Ảnh hưởng của một số điều kiện nuôi cấy đến khả năng kháng khuẩn của chủng lactobacillus l18

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY ĐẾN KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN CỦA CHỦNG LACTOBACILLUS L18 HÀ NỘI – 2023 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY ĐẾN KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN CỦA CHỦNG LACTOBACILLUS L18 Người thực : NGUYỄN THỊ YẾN Mã sinh viên : 646561 Khóa : 64 Ngành : CƠNG NGHỆ SINH HỌC Người hướng dẫn : TS HỒ TÚ CƯỜNG : PGS.TS NGUYỄN XUÂN CẢNH HÀ NỘI – 2023 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu khóa luận trung thực chưa cơng bố nghiên cứu khác Các tài liệu trích dẫn khoá luận nêu mục tài liệu tham khảo Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm số liệu khoá luận Hà Nội, ngày tháng năm 2023 Sinh viên Nguyễn Thị Yến i LỜI CẢM ƠN Sau thời gian làm đề tài tốt nghiệp Bộ môn Công nghệ vi sinh, giúp đỡ dìu dắt tận tình thầy giáo, cán phịng thí nghiệm Bộ môn, cố gắng nỗ lực học tập thân, tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp Lời đầu tiên, tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban lãnh đạo Học viện, Ban chủ nhiệm khoa Cơng nghệ sinh học tồn thể thầy cô giáo giảng dạy, hướng dẫn tạo điều kiện để tơi hồn thành khố luận tốt nghiệp Tơi xin bày tỏ kính trọng lòng biết ơn sâu sắc đến thầy giáo PGS.TS Nguyễn Xuân Cảnh TS Hồ Tú Cường định hướng đề tài tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tơi suốt q trình làm khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới cán phịng thí nghiệm Bộ mơn Cơng nghệ vi sinh thầy PGS.TS Nguyễn Văn Giang, cô Th.S Trần Thị Hồng Hạnh, cô Th.S Nguyễn Thanh Huyền, cô Th.S Trần Thị Đào anh, chị nghiên cứu viên Dương Văn Hoàn, Nguyễn Thị Thu giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian thực khóa luận Cuối cùng, tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, người thân, bạn bè động viên, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2023 Sinh viên Nguyễn Thị Yến ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC HÌNH vii TÓM TẮT viii PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích nội dung nghiên cứu 1.2.1 Mục đích nghiên cứu .2 1.2.2 Nội dung nghiên cứu .2 PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan Lactobacillus spp 2.1.1 Đặc điểm chung Lactobacillus spp 2.1.2 Vai trò 2.2 Tổng quan Lactobacillus fermentum 2.2.1 Đặc điểm chung Lactobacillus fermentum .6 2.2.2 Vai trò Lactobacillus fermentum 2.3 Tổng quan Lactobacillus fermentum L18 2.3.1 Đặc điểm sinh học 2.3.2 Khả sinh hợp chất kháng khuẩn 2.4 Tổng quan vi khuẩn kiểm định (VKKĐ) 10 2.4.1 Tổng quan Staphylococcus aureus 10 2.4.2 Tổng quan Aeromonas hydrophila 11 2.5 Một số hợp chất kháng khuẩn tổng hợp LAB 13 2.5.1 Axit hữu 13 2.5.2 Diacetyl 14 2.5.3 Hydrogen peroxide 15 2.5.4 Reuterin .15 iii 2.5.5 Bacteriocin 16 2.6 Tình hình nghiên cứu hợp chất kháng khuẩn từ Lactobacillus 17 2.6.1 Các nghiên cứu giới 17 2.6.2 Các nghiên cứu nước 18 PHẦN III VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 3.1 Vật liệu nghiên cứu .20 3.1.