Nghiên cứu đặc điểm sinh học của chủng vi khuẩn tía quang hợp có khả năng xử lý nước thải đậu nành vinasoy bắc ninh (khóa luận tốt nghiệp)

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA CHỦNG VI KHUẨN TÍA QUANG HỢP CÓ KHẢ NĂNG XỬ LÝ NƯỚC THẢI ĐẬU NÀNH VINASOY BẮC NINH Người thực hiện: NGUYỄN THỊ BÍCH HẰNG Khố: K62CNSHB Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Người hướng dẫn: TS HOÀNG THỊ YẾN TS ĐINH TRƯỜNG SƠN Hà Nội – 2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan, số liệu kết nghiên cứu khóa luận trung thực Tôi xin cam đoan, giúp đỡ việc hồn thành khóa luận cảm ơn thơng tin trích dẫn khóa luận ghi rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 03 tháng 03 năm 2021 Sinh viên Nguyễn Thị Bích Hằng LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành Đề tài tốt nghiệp trước hết tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Hoàng Thị Yến - cán Phịng Thí nghiệm trọng điểm Cơng nghệ gen, Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Người Thầy trực tiếp quan tâm, giúp đỡ, tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi dạy bảo thời gian thực Đề tài tốt nghiệp Viện Công nghệ sinh học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Tiếp theo, xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến TS Đinh Trường Sơn - cán giảng dạy môn Công nghệ sinh học Thực vật, Khoa Công nghệ sinh học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam - người Thầy hướng dẫn động viên suốt thời gian vừa qua Ngồi ra, tơi xin chân thành cảm ơn CN Trần Thu Hà ThS Trần Thị Thu Quỳnh - cán nghiên cứu Phịng Thí nghiệm trọng điểm Cơng nghệ gen, Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam tận tình bảo, giúp đỡ cho tơi ý kiến đóng góp bổ ích trình thực Đề tài tốt nghiệp Tơi trân trọng tình cảm giúp đỡ q báu Tơi xin gửi đến Q thầy cô Khoa Công nghệ sinh học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam lời cảm ơn thầy cô dạy dỗ, tạo điều kiện thuận lợi học tập, truyền đạt vốn kiến thức quý báu cho suốt bốn năm qua Cuối cùng, xin bày tỏ lịng biết ơn vơ hạn tới ơng bà, cha mẹ người thân gia đình, tồn thể bạn bè, bên cạnh giúp đỡ, động viên, khuyến khích, ủng hộ vật chất lẫn tinh thần cho suốt thời gian qua Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 03 tháng 03 năm 2021 Sinh viên Nguyễn Thị Bích Hằng MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC BẢNG iv DANH MỤC HÌNH vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vii TÓM TẮT ix Phần I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích 1.3 Yêu cầu Phần II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan nước thải sữa đậu nành 2.1.1 Nguồn gốc phát sinh nước thải nhà máy chế biến sữa đậu nành 2.1.2 Thành phần, tính chất nước thải nhà máy sữa 2.2 Các phương pháp xử lý nước thải nhà máy sữa đậu nành 2.2.1 Xử lý phương pháp học 2.2.2 Xử lý phương pháp hóa lý 2.2.3 Xử lý phương pháp sinh học, hóa sinh 2.3 Tổng quan vi khuẩn tía quang hợp 11 2.3.1 Khái niệm vi khuẩn tía quang hợp 11 2.3.2 Đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hố vi khuẩn tía quang hợp 12 2.3.3 Ứng dụng VKTQH xử lý nước thải 24 Phần III VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 3.