Khóa luận tốt nghiệp đánh giá ảnh hưởng của một số điều kiện nuôi cấy đến sự sinh trưởng của chủng nấm linh chi ga cb20 thu thập tại vườn quốc gia cát bà hải phòng

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: ĐÁNH GIÁ ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY ĐẾN SỰ SINH TRƯỞNG CỦA CHỦNG NẤM LINH CHI GA-CB20 THU THẬP TẠI VƯỜN QUỐC GIA CÁT BÀ HẢI PHÒNG Sinh viên thực : Đồn Thị Thu Trà Khoa : Cơng nghệ sinh học Giảng viên hướng dẫn : ThS.Trần Đông Anh HÀ NỘI, 7/2021     LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đề tài: “Đánh giá ảnh hưởng số điều kiện nuôi cấy đến sinh trưởng chủng nấm Linh Chi Ga-CB20 thu thập vườn quốc gia Cát Bà Hải Phịng.” tơi trực tiếp thực Số liệu kết nghiên cứu khóa luận hồn tồn xác, trung thực chưa công bố tài liệu, báo, tạp chí Tơi xin cam đoan thơng tin trích dẫn khóa luận rõ nguồn gốc, đảm bảo trích dẫn theo quy định Hà Nội, ngày 01 tháng 07 năm 2021 Sinh viên Đoàn Thị Thu Trà i        LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận tốt nghiệp này, bên cạnh nỗ lực thân, ln nhận động viên, giúp đỡ tận tình tập thể cá nhân Tôi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Học viện, Ban chủ nhiệm khoa Công nghệ sinh học thầy cô giáo truyền đạt cho kiến thức quý báu suốt thời gian học tập rèn luyện Học viện Nông nghiệp Việt Nam Tôi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới ThS.Trần Đông Anh Bộ môn Công nghệ vi sinh, khoa Công nghệ sinh học - Học viện Nông nghiệp Việt Nam hướng dẫn, bảo tạo điều kiện cho suốt thời gian thực tập tốt nghiệp trình học tập Tôi xin gửi lời cảm ơn tới thầy TS Ngô Xuân Nghiễn, thầy ThS Trần Đông Anh, cô ThS Nguyễn Thị Luyện, KS.Nguyễn Thị Huyền Trang, môn Công nghệ vi sinh giúp đỡ hướng dẫn suốt thời gian qua Tôi xin gửi lời cảm ơn đến bạn, anh, chị, em Viện Nghiên cứu Phát triển nấm ăn, nấm dược liệu - Học viện Nông nghiệp Việt Nam tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ tơi hồn thành khóa luận Cuối tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè, người thân ln động viên, giúp đỡ, tạo động lực cho suốt trình học tập nghiên cứu Hà Nội, ngày 01 tháng 07 năm 2021 Sinh viên Đoàn Thị Thu Trà ii        MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN .i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT .v DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii BẢN TÓM TẮT KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP viii Phần I MỞ ĐẦU .1 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu Phần II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tình hình nghiên cứu, sản xuất tiêu thụ nấm giới Việt Nam 2.1.1 Tình hình nghiên cứu, sản xuất tiêu thụ nấm giới .3 2.1.2 Tình hình nghiên cứu, sản xuất tiêu thụ nấm Việt Nam 2.2 Giới thiệu chung nấm 2.3 Giới thiệu chung nấm Linh Chi 2.3.1 Đặc điểm hình thái nấm Linh Chi 2.3.2 Chu trình sống nấm Linh Chi 2.3.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển nấm Linh Chi .10 2.3.4 Thành phần hóa học hoạt chất nấm Linh Chi 12 PHẦN III.VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP 14 3.1 Thời gian địa điểm thí nghiệm 14 3.2 Đối tượng thí nghiệm 14 3.3 Vật liệu thí nghiệm 14 3.3.1 Nguyên liệu, hóa chất 14 3.3.2 Các điều kiện, trang thiết bị sử dụng thí nghiệm .15 3.4 Phương pháp nghiên cứu 15 iii        3.4.1 Phương pháp nghiên cứu .15 3.4.2 Các tiêu theo dõi 15 3.4.3 Phương pháp xử lý số liệu 15 3.5 Nội dung nghiên cứu 15 Phần