NGHIÊN cứu ẢNH HƯỞNG của đèn LEDTRONG QUY TRÌNH VI NHÂN GIỐNG LAN GIẢHẠC DI LINH TALY

Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, Số 53B, 2021 NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA ĐÈN LED TRONG QUY TRÌNH VI NHÂN GIỐNG LAN GIẢ HẠC DI LINH TALY ĐÀO QUỐC HƯNG1, ĐỖ ĐĂNG GIÁP2, TRẦN THỊ THANH TÂM1, NGUYỄN THỊ KIM KHOA1, NGUYỄN VĂN ĐỆ1, ĐỖ ĐỨC THĂNG2 Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm, Trường Đại học Cơng nghiệp thành phố Hồ Chí Minh Viện Sinh học Nhiệt đới hungdao1610@gmail.com Tóm tắt: Lan giả hạc (Dendrobium anosmum) Di Linh Taly có nguồn gốc huyện Di Linh, tỉnh Lâm Đồng, lồi lan q, có giá trị kinh tế cao, nhiều người sưu tầm Các mẫu protocorm-like bodies (PLB) lan giả hạc Di Linh Taly khảo sát nuôi cấy in vitro đèn FL (huỳnh quang) đèn diode phát ánh sáng xanh dương kết hợp với đỏ (LED BR 30:35), sau tái sinh hồn chỉnh in vitro dưỡng vườn ươm tháng Protocorm-like bodies ni đèn LED BR có tỷ lệ phát sinh chồi 38 – 42%, gấp 3,8 - 4,2 lần so với nuôi đèn FL (10%) Chồi lan giả hạc nuôi đèn LED BR có số rễ/chồi 3,67 – 5,16, nhiều có ý nghĩa thống kê so với nuôi FL (1,95 rễ/chồi) Chiều dài rễ LED BR 3,42 – 4,14 mm FL 2,97 mm Các loại lan in vitro thích nghi tốt dưỡng vườn ươm Đèn LED 30R:35R ảnh hưởng có ý nghĩa đến sinh trưởng, phát triển chồi rễ lan giả hạc Di Linh Taly, làm tăng hiệu nhân giống in vitro Từ khóa: light-emitting diode (LED), Dendrobium anosmum, lan giả hạc Di Linh Taly, protocorm-like bodies, nhân giống in vitro, dưỡng EFFECTS OF LIGHT-EMITTING DIODES IN MICROPROPAGATION OF Dendrobium anosmum DI LINH TALY Abstract: Dendrobium anosmum Di Linh Taly originated from Di Linh District, Lam Dong Province is a precious orchid, of high economic value, and in great demand of collectors Protocorm-like bodies (PLB) Dendrobium anosmum Di Linh Taly were investigated by in vitro culture under FL (flouresent lamp) and under light-emitting diodes with blue and red combination (LED BR 30:35) The in vitro regenerated plantlets were hardened under greenhouse environment for month Percentage of PLB producing shoots was 38 – 42% under LED 30B:35R, 3.8 – 4.2 times more than that under FL (10%) The number of roots per shoot under LED 30B:35R was 3.67 – 5.16, significantly more than that under FL (1.95 roots per shoot) Root length under LED 30B:35R was 3.42 – 4.14 mm while that under FL was 2.97 mm The in vitro plantlets all were well acclimated under greenhouse environment The LED 30B:35R could significantly promote growth and development of shoots and roots Dendrobium anosmum Di Linh Taly, increasing cost effectiveness in micropropagation Key words: light-emitting diode (LED), Dendrobium anosmum Di Linh Taly, protocorm-like bodies, micropropagation, hardening ĐẶT VẤN ĐỀ Lan Giả Hạc gọi Lưỡng Điểm Hạc, Giả Hạc Tím, hay Lan Phi Điệp có tên khoa học