Ảnh hưởng của điều kiện nuôi cấy đến khả năng sinh tổng hợp enzyme xylanase của các chủng vi khuẩn bacillus sp

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC -  - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: ẢNH HƢỞNG CỦA ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY ĐẾN KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP ENZYME XYLANASE CỦA CÁC CHỦNG VI KHUẨN BACILLUS SP HÀ NỘI- 2023 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC -  - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: ẢNH HƢỞNG CỦA ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY ĐẾN KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP ENZYME XYLANASE CỦA CÁC CHỦNG VI KHUẨN BACILLUS SP Sinh viên thực : Nguyễn Thị Kiều Anh Mã sinh viên : 642426 Lớp : K64CNSHA Giảng viên hƣớng dẫn : PGS.TS Nguyễn Văn Giang Bộ môn : Công nghệ vi sinh Hà Nội - 2023 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu khóa luận trung thực chƣa đƣợc sử dụng công bố Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực khóa luận đƣợc cám ơn thơng tin trích dẫn đƣợc ghi rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 13 tháng 02 năm 2023 Sinh viên Nguyễn Thị Kiều Anh i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành khóa luận tơi xin chân thành cảm ơn Ban Giám đốc Học viện Nông nghiệp Việt Nam, Ban chủ nhiệm Khoa Công nghệ Sinh học, thầy cô giáo tận tình hƣớng dẫn, giảng dạy suốt trình học tập, nghiên cứu rèn luyện Học viện Nơng nghiệp Việt Nam Trong suốt q trình thực đề tài tốt nghiệp, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Thầy giáo hƣớng dẫn PGS.TS Nguyễn Văn Giang, ngƣời định hƣớng giúp đỡ nhƣ hỗ trợ nhiều suốt q trình thực khóa luận tốt nghiệp Tơi xin cảm ơn thầy PGS.TS Nguyễn Xuân Cảnh, cô ThS Trần Thị Hồng Hạnh, cô ThS Nguyễn Thanh Huyền, cô ThS Trần Thị Đào, nghiên cứu viên Dƣơng Văn Hoàn, Nguyễn Thị Thu, Tạ Hà Trang tận tình, chu đáo, bảo hƣớng dẫn tơi hồn thành đề tài cách tốt Đồng thời, xin cảm ơn toàn thể bạn thực tập nghiên cứu phịng thí nghiệm Bộ mơn Cơng nghệ vi sinh giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình thực đề tài tốt nghiệp Cuối cùng, với tất lòng thành kính biết ơn vơ hạn, tơi xin gửi lời cảm ơn đến bố mẹ, ngƣời sinh thành, nuôi nấng, động viên tạo động lực cho suốt q trình học tập nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 13 tháng 02 năm 2023 Sinh viên Nguyễn Thị Kiều Anh ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục bảng vi Danh mục hình vii Danh mục viết tắt viii Tóm tắt .1 PHẦN I MỞ ĐẦU .2 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích 1.3 Nội dung nghiên cứu PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan xylanase 2.1.1 Định nghĩa 2.1.2 Cấu trúc, phân loại chế xúc tác xylanase .4 2.1.3 Các nguồn enzyme xylanase 2.1.4 Ứng dụng enzyme xylanase 10 2.2 Tổng quan Bacillus sp 13 2.2.1 Định nghĩa 13 2.2.2 Phân loại khoa học .14 2.2.3 Cấu trúc hình thái Bacillus sp 14 2.3 Tình hình nghiên cứu chủng Bacillus sp sinh tổng hợp enzyme giới nƣớc 16 2.3.1 Tình hình nghiên cứu chủng Bacillus sp sinh tổng hợp enzyme Việt Nam 16 2.3.2 Tình hình nghiên cứu chủng Bacillus sp sinh tổng hợp enzyme giới .17 iii PHẦN III VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 3.1 Vật liệu nghiên cứu 20 3.1.