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu 28 3.2 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 28 3.2.1 Đối tượng 28 3.2.2 Hóa chất, mơi trường thiết bị máy móc 28 3.3 Phương pháp nghiên cứu 30 3.3.1 Phương pháp nuôi cấy VKTQH 30 3.3.2 Phương pháp đánh giá sinh trưởng VKTQH 30 3.3.3 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm hình thái khuẩn lạc, tế bào 30 3.3.4 Phương pháp nghiên cứu hệ sắc tố VKTQH 30 3.3.5 Phương pháp xác định khả sử dụng muối cho sinh trưởng 31 3.3.6 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng pH ban đầu cho sinh trưởng 31 3.3.7 Phương pháp xác định khả sử dụng sulfide cho sinh trưởng 31 3.3.8 Phương pháp xác định trình tự gen 16S rRNA 31 Phần IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37 4.1 Kết nghiên cứu đặc điểm sinh học 37 4.1.1 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc, tế bào 37 4.1.2 Đường cong sinh trưởng 37 4.1.3 Đặc điểm hệ sắc tố quang hợp 39 4.1.4 Ảnh hưởng nồng độ muối đến khả sinh trưởng chủng SoyN 40 4.1.5 Ảnh hưởng pH ban đầu đến khả sinh trưởng chủng SoyN 42 4.1.6 Ảnh hưởng sulfide đến khả sinh trưởng chủng SoyN 43 4.2 Xác định trình tự gen chủng vi khuẩn nghiên cứu 46 4.2.1 Khuếch đại gen 16S rRNA chủng VKTQH lựa chọn 46 4.2.2 Kết giải trình tự gen 16S rRNA 48 4.2.3 Xây dựng phát sinh chủng loại số loài VKTQH 49 Phần V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 51 5.1 Kết luận 51 5.2 Kiến nghị 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 PHỤ LỤC 57 DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Nồng độ chất ô nhiễm nước thải đầu vào Bảng 2.2 So sánh cực đại hấp thụ hai dạng Bacteriochlorophyll a b VKTQH (trong tế bào nguyên dịch chiết ete) 14 Bảng 3.1 Thành phần phản ứng PCR 34 Bảng 4.1 Sinh trưởng (theo OD660) chủng SoyN2 ngày nuôi cấy 38 Bảng 4.2 Sinh trưởng (theo ∆OD660) chủng SoyN2 sau ngày nuôi cấy môi trường DSMZ-27 lỏng nồng độ muối khác 41 Bảng 4.3 Sinh trưởng (theo ∆OD660) chủng SoyN2 sau ngày nuôi cấy môi trường DSMZ-27 lỏng chuẩn pH khác 42 Bảng 4.4 Sinh trưởng (theo ∆OD660) chủng SoyN2 sau ngày nuôi cấy môi trường DSMZ-27 lỏng nồng độ Na2S khác 44 Bảng 4.5 Một số đặc điểm hình thái, sinh lý sinh hóa chủng VKTQH (SoyN2) so sánh với loài gần gũi 46 Bảng 4.6 So sánh kết giải trình tự gen 49 DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Hình dạng tế bào số đại diện VKTQH không lưu huỳnh (Pfennig, 1969) 12 Hình 2.2 Sơ đồ cấu tạo dạng chromotophor VKTQH 15 Hình 2.3 Sơ đồ định vị thành phần máy quang hợp sơ cấp VKTQH 15 Hình 2.4 Mạch truyền điện tử tảo vi khuẩn bậc cao VKTQH 16 Hình 4.1 Hình dạng khuẩn lạc, tế bào chủng SoyN 37 Hình 4.2 Đường cong sinh trưởng chủng VKTQH SoyN 39 Hình 4.3 Phổ hấp phụ dịch huyền phù tế bào chủng SoyN 40 Hình 4.4 Sinh trưởng chủng SoyN nồng độ muối khác 41 Hình 4.5 Sinh trưởng chủng SoyN2 mơi trường có pH ban đầu khác 43 Hình 4.6 Sinh trưởng chủng SoyN nồng độ Na S khác SoyN 46 Hình 4.7 Ảnh điện di ADN tổng số 47 Hình 4.8 Ảnh điện di sản phẩm PCR 48 Hình 4.9 Cây phát sinh chủng loại số lồi VKTQH khơng lưu huỳnh 50 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT BOD Biochemical Oxygen Demand – Nhu cầu oxy sinh hoá 3-PGA phosphoglyxeric acid ATP Adenosine Triphosphat Bchl Bacteriochlorophyll bp Base pair (Cặp bazơ nitơ) COD Chemical Oxygen Demand – Nhu cầu oxi hoá học cs Cộng Cyt Cytochrom ddNTP Dideoxynucleotide DMSO dimethylsulfur oxit DNA deoxyribonucleic acid dNTP Deoxyribonucleotide triphosphate DSMZ Douth samlung microoganisms zentrum ED Entner- Doudoroff EMP Embden-Meyerhof