Dendrobium anosmum Lan Giả Hạc Di Linh Taly có nguồn gốc huyện Di Linh, tỉnh Lâm Đồng, lồi lan q, có giá trị kinh tế cao, nhiều người sưu tầm Với cách nhân giống truyền thống cách tách chồi giâm đoạn thân cho hệ số nhân giống thấp [1] Trong phương pháp nhân giống in vitro cho phép nhân nhanh, tạo trẻ hóa, bệnh có hiệu kinh tế cao Ánh sáng yếu tố cần thiết cho trình quang hợp Các loại nguồn sáng sử dụng ni cấy mơ thực vật gồm có đèn dây tốc (IB), đèn huỳnh quang (TFL), đèn kim loại halogen (MHL), đèn natri cao áp (HPS) Từ lâu đèn huỳnh quang sử dụng phổ biến vi nhân giống nhiều loại trồng Loại ánh sáng từ TFL có dãi bước sóng rộng từ 350 – 750 nm, có phổ ánh sáng không cần thiết, chất lượng thấp kích thích sinh trưởng Loại nguồn sáng sử dụng điện cao với hiệu đầu thấp, dẫn đến làm tăng giá thành sản xuất Hiện cơng nghệ © 2021 Trường Đại học Cơng nghiệp thành phố Hồ Chí Minh NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA ĐÈN LED TRONG QUY TRÌNH VI NHÂN GIỐNG LAN GIẢ HẠC DI LINH TALY 49 diode phát sáng (light-emitting diode, LED) nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật vi nhân giống có nhiều ưu điểm hẳn nguồn chiếu sáng thông thường Sử dụng đèn LED cho phép lựa chọn phổ ánh sáng phù hợp cho loại cây, tiết kiệm điện năng, tỏa nhiệt thấp, bền, tuổi thọ bóng đèn cao, kích thước bóng đèn nhỏ, giảm giá thành nhân giống in vitro [2] Ánh sáng đơn sắc hay kết hợp loại ánh sáng đơn sắc chứng minh có ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển Ánh sáng đỏ cảm ứng kéo dài đỉnh chồi [3], phát triển đặc điểm hình thái làm vàng chồi, làm tăng chiều cao chồi, độ dài lóng phát sinh rễ Trong ánh sáng xanh dương kích thích tổng hợp chlorophyll phát triển khí khổng [4] Sử dụng đèn LED kết hợp ánh sáng đỏ ánh sáng xanh dương kích sinh trưởng củ Lilium, cho củ to hơn, làm tăng sinh khối khơ, tươi tích lũy chất khơ nhiều [5] Mục đích nghiên cứu khảo sát ảnh hưởng đèn LED kết hợp ánh sáng xanh dương đỏ quy trình nhân giống in vitro lan giả hạc Di Linh Taly, làm sở cho việc ứng dụng đèn LED nuôi cấy mô loại lan PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu Nghiên cứu thực từ tháng 12/2019 đến tháng 6/2020 Phịng Thí nghiệm Trọng điểm phía Nam Cơng nghệ Tế bào Thực vật, Viện Sinh học Nhiệt Đới, 9/621 Xa lộ Hà Nội, Quận Thủ Đức, Thành phố Hồ Chí Minh 2.2 Vật liệu Mẫu protocorm-like bodies (PLB) Lan giả hạc Di Linh Taly (Dendrobium anosmum) in vitro sử dụng làm vật liệu nghiên cứu Viện Sinh học Nhiệt đới (9/621 Xa lộ Hà Nội, Phường Linh Trung, Quận Thủ Đức, Thành phố Hồ Chí Minh) cung cấp Các loại đèn chiếu sáng sử dụng gồm đèn huỳnh quang (FL) đèn diode phát sáng (LED) kết hợp ánh sáng xanh dương đỏ (Bảng 1) Bảng Các loại đèn chiếu sáng sử dụng nhân giống in vitro lan giả hạc Di Linh Taly Loại đèn Tỉ lệ ánh sáng xanh Cường độ ánh sáng dương : đỏ (μmol.m-2.s-1) FL Huỳnh quang 