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu .20 3.1.2 Đối tượng nghiên cứu 20 3.1.3 Hóa chất, dụng cụ thiết bị .20 3.1.4 Môi trường sử dụng nghiên cứu 20 3.2 Phương pháp nghiên cứu 21 3.2.1 Phương pháp khuếch tán đĩa thạch .21 3.2.2 Ảnh hưởng nguồn carbon đến hoạt tính kháng khuẩn chủng vi khuẩn Lactobacillus fermentum L18 21 3.2.3 Ảnh hưởng nguồn nitơ 22 3.2.4 Ảnh hưởng nồng độ NaCl .22 3.2.5 Ảnh hưởng pH .22 3.2.6 Ảnh hưởng nhiệt độ 23 3.2.7 Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy 23 3.2.8 Ảnh hưởng thời gian bảo quản lạnh 23 PHẦN IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 4.1 Ảnh hưởng nguồn carbon đến hoạt tính kháng khuẩn chủng vi khuẩn Lactobacillus fermentum L18 24 4.1.1 Ảnh hưởng nguồn carbon khác 24 4.1.2 Ảnh hưởng nồng độ glucose 25 4.2 Ảnh hưởng nguồn nitơ .26 4.2.1 Ảnh hưởng nồng độ cao nấm men 26 4.2.2 Ảnh hưởng nồng độ peptone 27 4.3 Ảnh hưởng nồng độ NaCl 28 4.4 Ảnh hưởng pH 29 iv 4.5 Ảnh hưởng nhiệt độ 30 4.6 Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy 31 4.7 Ảnh hưởng thời gian bảo quản lạnh 33 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 35 5.1 Kết luận 35 5.2 Kiến nghị 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO 36 PHỤ LỤC 43 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Tên đầy đủ Chữ viết tắt FAO Food and Agriculture Organization (Tổ chức Lương thực Nông nghiệp Liên Hiệp Quốc) MRS De Man, Rogosa and Sharpe LAB Lactic acid bacteria ( Vi khuẩn lactic) LB Luria Bertani µl Microliter ml Milliliter mm Millimeter NB Nutrient Broth VKKĐ Vi khuẩn kiểm định vi DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Kết nhuộm gram (A) hình thái khuẩn lạc (B) chủng vi khuẩn Lactobacillus fermentum L18 Hình 4.1 Ảnh hưởng nguồn carbon khác đến khả kháng khuẩn chủng Lactobacillus fermentum L18 24 Hình 4.2 Ảnh hưởng nồng độ glucose đến khả kháng khuẩn chủng Lactobacillus fermentum L18 25 Hình 4.3 Ảnh hưởng nồng độ cao nấm men đến khả kháng khuẩn chủng Lactobacillus fermentum L18 26 Hình 4.4 Ảnh hưởng nồng độ peptone đến khả kháng khuẩn chủng Lactobacillus fermentum L18 27 Hình 4.5 Ảnh hưởng nồng độ NaCl đến khả kháng khuẩn chủng Lactobacillus fermentum L18 28 Hình 4.6 Ảnh hưởng pH đến khả kháng khuẩn chủng Lactobacillus fermentum L18 29 Hình 4.7 Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả kháng khuẩn chủng Lactobacillus fermentum L18 31 Hình 4.8 Ảnh hưởng thời gian ni cấy đến khả kháng khuẩn chủng Lactobacillus fermentum L18 32 Hình 4.9 Biểu đồ thể ảnh hưởng thời gian bảo quản lạnh đến khả kháng khuẩn chủng Lactobacillus fermentum L18 33 vii TĨM TẮT Với mục đích tối ưu hóa số điều kiện ni cấy ảnh hưởng đến khả kháng khuẩn chủng vi khuẩn Lactobacillus fermentum L18 kháng lại chủng vi khuẩn gây bệnh Aeromonas hydrophila Staphylococcus aureus, tiến hành thí nghiệm đánh giá ảnh hưởng số điều kiện nuôi cấy thành phần môi trường, điều kiện pH, nhiệt độ, thời gian nuôi cấy thời gian bảo quản lạnh đến hoạt tính kháng khuẩn chủng vi khuẩn L fermentum L18 Kết cho thấy, số nguồn carbon thử nghiệm, glucose nguồn carbon phù hợp để chủng L fermentum L18 sinh hợp chất kháng khuẩn có hoạt tính cao Trong mơi trường MRS lỏng có bổ sung 3% glucose, thu nhận hoạt tính kháng khuẩn cao nhất, cho đường kính vòng kháng khuẩn 15.00 mm A.hydrophila 14.67 ± 0.58 mm S.aureus Đối với nguồn nitơ thử nghiệm, hoạt tính kháng khuẩn cao nuôi chủng L fermentum L18 môi trường MRS lỏng bổ sung cao nấm men 1% peptone 2% Tuy nhiên, bổ sung NaCl vào môi trường nuôi cấy làm giảm hoạt tính kháng khuẩn Các yếu tố pH, nhiệt độ, thời gian nuôi cấy thời gian bảo quản có ảnh hưởng đáng kể đến hoạt tính kháng khuẩn Sau ngày ni cấy điều kiện 30C pH 6.5, hoạt tính kháng khuẩn đạt cực đại Ngoài ra, thời gian bảo quản lâu hoạt tính kháng khuẩn giảm, với đường kính vịng kháng khuẩn 9.67 ± 0.58 mm 8.67 ± 0.58 mm A.hydrophila S aureus tương ứng sau 20 ngày bảo quản 4C viii PHẦN V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Mơi trường MRS lỏng có bổ sung glucose 3% nguồn carbon, bổ sung cao nấm men 1% peptone 2% nguồn nitơ nuôi 30C, pH 6.5 ngày điều kiện nuôi cấy thích hợp để chủng Lactobacillus fermentum L18 thể hoạt tính kháng khuẩn tốt Dịch ni sau ly tâm chủng L fermentum L18 bảo quản lạnh đến 15 ngày trì hoạt tính kháng khuẩn tốt 5.2 Kiến nghị Từ kết nghiên cứu thu được, tơi có kiến nghị phương hướng nghiên cứu tiếp theo: - Nghiên cứu xem hợp chất kháng khuẩn chủng vi khuẩn L fermentum L18 sinh thuộc loại - Chiết xuất tinh hợp chất kháng khuẩn từ chủng vi khuẩn L.fermentum L18 để ứng dụng vào làm chế phẩm probiotic 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Đồng Thị Hoàng Anh, Nguyễn Quang Huy & Nguyễn Quỳnh Uyển (2017) Khảo sát số đặc điểm bacteriocin chủng vi khuẩn Lactobacillus plantarum UL487 phân lập từ mẫu chao Huế Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Cơng nghệ 33(1S): 1-6 Lê Huy Chính (2001) Vi sinh y học Nhà xuất Y học, Hà Nội Nguyễn Hoàng Thảo Minh (2022) Phân lập nghiên cứu đặc điểm sinh học chủng vi khuẩn Lactobacillus sinh bacteriocin từ thủy sản Khóa luận tốt nghiệp Học viện Nông nghiệp Việt Nam Nguyễn Văn Thành & Nguyễn Ngọc Trai (2012) Phân lập tuyển chọn vi khuẩn Lactobacillus sp có khả ức chế vi khuẩn gây bệnh gan thận mủ đốm đỏ cá tra Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ (23a): 224234 Lê Ngọc Thùy Trang & Phạm Minh Nhựt (2014) Phân lập khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến khả sản sinh hợp chất kháng khuẩn Lactobacillus plantarum Tạp chí sinh học 36(1se): 97-106 TIẾNG ANH Adebayo F., Afolabi O & Akintokun A (2014) Antimicrobial properties of purified bacteriocins produced from Lactobacillus casei and Lactobacillus fermentum against selected pathogenic microorganisms British Journal of Medicine and Medical Research 4(18): 3415-3431 Afrin S., Hoque M A., Sarker A K., Satter M A & Bhuiyan M N I (2021) Characterization and profiling of bacteriocin-like substances produced by lactic acid bacteria from cheese samples Access Microbiol 3(6): 000234 Al-Omari A W., Matter I R & Almola A H (2022) An overview of Bacteriocins Samarra Journal of Pure and Applied Science 4(2): 58-72 36 Ammor S., Tauveron G., Dufour E & Chevallier I (2006) Antibacterial activity of lactic acid bacteria against spoilage and pathogenic bacteria isolated from the same meat