EtBr Ethidium Bromide F Forward GOGAT Glutamine-2-oxoglutarate aminotransferase hay glutamate sythase GS glutamine synthetase ICL isocitrate lyase Kb Kilo base KDG 2-keto-3-deoxygluconate M Marker OAA axít oxaloacetate OD Optical Density (Mật độ quang) PC pyruvate carboxylase PCR Polymerase Chain Reaction (Phản ứng chuỗi trùng hợp) PEP phospho Enol Pyruvate PEP- synthase phosphate enol pyruvate synthase PEPCK PEP- carboxykinase PK pyruvate kinase PTS phosphotransferase R Reverse RC Trung tâm phản ứng quang hóa rRNA Ribonucleic Acid Ru-5-P ribulozo 5-phosphate SBR Sequencing Biological Reactor – Công nghệ phản ứng sinh học theo mẻ SCP Single cell protein- protein đơn bào SS Suspended solid-Chất rắn lơ lửng Taq Thermus aquaticus TB Trung bình TMAO trimethylamin N-oxit VK Vi khuẩn VKTQH Vi khuẩn tía quang hợp VSV Vi sinh vật Bảng 4.6 So sánh kết giải trình tự gen Trình tự gen 16S rRNA Chủng chủng vi khuẩn so sánh Rhodopseudomonas palustris ATCC 17003 Rhodopseudomonas palustris S55 Rhodopseudomonas palustris NTUIOB YSC4 SoyN Rhodopseudomonas palustris P1 Rhodopseudomonas.sp JA368 Rhodopseudomonas.sp S-1 Tổng điểm Độ tương đồng (%) Mã số truy cập GenBank 2414 99,70 AB498816.1 2414 99,70 D84187.1 2412 99,77 AB767254.1 2412 99,77 JX876953.1 2407 99,62 FM877678.1 2401 99,55 KC491187.1 4.2.3 Xây dựng phát sinh chủng loại số lồi VKTQH Sau có kết giải trình tự gen, tiến hành so sánh trình tự gen thu với trình tự lồi cơng bố Ngân hàng gen Quốc tế (NCBI) Và để làm sáng tỏ mối quan hệ di truyền chủng SoyN , tiến hành xây dựng phát sinh chủng loại dựa sở so sánh trình tự nucleotide gen 16S rRNA chủng SoyN với 11 loài công bố Genbank Sử dụng phần mềm ClustalX Megablast, xây dựng chủng loại chủng vi khuẩn nghiên cứu với lồi gần gũi (Hình 4.9) 49 Rhodobacter veldkampii (NR 043405.1) Rhodobacter sphaeroides (MG576212.1) Rhodobacter blasticus (NR 043735.1) Rhodovulum strictum (NR 025845.1) Rhodovulum sulfidophilum (LC596064.1) Rhodovulum adriaticum (NR 043404.1) Rhodocista pekingensis (NR 028855.1) Rhodospirillum centenum (NR 025830.1) Rhodoplanes elegans (NR 029125.1) Rhodopseudomonas faecalis (NR 024971.1) Rhodopseudomonas palustris (AB498816.1) SoyN2 Hình 4.9 Cây phát sinh chủng loại số lồi VKTQH khơng lưu huỳnh Từ phát sinh chủng loại (Hình 4.9) ta thấy, chủng SoyN gần gũi với loài Rhodopseudomonas palustris (AB498816.1) (99,70%) Vì chúng tơi cho chủng SoyN thuộc loài R palustris Như vậy, từ đặc điểm sinh học chủng VKTQH lựa chọn như: hình dạng tế bào, đường cong sinh trưởng, sắc tố quang hợp, khả sử dụng muối, khả chịu sulfide kết phân tích trình tự gen mã hóa 16S rRNA, xác định chủng SoyN thuộc loài R palustris 50 Phần V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận + Đặc điểm sinh học chủng SoyN : - Về hình thái khuẩn lạc, tế bào: chủng SoyN có khuẩn lạc dạng hình trịn, mép căng, bề mặt lồi, màu nâu đỏ, đường kính khoảng 1,5-2 mm, tế bào hình que, kích thước chiều dài khoảng 2,5 - 4µm, chiều rộng khoảng 0,5 0,8µm, sinh sản cách nảy chồi Dịch huyền phù tế bào màu nâu đỏ - Thời điểm thu sinh khối cao chủng SoyN : sau ngày nuôi cấy - Chủng SoyN chứa Bchl a - Chủng SoyN có khả sinh trưởng dải nồng độ muối từ 02,5% (tối ưu 0%) sinh trưởng dải pH từ 5,5-8,5 (tối ưu 6,5), có khả chịu nồng độ sulfide từ 0-1,6 mM (tối ưu mM) + Xác định trình tự gen 16S rRNA phân loại đến loài chủng VKTQH (SoyN ) - Kết phân tích trình tự gen cho thấy chủng SoyN có độ tương đồng với lồi Rhodopseudomonas palustris có mã số đăng kí Ngân hàng gen AB498816.1 đến 99,70% Do kết hợp với đặc điểm sinh học trình tự gen mã hóa 16S rRNA xác định chủng SoyN thuộc loài Rhodopseudomonas palustris 5.2 Kiến nghị Để ứng dụng chủng VKTQH (SoyN ) với mục đích xử lý nước thải đậu nành cần có số nghiên cứu như: - Xác định môi trường để sản xuất sinh khối - Ảnh hưởng điều kiện ngoại cảnh đến khả tích lũy sinh khối nhiệt độ, cường độ sáng, oxy đến sinh trưởng chúng 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Đinh Thị Thu Hằng (2007) Nghiên cứu phân huỷ sinh học hợp chất Hydrocarbon mạch vòng số vi khuẩn quang hợp tía phân lập Việt Nam Luận án tiến sỹ sinh học Viện Công nghệ sinh học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Đỗ Thị Liên, Đỗ Thị Tố Uyên Trần Văn Nhị (2009) Đặc điểm sinh học chủng vi khuẩn quang hợp tía thuộc chi Rhodovullum có khả xử lý sulfide nguồn nước ô nhiễm Báo cáo khoa học Hội nghị Cơng nghệ sinh học tồn quốc Đại học Thái Nguyên tr 954-958 Đỗ Thị Tố Uyên (2004) Nghiên cứu đặc điểm sinh học vi khuẩn quang hợp tía khơng lưu huỳnh nhằm sử dụng cơng nghệ làm nước thải chế biến tinh bột Luận án Tiến sỹ sinh học Đỗ Thị Tố Uyên Trần Văn Nhị (2005) Nghiên cứu xây dựng quy trình sản xuất ubiquinone từ sinh khối vi khuẩn quang hợp tía Tuyển tập Hội nghị Quốc Gia Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, định hướng y dược học Đại học Y Hà Nội tr 846-849 Đỗ Thị Tố Uyên Trần Văn Nhị (2006) Nghiên cứu tổng hợp ngoại tiết 5-aminolevulinic acid chủng vi khuẩn quang hợp tía phân lập Việt Nam Tạp chí Cơng nghệ sinh học tr 73-80 Hoàng Thị Yến (2010) Nghiên cứu vi khuẩn quang hợp tía khơng lưu huỳnh phân lập Việt Nam dùng làm thức ăn tươi sống cho giống động vật hai mảnh vỏ Luận án Tiến sĩ sinh học Nguyễn Văn Nhật (2013) Đánh giá trạng môi trường cụm nhà máy chế biến thực phẩm KCN Tiên Sơn, đề xuất giải pháp quản lý thiết kế hệ thống xử lý nước thải nhà máy sữa đậu nành Vinasoy Bắc Ninh Luận văn Thạc sĩ kỹ thuật Mỵ Trần Hương Trà, Dương Thị Giáng Hương Vũ Thị Thúy (2015) Nghiên cứu nhân nuôi sử dụng vi khuẩn Rhodobacteria để xử lý chất hữu Sulfide nước Nguyễn Kim Thiện (2010) Đồ án thiết kế hệ thống xử lý nước thải ngành sữa Trường Đại học Bách Khoa TP Hồ Chí Minh 10 11 Trần Dụ Chi, Đỗ Hoài Thu, Dương Đức Tiến Trần Hải Linh (2004) Bước đầu tìm hiểu ảnh hưởng nhiệt độ lên sinh trưởng quang hợp hai chủng vi tảo biển Isochrysis sp; Chroomonas sp Tạp chí khoa học Đại học Quốc gia Hà Nội tr 87-93 Trần Thị Tho, Nguyễn Trọng Nho Đặng Đình Kim (2000) Nghiên cứu kỹ thuật nuôi sinh khối tảo Chlorella pyrenoidosa phục vụ nuôi trồng thủy 52 sản Tuyển tập Báo cáo khoa học Hội thảo khoa học tồn quốc ni trồng thủy sản tr 147-151 12 Trần Văn Nhị Đỗ Thị Tố Uyên (1999) Nghiên cứu vi khuẩn quang hợp để sử dụng xử lý nước thải giàu hữu II Báo cáo Hội nghị Công nghệ sinh học toàn quốc 12/1999 tr 292-300 Tài liệu tiếng anh Anil Kumar P., Srinivas T N R., Sasikala C., and Ramana C V (2007) Rhodobacterchanglensis sp nov., a psychrotolerant, phototrophic alphaproteobacterium from the Himalayas of India Int J Syst Evol Microbiol pp 2568-2571 Arunaski K., Ramana V., Sproer C., Sasikala C., and Ramana C.V (2008) Rhodobacter megalophilus sp nov., a phototroph from the Indian Himalayas possessing a wide