24,5 LED 30B : 35R 53,6 LED 30B : 35R 51,8 Ánh sáng xanh dương (blue, B); ánh sáng đỏ (red, R) 2.3 Bố trí thí nghiệm Thí nghiệm thí nghiệm thực phịng thí nghiệm Mỗi nghiệm thức thử nghiệm bình, bình cấy mẫu Các bình bố trí hồn tồn ngẫu nhiên Mơi trường ni cấy MS bổ sung 30g/L đường sucrose, 0,2g/L nấm men, 0,2g/L peptone, 0,2 mg/L BA, 10% nước dừa Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng đèn LED giai đoạn phát sinh chồi từ PLB lan giả hạc Di Linh Taly Mẫu PLB lan giả hạc Di Linh Taly cấy vào môi trường môi trường MS bổ sung, nuôi ba điều kiện chiếu sáng: FL (Huỳnh quang) LED (30B:35R, cường độ 53,6 μmol.m-2 s-1) LED (30B:35R, cường độ 51,8 μmol.m-2 s-1) Chiều cao chồi, số chồi, hình thái chồi, khối lượng tươi, khối lượng khô xác định sau tuần ni cấy Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng đèn LED giai đoạn tái sinh hoàn chỉnh từ chồi lan giả hạc Di Linh Taly Chồi lan giả hạc Di Linh Taly thí nghiệm cấy vào môi trường môi trường MS bổ sung, nuôi ba điều kiện chiếu sáng: FL (Huỳnh quang) LED (30B:35R, cường độ 53,6 μmol.m-2 s-1) LED (30B:35R, cường độ 51,8 μmol.m-2 s-1) © 2021 Trường Đại học Cơng nghiệp thành phố Hồ Chí Minh 50 NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA ĐÈN LED TRONG QUY TRÌNH VI NHÂN GIỐNG LAN GIẢ HẠC DI LINH TALY Chiều dài rễ, số rễ/chồi, số lá, số chồi, chiều cao cây, hàm lượng chlorophyll, hàm lượng carotenoid khảo sát sau tuần ni cấy Thí nghiệm thực nhà lưới Cây lan giả hạc tái sinh in vitro ba điều kiện chiếu sáng (FL, LED LED 2) chuyển phòng ánh sáng tự nhiên 10 ngày Những lan rửa sạch, để nước ngày nhà lưới, trồng giá thể dớn trắng tháng Cây chăm sóc nhau, tưới ngày/lần, tưới ướt đẫm giá thể Vườn ươm chiếu ánh sáng tự nhiên, có mai vịm che, lưới bao xung quanh, phun sương tự động 3h/lần, lần phút Số lá, số rễ, chiều cao cây, tỷ lệ sống xác định sau tháng dưỡng Phương pháp xác định sinh khối, hàm lượng chlorophyll carotenoid Các mẫu lan tươi (g/bình) xác định khối lượng cân phân tích CP224S (Sartorius, Germany), sau đem sấy nhiệt độ 50oC 48 tủ sấy SANYO MOV- 112 (Japan) xác định khối lượng khô Hàm lượng chlorophyll carotenoid xác định phương pháp đo màu Mẫu lan (0,25g) sau tuần nuôi cấy cắt nhuyễn, cho vào ống nghiệm chứa 10ml acetone 80%, bịt kín, đặt nhiệt độ phòng 72 giờ, đo mật độ quang bước sóng 470nm, 645nm 663nm máy đo UV- VIS (Agilent) Mỗi nghiệm thức thực lần lặp Hàm lượng chlorophyll a, b carotenoid tính theo cơng thức Arnon [6]: Chlorophyll a (mg.g-1) = (12,7.A663 −2,69.A645 ).V (22,9.A m −4,68.A ).V 645 663 Chlorophyll b (mg.g-1) = m Chlorophyll tổng = Chlorophyll a + Chlorophyll b [1000.A −1,82.(12,25.A −2,97.A )−85,02.