Nghiên cứu quy trình vi nhân giống cây thược dược lùn đỏ nhung (grandalia magenta)

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC -🖎🕮✍ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH VI NHÂN GIỐNG CÂY THƯỢC DƯỢC LÙN ĐỎ NHUNG (Grandalia™ Magenta)” Sinh viên thực : Lê Thị Thúy Phương Khóa : 62 Ngành : Cơng nghệ sinh học uGiảng viên hướng dẫn : TS Nguyễn Thị Lâm Hải HÀ NỘI – THÁNG 09/2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết nghiên cứu trình bày khóa luận trung thực, khách quan chưa dùng bảo vệ để lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực khóa luận cảm ơn, thơng tin trích dẫn luận án rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 09 tháng 09 năm 2021 Sinh viên Lê Thị Thúy Phương LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành khóa luận này, tơi xin gửi lời cảm ơn đến đến thầy cô khoa Công nghệ sinh học, quý thầy Cô Học viện nông nghiệp Việt Nam tạo hội cho học tập, rèn luyện tích lũy kiến thức, kỹ để thực khóa luận Đặc biệt, tơi xin chân thành cảm ơn sâu sắc đến TS Nguyễn Thị Lâm Hải tận tình dẫn, theo dõi đưa lời khun bổ ích giúp tơi giải vấn đề gặp phải trình thực đề tài hồn thành khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy cô mơn Cơng nghệ Sinh học Thực vật nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian thực đề tài Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới tất người thân, bạn bè người bên cạnh động viên giúp đỡ trình học tập thực đề tài Hà Nội, ngày 09 tháng 09 năm 2021 Sinh viên Lê Thị Thúy Phương ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vii TÓM TẮT ix Chương 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 2.1 Mục tiêu đề tài 2.1.1 Mục tiêu chung 2.1.2 Mục tiêu cụ thể Chương 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1.Giới thiệu Thược dược 2.1.1.Vị trí, phân loại 2.1.2 Đặc điểm thực vật học hoa Thược dược 2.1.3.Một số yêu cầu ngoại cảnh 2.2 Khái quát nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.1 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.2 Các giai đoạn ni cấy mơ tế bào thực vật 2.3 Một số nghiên cứu nuôi cấy mô Thược dược 12 2.3.1.Một số nghiên cứu nuôi cấy mô Thược dược giới 12 2.3.2 Một số nghiên cứu nuôi cấy mô Thược dược Việt Nam 14 Chương VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 3.1 Đối tượng, vật liệu, địa điểm thời gian nghiên cứu 17 3.1.1 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 17 3.1.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 18 iii 3.2 Nội dung phương pháp nghiên cứu 18 3.2.1 Nội dung nghiên cứu 18 3.2.2 Phương pháp nghiên cứu 26 Chương 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 28 4.1.Tạo vật liệu khởi đầu 28 4.2 Giai đoạn nhân nhanh invitro Thược dược lùn đỏ nhung 29 4.2.1 Ảnh hưởng BAP đến nhân nhanh in vitro chồi Thược dược lùn đỏ nhung 29 4.2.2 Ảnh hưởng Kinetin đến nhân nhanh in vitro chồi Thược Dược đỏ nhung 31 4.2.3 So sánh hiệu nhân chồi môi trường bổ sung BAP môi trường bổ sung Kinetin tác động vào Thược dược lùn đỏ nhung 33 4.2.4 Ảnh hưởng tổ hợp BAP Kinetin đến nhân nhanh in vitro Thược dược lùn đỏ nhung 33 4.2.5 Ảnh hưởng tổ hợp BAP α-NAA đến nhân nhanh invitro Thược dược