temperature range for growth Int J Syst Evol Microbiol pp 1792-1796 Banerjee S, Azad S A, Vikineswary S, Selvaraj O S and Mukherjee T K (2000) Phototrophic bacteria as fish feed supplements Asian-Australian Journal of Animal Science pp 991-994 Bergey D.H., Noel R K and John G H (1984) Bergey's manual of systematic bacteriology, Baltimore, MD : Williams & Wilkins Bertling K, Hurse T J, Kappler U and Bakie A D (2005) Cultivation of photosynthetic bacteria using Vertical-Cavity Surface-Emitting Lasers IEEE LEOS Annual Meeting Conference Proceedings, Sydney, NSW, Australia pp 184-185 Blasco R., Cardenas J., and Castillo (1989) Acetate metabolism in purple non sulfur bacteria, FEMS Microbio Lett 58 pp 129- 132 Condrad R., and Schlegel H G (1977b) Different degradation pathways for glucose and fructose in Rhodoseudomonas capsulatus Arch, Microbiol pp 38-48 Devereux R and S G Willis (1995) Amplification of ribosomal RNA sequences Molecular Microbial Ecology Manual pp 277-287 Getha K, Chong V C, and Vikineswary S (1998) Potential use of the phototrophic bacterium, Rhodopseudomonas Palustris as an aquaculture feed Asian Fisheries Science pp 223-232 Guillard R.R.L (1975) Culture of phytoplankton for feeding marine invertebrates In Smith, W.L and Chanle, Y.M.H (eds.) Culture of Marine Invertebrate Animals Plenum Press New York USA pp 26-60 Hiraishi A, and Ueda Y (1995) Isolation and characterization of Rhodovulum strictum sp nov and some other purple nonsulfur bacteria from colored blooms in tidal and seawater pools International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology pp 319-326 10 11 53 12 13 Hiraishi A., Muramatsu K., and Ueda Y (1996) Molecular genetic analyses of Rhodobacter azotoformans sp.nov., an related species of phototophic bacteria Syst Appl Microbiol pp 168-177 Imhoff J.F., and Truper H.G (1989) Purple non-sulfur bacteria, Bergey’s manual of Systematic Bacteriology, Williams and Wilkins, Baltimore pp 1658-1680 14 Imhoff J.F., Hiraishi A and Süling J., (2005) Anoxygenic phototrophic bacteria In: Brenner DJ, Krieg NR and Staley JT (eds) Bergey’s Manual 51 of Systematic Bacteriology, 2nd ed, Vol 2, part A pp 119–132 15 Imhoff J.F., Petri R., and Suling J (1989a) Reclassification of species of the spiral-shape phototrophic purple non-sulfur bacteria of the Proteobacteria: description of the new genera Phaeospirillum gen nov., Rhodovibrio gen nov., Rhodothalassium gen nov and Roseospira gen nov as well as transfer of Rhodospirillum fulvum to Phaeospirillum fulvum comb nov., of Rhodospirillum molischianum to Phaeospirillum molischianum comb nov., of Rhodospirillum salinarum to Rhodovibrio salinarum comb nov., Rhodospirillum sodomense to Rhodovibrio sodomensis comb nov., of Rhodospirillumsalexigens to Rhodothalassium salexigens comb nov and of Rhodospirillum mediosalinum to Roseospira mediosalina comb Nov Int J Syst Bacteriol 48 pp 793-798 16 Jenkins, D., M G Richard and G.T Daigger (1993) Manual on the Causes and Control of Activated Sludge Bulking and Foaming, 2nd Ed., Lewis Publishers, Boca Raton, FL, 1993; rd Ed., 2003 17 Junguo He, Guanging Zhang and Haifeng Lu (2010) Treatment of soybean wastewater by a wild strain Rhodobacter sphaeroides and to produce protein under natural conditions Kantachote D, Torpee S and Umsakul K (2005) The potential use of anoxygenic