(21,5.A −5,1.A )].V 470 663 645 645 663 Carotenoid (mg.g-1) = 198.m Trong đó: A470, A645, A663 độ hấp phụ (A) đo bước sóng 470, 645 663 nm m khối lượng mẫu (g) V thể tích acetone 80% (ml) Phân tích số liệu: Phân tích phương sai (ANOVA) thực phần mềm Statgraphics XV.I (Statgraphics Technolgies, Hoa Kỳ) Các tiêu nghiên cứu nghiệm thức so sánh sai khác kiểm định LSD α = 0.05 (Least Significant Difference) KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 Ảnh hưởng đèn LED đến sinh trưởng phát triển chồi từ PLB lan giả hạc Di Linh Taly Dựa theo số liệu thống kê mô tả quan sát sinh thái (Bảng Hình 1), sinh trưởng phát triển chồi từ protocorm-like bodies (PLB) lan giả hạc Di Linh Taly in vitro nuôi đèn LED khỏe mạnh nuôi đèn huỳnh quang (FL) Số chồi phát sinh từ PLB nghiệm thức có chiếu sáng đèn LED 10 – 11, cao 3,3 – 3,6 lần so với nghiệm thức FL (3 chồi) Ở tuần thứ sau nuôi cấy mẫu cấy FL chủ yếu phát triển dạng protocorm (87%) Kích thước chồi LED cho 60% chồi nhỏ 0,5 cm, 40% chồi 0,5 – cm LED cho 55% chồi nhỏ 0,5 cm, 36% chồi 0,5 – cm, 9% chồi lớn cm FL cho chồi nhỏ 0,5 cm (100%) Ánh sáng màu xanh dương có bước sóng 400 đến 500 nm, có lượng tương đối cao, có tác động mạnh đến sinh trưởng Lin cộng nghiên cứu nhân giống in vitro lan thạch học thiết bì (Dendrobium officianle) cho thấy PLB ni cấy LED ánh sáng xanh dương hay LED ánh sáng xanh dương kết hợp ánh sáng đỏ (LED BR) khỏe mạnh hơn, phát sinh nhiều chồi so với nuôi LED ánh sáng đỏ, huỳnh quang hay tối Ánh sáng xanh dương cho nhân tố điều hòa sinh trưởng, tác động đến biệt hóa PLB, điều kiện ánh sáng tốt kích tích phát sinh chồi [7] Bảng Ảnh hưởng đèn LED đến sinh trưởng phát triển chồi lan giả hạc Di Linh Taly sau tuần nuôi cấy PLB in vitro Ánh sáng Số mẫu cấy Số mẫu sống Tỷ lệ mẫu sống PLB FL 50 30 60% 26a © 2021 Trường Đại học Cơng nghiệp thành phố Hồ Chí Minh LED 50 24 48% 11b LED 50 29 58% 15b NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA ĐÈN LED TRONG QUY TRÌNH VI NHÂN GIỐNG LAN GIẢ HẠC DI LINH TALY Hình thái chồi Kích thước chồi 51 Tỷ lệ PLB Cụm Tỷ lệ tạo cụm Chồi Tỷ lệ tạo chồi Chồi < 0,5 cm Tỷ lệ chồi cm 87% 3% 3a 10% 3a 100% 0% 46% 13% 10b 42% 6b 60% 40% 52% 10% 11b 38% 6b 55% 36% Tỷ lệ chồi > cm 0% 0% 9% Các ký tự khác (a, b) thể khác biệt có ý nghĩa (p ≤ 0,05) A1 A2 B1 B2 C1 C2 Hình Chồi lan giả hạc Di Linh Taly tuần sau nuôi cấy PLB in vitro A1, A2: chiếu sáng FL B1, B2: chiếu sáng LED C1, C2: chiếu sáng LED Tỷ lệ mẫu sống khơng có khác biệt đáng kể nghiệm thức chiếu sáng đèn LED huỳnh quang (Hình 1) Tỷ lệ mẫu bị nâu hóa dẫn đến hoại tử sớm lên tới 40 – 52% (Bảng 2) Hiện tượng nâu hóa thường có liên quan trực tiếp đến hoạt động enzyme ơxy hóa polyphenol mà không liên quan đến hàm lượng phenol nội sinh [7] Khi bị stress vết cắt lúc cấy mẫu hợp chất phenol sinh ra, theo enzyme peroxidase ơxy hóa hợp chất phenol thành quinine, hợp chất có phản ứng mạnh độc mô thực vật Sinh khối chồi phát sinh từ PLB ni LED cao có ý nghĩa thống kê so với nuôi FL Sau tuần nuôi cấy PLB sinh khối tươi chồi nghiệm thức LED LED