IV: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .18 4.1 Đánh giá ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng nuôi cấy đến khả sinhtrưởng chủng nấm Linh chi Ga-CB20 .18 4.2 Kết khảo sát, đánh giá ảnh hưởng pH môi trường đến khả sinh trưởng chủng nấm Linh chi Ga-CB20 nhân giống nấm 20 4.3 Kết khảo sát, đánh giá ảnh hưởng nguồn carbon đến khả sinh trưởng chủng nấm Linh chi Ga-CB20 nhân giống nấm 23 4.4 Kết khảo sát, đánh giá ảnh hưởng nguồn nito đến khả sinh trưởng chủng nấm Linh chi Ga-CB20 nhân giống nấm 26 Phần V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 29 5.1 Kết luận 29 5.2 Kiến nghị 29 TÀI LIỆU THAM KHẢO .30 PHỤ LỤC 32 iv        DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Ý nghĩa Cs Cộng CT Công thức CV% Độ xác thí nghiệm LSD0,05 Độ lệch chuẩn mức ý nghĩa 5% v        DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Thành phần hoạt chất nấm Linh Chi .13 Bảng 4.1 Ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng nuôi cấy đến sinh trưởng chủng Linh Chi Ga-CB20 18 Bảng 4.2 Ảnh hưởng pH môi trường đến sinh trưởng chủng Linh Chi Ga-CB20 22 Bảng 4.3 Ảnh hưởng nguồn carbon đến sinh trưởng chủng Linh Chi GaCB20 24 Bảng 4.4 Ảnh hưởng nguồn nito đến sinh trưởng chủng Linh Chi GaCB20 27   vi        DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Hình ảnh nấm Linh Chi tự nhiên Hình 2.2 Hình ảnh nấm Linh Chi ni trồng nhân tạo Hình 2.3 Chu trình phát triển nấm Linh Chi Hình 3.1 Hình ảnh chủng nấm Linh Chi Ga-CB20 tự nhiên 14 Hình 4.1 Hình thái hệ sợi nấm Linh chi Ga-CB20 môi trường dinh dưỡng nuôi cấy khác sau ngày nuôi cấy 20 Hình 4.2 Hình thái hệ sợi nấm Linh chi Ga-CB20 môi trường dinh dưỡng nuôi cấy khác sau 10 ngày nuôi cấy 20 Hình 4.3 Hình thái hệ sợi nấm Linh chi Ga-CB20 môi trường pH khác sau ngày nuôi cấy .22 Hình 4.4 Hình thái hệ sợi nấm Linh chi Ga-CB20 mơi trường có nguồn Carbon khác sau ngày nuôi cấy .25 Hình 4.5 Hình thái hệ sợi nấm Linh chi Ga-CB20 mơi trường có nguồn Nito khác sau ngày nuôi cấy 28   vii       BẢN TÓM TẮT KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP Tên khóa luận: “Đánh giá ảnh hưởng số điều kiện nuôi cấy đến sinh trưởng phát triển chủng nấm Linh Chi Ga-CB20 thu thập vườn quốc gia Cát Bà Hải Phịng” Giảng viên hướng dẫn: ThS.Trần Đơng Anh Sinh viên thực hiện: Đoàn Thị Thu Trà Lớp: K62-CNSHP Đề tài “Đánh giá ảnh hưởng số điều kiện nuôi cấy đến sinh trưởng phát triển chủng nấm Linh Chi Ga-CB20 thu thập vườn quốc gia Cát Bà Hải Phòng” nhằm đánh giá ảnh hưởng môi trường nuôi cấy, mức pH, nguồn carbon nito khác đến khả sinh trưởng chủng nấm Linh Ga-CB20 nhân giống nấm cấp Qua xác định môi trường dinh dưỡng bổ sung tốt thích hợp Thí nghiệm 1, đánh giá sinh trưởng hệ sợi nấm Linh Chi Ga-CB20 môi trường nuôi cấy khác nhau: PGA,YGA, SPGA; cho thấy: mơi trường có thành phần dịch chiết 200g khoai lang + 20g Glucose + 15g Agar/1000ml (SPGA) môi trường phù hợp với sinh trưởng hệ sợi nấm Linh Chi nhất, thời gian hệ sợi nấm sinh trưởng kín bề mặt mơi trường đĩa thạch 13,78 ngày với tốc độ mọc hệ sợi 3,09 mm/ngày Ở thí nghiệm 2, đánh giá sinh trưởng hệ sợi nấm Linh Chi Ga-CB20 mơi trường có pH khác nhau: 4, 5, 6, 7, 8, 9; cho thấy: mơi trường SPGA có pH khoảng (7,8) môi trường phù hợp với sinh trưởng hệ sợi nấm Linh Chi nhất, thời gian hệ sợi nấm sinh trưởng kín bề mặt mơi trường đĩa thạch từ 8,72 đến 8,89 ngày với tốc độ mọc hệ sợi khoảng (4,79-4,88) mm/ngày Sau tiến hành