Phân lập và nghiên cứu đặc điểm của một số chủng nấm gây bệnh thán thư trên cây nha đam (khóa luận tốt nghiệp)

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “PHÂN LẬP VÀ NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM CỦA MỘT SỐ CHỦNG NẤM GÂY BỆNH THÁN THƯ TRÊN CÂY NHA ĐAM” Sinh viên thực : Nguyễn Thị Hương Giang Khóa : 62 Ngành : Công nghệ sinh học Người hướng dẫn : ThS Trần Thị Hồng Hạnh HÀ NỘI – 2021 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan khóa luận hồn tồn hồn thiện tìm hiểu, nghiên cứu khoa học thân hướng dẫn Ths Trần Thị Hồng Hạnh-bộ môn Công nghệ vi sinh-khoa Công nghệ sinh học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam Các nội dung nghiên cứu kết trình bày luận văn trung thực, không chép tài liệu, cơng trình nghiên cứu người khác mà không rõ nguồn gốc tham khảo Tôi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan trước hội đồng nhà trường Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Sinh viên Nguyễn Thị Hương Giang i LỜI CẢM ƠN Sau thời gian làm đề tài tốt nghiệp Bộ môn Công nghệ vi sinh, giúp đỡ tận tình dạy thầy phịng thí nghiệm với cố gắng học tập thân, tơi hồn thành tốt khóa luận tốt nghiệp Đầu tiên em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới giảng viên Ths Trần Thị Hồng Hạnh-bộ môn Công nghệ vi sinh định hướng đề tài, nhiệt tình giúp đỡ truyền đạt kinh nghiệm quý báu cho suốt q trình thực đề tài Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy cô mơn Cơng nghệ vi sinh tồn thể anh chị, bạn bè nghiên cứu phịng tí nghiệm giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian làm đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn ban Giám đốc Học viện với thầy cô khoa Công nghệ sinh học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam truyền đạt kiến thức bổ ích suốt bốn năm ngồi ghế giảng đường tiền đề để tơi hồn thành tốt khóa luận Cuối cùng, tơi biết ơn gia đình ln bên ủng hộ chỗ dựa tinh thần vững cho tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Sinh viên Nguyễn Thị Hương Giang ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ix TÓM TẮT x PHẦN I: MỞ ĐẦU 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.3.1 Ý nghĩa khoa học 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Cây nha đam 2.1.1 Nguồn gốc 2.1.2 Đặc điểm thực vật học 2.1.3 Giá trị dược liệu 2.1.4 Giá trị dinh dưỡng 2.2 Một số bệnh nấm gây nha đam 2.2.1 Bệnh thán thư 2.2.2 Bệnh đốm 2.2.3 Bệnh thối rễ thân 2.3 Giới thiệu nấm Colletotrichum spp 2.3.1 Nguồn gốc 2.3.2 Đặc điểm hình thái iii 2.3.3 Con đường xâm nhập 2.3.4 Nấm Colletotrichum gloeosporioides gây bệnh thán thư 2.4 Tình hình nghiên cứu nấm Colletotrichum gây bệnh thán thư 10 2.4.1 Tình hình nghiên cứu giới 10 2.4.2 Tình hình nghiên cứu nước 12 2.5 Một số biện pháp phòng bệnh nấm Colletotrichum gây 13 PHẦN III: VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 3.1 Đối tượng nghiên cứu 14 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 14 3.3 Vật liệu nghiên cứu 14 3.3.1 Mẫu bệnh dùng nghiên cứu 14 3.3.2 Một số môi trường nuôi nấm 14 3.3.3 Hóa chất dụng cụ thí nghiệm 15 3.4 Nội dung nghiên cứu 15 3.4.1 Lấy mẫu phân lập mẫu nấm Colletotrichum số tỉnh Việt Nam 15 3.4.2 Nghiên cứu dặc điểm sinh học nấm Colletotrichum (hình thái tản nấm, sợi nấm, bào tử đĩa áp) 15 3.4.3 