tương ứng 0,212 0,247 g FL 0,141 g, khoảng 57 – 67% so với LED Tương tự, sinh khối khô chồi lan LED LED 0,020 0,026 g FL 0,015 g, 55 - 71% so với LED (Bảng 3) Ánh sáng đỏ kích thích làm tăng sinh khối tươi ánh sáng đỏ kết hợp với ánh sáng xanh dương làm tăng tích lũy vật chất khơ Kết nghiên cứu Lin cộng cho thấy sinh khối tươi © 2021 Trường Đại học Công nghiệp thành phố Hồ Chí Minh 52 NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA ĐÈN LED TRONG QUY TRÌNH VI NHÂN GIỐNG LAN GIẢ HẠC DI LINH TALY sinh khối khô chồi 5mm lan thạch học thiết bì đạt cao mẫu lan nuôi LED đỏ Sinh khối tươi loại chồi LED đỏ cao gấp gần lần so với FL, LED BR tối Trong tích lũy chất khơ chồi lan đạt cao RED BR thấp LED đỏ [8] Xu cộng nghiên cứu nhân giống in vitro PLB lan vũ nữ (Oncidium) cho thấy LED đỏ PLB tăng trưởng mạnh nhất, hàm lượng carbohydrate nhiều tỉ lệ biệt hóa thấp LED xanh dương PLB có tỉ lệ biệt hóa cao [9] Bảng Ảnh hưởng đèn LED đến sinh khối chồi phát sinh từ PLB lan giả hạc Di Linh Taly sau tuần nuôi cấy in vitro Ánh sáng Khối lượng tươi (g) Khối lượng khô (g) b FL 0,141 0,015b LED 0,212ab 0,020ab a LED 0,247 0,026a Các ký tự khác (a, b) thể khác biệt có ý nghĩa (p ≤ 0,05) dựa theo kiểm định LSD 3.2 Ảnh hưởng đèn LED quy trình tái sinh hoàn chỉnh từ chồi lan giả hạc Di Linh Taly in vitro Chồi lan nuôi đèn LED sinh trưởng phát triển nhanh so với nuôi đèn huỳnh quang (FL) Tỷ lệ chồi phát sinh rễ LED 80 – 91% cao hẳn so với FL (chỉ có 53%) Số rễ/chồi đèn LED 3,67 – 5,16 cao gấp 1,9 – 2,7 lần so với FL (1,95 rễ/chồi) Tương tự, chiều dài rễ LED LED tương ứng 4,14 mm 3,42 mm, cao 1,2 -1,4 lần so với FL (l2,97 mm) (Bảng 4) Kết hợp ánh sáng xanh dương đỏ (LED BR) có ảnh hưởng làm tăng tỉ lệ chồi phát sinh rễ kéo dài rễ Trong giai đoạn tái sinh hoàn chỉnh in vitro từ chồi lan vũ nữ (Onchidium), tỉ lệ chồi phát sinh rễ nuôi LED BR cao nhiều so với nuôi LED xanh dương, LED đỏ nuôi huỳnh quang Chiều dài rễ LED BR, LED xanh dương hay LED đỏ dài so với FL [10] Bảng Ảnh hưởng đèn LED đến sinh trưởng phát triển rễ từ chồi lan giả hạc Di Linh Taly sau tuần nuôi cấy in vitro Ánh sáng Mẫu cấy Tỷ lệ chồi hình thành rễ Số rễ/chồi Chiều dài rễ (mm) FL 36 53% (19) 1,95c 2,97b LED 35 91% (32) 5,16a 4,14a LED 30 80% (24) 3,67b 3,42ab Các ký tự khác (a, b, c) thể khác biệt có ý nghĩa (p ≤ 0,05) dựa theo kiểm định LSD Sự sinh trưởng phát triển chồi lan giai đoạn tái sinh hoàn chỉnh nghiệm thức chiếu sáng đèn LED tốt so với chiếu sáng đèn huỳnh quang (FL) Số chồi/mẫu cấy số lá/chồi LED 2,60 3,52, LED 3,20 3,44 cao FL (2,17 2,98) Chiều dài chồi khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê nghiệm thức nghiên cứu tiêu LED 11,93 mm, dài 33% so với FL, 8,98 mm, (Bảng 5) Điều khẳng định thêm quan sát hình thái chồi Cây lan in vitro chiếu sáng đèn LED có thân cao hơn, dài có diện tích rộng so với chiếu sáng FL (Hình 