thí nghiệm 2, tiếp tục đánh giá sinh trưởng hệ sợi nấm Linh Chi mơi trường có bổ sung nguồn carbon khác nhau: Saccharose, Maltose, Lactose, D-fructose, Glucose, Xylose, Tinh bột tan, Dextrin; cho thấy: mơi trường pH 7-8 có 200g khoai lang +15g agar +20g D-fructose/1000ml mơi trường thích hợp với sinh trưởng hệ sợi nấm Linh Chi nhất, thời gian hệ sợi nấm sinh   viii       trưởng kín bề mặt mơi trường đĩa thạch 6,06 ngày với tốc độ mọc hệ sợi đạt 7,02 mm/ngày Cuối thí nghiệm 4, đánh giá sinh trưởng hệ sợi nấm Linh Chi mơi trường có bổ sung nguồn nito khác nhau: NH4Cl, NH4NO3, (NH4)2SO4 , Ure, Peptone, Cao nấm men, Casein ; cho thấy: mơi trường pH 7-8 có 200g khoai lang +15g agar +20g D-fructose+ 2g Cao nấm men/1000ml môi trường thích hợp với sinh trưởng hệ sợi nấm Linh Chi nhất, thời gian hệ sợi nấm sinh trưởng kín bề mặt mơi trường đĩa thạch 7,00 ngày với tốc độ mọc hệ sợi đạt 6,07 mm/ngày ix        4.3 Kết khảo sát, đánh giá ảnh hưởng nguồn carbon đến khả sinh trưởng chủng nấm Linh chi Ga-CB20 nhân giống nấm Hồn thành thí nghiệm với môi trường dinh dưỡng nuôi cấy mức pH khác nhau, xác định môi trường khoai lang khoảng pH(7,8) môi trường tối ưu cho trình sinh trưởng phát triển hệ sợi chủng nấm Linh chi GaCB20 Trong thí nghiệm đây, tiến hành đánh giá khả sinh trưởng chủng nấm Linh chi Ga-CB20 mơi trường có bổ sung nguồn carbon khác (Saccarose, Maltose, D- Fructose, α- Lactose, Glucose, Xylose, Tinh bột tan, Dextrin) Mỗi đĩa petri cấy miếng giống khoảng 5x5 mm Thí nghiệm theo dõi thường xuyên để loại bỏ tạp nhiễm (nếu có) Quan sát hình thái, đo độ dài hệ sợi sau 4, 7, 10 ngày nuôi cấy, thời gian hệ sợi mọc kín đĩa Sau q trình theo dõi thu kết bảng 4.3 hình 4.7, 4.8, 4.9 Sau ngày cấy giống, hệ sợi nấm nuôi cấy tất CT môi trường bắt đầu có tượng sinh trưởng sợi màu trắng rõ rệt, mượt Do CT có hệ sợi kín đĩa vào ngày ngoại trừ CT3 nên thí nghiệm bảng kết có tiêu đường kính hệ sợi sử dụng số liệu ngày để so sánh nhận xét Kết theo dõi thí nghiệm cho thấy, hệ sợi nấm Linh chi Ga-CB20 phát triển tốt, nhanh đồng hầu hết môi trường bổ sung nguồn carbon khác với đường kính hệ sợi sau ngày ni cấy đạt từ 44,72 mm đến 56,39 mm, thời gian hệ sợi mọc kín đĩa dạo động khoảng 6,06 đến ,11 ngày tốc độ mọc hệ sợi đạt 5,98 mm/ngày đến ,02 mm/ngày Trừ CT3(lactose) với đường kính hệ sợi sau ngày ni cấy đạt 25,61mm , tốc độ mọc 4,54 mm/ngày thời gian hệ sợi ăn kín mặt thạch 9,39 ngày, cách biệt lớn so với công thức khác Với mức ý nghĩa 0,05 sai số nằm phạm vi cho phép, CT4 với nguồn Carbon D-fructose khác có ý nghĩa với tất CT cịn lại cơng thức tốt với đường kính hệ sợi sau ngày 56,39 mm, thời gian hệ sợi ăn kín mặt thạch nhanh đạt 6,06 ngày tốc độ mọc hệ sợi 7,02 mm/ngày Độ dày hệ sợi mức dày, sợi bám vào bề mặt môi trường,số lượng sợi nấm đơn vị diện tích giá thể cao, tận dụng tốt nguồn dinh dưỡng từ môi trường, hạn chế tạp nhiễm Cuối cùng, CT4-môi trường bổ sung nguồn carbon D-fructose công thức môi trường tốt chọn để tiếp túc làm thí nghiệm 23       Bảng 4.3 Ảnh hưởng nguồn carbon đến sinh trưởng chủng Linh Chi Ga-CB20 Chỉ tiêu Đường kính hệ sợi sau ngày ni cấy Thời gian hệ Tốc độ Độ dày hệ sợi mọc kín mọc hệ sợi Đặc điểm hình mặt thạch sợi (đơn vị) thái hệ sợi (ngày) (mm/ngày) CT (mm) CT1 49,11 6,89 6,17 +++++ CT2 46,89 7,00 6,07 +++++ CT3 25,61 9,39 4,54 +++++ CT4 56,39 6,06 7,02 +++++ CT5 52,39 6,67 6,38 +++++ CT6 47,94 7,00 6,07 ++++ CT7 44,72 7,11 5,99 +++++ CT8 47,27 7,11 5,98 +++++ LSD0,05 2,20 0,26 0,18 CV% 2,70 2,10 1,80   24   Trắng, mượt, Trắng, mượt,đều Trắng, mượt,đều Trắng, mượt,đều Trắng, mượt,đều Trắng, mượt, không Trắng, mượt,đều Trắng, mượt,đều     Hình 4.4 Hình thái hệ sợi nấm Linh chi Ga-CB20 mơi trường có nguồn Carbon khác sau ngày nuôi cấy 25       4.4 Kết khảo sát, đánh giá ảnh hưởng nguồn nito đến khả sinh trưởng chủng nấm Linh chi Ga-CB20 nhân giống nấm Nhằm đánh giá ảnh hưởng nguồn nito khác đến sinh trưởng hệ sợi nấm Linh Chi Ga-CB20, tiến hành thí nghiệm ni cấy giống nấm mơi trường SPGA,pH(7,8) có bổ sung nito với hàm lượng 2,0g/lít Các nguồn nito sử dụng thí nghiệm bao gồm nguồn nito hữu (Cao nấm men, Casein, Peptone) nguồn nito vô NH4Cl, NH4NO3, (NH4)2SO4, Ure Mỗi đĩa petri cấy miếng giống khoảng 5x5 mm Thí nghiệm theo dõi thường xuyên để loại bỏ tạp nhiễm (nếu có) Quan sát hình thái, đo độ dài hệ sợi sau 4, 7, 10 ngày ni cấy, thời gian hệ sợi mọc kín đĩa Sau trình theo dõi thu kết bảng 4.4 hình 4.10, 4.11, 4.12 Kết theo dõi sinh trưởng hệ sợi nấm Linh Chi Ga-CB20 mơi trường có bổ sung nguồn nito khác cho thấy, hầu hết hệ sợi chủng nấm sinh trưởng phát triển tốt hầu hết CT(CT1,2,3,5,6,7) Hệ sợi có tốc độ mọc hệ sợi mm/ngày đạt từ 5,47 đến 6,07 mm/ngày, thời gian sinh trưởng kín bề mặt thạch từ 7,00 đên 7,78 ngày Đường kính trung bình ngày sau cấy đạt thấp 73,50 mm(CT7) đến cao 82,05 mm(CT6), với mức ý nghĩa 0,05 sai số nằm phạm vi cho phép CT6 khác khơng có ý nghĩa với cơng thức cịn lại ngồi CT7 CT4 (bổ sung 2g Ure) số liệu 0,00 ngày sau cấy bắt đầu bung sợi, hệ sợi sinh trưởng chậm sau 19 ngày, hệ sợi dừng sinh trưởng bắt đầu già hóa, xuất đốm mốc xanh Có thể mơi trường có bổ sung Ure không phù hợp cho sinh trưởng nấm Linh Chi Ga-CB20 sợi nấm cần thời gian dài để tiết enzyme thủy phân ure thành hợp chất đơn giản dễ hấp thụ để sợi nấm sử dụng Hệ sợi CT6 (bổ sung 2g Cao nấm men) sinh trưởng với độ dài đường kính trung bình ngày nhanh 82,05 bên cạnh độ dày hệ sợi sinh trưởng mức dày(+++++) hạn chế nhiều xâm nhiễm vi khuẩn, nấm mốc Bắt đầu từ ngày thứ sau cấy hệ sợi CT 1, 2, 3, đặc biệt CT7 sinh trưởng với tốc độ mọc hệ sợi tăng nhanh nhanh so với ngày trước để đến ngày thứ sau cấy sinh trưởng kín đĩa 26       Bảng 4.4 Ảnh hưởng nguồn nito đến sinh trưởng chủng Linh Chi Ga-CB20 Chỉ tiêu Đường kính hệ sợi sau ngày ni CT cấy (mm) Thời gian hệ Tốc độ mọc sợi mọc kín hệ sợi mặt thạch (mm/ngày) (ngày) Độ dày hệ sợi (đơn vị) Đặc điểm hình thái hệ sợi Trắng, CT1 78,44 7,56 5,59 ++++ xù, không CT2 79,17 7,56 5,64 ++++ Trắng, xù, Trắng, CT3 79,17 7,50 5,69 ++++ mượt, không CT4 0,00 0,00 0,00 +++++ CT5 78,55 7,56 5,64 ++++ CT6 82,05 7,00 6,07 +++++ Trắng, xù, Trắng, mượt,đều Trắng, xù, Trắng, CT7 73,50 7,78 5,47 ++++ mượt, không LSD0,05 4,90 0,16 0,37 CV% 4,10 4,40 4,30 Nhìn vào bảng kết , ta thấy môi trường dinh dưỡng khoai lang, pH khoảng 7-8, nguồn Carbon D-Fructose, với nguồn Nito hữu vô khác (trừ Ure) hệ sợi Linh Chi Ga-CB20 sinh trưởng phát triển tốt Và môi 27       trường bổ sung Cao nấm men tốt khác có ý nghĩa với tất cơng thức cịn lại tiêu thời gian hệ sợi mọc kín mặt thạch tốc độ mọc hệ sợi Hình 4.5 Hình thái hệ sợi nấm Linh chi Ga-CB20 mơi trường có nguồn Nito khác sau ngày nuôi cấy   28       Phần V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Từ thí nghiệm thực trên, rút số kết luận sau: Trên môi trường dinh dưỡng nhân giống khác thí nghiệm 1, chủng nấm Linh