photosynthetic bacteria for treating latex rubber sheet wastewater Electronic Journal of Biotechnology pp 314– 323 Kobayashi M and Kondo M (1984) The role of phototrophic bacteria in nature and their utilization, Proceedings of the Third International Symposium on our Environment, Singapore Kobayashi M and Tchan Y.T (1973) Treatment of industrial waster solutions and production of useful by-product using a photosynthetic bacteria methotd Wat Res pp 1219-1224 Kondratieva E N., and Gogotov I N., (1981) Molecular hydrogen in microbial metabolism, Nauka Moscow pp 343 Lee W J., Park Y S., Park Y T., Kim S J., and Kim K.Y (1997) Studies on the availability of marine bacteria and the environmental factors for the mass culture of the high quality of Rotifera and Artemia: Change of 18 19 20 21 22 54 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 fatty acid and amino acid composition during cultivation and rotifer, Brachionus plicatilis by marine bacteria Erythrobacter sp S pi-I, Korean Fish Soci pp 319-328 Li Y., Xu B., and Xu X.H (1995) Isolation, identification and growth condition of Rhodopseudomonas J Ocean Uni Qing dao pp 345-359 Lorrungruang C, Martthong J, Sasaki K, and Noparatnaraporn N (2006) Selection of photosynthetic bacterium Rhodobacter sphaeroides 14F polyhydroxyalkanoate production with two-stage aerobic dark cultivation Journal of Bioscience and Bioengineering 102 (2) pp 128–131 Lucking D., Pike L., and Sojka G (1976) Glycerol utilization by a mutant of Rhodopseudomonas capsulata, J Bacteriol pp 750-752 Ogbonda K H, Aminigo R E, and Abu G O (2007) Influence of tempertature and pH on biomass production and protein biosynthesis in a putative Spirulina sp Bioresource Technology 98(11) pp 2207-2211 Okamura K., Kanbe T., and Hiraishi A (2009) Rhodoplanes serenus sp nov , a purple non-sulfur bacterium isolated from pond water Int J Syst Evol Microbiol pp 531-535 Overmann J and Garcia-Pichel F (2006) The phototrophic way of life, In The Prokaryotes A handbook on the biology of bacteria: Proteobateria: Ecophysiology and Biochemistry Third edition Dworkin M (Editor-inChief)., Falkow S., Rosenberg E., Schleifer K.H and Stackebrandt E (Editor) pp 32-85 Pfennig, N (1969) Rhodopseudomonas acidophila sp n., a new species of budding nonsulfur bacteria J Bacteriol pp 597-602 Pfennig, N., and Truper, H.G (1994) Characterization and identification of the Anoxygenic Phototrophic Bacteria In: The Prokaryote: a hanbook of on habitats, isolation and identification of bacteria Springer-Verlag, Berlin pp 299-311 Pfennig N., Lunsdorf H., Suling J and Imhoff J.f (1997), Rhodospiratrueperi gen nov., sp nov., a new phototrophic proteobacterium of the alpha group Arch Microbiol pp 39-45 Prennig N., and Trueper H.G (1992), Characterization and identification of the Anoxygenic Phototrophic Bacteria In: The Prokaryote: a handbook of on habitats, isolation and identification of bacteria, Springer Verlag Berlin pp 299-311 Quadri S.M.H and Hoare S (1967) Pyruvate decarboxylase in photosynthetic bacteria, Biochem Biophys Acta pp 304-306 Rahalka S.B., Jashi S.R., and Shivaraman N (1993) Photometabolism of aromatic compounds by Rhodoseudomonas palustris Curr Microbiol pp 1-9 Ramana V., Anil kumar P., Srinivas T.N.R, Sasikala C., and Ramana C.V (2009) Rhodobacteraestuarii sp nov., a phototrophic alphaproteobacterium 