2) Khi nghiên cứu nhân giống lan vũ nữ giai đoạn tạo rễ in vitro ánh sáng đỏ kích thích kéo dài chồi cịn ánh sáng xanh dương ức chế kéo dài chồi [10] Tuy nhiên, sử dụng LED kết hợp hai loại ánh sáng đơn sắc (xanh dương đỏ) nuôi cấy in vitro lan hồ điệp (Phalaenopsis) sinh khối chồi, chiều cao chồi chiều dài tăng lên đáng kể so với ánh sáng huỳnh quang [11] © 2021 Trường Đại học Cơng nghiệp thành phố Hồ Chí Minh NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA ĐÈN LED TRONG QUY TRÌNH VI NHÂN GIỐNG LAN GIẢ HẠC DI LINH TALY 53 Bảng Ảnh hưởng đèn LED đến sinh trưởng phát triển chồi lan giả hạc Di Linh Taly sau tuần nuôi cấy in vitro Ánh sáng Số chồi/mẫu cấy Chiều dài chồi (mm) Số lá/chồi FL 2,17b 8,98ab 2,98b LED 2,60b 7,81b 3,52a LED 3,20a 11,93a 3,44ab Các ký tự khác (a, b) thể khác biệt có ý nghĩa (p ≤ 0,05) dựa theo kiểm định LSD A2 B2 A1 B1 C2 C1 Hình Cây lan giả hạc Di Linh Taly sau tuần nuôi cấy in vitro A1, A2: Cây chiếu sáng FL B1, B2: Cây chiếu sáng LED C1, C2: Cây chiếu sáng LED Cây lan LED có hàm lượng chlorophyll tổng đạt cao 0,994 mg/g FL lại thấp 0,569 mg/g Hàm lượng carotenoid nghiệm thức LED 0,313 mg/g, cao có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức FL 0,245 mg/g (Bảng 6) Chlorophyll a, b sắc tố quang hợp hấp thụ ánh sáng đỏ bước sóng tương ứng 660, 640 nm ánh sáng xanh dương vùng bước sóng 400 – 450, 425 – 475 nm Carotenoid gồm sắc tố có tế bào thực vật, hấp thụ lượng ánh sáng sử dụng cho quang hợp bảo vệ chlorophyll khỏi phá hủy ánh sáng Carotenoid hấp thụ tối ưu vùng ánh sáng xanh dương với bước sóng 400-500 nm Hàm lượng chlorophyll carotenoid sinh nhiều nghiệm thức chiếu sáng đèn LED xanh dương đỏ (LED BR) kích thích ánh sáng xanh dương kết hợp với ánh sáng đỏ Nghiên cứu trước có kết tương tự với nghiên cứu Khi nghiên cứu nhân giống in vitro lan thạch học thiết bì Lin cộng hàm lượng chlorophyll tổng, a, b LED BR cao nhiều so với LED đơn sắc (xanh dương đỏ), huỳnh quang tối Hàm lượng chlorophyll hình thành nhiều LED 2B:1R (tỉ lệ ánh sáng xanh dương đỏ 2:1) hàm lượng carotenoid cao LED 1B:2R (tỉ lệ ánh sáng xanh dương đỏ 1:2) [7] Kết nghiên cứu vi nhân giống Stevia rebaudiana Marco cộng cho thấy hàm lượng sắc tố quang hợp chlorophyll a, b, a + b carotene thu ánh sáng đèn LED BR cao đèn huỳnh quang [12] © 2021 Trường Đại học Công nghiệp thành phố Hồ Chí Minh 54 NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA ĐÈN LED TRONG QUY TRÌNH VI NHÂN GIỐNG LAN GIẢ HẠC DI LINH TALY Bảng Ảnh hưởnng đèn LED đến hàm lượng chlorophyll carotenoid mẫu lan giả hạc Di Linh Taly sau tuần nuôi cấy chồi Ánh sáng Chlorophyl a (mg/g) Chlorophyl b (mg/g) Chlorophyl tổng (mg/g) Carotenoid (mg/g) FL 0,569c 0,309c 0,877c 0,245d LED 0,617c 0,303c 0,920c 0,292cd LED 0,652c 0,341c 0,994c 0,313c Các ký tự khác (c, d) thể khác biệt có ý nghĩa (p ≤ 0,05) dựa theo kiểm định LSD 