chi Ga-CB20 sinh trưởng tốt môi trường khoai lang (SPGA) (200 gram khoai lang + 20 gram Glucose + 15 gram agar )với thời gian mọc kín đĩa 13,78 ngày độ dài hệ sợi trung bình đạt 3,09 mm/ngày Ở mơi trường nhân giống khoai lang có pH khác nhau, chủng nấm Linh chi Ga-CB20 sinh trưởng tốt môi trường có khoảng pH 7-8 với thời gian mọc kín đĩa từ 8,73 đến 8,89 ngày độ dài hệ sợi trung bình đạt 66.60 mm/ngày Từ kết hai thí nghiệm trên, thí nghiệm 3, mơi trường nhân giống khoai lang, pH khoảng 7-8 có bổ sung nguồn carbon khác Chủng nấm Linh chi GaCB20 sinh trưởng tốt mơi trường có bổ sung đường D-Fructose với thời gian mọc kín đĩa 6,06 ngày độ dài hệ sợi trung bình đạt 7.02 mm/ngày Thí nghiệm có mơi trường nhân giống có bổ sung nguồn cung cấp nitơ khác nhau, chủng nấm Linh chi Ga-CB20 sinh trưởng tốt mơi trường có bổ sung cao nấm men với thời gian hệ sợi mọc kín đĩa 7,00 ngày độ dài hệ sợi trung bình 6,07 mm/ngày 5.2 Kiến nghị Dựa kết đạt nghiên cứu, để góp phần đưa kết áp dụng cách có hiệu thực tiễn sản xuất, xin đề nghị số vấn đề sau: - Tiếp tục nghiên cứu ảnh hưởng điều kiện ngoại cảnh nhiệt độ, ánh sáng đến khả sinh trưởng hệ sợi nấm linh chi Ga-CB20 trình nhân giống - Thử nghiệm nuôi trồng nấm linh chi Ga-CB20 giá thể khác nhau, điều kiện khác bước đưa chủng chủng nấm vào sản xuất 29       TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Cơng phiên, 2012 Nấm - Dịng sản phẩm chủ lực Báo Sài Gịn Giải Phóng.  Đinh Xn Linh- Thân Đức Nhã – Nguyễn Hữu Đống- Nguyễn Thị Sơn- Nguyễn Duy Trình- Ngơ Xn Nghiễn (2012) Kĩ thuật trồng, chế biến nấm ăn nấm dược liệu, Nhà Xuất Nông nghiệp (Tái lần thứ nhất) Lê Duy Thắng (2001) Kỹ thuật nuôi trồng nấm ăn, tập Nhà xuất Nông nghiệp Lê Duy Thắng, (1999) Kỹ thuật trồng nấm – Tập 1: Nuôi trồng số nấm ăn thông dụng Việt Nam Nhà xuất Nông Nghiệp, TP.HCM Lê Xuân Thám (1996) Nấm Linh chi - dược liệu quí việt nam Nhà xuất mủi cà mau Lê Xuân Thám (1996) Nghiên cứu đặc điểm sinh học đặc điển hấp thu khoáng nấm Linh chi Ganoderma lucidum (Leyss.ex Fr).Karst Luận án phó tiến sỹ khoa học sinh học, đại học Khoa Học Tự Nhiên, Đại học Quốc Gia Hà nội, Việt nam Nguyễn Hữu Đống, Đinh Xuân Linh (2000) Nấm ăn nấm dược liệu - công dụng công nghệ nuôi trồng Nhà xuất Hà nội Nguyễn Hữu Đống, Nguyễn Thị Sơn, Zani Federico (2002) Cơ sở khoa học công nghệ nuôi trồng Nhà xuất Nông nghiệp, Hà nội Nguyễn Lân Dũng (2001) Công nghệ nuôi trồng nấm, tập Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội 10 Nguyễn Lân Dũng (2004) Công nghệ nuôi trồng nấm, Tập (Tái lần thứ 2), Nhà xuất Nông Nghiệp, Hà Nội 11 Nguyễn Lân Dũng (2004) Công nghệ nuôi trồng nấm, Tập (Tái lần thứ 2), Nhà xuất Nông Nghiệp, Hà Nội 12 Nguyễn Lân Dũng (2010) Công nghệ nuôi trồng nấm, Tập 2, Nhà xuất Nông Nghiệp, Hà Nội 13 Trần Văn Mão (2004) Nuôi trồng chế biến nấm ăn nấm làm thuốc chữa bệnh Nhà xuất Nông nghiệp, Hà nội 14 Trịnh Tam Kiệt (2011), Nấm lớn Việt Nam, Tập 1, NXB Khoa học Tự nhiên Công nghệ Hà Nội 15 Trịnh Tam Kiệt (2012), Nấm lớn Việt Nam, Tập 2, NXB Khoa học Tự nhiên Công nghệ Hà Nội 16 Trịnh Tam Kiệt (2013) Nấm lớn Việt Nam, Tập 3, Nhà xuất Khoa học tự nhiên Công nghệ, Hà Nội TÀI LIỆU TIẾNG ANH  Boh B (2013) Ganoderma lucidum: a potential for biotechnological production of u8(3):255- 87 Boh B., Berovic M, Zhang J, Zhi-Bin L (2007) Ganoderma lucidum and its pharmaceutically active compounds Biotechnol Annu Rev.,13:265–301 Sanodiya B S, Thakur G S, Baghel