Ảnh hưởng số yếu tố đến sinh trưởng nấm 15 3.4.4 Định danh số chủng nấm Colletotrichum phương pháp phân tử (Tách chiết, PCR, xây dựng phân loại) 15 3.5 Phương pháp nghiên cứu 15 3.5.1 Phương pháp lấy mẫu bệnh đồng ruộng 15 3.5.2 Phương pháp phân lập mẫu bệnh 15 3.5.3 Nghiên cứu số đặc điểm sinh học nấm Colletotrichum spp 16 3.5.4 Phương pháp giữ giống 17 3.5.5 Phương pháp đếm số lượng tế bào sống (CFU) đĩa thạch 17 iv 3.5.6 Phương pháp lây nhiễm nhân tạo 18 Phương pháp lây bệnh nhân tạo mô tả theo Avasthi et al., 2011 18 3.5.7 Phương pháp tách chiết DNA 18 Sử dụng phương pháp Masoomi-Aladizgeh cộng sự, 2016 để tách chiết DNA nấm 18 3.5.8 Phương pháp điện di 19 3.5.9 Phương pháp PCR 19 3.5.10 Giải trình tự gen 20 PHẦN IV: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 21 4.1 Thu thập phân lập mẫu nấm Colletotrichum spp gây bệnh thán thư nha đam 21 4.2 Lây nhiễm nhân tạo chủng nấm Colletotrichum gây bệnh thán thư nha đam 23 4.3 Đặc điểm sinh học chủng nấm gây bệnh thán thư phân lập 25 4.3.1 Đặc điểm hình thái 25 4.3.2 Ảnh hưởng thời gian đến sinh trưởng tản nấm 30 4.3.3 Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy 31 4.3 Định danh phân tử nấm Colletotrichum 41 4.3.1 Tách chiết DNA tổng số 41 4.3.2 Kết PCR 42 4.3.3 Đọc trình tự sản phẩm PCR 43 PHẦN V: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 46 5.1 Kết luận 46 5.2 Kiến nghị 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 PHỤ LỤC 55 v DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Thành phần phản ứng PCR 20 Bảng 4.1 Kết thu thập phân lập mẫu nghi bị bệnh thán thư nha đam 21 Bảng 4.2 Đặc điểm hình thái tản nấm phân lập môi trường PDA 22 Bảng 4.2 Đặc điểm hình thái tản nấm phân lập môi trường PDA 23 Bảng 4.3 Đường kính chủng Colletotrichum qua ngày ni cấy 30 Bảng 4.4 Ảnh hưởng nhiệt độ đến phát triển nấm 34 vi DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Bệnh thán thư nấm Colletotrichum gây nha đam (Shutrodhar Shamshi, 2013) Hình 2.2 Bệnh đốm nấm gây nha đam (Swapan K Ghosh, 2018) Hình 2.3 Bệnh thối nấm Fusarium gây nha đam (Avasthi et al., 2018) Hình 4.1 Triệu chứng bệnh thán thư nấm Colletorichum gây hại nha đam 21 Hình 4.2 Triệu chứng bệnh thán thư nha đam chủng nấm Colletotrichum gây 24 Hình 4.3 Hình thái mặt trước tản nấm (A), Hệ sợi cuống sinh bào tử (B), Bào tử (C), Đĩa áp (D) chủng nấm Colletotrichum (TB2) gây bệnh thán thư nha đam 26 Hình 4.4 Hình thái mặt trước tản nấm (A), Hệ sợi cuống sinh bào tử (B), Bào tử (C), Đĩa áp (D) chủng nấm Colletotrichum (BV1) gây bệnh thán thư nha đam 27 Hình 4.5 Hình thái mặt trước tản nấm (A), Hệ sợi cuống sinh bào tử (B), Bào tử (C), Đĩa áp (D) chủng nấm Colletotrichum (HN5) gây bệnh thán thư nha đam 28 Hình 4.6 Hình thái mặt trước tản nấm (A), Hệ sợi cuống sinh bào tử (B), Bào tử (C), Đĩa áp (D) chủng nấm Colletotrichum (GL3) gây bệnh thán thư nha đam 29 Hình 4.7 Đường kính tản nấm chủng Colletotrichum sau ngày nuôi cấy 31 Hình 4.8 Ảnh hưởng mơi trường đến đường kính tản nấm sau ngày ni cấy 32 vii Hình 4.9 Ảnh hưởng mơi trường đến sinh trưởng TB2 sau ngày nuôi cấy 33 Hình 4.10 Ảnh hưởng nhiệt độ đến sinh trưởng nấm TB2 sau ngày nuôi cấy 35 Hình 4.11 Ảnh hưởng pH đến đường kính tản nấm sau ngày ni cấy 35 Hình 4.12 Ảnh hưởng pH đến sinh trưởng nấm TB2 sau ngày nuôi cấy 37 Hình 