3.3 Sự sinh trưởng phát triển lan giả hạc Di Linh Taly dưỡng vườn ươm Cây lan giả hạc Di Linh Taly nuôi cấy in vitro điều kiện chiếu sáng khác (LED hay FL) đưa dưỡng vườn ươm cho thấy khả thích nghi chúng khơng có khác Hầu hết tiêu khảo sát chiều dài rễ, số chồi mới, chiều dài chồi gốc số lá/chồi khơng sai khác có ý nghĩa thống kê loại lan tái sinh in vitro (LED 1, LED 2, FL) Số rễ/chồi chiều dài chồi có nguồn từ đèn LED nhiều dài so với có nguồn từ đèn huỳnh quang FL (Bảng Hình 3) Kết tương tự với nghiên cứu Ramírez-Mosqueda cộng lồi lan vanilla (Vanilla planifolia Jacks) [13] Các lan vanilla nhân giống in vitro với nguồn chiếu sáng khác (LED xanh dương, LED đỏ, LED xanh dương kết hợp với đỏ, LED trắng, đèn huỳnh quang) dưỡng vườn ươm tuần thích nghi tốt, tỉ lệ sống 100%, khơng có khác biệt có ý nghĩa sinh trưởng phát triển Bảng Sinh trưởng phát triển loại lan giả hạc Di Linh Taly sau tháng dưỡng vườn ươm Số rễ/chồi Chiều dài rễ (mm) Số chồi Chiều dài chồi gốc (mm) Chiều dài chồi (mm) Số lá/chồi Cây có nguồn từ FL 4,37b 4,12a 1,53a 14,77a 8,09b 4,11a Cây có nguồn từ LED Cây có nguồn từ LED 5,65a 5,05ab 4,14a 4,37a 1,44a 1,11a 13,20a 15,04a 7,74b 10,30a 4,06a 3,94a Nguồn mẫu in vitro Các ký tự khác (a, b) thể khác biệt có ý nghĩa (p ≤ 0,05) dựa theo kiểm định LSD A B C Hình Cây lan giả hạc Di Linh Taly sau tuần dưỡng vườn ươm A Cây có nguồn từ in vitro với FL B Cây có nguồn từ in vitro với LED C Cây có nguồn từ in vitro với LED KẾT LUẬN Đèn LED ánh sáng xanh dương/ đỏ (30B:35R) thích hợp quy trình nhân giống in vitro lan giả hạc Di Linh TaLy Đèn LED 30B:35R có tác động kích thích tạo chồi từ protocorm-like bodies làm tăng số chồi phát sinh Nó hiệu kích thích hình thành rễ làm tăng hàm lượng chất khơ chồi lan giả ni cấy in vitro © 2021 Trường Đại học Cơng nghiệp thành phố Hồ Chí Minh NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA ĐÈN LED TRONG QUY TRÌNH VI NHÂN GIỐNG LAN GIẢ HẠC DI LINH TALY 55 Có thể ứng dụng đèn LED nhân nhanh lan giả hạc Di Linh Taly in vitro Tuy nhiên, cần nghiên cứu sâu tỉ lệ kết hợp loại ánh sáng đơn sắc, cường độ ánh sáng quang kỳ thích hợp với giống LỜI CẢM ƠN Các tác giả chân thành cảm ơn Phòng Thí nghiệm Trọng điểm phía Nam Cơng nghệ Tế bào Thực vật, Viện Sinh học Nhiệt Đới, 9/621 Xa lộ Hà Nội, Quận Thủ Đức, Thành phố Hồ Chí Minh hỗ trợ vật liệu, hóa chất, dụng cụ trang thiết bị để thực nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Nguyễn Văn Vinh, Nguyễn Hữu Lê, Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật lên phát sinh chồi rễ phong lan giả hạc Dendrobium anosmum Tạp chí Khoa học Công nghệ, 2009 47 (5), p.99-107 [2] Gioia D Massa, Hyeon-Hye Kttchim, Raymond M Wheeler, Cary A Mitchell, Plant productivity in response to LED lighting, Horticultural Science, 2008 43 (7), p.1951-1956 [3] Bonnett HT, Phytochrome regulation of endogenous bud