R K, Prasad G B, Bisen P S (2009) Ganoderma 30       lucidum: A potent pharmacological macrofungus Curr Pharm Biotechnol.10(8):717–42 Sattler C, Labbe N, Harper D, Elder T, Rials T (2008) Effects of hot water extraction on physical and chemical characteristics of oriented strand board (OSB) wood flakes Clean Soil Air Water, 36, pp 674-681 Sung SK, Kim MJ, Lee DH, Choung SY, Kim BK, Kim HW (2005) Glucan of Ganoderma lucidum (W.Curt.:Fr.) Lloyd (Aphyllophoromycetideae) cooperatively induces tumor necrosis factor – and interleukin-6 ưith lipopolysaccharide by binding to dectin-1 International Journal of Medicinal Mushrooms 7, pp 193-200 Wang Zhiqiang, (2009), Rare mushroom cultivation, Shanghai, China Zhou S.F , A clinical Study of a Ganoderma lucidum extract in patients with type II diabetes mellitus Division of Pharmacology and Clinical Pharmacology, Faculty of Medicine and Health Science, Auckland University, Auckland, New Zealand Zhou X, Lin J, Yin Y, Zhao J, Sun X, Tang K (2007) Ganodermataceae: Natural products and their related pharmacological functions Am J Chin Med 35:559–74 31       PHỤ LỤC Thí nghiệm 1: Đánh giá ảnh hưởng mơi trường dinh dưỡng nuôi cấy đến khả sinh trưởng nấm Linh chi Ga-CB20 BALANCED ANOVA FOR VARIATE DKTB7 FILE TRA 22/ 8/21 13:12 :PAGE anh huong moi truong dinh duong nuoi cay den sinh truong chung gacb20 VARIATE V003 DKTB7 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 907407 453704 0.36 0.719 CT 38.6852 19.3426 15.42 0.015 * RESIDUAL 5.01852 1.25463 * TOTAL (CORRECTED) 44.6111 5.57639 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TDMHS FILE TRA 22/ 8/21 13:12 :PAGE anh huong moi truong dinh duong nuoi cay den sinh truong chung gacb20 VARIATE V004 TDMHS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 178784E-02 893918E-03 0.91 0.474 CT 342791 171396 174.30 0.001 * RESIDUAL 393336E-02 983341E-03 * TOTAL (CORRECTED) 348513 435641E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TGKD FILE TRA 22/ 8/21 13:12 :PAGE anh huong moi truong dinh duong nuoi cay den sinh truong chung gacb20 VARIATE V005 TGKD LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 432096E-01 216048E-01 0.70 0.551 CT 9.45062 4.72531 153.10 0.001 * RESIDUAL 123456 308640E-01 * TOTAL (CORRECTED) 9.61729 1.20216 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TRA 22/ 8/21 13:12 :PAGE anh huong moi truong dinh duong nuoi cay den sinh truong chung gacb20 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 3 DKTB7 24.4444 24.5556 23.8333 TDMHS 2.82674 2.84886 2.81485 TGKD 15.1111 15.0000 15.1667 SE(N= 3) 0.646692 0.181047E-01 0.101430 5%LSD 4DF 2.53489 0.709665E-01 0.397583 MEANS FOR EFFECT CT - 32       CT NOS 3 DKTB7 24.5556 21.6111 26.6667 TDMHS 2.79271 2.61206 3.08569 TGKD 15.2222 16.2778 13.7778 SE(N= 3) 0.646692 0.181047E-01 0.101430 5%LSD 4DF 2.53489 0.709665E-01 0.397583 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TRA 22/ 8/21 13:12 :PAGE anh huong moi truong dinh duong nuoi cay den sinh truong chung gacb20 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE DKTB7 TDMHS TGKD GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 24.278 2.8302 15.093 STANDARD DEVIATION C OF V |NL SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 2.3614 1.1201 4.6 0.7188 0.20872 0.31358E-01 1.1 0.4743 1.0964 0.17568 1.2 0.5509 |CT | | | 0.0151 0.0006 0.0007 | | | | Thí nghiệm 2: Đánh giá ảnh hưởng pH đến khả sinh