lùn đỏ nhung 35 4.3 Tạo hoàn chỉnh 36 4.3.1 Ảnh hưởng α-NAA đến khả tạo rễ chồi Thược dược lùn đỏ nhung 37 4.3.2 Ảnh hưởng IBA đến khả tạo rễ chồi Thược dược lùn đỏ nhung 38 4.4 Bước đầu huấn luyện Thược dược in vitro ngồi mơi trường tự nhiên 40 Chương KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 42 5.1 Kết luận 42 5.2 Kiến nghị 42 Tài liệu tham khảo 43 PHỤ LỤC 45 iv DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Cơng thức thí nghiệm xác định hiệu chất khử trùng 20 Bảng 3.2 Ảnh hưởng BAP đến khả tạo cụm chồi Thược dược lùn đỏ nhung 22 Bảng 3.3 Ảnh hưởng kinetin đến khả tạo cụm chồi Thược dược lùn đỏ nhung 22 Bảng 3.4 Ảnh hưởng BAP Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Thược dược lùn đỏ nhung 23 Bảng 3.5 Ảnh hưởng BAP α-NAA đến khả nhân nhanh chồi Thược dược lùn đỏ nhung 24 Bảng 3.7 Ảnh hưởng α-NAA đến khả tạo rễ Thược dược lùn đỏ nhung 24 Bảng3.8 Ảnh hưởng IBA đến khả tạo rễ Thược dược lùn đỏ nhung 25 Bảng 3.9 Ảnh hưởng giá thể đến tỷ lệ sống Thược dược lùn đỏ nhung 26 Bảng 4.1 Ảnh hướng thời gian chất khử trùng đến giai đoạn tạo vật liệu khởi đầu 28 Bảng 4.2 Ảnh hưởng BAP đến nhân nhanh in vitro chồi Thược dược đỏ nhung (sau tuần nuôi cấy ) 30 Bảng 4.3 Ảnh hưởng Kinetin đến hệ số nhân chồi Thược dược lùn đỏ nhung (sau tuần nuôi cấy) 32 Bảng 4.4 Ảnh hưởng tổ hợp BAP Kinetin đến hệ số nhân chồi Thược dược lùn đỏ nhung (sau tuần nuôi cấy ) 34 Bảng 4.5 Ảnh hưởng tổ hợp BAP α-NAA đến hệ số nhân nhanh in vitro chồi Thược dược lùn đỏ nhung (sau tuần nuôi cấy) 36 Bảng 4.6 Ảnh hưởng α-NAA đến khả tạo rễ chồi Thược dược lùn đỏ nhung ( sau tuần nuôi cấy) 37 v Bảng 4.7: Ảnh hưởng IBA đến khả tạo rễ chồi Thược dược lùn đỏ nhung (sau tuần nuôi cấy) 39 Bảng 4.8 Ảnh hưởng giá thể đến tỷ lệ sống Thược dược lùn đỏ nhung 41 vi DANH MỤC HÌNH Hình 1.1.Thược dược lùn đỏ nhung Hình 3.1 Thược dược lùn đỏ nhung 17 Hình 4.1.Ảnh hưởng BAP đến nhân nhanh in vitro chồi Thược dược đỏ nhung (sau tuần nuôi cấy ) 30 Hình 4.2 Ảnh hưởng Kinetin đến hệ số nhân chồi Thược dược lùn đỏ nhung (sau tuần nuôi cấy) 32 Hình 4.3 Ảnh hưởng tổ hợp BAP Kinetin đến hệ số nhân chồi Thược dược lùn đỏ nhung (sau tuần nuôi cấy ) 34 Hình 4.4: Ảnh hưởng tổ hợp BAP α-NAA đến hệ số nhân nhanh in vitro chồi Thược dược lùn đỏ nhung (sau tuần ni cấy) 35 Hình 4.5 Ảnh hưởng α-NAA đến khả tạo rễ chồi Thược dược lùn đỏ nhung ( sau tuần nuôi cấy) 37 Hình 4.6 :Ảnh hưởng IBA đến khả tạo rễ chồi Thược dược lùn đỏ nhung (sau tuần nuôi cấy) 38 Hình 4.7 Ảnh hưởng giá thể đến tỷ lệ sống Thược dược lùn đỏ nhung sau tuần giá thể mùn dừa peat moss tỷ lệ 1:1 40 vii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT STT 10 11 Viết tắt BAP CV% CT Cs ĐC IAA Kinetin LSD0,05 MS Nxb α-NAA Viết đầy đủ 6-Benzyl amoni purin Sai số thí nghiệm Cơng thức Cộng Đối chứng β-indole-acetic acid 6-(2-furfuryl)-aminopurine Độ lệch tiêu chuẩn mức nghĩa 5% Murashige Skoog Nhà xuất α- Napthalene aceticacid viii TÓM TẮT Với đề tài “Nghiên cứu vi nhân giống thược dược lùn đỏ nhung (Grandalia™ Magenta)”, sử dụng đỉnh sinh trưởng để làm vật liệu nuôi cấy ban đầu Khử trùng Presept 1% 15 phút cho mô đỉnh sinh trưởng thời gian khử trùng tối ưu để đạt kết hài