development on root cultures of Convolvulus arvensis, Planta, 1972 106, p.325-330 [4] Poudel PR, Kataoka I, Mochioka R, Effect of red- and blue-light-emitting diodes on growth and morphogenesis of grapes, Plant Cell Tissue Organ Culture, 2008 92, p.147-153 [5] Lian ML, Murhy HN, Paek KY, Effects of light-emitting diodes (LEDs) on the in vitro inductioin and growth of bulblets of Lilium oriental hybrid ‘Pesaro’, Science of Horticulture, 2002 94, p.365-370 [6] Arnon DI, Copper enzymes in isolated chloroplasts polyphenol oxidase in Beta vulgaris, Plant Physiology, 1949 94, p.1-15 [7] Huang Li-Chun, Ya-Lin Lee, Bau-lian Huang, Ching-I Kuo, Jei-Fu Shaw, High polyphenol oxidase activity and low titratable acidity in browning bamboo tissue culture, In Vitro Cellular and Developmental Biology – Plant, 2002 38, p.358-365 [8] Lin Yuan, Jia Li, Bo Li, Tao He, Effects of light quality on growth and development of protocorm-like bodies of Dendrobium officinale in vitro, Plant Cell Tissue Organ Culture, 2011 105, p.329-335 [9] Xu ZG, Cui J, Di XR, Effects of different spectral energy distribution on tissue culture of Oncidium in vitro, Int J Autom Comput, 2009 31, p.45-50 [10] Mengxi Liu, Xu Zhigang, Yang Yang, Feng Yijie, Effects of different spectral lights on Oncidium PLBs induction, proliferation, and plant regeneration, Plant Cell Tissue Organ Culture, 2011 106, p.1-10 [11] Wongnok A, Piluek C, Techasilpitak T, Tantivivat S, Effects of light-emitting diodes on micropropagation of Phalaenosis orchids, Proceeding IW on Ornamental Plants - Actual Horticulure, 2008 788, p.149-156 [12] Marco A Ramírez-Mosqueda, Lourdes G Iglesias-Andreu, José R Bautisa-Aguilar, The effect of light quality on growth and development of in vitro plantlet of Stevia rebaudiana Bertoni, Sugar Technology, 2016 19(3), p.331336 [13] Ramírez-Mosqueda MA, Iglesias-Andreu LG, Luna-Sánchez IJ, Light quality affects growth and development of in vitro plantlet of Vanilla planifolia Jacks, South African Journal of Botany, 2017 p.1-6 Ngày nhận bài: 16/03/2021 Ngày chấp nhận đăng: 14/05/2021 © 2021 Trường Đại học Công nghiệp thành phố Hồ Chí Minh ...NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA ĐÈN LED TRONG QUY TRÌNH VI NHÂN GIỐNG LAN GIẢ HẠC DI LINH TALY 49 diode phát sáng (light-emitting diode, LED) nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật vi nhân giống có nhiều... NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA ĐÈN LED TRONG QUY TRÌNH VI NHÂN GIỐNG LAN GIẢ HẠC DI LINH TALY 55 Có thể ứng dụng đèn LED nhân nhanh lan giả hạc Di Linh Taly in vitro Tuy nhiên, cần nghiên cứu sâu tỉ... Chí Minh 54 NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA ĐÈN LED TRONG QUY TRÌNH VI NHÂN GIỐNG LAN GIẢ HẠC DI LINH TALY Bảng Ảnh hưởnng đèn LED đến hàm lượng chlorophyll carotenoid mẫu lan giả hạc Di Linh Taly sau