Nội Trần Xuân Ngạch (2007), Công nghệ enzyme, Trường Đại Học Bách Khoa Đà Nẵng Trần Linh Thước (2017) Phương pháp phân tích vi sinh vật NXB giáo dục Alexander, M (1971), Microbial Ecology J Wiley & Sons Inc., New York, U.S.A 10 Alexander, M (1977), Introduction to Soil Microbiology J Wiley & Sons, New York, U.S.A 11 Lowry, O H., Rosebrough, N J., Farr, A L., et al (1951) Protein measurement with the folin phenol reagent Journal of Biological Chemistry, 193, 265–275 12 Pandey, A., Webb, C., Soccol, C R., & Larroche, C (2006) Enzyme technology (p 320) New York, NY: Springer 13 Boominadhan U., R Rajakumar, P K V Sivakumaar, M M Joe (2009) Optimization of protease enzyme production using Bacillus sp isolated from different wastes, Botany Research International 14 Folasade M O and Joshua O A (2005) Production dynamics of extracellular protease from Bacillus species African Journal of Biotechnology Vol 4: 776779 42     15 Rao, M B., Tanksale, A M., Ghatge, M S and Deshpande, V V (1998) Molecular and biotechnological aspects of microbial proteases Microbiology and Molecular Biology Research, 62:597-635 16 Vadlamani, S and Parcha, S R (2011) Studies on industrially important alkaline protease production from locally isolated superior microbial strain from soil microorganisms International Journal of Biotechnology Applications, 3:102-105 17 Younes, G., Sara, R., Alireza, E., Aboozar, K., Maryam, S and Najme, T (2011) Screening and isolation of extracellular protease producing bacteria from the Maharloo Salt Lake Iranian Journal of Pharmaceutical Sciences, 7:175-180 18 Chu, W H (2007) Optimization of extracellular alkaline protease production from species of Bacillus Journal of Indian Microbiology and Biotechnology, 34:241–245 19 Harish R Chauhan, BJ (2017) Phân lập, xác định đặc tính vi sinh vật sản xuất protease từ đất nông nghiệp tinh chế protease Tạp chí Quốc tế Nghiên cứu Dược phẩm Khoa học Sức khỏe, (1): 1581-1585 43     44     Phụ lục Phụ lục 1: Hình ảnh hình thái khuẩn lạc 22 chủng phân lập 45     46     Phụ lục 2: Hình thái tế bào 22 chủng vi khuẩn 47     Phụ lục 3: Hình ảnh vòng phân giải 22 chủng vi khuẩn 48     Phụ lục 4: Trình tự chủng vi khuẩn phân lập Trình tự chủng NTG1 là: CCTTAAAGGTTCACCGTCACCGACTTNGGGTGTTACAAACTCTCGTGGTGT GACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGA TCCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCACGCAGTCGAGTTGCAGACTGCGA TCCGAACTGAGAACAGATTTGTGGGATTGGCTTAACCTCGCGGTTTCGCTG CCCTTTGTTCTGTCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCA TGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCACC TTATAGTGCCCAACTGAATGCTGGCAACTAAGATCAAGGGTTGCGCTCGTT GCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCAC CACCTGTCACTCTGCCCCCGAAGGGGACGTCCTATCTCTAGGATTGTCAGA GGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACAT GCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGTCTTGCG ACCATACTCCCCAGGCGGAGTGATTAATGCGTATATCTGCTGCACTAAGGG GNGGAAACCCCCTAACACTNAGCACTCATCGTTTACGGCGTGGACTNACA GGATATCTAATACGGTTCGCTCCCGACGTTTACGCTCCTCAGAGTCAGTTA CAGACCGGAGAGTCACCTTCACCACAGGNTTTCCTCCACATCTCTACAANA TTTCACCGCTACACGGGGAAGTGCNACCTCTCCTCCTTCGGCGCNNNAGTT CCCCCATTTTCCAATGACCCCTCCCNGGANTGAGCGGGGGGCTTTTAAATC AAAATTAAAAAAACCCGGGGGCNAGCC Trình tự chủng NBU2 là: CNCTGCCCCCTTCGGCGGCTGGCTCCATAAAGGTTACCTCACCGACTTCGG GTGTTGCAAACTCTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAA CGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCAC GCAGTCGAGTTGCAGACTGCGATCCGAACTGAGAACAGATTTGTGGGATT GGCTAAACCTTGCGGTCTCGCAGCCCTTTGTTCTGTCCATTGTAGCACGTGT GTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCT CCGGTTTGTCACCGGCAGTCACCTTAGAGTGCCCAACTAAATGCTGGCAAC TAAGATCAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACA CGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCACTCTGTCCCCGAAGGGAAA 49     GCCCTATCTCTAGGGTTGTCAGAGGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCG CGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACAGCTTGTGCGGGCCCCCGTCA ATTCCTTAGAAGTTTCAGTCTTGCTACCGTACTCCCCGGTCGTAGTACGATA ATGAATTGGCTG Trình tự chủng NBU6 là: CCTCAACCCCCTTCGGCGGCTGGCTCCTTGCGGTTACCCCACCGACTTCGG GTGTTGTAAACTCTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGACCCGGGAA CGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCAATTCCGACTTCAT GCAGGCGAGTTGCAGCCTGCAATCCGAACTGAGACTGGCTTTTTAGGATTC GCTCCGCCTCGCGGCTTCGCTTCCCGTTGTACCAGCCATTGTAGTACGTGTG TAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTC CGGTTTGTCACCGGCAGTCACTCTAGAGTGCCCAACTCAATGCTGGCAACT AAAGTTAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACAC GAGCTGACGACAACCATGCTCCACATGTCACCTCTGCCCCGAAGGGAAGC CCTATATCTAGGACGGTCAGAGGGATGTCAAAACCTGGGGAGGTTGATCT CGTGGCTTCGAATTATACCCCATACTCC Trình tự chủng NNU1 là: NTGACCACCATTCGGCGGCTGGCTCCTAAAAGGTTACCTCACCGACTTCGG GTGTTACAAACTCTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAA CGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCAC GCAGTCGAGTTGCAGACTGCGATCCGAACTGAGAACAGATTTGTGGGATT GGCTTAACCTCGCGGTTTCGCTGCCCTTTGTTCTGTCCATTGTAGCACGTGT GTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCT CCGGTTTGTCACCGGCAGTCACCTTAGAGTGCCCAACTGAATGCTGGCAAC TAAGATCAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACA CGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCACTCTGCCCCCGAAGGGGAC GTCCTATCTCTAGGATTGTCAGAGGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCG CGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCA ATTCCTTTGAGTTTCAGTCTTGCGACCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAAT GCGTTAGCTGCAGCACTAAGGGGCGGAGACCCCCTAACACTTAGCACTCA TCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTCCCCACGC 50     TTTCGCTCCTCAGCGTCAGTTACAGACCAGAGAGTCGCCTTCGCCACTGGT GTTCCTCCACATCTCTACGCATTTCACCGCTACACGTGGAATTCCACTCTCC TCTTCTGCACTCAAGTTCCCCAGTTTCCAATGACCCTCCCCGGTTGAGCCGG GGGCTTTCACATCAGACTTAAGAAACCGCCTGCGAGCCCTCTACGCCCAAT AATTCTGGACAACACTTGCCNCCTACGTATTACCGCCGCTGNTGGCNCGTA ATTANACATCGCCTGTTTNTTTAGGAACNCNCCACGGACGGCCCTNTTCTA ACGGAAGTTGTTTTTCCTCACAAAAGAGCTTTNNATCCGAAAGACANCTTC CTCCACCGGCGGTTGTTCGTTCAATTTCTTCCTTTGCGGAAGAAT Trình tự chủng NBN2 là: GGGTCCCGCCCGAGCTAGTGTTACCTTCGGCGGCTGGCTCCTAAAAGGTTA CCTCACCGACTTCGGGTGTTACAAACTCTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGT ACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAG CGATTCCAGCTTCACGCAGTCGAGTTGCAGACTGCGATCCGAACTGAGAAC AGATTTGTGGGATTGGCTTAACCTCGCGGTTTCGCTGCCCTTTGTTCTGTCC ATTGTAGCACGTGTGTAGCCTTGGTCATATGGGGCATCATGATGTGAGGTC CTCCCCCGTTCCTCGTGTTAGACGCCGGATGTTGACCTTTGAAGTCCGATG GGGGTGCTGCGGGGGGACGACGGGTGTGTGGAAGAGAATGGGAACGGGA ATGTTTACGGTGTGCGGGGGCCGAGGGA 51     Phụ lục 5: Hình ảnh poster hội thảo cơng nghệ sinh học toàn quốc Huế 52