hoà tỉ lệ mẫu khả tái sinh khối mô nuôi cấy Việc bổ sung hai loại Cytokinin BAP Kinetin cho thấy không hiệu giai đoạn nhân nhanh Thược dược lùn đỏ nhung Mơi trường thích hợp cho giai đoạn nhân nhanh Thược dược lùn đỏ nhung môi trường MS không bổ sung Cytokinin với hệ số nhân đạt 3,83 đoạn thân/mẫu chiều dài chồi đạt 4.78 cm Chồi in vitro rễ tốt môi trường MS không bổ sung Auxin Ở giai đoạn vườn ươm, giá thể Mùn dừa + Peat moss 1:1 vừa đảm bảo tỷ lệ sống cao vừa tạo môi trường thuận lợi cho in vitro Thược dược lùn đỏ nhung sinh trưởng phát triển ix Bảng 4.5 Ảnh hưởng tổ hợp BAP α-NAA đến hệ số nhân nhanh in vitro chồi Thược dược lùn đỏ nhung (sau tuần nuôi cấy) Công thức Nồng độ α-NAA (mg/l) Hệ số nhân Chiều cao (cm) Số 0,0 3.47 3,47 7,50 0,5 4,02 3,23 7,13 1,0 3,37 2,13 7,10 1.5 1,10 0,84 4,57 5% LSD 0,54 CV% 4,13 0,54 6,14 0,1 6,75 Kết trình bày Bảng 4.5 Hình 4.5 cho thấy việc sử dụng kết hợp BAP α-NAA làm tăng hệ số nhân Hệ số nhân cao đạt 4,02 đoạn thân/ mẫu tương tự tăng nồng độ α-NAA lên cao hệ số nhân giảm nồng độ 1,5 mg/l hệ số nhân đạt 1,10 đoạn thân/mẫu Chiều cao chồi giảm dần tăng nồng độ α-NAA Tuy nhiên nồng độ bổ sung α-NAA 1,5mg/l xuất mô sẹo chồi tái sinh từ mô sẹo Kết cho giống với kết Võ Minh Khoa (2010) Theo Cây Thược dược tạo mơ sẹo tốt mơi trường MS có bổ sung 30g/l sucrose, 8g/l agar, 5,0 mg/1BA 1,0 mg/1 α-NAA, pH 5,8 với tỷ lệ tạo sẹo có khả tái sinh chồi 78,33% Như thấy α-NAA giúp tăng chất lượng chiều sẹo làm phát sinh chồi từ mơ sẹo Mơi trường tốt thí nghiệm môi trường MS +0,1 mg/l BAP + 0,5 mg/l α-NAA 4.3 Tạo hoàn chỉnh Cắt chồi sau tuần nuôi cấy môi trường nhân nhanh chồi (các chồi loại bỏ bớt đoạn già phần gốc chồi), cấy chuyển sang môi trường bổ sung α-NAA với nồng độ khác theo dõi theo tuần 36 4.3.1 Ảnh hưởng α-NAA đến khả tạo rễ chồi Thược dược lùn đỏ nhung Hình 4.5 Ảnh hưởng α-NAA đến khả tạo rễ chồi Thược dược lùn đỏ nhung ( sau tuần nuôi cấy) Bảng 4.6 Ảnh hưởng α-NAA đến khả tạo rễ chồi Thược dược lùn đỏ nhung ( sau tuần nuôi cấy) Tỷ lệ rễ Số rễ/ Chiều dài (%) mẫu rễ MS 100,00 10,50 2,89 MS + 0,1 mg/l α-NAA 98,67 9,50 3,87 MS + 0,2 mg/l α-NAA 98,00 5,55 1,93 MS + 0,3 mg/l α-NAA 97,33 3,94 1,32 MS + 0,5 mg/l α-NAA 96,67 6,97 1,97 LSD 0.05 0,6 0,12 CV% 5,7 4,1 CT Nội dung Sau tuần nuôi cấy, dựa vào hình 4.5 bảng 4.6 cho thấy kết rễ chồi bất định thuận lợi môi trường nghiên cứu, chồi Thược dược lùn đỏ nhung tự rễ tốt môi trường không bổ sung α-NAA tỷ lệ rễ cao đạt 100% chất lượng rễ tốt thông qua 37 số rễ (10,3 rễ/cây) chiều dài rễ đạt 2,89 cm công thức bổ sung α-NAA tỷ lệ rễ cao tiêu số rễ/cây thấp với công thức không bổ sung α-NAA, nhiên chiều dài rễ cao bổ sung α-NAA 0,1 mg/l Kết nghiên cứu chúng tơi thí nghiệm tương đồng với nghiên cứu Trịnh Khắc Quang (2010 ) Theo tác giả Trịnh Khắc Quang, mơi trường thích hợp để rễ môi trường MS với số rễ (6,33 rễ/cây) chiều dài rễ đạt 4,1cm Như mơi trường rễ thích hợp cho chồi Thược dược lùn đỏ nhung môi trường MS không bổ sung auxin 4.3.2 Ảnh hưởng IBA đến khả tạo rễ chồi Thược dược lùn đỏ nhung Trong thí nghiệm sử dụng môi trường MS kết hợp nồng độ IBA khác từ 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 mg/l Sau