trưởng nấm Linh chi Ga-CB20 BALANCED ANOVA FOR VARIATE DKTB7 FILE TRA2 22/ 8/21 13:24 :PAGE anh huong cua ph den sinh truong cua chung gacb20 VARIATE V003 DKTB7 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 112.318 56.1589 8.30 0.008 CT 2693.64 538.728 79.64 0.000 * RESIDUAL 10 67.6450 6.76450 * TOTAL (CORRECTED) 17 2873.60 169.036 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TDMHS FILE TRA2 22/ 8/21 13:24 :PAGE anh huong cua ph den sinh truong cua chung gacb20 VARIATE V004 TDMHS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 145040 725200E-01 7.38 0.011 CT 1.88016 376031 38.29 0.000 * RESIDUAL 10 982024E-01 982024E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 2.12340 124906 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TGKD FILE TRA2 22/ 8/21 13:24 :PAGE anh huong cua ph den sinh truong cua chung gacb20 VARIATE V005 TGKD LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 564815 282408 7.44 0.011 CT 9.29167 1.85833 48.95 0.000 * RESIDUAL 10 379629 379629E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 10.2361 602124 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TRA2 22/ 8/21 13:24 :PAGE anh huong cua ph den sinh truong cua chung gacb20 33       MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 6 DKTB7 58.2500 60.0833 54.1111 TDMHS 4.71280 4.72302 4.52770 TGKD 9.08333 9.05556 9.44444 SE(N= 6) 1.06180 0.404562E-01 0.795433E-01 5%LSD 10DF 3.34577 0.127479 0.250644 MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 3 DKTB7 50.0556 64.6667 33.2778 66.6111 66.6667 63.6111 TDMHS 4.78395 4.84568 3.94541 4.87979 4.79321 4.67901 TGKD 8.88889 8.77778 10.7778 8.72222 8.88889 9.11111 SE(N= 3) 1.50161 0.572138E-01 0.112491 5%LSD 10DF 4.73163 0.180283 0.354464 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TRA2 22/ 8/21 13:24 :PAGE anh huong cua ph den sinh truong cua chung gacb20 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE DKTB7 TDMHS TGKD GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 57.481 18 4.6545 18 9.1944 STANDARD DEVIATION C OF V |NL SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 13.001 2.6009 4.5 0.0076 0.35342 0.99097E-01 2.1 0.0108 0.77597 0.19484 2.1 0.0106 |CT | | | 0.0000 0.0000 0.0000 | | | | Thí nghiệm 3: Đánh giá ảnh hưởng nguồn Carbon đến khả sinh trưởng nấm Linh chi Ga-CB20 BALANCED ANOVA FOR VARIATE DKTB4 FILE TRA3 22/ 8/21 13:32 :PAGE anh huong cua nguon carbon den sinh truong cua chung gacb 20 VARIATE V003 DKTB4 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 1.96528 982638 0.62 0.556 CT 1743.87 249.124 157.23 0.000 * RESIDUAL 14 22.1827 1.58448 * TOTAL (CORRECTED) 23 1768.01 76.8702 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TDMHS FILE TRA3 22/ 8/21 13:32 :PAGE anh huong cua nguon carbon den sinh truong cua chung gacb 20 VARIATE V004 TDMHS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 960173E-03 480086E-03 0.04 0.958 CT 10.1017 1.44311 129.14 0.000 * RESIDUAL 14 156445 111746E-01 * TOTAL (CORRECTED) 23 10.2591 446050 34       BALANCED ANOVA FOR VARIATE TGKD FILE TRA3 22/ 8/21 13:32 :PAGE anh huong cua nguon carbon den sinh truong cua chung gacb 20 VARIATE V005 TGKD LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 231482E-02 115741E-02 0.05 0.949 CT 19.6806 2.81151 125.96 0.000 * RESIDUAL 14 312497 223212E-01 * TOTAL (CORRECTED) 23 19.9954 869364 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TRA3 22/ 