small-scale facility: 1—Screening and characterization of the antibacterial compounds Food control 17(6): 454-461 10 Banerjee S P., Dora K C & Chowdhury S (2013) Detection, partial purification and characterization of bacteriocin produced by Lactobacillus brevis FPTLB3 isolated from freshwater fish: Bacteriocin from Lb brevis FPTLB3 Journal of Food science and Technology 50: 17-25 11 Bratcher D F (2018) Other gram-positive bacilli Principles and Practice of Pediatric Infectious Diseases; Elsevier: Amsterdam, The Netherlands 786790 12 Bremer P J., Crop N Z I f., Research F., Fletcher G & Osborne C (2004) Staphylococcus aureus New Zealand Institute for Crop & Food Research trang trang 13 Cotter P D., Ross R P & Hill C (2013) Bacteriocins—a viable alternative to antibiotics? Nature Reviews Microbiology 11(2): 95-105 14 Daskalov H (2006) The importance of Aeromonas hydrophila in food safety Food Control 17(6): 474-483 15 Dong J., Zhang L., Liu Y., Xu N., Zhou S., Yang Y., Yang Q & Ai X (2021) Luteolin decreases the pathogenicity of Aeromonas hydrophila via inhibiting the activity of aerolysin Virulence 12(1): 165-176 16 Feng J., Jiang Y., Li M., Zhao S., Zhang Y., Li X., Wang H., Lin G., Wang H & Li T (2018) Diversity and evolution of Lactobacillus casei group isolated from fermented dairy products in Tibet Archives of microbiology 200(7): 1111-1121 17 Fugaban J I I., Holzapfel W H & Todorov S (2022) The Overview of natural by-products of beneficial lactic acid bacteria as promising antimicrobial agents Applied Food Biotechnology 9(2): 127-143 37 18 Fuochi V., Li Volti G & M Furneri P (2017) Probiotic properties of Lactobacillus fermentum strains isolated from human oral samples and description of their antibacterial activity Current pharmaceutical biotechnology 18(2): 138-149 19 Giraffa G., Chanishvili N & Widyastuti Y (2010) Importance of lactobacilli in food and feed biotechnology Research in microbiology 161(6): 480-487 20 Hernandez D., Cardell E & Zarate V (2005) Antimicrobial activity of lactic acid bacteria isolated from Tenerife cheese: initial characterization of plantaricin TF711, a bacteriocin‐like substance produced by Lactobacillus plantarum TF711 Journal of applied microbiology 99(1): 77-84 21 Holzapfel W H & Wood B J (2014) Lactic acid bacteria: biodiversity and taxonomy John Wiley & Sons trang trang 22 Janda J M & Abbott S L (2010) The genus Aeromonas: taxonomy, pathogenicity, and infection Clinical microbiology reviews 23(1): 35-73 23 Kleerebezemab M., Hols P & Hugenholtz J (2000) Lactic acid bacteria as a cell factory: rerouting of carbon metabolism in Lactococcus lactis by metabolic engineering Enzyme and microbial technology 26(9-10): 840-848 24 Kong Y., Olejar K J., On S L & Chelikani V (2020) The potential of Lactobacillus spp for modulating oxidative stress in the gastrointestinal tract Antioxidants 9(7): 610 25 Krovacek K., Dumontet S., Eriksson E & Baloda S B (1995) Isolation, and virulence profiles, of Aeromonas hydrophila implicated in an outbreak of food poisoning in Sweden Microbiology and immunology 39(9): 655-661 26 Krovacek K., Peterz