tuần theo dõi thu kết bảng hình Hình 4.6 :Ảnh hưởng IBA đến khả tạo rễ chồi Thược dược lùn đỏ nhung (sau tuần nuôi cấy) 38 Bảng 4.7: Ảnh hưởng IBA đến khả tạo rễ chồi Thược dược lùn đỏ nhung (sau tuần nuôi cấy) CT Nội dung Tỷ lệ rễ (%) Số rễ/mẫu Chiều dài rễ MS 100,00 7,07 3,89 MS + 0,1 mg/l IBA 99,33 7,03 2,78 MS + 0,2 mg/l IBA 98,00 7,03 2,86 MS + 0,3 mg/l IBA 97,33 7,0 3,76 MS + 0,5 mg/l IBA 96,67 7,0 3,57 LSD 0.05 0,57 0,14 CV% 5,62 6,71 Khi bổ sung IBA cho mơi trường rễ tạo hồn chỉnh có kết tương đồng với bổ sung α-NAA Khi không bổ sung IBA cho tỷ lệ rễ tuyệt đối, số số rễ/cây 7,07 cm chiều dài rễ 3,89 cm cao Bên cạnh tỷ lệ rễ giảm dần tăng nồng độ IBA Tuy nhiên bổ sung IBA nồng độ khác lại cho tỷ lệ rễ tương đồng có chênh lệch lớn, chiều dài rễ có biến động khơng theo chu kì Trong năm 2015 Võ Minh Khoa cộng tiến hành nghiên cứu nuôi cấy Thược dược phương pháp nuôi cấy mô Môi trường thích hợp để tạo hồn chỉnh mơi trường MS có bổ sung 30g/l sucrose, 8g/l agar + 0,1 mg/l IBA Kết ngược với kết nghiên cứu Nguyên nhân dẫn tới khác biệt đặc điểm di truyền giống Thược dược khác có nồng độ IBA thích hợp khác 39 4.4 Bước đầu huấn luyện Thược dược in vitro ngồi mơi trường tự nhiên Ở thí nghiệm mục đích chúng tơi tìm giá thể tốt để phù hợp với Thược dược lùn điều kiện tự nhiên để dễ dàng thích nghi Đầu tiên phải loại bỏ thạch cách rửa vịi nước, ý khơng làm đứt rễ Sau trồng vào giá thể chuẩn bị sẵn để đánh giá tỉ lệ sống Trong tuần đầu, sử dụng lưới đen để che kín giúp khơng bị nước nhanh hay héo ánh sáng mặt trời Khi cứng cáp bỏ lưới tránh trường hợp bị thối rễ thiếu ánh sáng quang hợp Tưới nước đặn ngày không tưới trực tiếp vào gốc cây, thực tưới nhỏ giọt Hình 4.7 Ảnh hưởng giá thể đến tỷ lệ sống Thược dược lùn đỏ nhung sau tuần giá thể mùn dừa peat moss tỷ lệ 1:1 40 Bảng 4.8 Ảnh hưởng giá thể đến tỷ lệ sống Thược dược lùn đỏ nhung Giá thể Mùn dừa Peat Moss Mùn dừa+peat moss tỷ lệ 1:1 Peat moss +10% Perlite Tỷ lệ sống (%) Chiều cao Số 73,00 3,78 3,12 80,00 4,15 3,45 89,00 4,92 4,30 75,00 4,11 3,68 Kết trình bày Bảng 4.8 cho thấy Thược dược lùn đỏ nhung thích nghi tốt với loại giá thể khác chứng cho thấy khơng có chênh lệch tỷ lệ sống q lớn giá thể Tuy nhiên giá thể có thấy ưu việt Mùn dừa + peat moss tỷ lệ 1:1 với tỷ lệ sống 89%, chiều dài đạt 4,92 cm số 4,3 lá/cây Bên cạnh giá thể hiệu mùn dừa với tỷ lệ sống đạt 73% mùn dừa khó kiểm sốt độ ẩm, giá thể nhiều mùn xơ trở thành vật liệu giữ nước Từ kết kết luận giá thể tốt để huấn luyện ngồi mơi trường giá thể Mùn dừa + peat moss tỷ lệ 1:1 41 Chương KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận - Khử trùng Presept 1% vòng 15 phút cho hiệu đạt 72,2% nuôi cấy khởi động - Mơi trường thích hợp để nhân nhanh in vitro chồi Thược dược lùn đỏ nhung môi trường MS không bổ sung Cytokinin - Môi trường thích hợp để tạo rễ cho chồi Thược dược lùn đỏ nhung điều kiện in vitro MS không bổ sung auxin - Giá thể thích hợp để rèn luyện hoa Thược dược lùn đỏ nhung cho ngồi mơi trường tự nhiên mùn dừa + peat moss 1:1 với tỷ lệ sống 89% 5.2 Kiến nghị Tiến hành thử nghiệm bổ sung GA3 cho trình nhân nhanh để tìm cơng thức phù hợp Tiếp tục nghiên cứu hồn thiện quy