55 isolated from an estuarine environment IntJSystEvolMicrobiol pp 11331136 36 Resnick S.M and Madigan M.T (1989) Isolation and characterization of a mildly thermophilic nonsulfur purple bacterium containing bacteriochlorophyll b FEMS Microbiol Lett pp 165-170 37 Sambrook J and Russell D.W (2001) Molecular cloning A Laboratory Manual, 3rd ed Cold spring Harbor Laboratory Cold Spring Harbor, NY 38 Sasaki K and Nagai S (1979) The optimum pH and temperature for the aerobic growth of Rhodopseudomonas gelatinosa, and Vitamin B12 and Ubiquinone formation on a starch medium Ferment Technol pp 383-386 39 Sasaki K., Noparatnaraporn N., and Nagai S (1991) Use of photosynthetic bacteria for the production of SCP and chemicals from agro-industrial wastes In Bio-conversion of waste materials to industrial products, ed Martin AM pp 225-263 40 Sasaki K., Noparatnaraporn N., Hayashi M., Nishzawa Y., and Nagai S (1981) Single cell protein production by treament of soybean wastes with Rhodopseudomonas gelatinosa J Ferment Technol pp 471-477 41 Sasaki K., Takana T., Nishizawa Y., and Hayashi M (1990) Identification of a herbicide 5-aminolevulinic acid by Rhodobacter sphaeroides using the effluent of swine waste from an anaerobic digestor Appl Microbiol Biotechnol pp 731-737 42 Wraight C A (1982) Current researchs on photosynthesis In Godvindjee (ed), Photosynthesis, vol I, Academic Press New York, London pp 1761 43 Ying‐Chien Chung, Chihpin Huang, Ching‐Ping Tseng (1996) Biodegradation of Hydrogen Sulfide by a Laboratory‐Scale Immobilized Pseudomonas putida CH11 Biofilter Tài liệu Internet Xử lý nước thải nhà máy chế biến sữa Cơng ty Mơi trường Bình Minh Truy cập ngày 21/01/2021 từ http://www.gree-vn.com/xu-ly-nuoc-thaibang-cong-nghe-sinh-hoc.htm Xử lý nước thải công nghệ sinh học Công nghệ xử lý nước thải Gree Truy cập ngày 18/01/2021 http://www.gree-vn.com/xu-ly-nuocthai-bang-cong-nghe-sinh-hoc.htm phương pháp xử lý nước thải phương pháp sinh học Công ty CP vệ sinh Môi trường đô thị Hưng Thịnh Truy cập ngày 19/01/2021 từ https://thongtacconghanoi.net/xu-ly-nuoc-thai-bang-phuong-phap-sinhhoc/#_Nhuoc_diem 56 PHỤ LỤC Bảng Kết đo OD 660 chủng SoyN ngày nuôi cấy Thời gian (ngày) Lần đo OD 660 3 3 3 0,422 0,372 0,401 1,434 1,227 1,395 2,511 2,784 2,560 3,470 3,209 3,042 3,701 3,562 3,461 3,659 3,413 3,225 3,179 3,086 2,947 TB OD 660 0,398 1,352 2,618 3,240 3,575 3,432 3,071 57 Bảng Kết đo OD 660 chủng SoyN thời gian nuôi cấy ảnh hưởng nồng độ muối khác Nồng độ NaCl (%) 0% 0,5% 1% 1,5% 2% 2,5% 3% 3,5% 4% 5% OD 660 (ngày 0) OD 660 (sau ngày) ∆OD 660 0,206 0,224 0,216 0,193 0,207 0,251 0,301 0,211 0,219 0,268 0,308 0,264 0,230 0,195 0,312 0,258 0,229 0,273 0,213 0,294 0,304 0,210 0,312 0,272 0,231 0,243 0,315 0,221 0,320 0,264 3,988 3,782 3,934 3,768 3,697 3,632 3,668 3,677 3,508 3,530 3,613 3,282 3,141 3,196 3,267 2,849 2,838 2,690 1,900 2,061 1,910 0,777 1,040 0,829 0,487 0,607 0,471 0,322 0,451 0,269 3,782 3,558 3,718 3,575 3,490 3,381 3,367 3,466 3,289 3,262 3,305 3,018 2,911 3,001 2,955 2,591 2,609 2,417 1,687 1,767 1,606 0,567 0,728 0,557 0,256 0,364 0,156 0,101 0,131 0,005 58 Bảng Kết đo OD 660 chủng SoyN thời gian nuôi cấy ảnh hưởng pH ban đầu pH 4,5 5,0 5,5 6,0 6,5 7,0 7,5 8,0 8,5 9,0 9,5 10,0 Lần đo OD 660 (ngày 0) OD 660 (sau ngày) ∆OD 660 3 3 3 3 3 3 0,312 0,268 0,211 0,198 0,297 0,155 0,214 