8/21 13:32 :PAGE anh huong cua nguon carbon den sinh truong cua chung gacb 20 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 8 DKTB4 46.1667 46.6875 46.0208 TDMHS 6.03635 6.02883 6.02086 TGKD 7.14583 7.16667 7.14583 SE(N= 8) 0.445039 0.373741E-01 0.528219E-01 5%LSD 14DF 1.34990 0.113364 0.160221 MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 3 3 DKTB4 49.1111 46.8889 25.6111 56.3889 52.3889 47.9444 44.7222 47.2778 TDMHS 6.17521 6.07143 4.53720 7.02279 6.38278 6.07143 5.98710 5.98148 TGKD 6.88889 7.00000 9.38889 6.05556 6.66667 7.00000 7.11111 7.11111 SE(N= 3) 0.726746 0.610317E-01 0.862578E-01 5%LSD 14DF 2.20438 0.185123 0.261639 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TRA3 22/ 8/21 13:32 :PAGE anh huong cua nguon carbon den sinh truong cua chung gacb 20 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE DKTB4 TDMHS TGKD GRAND MEAN (N= 24) NO OBS 24 46.292 24 6.0287 24 7.1528 STANDARD DEVIATION C OF V |NL SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 8.7676 1.2588 2.7 0.5564 0.66787 0.10571 1.8 0.9581 0.93240 0.14940 2.1 0.9495 |CT | | | 0.0000 0.0000 0.0000 | | | | Thí nghiệm 4: Đánh giá ảnh hưởng nguồn Nito đến khả sinh trưởng nấm Linh chi Ga-CB20 BALANCED ANOVA FOR VARIATE DKTB7 FILE TRA4 22/ 8/21 13:38 :PAGE anh huong nguon nito den sinh truong cua chung gacb 20 VARIATE V003 DKTB7 35       LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 12.4312 6.21561 0.82 0.467 CT 15953.9 2658.99 350.58 0.000 * RESIDUAL 12 91.0139 7.58449 * TOTAL (CORRECTED) 20 16057.4 802.868 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TDMHS FILE TRA4 22/ 8/21 13:38 :PAGE anh huong nguon nito den sinh truong cua chung gacb 20 VARIATE V004 TDMHS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 409038E-02 204519E-02 0.05 0.955 CT 83.7144 13.9524 318.36 0.000 * RESIDUAL 12 525914 438262E-01 * TOTAL (CORRECTED) 20 84.2444 4.21222 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TGKD FILE TRA4 22/ 8/21 13:38 :PAGE anh huong nguon nito den sinh truong cua chung gacb 20 VARIATE V005 TGKD LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 105820E-01 529101E-02 0.07 0.935 CT 145.294 24.2156 305.12 0.000 * RESIDUAL 12 952386 793655E-01 * TOTAL (CORRECTED) 20 146.257 7.31283 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TRA4 22/ 8/21 13:38 :PAGE anh huong nguon nito den sinh truong cua chung gacb 20 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 7 DKTB7 67.6905 66.1905 67.9286 TDMHS 4.85714 4.89087 4.86919 TGKD 6.45238 6.40476 6.40476 SE(N= 7) 1.04091 0.791257E-01 0.106480 5%LSD 12DF 3.20741 0.243813 0.328100 MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 3 DKTB7 78.4444 79.1667 79.1667 0.000000 78.5555 82.0555 73.5000 TDMHS 5.59358 5.64418 5.68915 0.000000 5.63856 6.07143 5.46991 TGKD 7.55556 7.55556 7.50000 0.000000 7.55556 7.00000 7.77778 SE(N= 3) 1.59002 0.120867 0.162650 5%LSD 12DF 4.89939 0.372431 0.501181 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TRA4 22/ 8/21 13:38 :PAGE anh huong nguon nito den sinh truong cua chung gacb 20 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - 36       VARIATE DKTB7 TDMHS TGKD GRAND MEAN (N= 21) NO OBS 21 67.270 21 4.8724 21 6.4206 STANDARD DEVIATION C OF V |NL SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 28.335 2.7540 4.1 0.4670 2.0524 0.20935 4.3 0.9546 2.7042 0.28172 4.4 0.9355 37   |CT | | | 0.0000 0.0000 0.0000 | | | |