4.13 Ảnh hưởng nguồn carbon đến đường kính tản nấm sau ngày ni cấy 37 Hình 4.14 Ảnh hưởng nguồn carbon đến đường kính nấm TB2 sau ngày ni cấy 38 Hình 4.15 Ảnh hưởng nguồn nitrogen đến đường kính tản nấm sau ngày ni cấy 39 Hình 4.16 Ảnh hưởng nguồn nitrogen đến đường kính nấm TB2 sau ngày nuôi cấy 40 Hình 4.17 Khả sinh enzyme cellulase chủng nấm Colletotrichum 41 Hình 4.18 Ảnh điện di DNA tổng số TB2 BV1 42 Hình 4.19 Ảnh điện di sản phẩm PCR nấm Colletotrichum TB2 BV1 43 Hình 4.20 Xây dựng phát sinh lồi dựa vào vùng trình tự ITS chủng TB2 44 Hình 4.21 Xây dựng phát sinh lồi dựa vào vùng trình tự ITS chủng BV1 44 viii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT BLAST Basic Local Alignment Search Tool Bp Base pairs C Colletotrichum CS Cộng ĐC Đối chứng DNA Deoxyribonucleic acid F Fusarium NCBI National Center for Biotechnology Information NXB Nhà xuất PDA Potato Dextrose Agar PCA Potato Carrot Agar PCR Polymer Chain Reaction SDA Sabouraud Dextrose Agar TAE Tris-acetate-EDTA WA Water agar CFU Colony Foming Unit ix chất thải chăn ni Đồng Tháp Tạp chí Khoa học 32: 58-68 Trường Đại học Cần Thơ 12 TCVN 6404:2016 (ISO 7218:2007) Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi - Yêu cầu chung hướng dẫn kiểm tra vi sinh vật 13 Đặng Thị Kim Uyên, Trần Vũ Phến Nguyễn Văn Hòa (2018) Xác định nấm Colletotrichum truncatum gây bệnh thán thư long hiệu dịch trích thảo mộc lên phát triển nấm Tạp chí Khoa học Công nghệ Nông nghiệp Việt Nam - Số 1(86) B Tài liệu tiếng anh Afanador-Kafuri, L., Minz, D., Maymon, M., and Freeman, S., 2003 Characterization of Colletotrichum isolates from tamarillo, Passiflora and mango in Colombia and identification of a unique species from the genus Phytopathology 93: 579-587 Agrios, G.N., 2005 Plant Pathology 5th edition Dana Dreibelbis Department of plant pathology, University of Florida 922 pages Surjushe, A., Vasani, R., Saple, D.G., 2008 “Aloe vera: A short review”, Indian Journal of Dermatology, vol 53 (4), pp 163-166 Avasthi, S., Gautam, A.K., Bhadauria, R., 2011 First report of anthracnose disease of Aloe vera caused by Colletotrichum gloeosporioides Journal of Research in Biology, 6: 408–410 Avasthi, S., Gautam, A.K., Bhadauria, R., 2015a Occurrence of leaf spot diseases on Aloe vera (L.) Burm.f caused by Curvularia species from Madhya Pradesh, India Biodiversitas 16: 79 – 83 Avasthi, S., Gautam, A.K., Bhadauria, R., 2015b First report of Penicillium purpurogenum causing collar and root rot infection in Aloe vera Plant Pathology & Quarantine, (1): 20–24 Avasthi, S., Gautam, A.K., Bhadauria, R., 2018 Isolation and Characterization of Fusarium species causing leaf spot and root rot diseases on Aloe vera Journal on New Biological Reports, 7(1) 001 – 009 48 Ansari, A., Khanzada, M.A., Rajput, M.A., Maitlo, S., Rajput, A.Q., Ujjan, A., 2018 Effect of different abiotic factors on the growth and sporulation of Colletotrichum gloeosporioides causing anthracnose of mango Plant Protection, 02 (01) 23-30 Armesto, C., Maia, F G M., Monteiro, F P., 2020 Exoenzymes as a pathogenicity factor in Colletotrichum gloeosporioides associated with coffee trees Summa phytopathol 10 Barnett, H.L., and Hunter, B.B., 1998 Illustrated Genera of Imperfect Fungi 4th Edition, APS Press, St Paul, 218 p 11 