0,201 0,296 0,278 0,187 0,320 0,310 0,253 0,271 0,201 0,193 0,245 0,215 0,311 0,284 0,234 0,251 0,301 0,184 0,180 0,236 0,302 0,273 0,187 0,315 0,219 0,222 0,264 0,206 0,316 0,595 0,400 0,412 1,034 0,931 0,952 2,202 2,401 2,398 3,527 3,469 3,424 3,904 3,984 3,831 3,774 3,699 3,923 3,669 3,567 3,691 2,939 3,133 2,950 2,404 2,178 2,307 1,753 1,919 1,785 1,194 1,230 1,040 0,747 0,588 0,717 0,283 0,132 0,201 0,836 0,634 0,797 1,988 2,200 2,102 3,249 3,282 3,104 3,594 3,731 3,560 3,573 3,506 3,678 3,454 3,256 3,407 2,705 2,882 2,649 2,220 1,998 2,071 1,451 1,646 1,598 0,879 1,011 0,818 0,483 0,382 0,401 59 Bảng Kết đo OD 660 chủng SoyN thời gian nuôi cấy ảnh hưởng Na S Nồng độ Na S (mM) 0,4 0,8 1,2 1,6 2,0 2,4 2,8 3,2 3,6 Lần đo OD 660 (ngày 0) OD 660 (sau ngày) 3 3 3 3 0,201 0,198 0,315 0,316 0,214 0,193 0,271 0,245 0,278 0,202 0,312 0,251 0,296 0,301 0,292 0,305 0,274 0,215 0,285 0,264 0,183 0,203 0,214 0,193 0,272 0,221 0,275 0,295 3,675 3,425 3,622 3,326 2,958 3,024 2,302 2,106 2,179 1,305 1,213 1,268 0,736 0,680 0,898 0,419 0,458 0,521 0,390 0,395 0,436 0,318 0,286 0,433 0,326 0,277 0,497 0,324 ∆OD 660 3,474 3,227 3,307 3,010 2,744 2,831 2,031 1,861 1,901 1,103 0,901 1,017 0,440 0,379 0,606 0,114 0,184 0,306 0,105 0,131 0,253 0,115 0,072 0,240 0,054 0,056 0,222 0,029 60 4,0 4,4 4,8 5,2 3 3 0,194 0,296 0,270 0,204 0,196 0,275 0,217 0,269 0,264 0,197 0,316 0,185 0,214 0,321 0,272 0,490 0,315 0,226 0,403 0,308 0,235 0,419 0,278 0,203 0,392 0,202 0,216 0,377 0,078 0,194 0,045 0,022 0,206 0,033 0,018 0,150 0,014 0,006 0,076 0,017 0,002 0,056 61 Hình Sinh trưởng chủng SoyN nồng độ muối khác Hình Sinh trưởng chủng SoyN mơi trường có pH ban đầu khác Hình Sinh trưởng chủng SoyN nồng độ Na S khác 62 Trình tự gen 16S rRNA chủng SoyN ATACGTCAGTGGCAGACGGGTGAGTAACGCGTGGGAACGTACCTTTT GGTTCGGAACAACACAGGGAAACTTGTGCTAATACCGGATAAGCCCTTACG GGGAAAGATTTATCGCCGAAAGATCGGCCCGCGTCTGATTAGCTAGTTGGTG AGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGATCAGTAGCTGGTCTGAGAGGATGATC AGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGT GGGGAATATTGGACAATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGAGT GATGAAGGCCCTAGGGTTGTAAAGCTCTTTTGTGCGGGAAGATAATGACGG TACCGCAAGAATAAGCCCCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATAC GAAGGGGGCTAGCGTTGCTCGGAATCACTGGGCGTAAAGGGTGCGTAGGC GGGTTTCTAAGTCAGAGGTGAAAGCCTGGAGCTCAACTCCRGAACTGCCTT TGATACTGGAAGTCTTGAGTATGGCAGAGGTGAGTGGAACTGCGAGTGTAG AGGTGAAATTCGTAGATATTCGCAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCAC TGGGCCATTACTGACGCTGAGGCACGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATT AGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATGCCAGCCGTTAGTGGG TTTACTCACTAGTGGCGCAGCTAACGCTCTAAGCATTCCGCCTGGGGAGTAC GGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGT GGAGCATGTGGTTTAATTCGACGCAACGCGCAGAACCTTACCAGCCCTTGA CATGTCCAGGACCGGTCGCAGAGACGTGACCTTCTCTTCGGAGCCTGGAGC ACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAG TCCCGCAACGAGCGCAACCCCCGTCCTTAGTTGCTACCATTTAGTTGAGCAC TCTAAGGAGACTGCCGGTGATAAGCCGCGAGGAAGGTGGGGATGACGTCA AGTCCTCATGGCCCTTACGGGCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGCGGTG ACAATGGGAAGCTAAGGGGTGACCCTTCGCAAATCTCAAAAAGCCGTCTCA GTTCGGATTGGGCTCTGCAACTCGAGCCCATGAAGTTGGAATCGCTAGTAAT CGTGGATCAGCATGCCACGGTGAATTCGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGC CCGTCACACCATGGGAGTTGGCTTTACCTGAAGACGGTGCGCTAGCCATC 63