M., Faris A & Månsson I (1989) Enterotoxigenicity and drug sensitivity of Aeromonas hydrophila isolated from well water in Sweden: a case study International Journal of Food Microbiology 8(2): 149154 38 27 Kumar K N., Devadas S M., Murugan S., Krishnan S G & Thayumanavan T (2018) Production and Characterization of Bacteriocin by Lactic Acid Bacterium- Pediococcus pentosaceus NKSM1 Isolated from Fermented ‘Appam’ Batter Journal of Pure and Applied Microbiology 12(3): 1315-1330 28 Lara-Villoslada F., Sierra S., Díaz-Ropero M P., Rodríguez J M., Xaus J & Olivares M (2009) Safety assessment of Lactobacillus fermentum CECT5716, a probiotic strain isolated from human milk Journal of dairy research 76(2): 216-221 29 Lehri B., Seddon A M & Karlyshev A V (2017) Potential probioticassociated traits revealed from completed high quality genome sequence of Lactobacillus fermentum 3872 Standards in genomic sciences 12(1): 1-9 30 Maldonado J., Cañabate F., Sempere L., Vela F., Sánchez A R., Narbona E., López-Huertas E., Geerlings A., Valero A D & Olivares M (2012) Human milk probiotic Lactobacillus fermentum CECT5716 reduces the incidence of gastrointestinal and upper respiratory tract infections in infants Journal of pediatric gastroenterology and nutrition 54(1): 55-61 31 Mann S., Park M S., Johnston T V., Ji G E., Hwang K T & Ku S (2021) Isolation, Characterization and Biosafety Evaluation of Lactobacillus Fermentum OK with Potential Oral Probiotic Properties Probiotics and Antimicrobial Proteins 13(5): 1363-1386 32 Mattila-Sandholm T., Myllärinen P., Crittenden R., Mogensen G., Fondén R & Saarela M (2002) Technological challenges for future probiotic foods International Dairy Journal 12(2-3): 173-182 33 Mohamed W F., Khalil K., Shady H M A & Sayed H A E (2016) Activity range determination and optimization of various environmental conditions for bacteriocin production by Lactobacillus acidophilus and Lactobacillus plantarum The Egyptian Journal of Experimental Biology (Botany) 12: 5366 39 34 Ng Z J., Zarin M A., Lee C K & Tan J S (2020) Application of bacteriocins in food preservation and infectious disease treatment for humans and livestock: A review RSC advances 10(64): 38937-38964 35 Ogunbanwo S., Sanni A & Onilude A (2003) Influence of cultural conditions on the production of bacteriocin by Lactobacillus brevis OG1 African Journal of Biotechnology 2(7): 179-184 36 Olaoye O & Onilude A (2011) Quantitative estimation of antimicrobials produced by lactic acid bacteria isolated from Nigerian beef International Food Research Journal 18(3) 37 Omemu A M & Faniran O W (2011) Assessment of the antimicrobial activity of lactic acid bacteria isolated from two fermented maize products-ogi and kunnu-zaki Malaysian Journal of Microbiology 7(3): 124-128 38 Oscáriz J C & Pisabarro A G (2001) Classification and mode of action of membrane-active bacteriocins produced by gram-positive bacteria International Microbiology 4: 13-19 39 Papagianni M (2012) Metabolic engineering of lactic acid bacteria for the production of industrially important compounds Computational and Structural