mơ nhân nhanh để tăng hiệu sản xuất thực nghiệm giảm chi phí hoa Thược dược lùn đỏ nhung hoa cảnh khác có giá trị cao kỹ thuật nuôi cấy in vitro 42 Tài liệu tham khảo Tài liệu tiếng Việt: Bùi Thị Thu Hương, Đồng Huy Giới (2019), Ảnh hưởng số yếu tố dinh dưỡng chất điều tiết sinh trưởng đến phát triển hình thái in vitro Cúc Anh thảo (Chrysanthemum sp.), Tạp chí Khoa học cơng nghệ lâm nghiệp số - 2019, tr 3-8 Bùi Minh Trí (2003), Bài giảng sinh lý Thực vật Tạ Như Thục Anh, Trần Dụ Chi, Vũ Văn Vụ (2008), Bước đầu nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hịa sinh trưởng đến phát sinh hình thái mô Hoắc hương nuôi cấy in vitro, Tạp chí VNU journal of Science Natural sciences and Technology, pp.24 Lê Văn Bình, Hồ Hữu Nghị, Lê Thị Muội (1993), Công nghệ sinh học thực vật cải tiến giống trồng, Nxb Nông nghiệp Nguyễn Bảo Tồn (2004), Giáo trình ni cấy mơ tế bào thực vật, Tủ sách Đại học Cần Thơ Trịnh Đình Quang (2010), Nghiên cứu nhân nhanh giống thược dược TDL – 05 phương pháp nuôi cấy mô tế bào, Tạp chí Theo TC NN&PTNT - Kỳ - tháng 07/2012, tr 6-8 Võ Minh Khoa (2015), Nghiên cứu nhân giống hoa thược dược phương pháp nuôi cấy mô, Sở Khoa học Công nghệ Bến Tre, chuyên mục Hoạt động Khoa học Công nghệ, tr 1-2 Nguyễn Đức Thành (2000), Nuôi cấy mô tế bào thực vật nghiên cứu ứng dụng, Nxb Nông nghiệp Hà Nội Võ Châu Tuấn, Trần Quang Dần (2012), Nghiên cứu khả tái sinh in vitro mật thân (Eurycoma longifolia jak.), Tạp chí khoa học công nghệ , số 12, 2, tr.126 10 Ngô Xn Bình, Bùi Bảo Hồn, Nguyễn Thúy Hà (2003), giáo trình cơng nghệ sinh học, Nxb Nơng nghiệp 11 Nguyễn Văn Mã, La Việt Hồng, Ong Xuân Phong (2013), Phương pháp nghiên cứu Sinh lý học thực vật, Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội 12 Vũ Văn Vụ (1999), Sinh lý thực vật ứng dụng, Nxb Giáo dục Hà Nội 13 Nguyễn Như Khanh, Nguyễn Văn Đính (2006), Sinh học phát triển thực vật, Nxb Giáo dục Hà Nội Tài liệu Tiếng Anh 14 Sakakibara H., Takei K., Hirose N (2006), Interactions between nitrogen and cytokinin in the regulation of metabolism and development, Trends in plant Science, volume 11, issue 9, pp 440 -448 15 Liudmila Jiménez-Mariña (2020), In vitro propagation methodology of sp., Avances, Vol 22, no 3, pp.406-422 Dahlia 16 Wandankar, G.D and Melody, S.N (2012), In vitro regeneration of Dahlia cav, Journal of Global Biosciences, vol.1, 2012, pp.28-41 43 17 Asad S., Nosheen H A and Rukhsana B (2009), Effect of different cultural conditions on micropropagation of rose (rosa indica L.), Institute of Mycology and Plant pathology, University of the Punjab Lahore, Pakistan, pp.2877-2882 18 Kirby E G and Vasil I K (1979), Effect of Pollen Protein Diffusates on Germination of Eluted Pollen Samples of Petunia hybrida in vitro, Department of Botany, University of Florida, Gainesville, Florida, Bot 44, pp 361-367 19 Manorama Mulin and Kiem Tran Thanh Van (1989), Obtention of in vitro flowers from thin epidermal cell layers of petunia hybrid (hort.), Institut de Physiologie Végétale, C.N.R.S., 91198 Gif -sur-Yvette Cedex (France), Plant Science 62, pp 113-121 20 Kortessa Dimasi-Therion, Athanasios S Economou, Evangelos M Sfakianaki (1993), Promotion of petunia (Petunia hybrida L.) regeneration in vitro by ethylene, Department of horticulture, Aristotle University, 55006 Thessaloniki, Greece, Tissue and Organ Culture 32, pp 219-225 21 Murashige T and Skoog F (1962), Plant growth Substances in commercial uses of tissue culture In: Plant growth Substances 1979, ed By F.Skoog Springer- Verlag, Berlin Heidelberg New York, pp 426-434 22 L.J.W Gilissen(1977), The Influence of Relative Humidity on the Swelling of Pollen Grains in vitro, Dept Of Botany, Faculty of Sciences, University, Toernooiveld, Nijmegen, The Netherlands, Planta 137, pp 299-301 23 Barbara Marcinek, Marzena Paymies, Monika Poniewozik, Danuta Kozak, Wojciech Durlak (2019), The influence of growth regulator on Dahlia propagation in tissue culture and acclimatization of plants in vitro condition, ACTA Scientiarum Polonorum Hortorum Cultus, Vol 18 no 44 PHỤ LỤC TN2 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE TN2 5/ 9/21 21:21 :PAGE phan tich ket qua thi nghiem VARIATE V002 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 39.9833 7.99667 11.32 0.000 * RESIDUAL 174 122.967 706705 * TOTAL (CORRECTED) 179 162.950 910335 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCC FILE TN2 5/ 9/21 21:21 :PAGE phan tich ket qua thi nghiem VARIATE V003 CCC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 194.508 38.9016 ****** 0.000 * RESIDUAL 174 5.30200 304713E-01 * TOTAL (CORRECTED) 179 199.810 1.11626 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE TN2 5/ 9/21 21:21 :PAGE phan tich ket qua thi nghiem VARIATE V004 SL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 142.961 28.5922 14.44 0.000 * RESIDUAL 174 344.433 1.97950 * TOTAL (CORRECTED) 179 487.394 2.72287 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN2 5/ 9/21 21:21 :PAGE phan tich ket qua thi nghiem MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 30 30 30 30 30 30 HSN 3.63333 3.32667 2.67333 2.23000 2.06667 1.80000 CCC 4.75000 3.83000 2.30667 2.30667 2.22667 1.88000 SL 7.13333 6.76667 7.63333 6.36667 5.23333 5.30000 SE(N= 30) 0.153482 0.318702E-01 0.256872 5%LSD 174DF 0.428353 0.889464E-01 0.716904 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN2 5/ 9/21 21:21 :PAGE phan tich ket qua thi nghiem F-PROBABILITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN (N= 180) STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | 45 | | HSN CCC SL NO OBS 180 2.3500 180 2.8833 180 6.4056 BASED ON TOTAL SS 0.95411 1.0565 1.6501 BASED ON RESID SS 0.84066 0.17456 1.4069 % | | 3.8 0.0000 6.1 0.0000 4.2 0.0000 | | TN3 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE TN3 5/ 9/21 21:26 :PAGE phan tich ket qua thi nghiem VARIATE V002 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 15.3000 5.10000 7.52 0.000 * RESIDUAL 116 78.6667 678161 * TOTAL (CORRECTED) 119 93.9667 789636 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCC FILE TN3 5/ 9/21 21:26 :PAGE phan tich ket qua thi nghiem VARIATE V003 CCC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 103.528 34.5092 ****** 0.000 * RESIDUAL 116 3.46037 298308E-01 * TOTAL (CORRECTED) 119 106.988 899058 