Bolton, M.D., Thomma, B.P.H.J., 2006 Sclerotinia sclerotiorum (Lib) de Bary: biology and molecular traits of a cosmopolitan pathogen Molecular Plant Pathology, London, v.7, n.1, p.1-6 12 Boudreau, M.D., Beland, F.A., 2006 An evaluation of the biological and toxicological properties of Aloe barbadensis (Miller) J Environ Sci Health 24:103-154 13 Cannon, P.F., Bridge, P.D., and Monte, E., 2000 Linking the past, present and future of Colletotrichum systematics In: Colletotrichum Host Specificity, Pathology and Host-Pathogen Interaction (eds D Prusky, S Freeman and M.B Dickman) APS Press, St Paul, Minnesota: 1-20 14 CABI (2003) Glomerella cingulata Crop Protection Compendium 15 Cedẽno, L., Brico, R., Fermín, G., 2010 Anthracnose on aloe caused by Colletotrichum gloeosporioides at the arid zone of Mérida State, Venezuela Fitopatología Venezolana 23(2):3034 16 Daodu, T., 2000 Aloe vera, the miracle healing plant Health feild Corporation, Lagos, 36 17 Damm, U., Cannon, P F., Woudenberg, J.H.C., & Crous, P W., (2012) The Colletotrichum acutatum species complex Stud Mycol 73: 37-113 18 Dean, R., Van Kan, J A., Pretorius, Z A., Hammond-Kosack, K E., Di Pietro, A., Spanu, P D., & Foster, G D., 2012 The Top 10 fungal pathogens in molecular plant pathology Molecular plant pathology, 13(4), 414-430 49 19 Freeman, S., Minz, D., Jurkevitch, E., Maymon, M., & Shabi, E., 2000 Molecular analyses of Colletotrichum species from almond and other fruits Phytopathology 90: 608-614 20 Guo, M., Pan, Y.M., Dai, Y.L., Gao, Z.M., 2013 First Report of Leaf Spot Caused by Colletotrichum spaethianumon on Peucedanum praeruptorumin China Plant Disease, 97,1380 21 Hegde, Y.R., Hegde, R.K., & Kulkarni, S., 1990 Studies on Nutritional Requirements of Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz and Sac A Causal Agent of Anthracnose of Arecanut, Mysore J Agric Sci 24:358-359 22 Huang, J.S., 2001 Plant pathogenesis and resistance: biochemistry and physiology of plant-microbe interactions Netherlands: Springer Chapter 2, Degradation of cell walls by plant pathogens; p 51–130 23 Hyde, K.D., Cai, L., Cannon, P.F., Crouch, J.A., Crous, P.W., Damm, U.,Goodwin, P.H., Johnston, P.R., Jones, E.B.G., Liu, Z.Y., Moriwaki, J., Noireung, P., Pennycook, S.R., Pfenning, L.H., Prihastuti, H., Sato, T., Shivas, R.G., Tan, Y.P., Taylor, P.W.J., Weir, B.S., Yang, Y.L., Zhang, J.Z., 2009a Colletotrichum names in current use Fungal Divers 39:147–183 24 Isaac, S., 1992 Fungal Plant Interaction London: Chapman and Hall Press 25 Jeffries, P., Dodd, J.C., Jeger, M.J., Plumbley, R.A., 1990 The biology and control of Colletotrichum species on tropical fruit crops, Plant pathology, Vol 39(3), pp 343 – 366 26 Ji, G., Wei, L., He, Y., & Wu, Y., 2007 First Report of Aloe Root and Stem Rot in China Caused by Fusarium solani Plant Disease 91(6): 768 27 Zhu, J.Z., Li, C.X., Ma, Y.M., Zhong, J., Li, X.G., 2020 First Report of Fusarium xylarioides causing root and stem rot on Aloe vera in China 28 Kim, K.D., Oh, B.J., Yang, J., 1999 Differential interactions of a Colletotrichum gloeosporioides isolate with green and red pepper fruits Phytoparasitica 27, 96-16 50 29 Kumar, K.R.P., Ramaswamy, G.R., Chandrashekar, S.C., & Gurumurthy, K.T., 2006 Cultural, Nutritional and Physiological