Biotechnology Journal 3(4): e201210003 40 Pelton R (2022) Lactobacillus fermentum ME-3: A Breakthrough in Glutathione Therapy Integrative Medicine: A Clinician's Journal 21(4) 41 Purkayastha S D., Bhattacharya M K., Prasad H K & De Mandal S (2020) Diversity and the antimicrobial activity of vaginal lactobacilli: current status and future prospective Trong: Recent Advancements in Microbial Diversity Elsevier: 397-422 trang 42 Rattanachaikunsopon P & Phumkhachorn P (2010) Lactic acid bacteria: their antimicrobial compounds and their uses in food production Annals of biological research 1(4): 218-228 40 43 Şanlıbaba P & Gỹỗer Y (2015) Antimicrobial activity of lactic acid bacteria J Int Sci Publ 3: 451-457 44 Sarika A., Lipton A & Aishwarya M (2010) Bacteriocin production by a new isolate of Lactobacillus rhamnosus GP1 under different culture conditions Adv J Food Sci Technol 2(5): 291-297 45 Seegers J F (2002) Lactobacilli as live vaccine delivery vectors: progress and prospects Trends in biotechnology 20(12): 508-515 46 Todar K 2005 Todar’s online textbook of bacteriology University of Wisconsin-Madison Department of Bacteriology 47 Vivekanandhan G., Savithamani K., Hatha A & Lakshmanaperumalsamy P (2002) Antibiotic resistance of Aeromonas hydrophila isolated from marketed fish and prawn of South India International Journal of Food Microbiology 76(1-2): 165-168 48 Voloshyna І., Skorokhod S., Appolonova Y., Zholobak N & Shkotova L (2019) Lactobacillus bacteria: biological and therapeutic properties Mikrobiolohichnyi zhurnal (Kiev, Ukraine: 1993) 81(6): 131-146 49 Wells J M & Mercenier A (2008) Mucosal delivery of therapeutic and prophylactic molecules using lactic acid bacteria Nature Reviews Microbiology 6(5): 349-362 50 Yang E., Fan L., Jiang Y., Doucette C & Fillmore S (2012) Antimicrobial activity of bacteriocin-producing lactic acid bacteria isolated from cheeses and yogurts Amb Express 2(1): 1-12 51 Yang Z (2000) Antimicrobial compounds and extracellular polysaccharides produced by lactic acid bacteria: structures and properties Citeseer trang trang 52 Zhang J., Bu Y., Zhang C., Yi H., Liu D & Jiao J (2020) Development of a Low-Cost and High-Efficiency Culture Medium for Bacteriocin Lac-B23 Production by Lactobacillus plantarum J23 Biology (Basel) 9(7) 41 53 Zhang L., Ma H., Kulyar M F.-e.-A., Pan H., Li K., Li A., Mo Q., Wang Y., Dong H & Bao Y (2022) Complete genome analysis of Lactobacillus fermentum YLF016 and its probiotic characteristics Microbial Pathogenesis 162: 105212 54 Zhao Y., Hong K., Zhao J., Zhang H., Zhai Q & Chen W (2019) Lactobacillus fermentum and its potential immunomodulatory properties Journal of functional foods 56: 21-32 55 Zhou X & Li Y (2021) Atlas of oral microbiology: From healthy microflora to disease Springer Nature 42 PHỤ LỤC Phụ lục Ảnh hưởng thành phần mơi trường đến hoạt tính kháng khuẩn chủng vi khuẩn Lactobacillus fermentum L18  Các nguồn carbon khác Nguồn carbon Đường kính vịng kháng khuẩn (mm) Aeromonas hydrophila Staphylococus aureus Glucose 13.33 ± 0.58 12.33 ± 0.58 Fructose 10.67 ± 0.58 10.33 ± 0.58 Saccharose 7.33 ± 0.58 6.67 ± 0.58 Lactose 9.67 ± 0.58 9.00 ± 0.00 Dextrin 0.00 3.33 ± 0.58 Maltose 0.00 2.33 ± 0.58 Tinh bột 0.00 0.00  Glucose 1%, 2%, 3%, 4% Nồng độ glucose Đường kính vịng kháng khuẩn (mm) Aeromonas hydrophila Staphylococus aureus Glucose 1% 0.00 0.00 Glucose 2% 11.33 ± 0.58 11.33 ± 0.58 Glucose 3% 15.00 ± 0.00 14.67 ± 0.58 Glucose 4% 12.67 ± 0.58 12.33 ± 0.58  Cao nấm men 1%, 2%, 3%, 4% Nồng độ cao nấm Đường kính vịng kháng khuẩn (mm) men Aeromonas hydrophila Staphylococus aureus Đối chứng 12.33 ± 0.58 13.00 ± 1.00 Cao nấm men 1% 15.33 ± 0.58 16.33 ± 0.58 Cao nấm men 2% 13.67 ± 0.58 11.33 ± 0.58 Cao nấm men 3% 13.33 ± 0.58 12.33 ± 0.58 Cao nấm men 4% 13.00 ± 0.58 12.67 ± 0.58 43  Peptone 1%, 2%, 3%, 4% Nồng độ peptone Đường kính vịng kháng khuẩn (mm) Aeromonas hydrophila Staphylococus aureus Peptone 1% 12.00 ± 0.00 13.67 ± 0.58 Peptone 2% 15.33 ± 0.58 16.00 ± 0.00 Peptone 3% 14.33 ± 0.58 14.33 ± 0.58 Peptone 4% 13.33 ± 0.58 13.67 ± 0.58  NaCl 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8% Nồng độ NaCl Đường kính vịng kháng khuẩn (mm) Aeromonas hydrophila Staphylococus aureus Đối chứng 16.33 ± 0.58 15.33 ± 0.58 NaCl 1% 14.33 ± 0.58 13.33 ± 0.58 NaCl 2% 13.00 ± 0.00 13.00 ± 0.00 NaCl 3% 13.00 ± 0.00 12.67 ± 0.58 NaCl 4% 11.33 ± 0.58 10.67 ± 0.58 NaCl 5% 3.33 ± 0.58 2.67 ± 0.58 NaCl 6% 0.00 0.00 NaCl 7% 1.67 ± 0.58 0.00 NaCl 8% 0.00 0.00 44 Phụ lục Ảnh hưởng số điều kiện ngoại cảnh đến hoạt tính kháng khuẩn chủng vi khuẩn Lactobacillus fermentum L18  pH pH Đường kính vịng kháng khuẩn (mm) Aeromonas hydrophila Staphylococus aureus 2.5 9.33 ± 0.58 9.33 ± 0.58 3.5 10.33 ± 0.58 10.67 ± 0.58 4.5 11.33 ± 0.58 13.33 ± 0.58 5.5 12.00 ± 0.00 13.67 ± 0.58 6.5 14.33 ± 0.58 16.33 ± 0.58 7.5 11.67 ± 0.58 14.67 ± 0.58 8.5 10.33 ± 0.58 13.33 ± 0.58 9.5 5.67 ± 0.58 11.33 ± 0.58 10.5 0.00 0.00 11.5 0.00 0.00 12.5 0.00 0.00  Nhiệt độ Nhiệt độ Đường kính vịng kháng khuẩn (mm) Aeromonas hydrophila Staphylococus aureus 25C 12.33 ± 0.58 12.67 ± 0.58 C 14.33 ± 0.58 15.00 ± 0.00 35C 13.00 ± 0.00 13.67 ± 0.58 C 11.33 ± 0.58 11.67 ± 0.58 45  Thời gian ni cấy Thời gian ni cấy Đường kính vịng kháng khuẩn (mm) Aeromonas hydrophila Staphylococus aureus ngày 0.00 0.00 ngày 13.67 ± 0.58 13.33 ± 0.58 ngày 13.00 ± 0.00 13.00 ± 1.00 ngày 12.67 ± 0.58 12.67 ± 0.58 ngày 12.67 ± 0.58 12.67 ± 0.58 10 ngày 12.33 ± 0.58 12.33 ± 0.58 12 ngày 10.00 ± 1.00 9.67 ± 0.58 14 ngày 0.00 0.00 16 ngày 0.00 0.00  Thời gian bảo quản lạnh Thời gian bảo Đường kính vịng kháng khuẩn (mm) quản lạnh Aeromonas hydrophila Staphylococus aureus Đối chứng 18.00 14.00 ngày 17.67 ± 0.58 13.67 ± 0.58 10 ngày 16.00 ± 0.00 11.33 ± 0.58 15 ngày 16.67 ± 0.58 11.67 ± 0.58 20 ngày 9.67 ± 0.58 8.67 ± 0.58 46 Phụ lục Ảnh hưởng thành phần mơi trường đến hoạt tính kháng khuẩn chủng vi khuẩn Lactobacillus fermentum L18  Các nguồn carbon khác  Glucose 1%, 2%, 3%, 4%  Cao nấm men (yeast extract) 1%, 2%, 3%, 4% 47  Peptone 1%, 2%, 3%, 4%  NaCl 1%, 2%, 3%, 4% Phụ lục Ảnh hưởng số điều kiện ngoại cảnh đến hoạt tính kháng khuẩn chủng vi khuẩn Lactobacillus fermentum L18  pH 48  Nhiệt độ  Thời gian nuôi cấy  Thời gian bảo quản lạnh 49