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE TN3 5/ 9/21 21:26 :PAGE phan tich ket qua thi nghiem 3 VARIATE V004 SL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 53.4917 17.8306 7.90 0.000 * RESIDUAL 116 261.833 2.25718 * TOTAL (CORRECTED) 119 315.325 2.64979 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN3 5/ 9/21 21:26 :PAGE phan tich ket qua thi nghiem MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 30 30 30 30 HSN 3.83000 2.77000 2.40067 2.28000 CCC 4.77667 2.54667 2.55000 2.28000 SL 7.56667 6.63333 6.40000 5.70000 SE(N= 30) 0.150351 0.315335E-01 0.274298 5%LSD 116DF 0.421091 0.883166E-01 0.768234 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN3 5/ 9/21 21:26 :PAGE phan tich ket qua thi nghiem F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - 46 VARIATE HSN CCC SL GRAND MEAN (N= 120) NO OBS 120 2.3167 120 3.1708 120 6.5750 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.88861 0.82351 3.9 0.0002 0.94819 0.17272 5.4 0.0000 1.6278 1.5024 6.1 0.0001 | | | | TN4 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE TN4 5/ 9/21 21:45 :PAGE phan tich ket qua thi nghiem VARIATE V002 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 25.6667 8.55556 7.29 0.000 * RESIDUAL 116 136.200 1.17414 * TOTAL (CORRECTED) 119 161.867 1.36022 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCC FILE TN4 5/ 9/21 21:45 :PAGE phan tich ket qua thi nghiem VARIATE V003 CCC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 55.5736 18.5245 617.55 0.000 * RESIDUAL 116 3.47965 299970E-01 * TOTAL (CORRECTED) 119 59.0532 496246 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE TN4 5/ 9/21 21:45 :PAGE phan tich ket qua thi nghiem VARIATE V004 SL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 5.66667 1.88889 1.72 0.164 * RESIDUAL 116 127.133 1.09598 * TOTAL (CORRECTED) 119 132.800 1.11597 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN4 5/ 9/21 21:45 :PAGE phan tich ket qua thi nghiem MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 30 30 30 30 HSN 4.16333 3.46667 3.43333 2.90000 CCC 4.81667 4.44667 3.629333 3.10333 SL 7.50000 7.46667 7.03333 7.60000 SE(N= 30) 0.197833 0.316212E-01 0.191135 5%LSD 116DF 0.554076 0.885622E-01 0.535317 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN4 5/ 9/21 21:45 :PAGE phan tich ket qua thi nghiem F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - 47 VARIATE HSN CCC SL GRAND MEAN (N= 120) NO OBS 120 3.0333 120 3.8425 120 7.4000 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.1663 1.0836 5.7 0.0002 0.70445 0.17320 4.5 0.0000 1.0564 1.0469 4.1 0.1644 | | | | TN5 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE TN5 5/ 9/21 21:49 :PAGE phan tich ket qua thi nghiem VARIATE V002 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 42.4667 14.1556 12.69 0.000 * RESIDUAL 116 129.400 1.11552 * TOTAL (CORRECTED) 119 171.867 1.44426 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCC FILE TN5 5/ 9/21 21:49 :PAGE phan tich ket qua thi nghiem VARIATE V003 CCC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 257.590 85.8632 ****** 0.000 * RESIDUAL 116 4.08200 351896E-01 * TOTAL (CORRECTED) 119 261.672 