Studies on Collectorichum gloeosporioids Causing Inflorescence Die-back-Disease of Arecanut Karnataka J Agric Sci.,19(2): (312-317) 30 Kumara, K.L.W., & Rawal, R.D., 2008 Influence of carbon, nitrogen, temperature and pH on the growth and sporulation of some Indian isolates of C gloeosporioides causing anthracnose disease of papaya (Carrica papayaL.) Tropical Agricultural Research and Extension, 11: 7-12 31 Kubicek, C.P., Starr, T.L., Glass, N.L., 2014 Plant cell wall-degrading enzymes and their secretion in plant-pathogenic fungi Annu Rev Phytopathol 52:427–451 32 KUMARI, M., JHA, K., & Etiology, P., 2020 Symptomatology and Management of Black Spot of Aloe vera (Aloe barbadensis Miller) through Botanicals and Biocontrol Agents – A Brief Review Current Journal of Applied Science and Technology 33 Leharwan, A., Malik, V.K., Singhand, R., & Leharwan, M., 2018 Effect of Culture Media and Temperature on Growth and Sporulation Colletotrichum gloeosporioidescause of Anthracnose Disease of Mango International Journal of Current Microbiology and Applied Sciences 7(12): 18351842 34 Mills, P.R., Hodson, A., & Brown, A.E., 1992 Molecular differentiation of Colletotrichum isolates infecting tropical fruits In: Colletotrichum: Biology, Pathology and Control (eds J.A Bailey and M.J Jeger) CAB International: Wallingford: 269-288 35 Martínez-Culebras, P V., Barrio, E., García, M D., & Querol, A., 2000 Identification of Colletotrichum species responsible for anthracnose FEMS Microbiology Letters 189(1), 97-101 36 Masoomi-Aladizgeh, F., Jabbari, L., Nekouei, R.K., & Aalami, A., 2016 A Simple and Rapid System for DNA and RNA Isolation from Diverse Plants Using Handmade Kit 51 37 O′Connell, R.J., Perfect, S., Hughes, B., Carzaniga, R., Bailey, J.A., Green, J., (2000) Dissecting the Cell Biology of Colletotrichum Infection Processes In: Bailey JA, Jegar MJ, editors Colletotrichum: Biology, Pathology, and Control Wallingfords, UK: CAB International 38 Perfect, S.E., Hughes, H.B., O′Connell, R.J., Green, J.R., 1992 Colletotrichum: a model genus for studies on pathology and fungal-plant interactions Fungal Genetics and Biology 27(2-3):186–198 39 Photita, W., Taylor, P.W.J., Ford, R., Hyde, K.D., & Lumyong, S., 2005 Morphological and molecular characterization of Colletotrichum species from herbaceous plants in Thailand Fungal Diversity 18: 117-133 40 Ponnuswamy, V., Vincent, S.G.P., 2013 A simpl method for the detection of protease activity on agar plates using bromocresol green dye J Biochem Tech 4: 628-630 41 Suryaningsih, E., Wah, E.Y., Opina, E.Y., Boujlodchoedchu, R., Hartman, G.L., & Wang, T.C., 1989 Anthracnose of pepper, AVNET Report, AVRDC Shanhua, Taiwan, China, p 39 42 Sutton, B.C., 1992 The genus Glomerella and its anamorph Colletotrichum In: Colletotrichum: Biology, Pathology and Control (eds J.A Bailey and M.J Jeger) CAB International: Wallingford: 1-26 43 Sangeetha, C.G., 2003 Studies on anthracnose of mango caused by Colletotrichum gloeosporioides(Penz.) Penz and Sacc., PhD Thesis, Univ Agric Sci., Bangalore, pp 77-156 44 Sreenivasaprasad, S., Talhinhas, P., Neves-Martins, J., & Oliveira, H., 2005 Molecular and phenotypic analyses reveal association of diverse Colletotrichum acutatum groups and a low level of C gloeosporioides