2.19892 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE TN5 5/ 9/21 21:49 :PAGE phan tich ket qua thi nghiem VARIATE V004 SL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 158.425 52.8083 46.70 0.000 * RESIDUAL 116 131.167 1.13075 * TOTAL (CORRECTED) 119 289.592 2.43354 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN5 5/ 9/21 21:49 :PAGE phan tich ket qua thi nghiem MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 30 30 30 30 HSN 3.47000 4.016679 3.373339 1.013330 CCC 3.47454 3.23000 2.13036 0.84000 SL 7.50000 7.30000 7.10000 4.66667 SE(N= 30) 0.192831 0.342489E-01 0.194143 5%LSD 116DF 0.540068 0.959218E-01 0.543742 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN5 5/ 9/21 21:49 :PAGE phan tich ket qua thi nghiem F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION 48 C OF V |CT | HSN CCC SL (N= 120) NO OBS 120 2.6333 120 3.0917 120 6.6417 SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.2018 1.0562 4.1 0.0000 1.4829 0.18759 6.1 0.0000 1.5600 1.0634 6.7 0.0000 | | | TN6 SINGLE EFFECT ANOVA FOR UNBALANCED DATA FILE TN66 5/ 9/21 22: :PAGE phan tich ket qua thi nghiem ANOVA FOR SINGLE EFFECT - CT -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB SR 225.88 1.4437 145 156.46 0.000 CDR 29.784 0.58495E-01 145 509.17 0.000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN66 5/ 9/21 22: :PAGE phan tich ket qua thi nghiem MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 30 30 30 31 29 SR 10.5000 9.50000 5.50000 3.93548 6.96552 CDR 2.89000 3.87333 1.92667 1.34194 1.96897 SE(N= 30) 0.219370 0.441570E-01 5%LSD 145DF 0.613101 0.123411 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN66 5/ 9/21 22: :PAGE phan tich ket qua thi nghiem F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SR CDR GRAND MEAN (N= 150) NO OBS 150 7.2600 150 2.3960 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 2.7329 1.2015 5.6 0.0000 0.92547 0.24186 4.1 0.0000 | | | | TN7 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SR FILE TN7 5/ 9/21 22: :PAGE PHAN TICH KET QUA THI NGHIEM VARIATE V002 SR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 38.6933 9.67333 7.53 0.000 * RESIDUAL 145 186.267 1.28460 * TOTAL (CORRECTED) 149 224.960 1.50980 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDR FILE TN7 5/ 9/21 22: :PAGE PHAN TICH KET QUA THI NGHIEM VARIATE V003 CDR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 31.8747 7.96867 92.30 0.000 * RESIDUAL 145 12.5187 863356E-01 49 * TOTAL (CORRECTED) 149 44.3933 297942 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN7 5/ 9/21 22: :PAGE PHAN TICH KET QUA THI NGHIEM MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 30 30 30 30 30 SR 7.07045 7.03004 7.03213 7.00100 7.00200 CDR 3.88667 2.78333 2.86333 3.76333 3.57000 SE(N= 30) 0.206930 0.536456E-01 5%LSD 145DF 0.578332 0.149930 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN7 5/ 9/21 22: :PAGE PHAN TICH KET QUA THI NGHIEM F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SR CDR GRAND MEAN (N= 150) NO OBS 150 7.5600 150 3.3733 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.2287 1.1334 5.0 0.0000 0.54584 0.29383 8.7 0.0000 50 | | | |