with olive anthracnose Applied and Environmental Microbiology, 71(6): 2987-2998 45 Schoch, C L., Seifert, K A., Huhndorf, S., Robert, V., Spouge, J L., Levesque, C A., & Miller, A N., 2012 Nuclear ribosomal internal transcribed spacer (ITS) region as a universal DNA barcode marker for Fungi Proceedings of the National Academy of Sciences, 109 (16), 6241−6246 46 Shutrodhar, A.R., & Shamsi, S., 2013 Anthracnose and leaf spot diseases of Aloe Vera L from Bangladesh Dhaka Dhaka University Journal of 52 Biological Sciences 22(2): 103-108 47 Swapan, K., Ghosh., 2018 Encountering epidemic effects of leaf spot disease (Alternaria brassicae) on Aloe vera by fungal biocontrol agents in agrifields-An ecofriendly approach PLoS One 13(3): e0193720 48 Tamura, K., Stecher, G., Peterson, D., Filipski A., & Kumar, S., 2013 MEGA6: Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 6.0 Molecular Biology and Evolution, 30: 2725-2729 49 Udhayakumar, R., & Rani, S U., 2010 Effect of pH levels, carbon and nitrogen sources on the mycelial growth andbio- mass production of Colletotrichum gloeosporioides(Penz.) Penz and Sacc International Journal of Plant Protection, Vol No : 1-4 50 Vinnere, O., 2004 Approaches to species delineation in anamorphic (mitosporic) fungi: a study on two extreme cases PhD thesis, University of Uppsala, Sweden 51 Vakalounakis, D.J., Kavroulakis, N., Lamprou, K., 2015 First report of Fusarium oxysporum causing root and crown rot on Barbados aloe in Greece Plant Disease 99 (11), 1649 52 Weir, B., Johnston, P., & Damm, U., 2012 The Colletotrichum gloeosporioides species complex Studies in Mycology, 73:115-180 53 Xiao, C.L., MacKenzie, S.J., & Legard, D.E., 2004 Genetic and pathogenic analyses of Colletotrichum gloeosporioides isolates from strawberry and noncultivated hosts Phytopathology 94: 446-453 54 Yee, M.F., & Sariah, M., 1993 Comparative Morphology and Characterization of Colletotrichum Isolates Occurring on Cocoa in Malaysia Perlanika j of Trop Agric Sci 16(1):45-51 Một số link: http://dost-bentre.gov.vn/tin-tuc/637/benh-than-thu-colletotrichumgloeopsoriodes Lô hội Truy cập ngày 1/10/2020 https://vi.wikipedia.org/wiki/L%C3%B4_h%E1%BB%99i Đoàn Thị Thúy Hiền (2019) Cây nha đam Truy cập ngày 5/10/2020 https://thuocdantoc.vn/duoc-lieu/cay-nha-dam 53 https://vi.wikipedia.org/wiki/B%E1%BB%87nh_th%C3%A1n_th%C6%B0 https://ansachuongsach.vn/chia-se-kinh-nghiem/cam-nang-lam-vuon/benhthan-thu https://nhandan.com.vn/kinhte/trong-nha-dam-tren-dat-han-man-458009/ 54 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Các chủng nấm phân lập TB1 BV5 GL2 HN4 GL4 TB3 HN2 HN3 GL1 BV2 BV3 BV4 HN1 GL6 GL5 55 Phụ lục 2: Ảnh hưởng môi trường đến sinh trưởng phát triển nấm Colletotrichum sau ngày 1BV HN5 GL3 PDA SDA WA Czapek 56 Phụ lục 3: Hình ảnh nhiệt độ ảnh hưởng đến phát triển tản nấm sau ngày BV1 HN5 GL3 20ºC 30ºC 37ºC 40ºC 57 Phụ lục 4: Hình ảnh pH ảnh hưởng đến phát triển tản nấm sau ngày pH BV1 HN5 GL3 58 pH BV1 HN5 GL3 10 59 Phụ lục 5: Ảnh hưởng nguồn carbon đến đường kính tản nấm sau ngày BV1 HN5 GL3 Glucose Fructose Mantose Galactose Lactose 60 Phụ lục 6: Ảnh hưởng nguồn nitrogen đến đường kính tản nấm sau ngày BV1 HN5 GL3 Peptone Tryptone KNO3 NH4Cl (NH4)2SO4 NaNO3 61 Phụ lục 7: Hình ảnh thử hoạt tính amylase 62