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 20 3.1.2 Đối tƣợng nghiên cứu 20 3.1.3 Thiết bị dụng cụ thí nghiệm 20 3.1.4 Mơi trƣờng hố chất sử dụng nghiên cứu 20 3.2 Phƣơng pháp nghiên cứu .21 3.2.1 Xác định hoạt tính enzyme xylanase phƣơng pháp khuếch tán thạch .21 3.2.2 Xác định hoạt độ xylanase chủng vi khuẩn 22 3.2.3 Khảo sát ảnh hƣởng điều kiện nuôi cấy tới khả sinh trƣởng hoạt tính xylanase chủng Bacillus 23 3.2.4 Khảo sát đặc điểm sinh học phản ứng hóa sinh chủng Bacillus tuyển chọn 25 3.2.5 Phƣơng pháp nhuộm gram 27 PHẦN IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 4.1 Xác định hoạt tính enzyme xylanase phƣơng pháp khuếch tán enzyme đĩa thạch 29 4.2 Xác định hoạt độ xylanase 30 4.2.1 Phƣơng pháp DNS .30 4.2.2 Xác định hoat độ xylanase 32 4.3 Khảo sát ảnh hƣởng điều kiện nuôi cấy tới khả sinh trƣởng hoạt tính xylanase chủng Bacillus 34 4.3.1 Xác định thời gian ni cấy thích hợp 34 4.3.2 Ảnh hƣởng giá trị pH khác đến hoạt độ xylanase chủng vi khuẩn .36 4.3.3 Nguồn nitơ khác 39 4.3.4 Nồng độ chất khác 41 4.4 Khảo sát đặc điểm sinh học phản ứng hóa sinh chủng Bacillus tuyển chọn 44 iv 4.4.1 Khả di động 44 4.4.2 Phản ứng catalase 44 4.4.3 Phản ứng MR (Methyl red) 45 4.4.4 Phản ứng VP (Voges-Proskauer) 46 4.4.5 Khả biến dƣỡng citrate 47 4.4.6 Khả sinh enzyme ngoại bào (cellulase protease) 48 4.5 Kết nhuộm gram 49 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 51 5.1 Kết luận 51 5.2 Kiến nghị 51 PHẦN VI TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 PHỤ LỤC 60 v DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Tính chất enzyme xylanase từ vi khuẩn (Beg & cs., 2000) Bảng 2.2 Các loài nấm sinh tổng hợp enzyme xylanase 10 Bảng 3.1 Thiết bị sử dụng .20 Bảng 4.1 Khả phân giải xylan chủng vi khuẩn 30 Bảng 4.2 Kết dựng đƣờng chuẩn xylose 31 Bảng 4.3 Hàm lƣợng xylose hoạt độ xylanase chủng vi khuẩn 33 Bảng 4.4 Ảnh hƣởng thời gian nuôi cấy tới hàm lƣợng xylose chủng vi khuẩn 34 Bảng 4.5 Hoạt độ xylanase dòng vi khuẩn theo mốc thời gian 6h, 12h, 18h, 24h, 30h nuôi 35 Bảng 4.6 Ảnh hƣởng pH tới hàm lƣợng xylose chủng vi khuẩn 37 Bảng 4.6 Ảnh hƣởng pH tới hoạt độ xylanase chủng vi khuẩn 38 Bảng 4.7 Ảnh hƣởng nguồn nitơ khác đến hàm lƣợng xylose chủng vi khuẩn 39 Bảng 4.8 Ảnh hƣởng nguồn nitơ khác đến hoạt độ xylanase chủng vi khuẩn 40 Bảng 4.9 Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ xylan đến hàm lƣợng xylose chủng vi khuẩn 42 Bảng 4.10 Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ xylan đến hàm hoạt độ xylanase chủng vi khuẩn 43 vi DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Cấu trúc xylan enzyme thủy phân xylan (Sunna & Antranikian, 1997) Hình 2.2 Cấu trúc không gian 3D enzyme xylanase (Heinen & cs., 2018) (Huang & cs., 2019) Hình 2.3 Hình thái tế bào Bacillus sp dƣới kính hiển vi đƣợc nhuộm gram 15 Hình 4.1 Hoạt tính enzyme xylanase đƣợc xác định phƣơng pháp khuếch tán enzyme đĩa thạch 29 Hình 4.2 Đồ thị đƣờng chuẩn xác định nồng độ đƣờng xylose 31 Hình 4.3 Hàm lƣợng đƣờng xylose đƣợc giải phóng chủng vi khuẩn 32 Hình 4.4 Khả di động 16 chủng Bacillus sp .44 Hình 4.5 Khả sinh catalase chủng vi khuẩn 45 Hình 4.6 Thử nghiệm phản ứng MR với chủng vi khuẩn tuyển chọn .45 Hình 4.7 Thử nghiệm phản ứng VP với chủng vi khuẩn tuyển chọn .46 Hình 4.8 Khả biến dƣỡng citrate chủng vi khuẩn .47 Hình 4.9 Khả sinh enzyme ngoại bào cellulase chủng vi khuẩn .48 Hình 4.10 Khả sinh enzyme protase chủng vi khuẩn 49 Hình 4.11 Nhuộm gram 50 vii DANH MỤC VIẾT TẮT Chữ viết tắt Giải nghĩa kDa Kilodaltons µg Microgram µl Microlit ĐC Đối chứng w/v Weight/volume mL Mili lít MR Methyl Red DNS Axit 3,5-dinitrosalicylic U/ml Unit/mili lít OD Mật độ quang viii Hình 4.10 Khả sinh enzyme protase chủng vi khuẩn 4.5 Kết nhuộm gram Thực phƣơng pháp nhuộm gram cho thấy vi khuẩn sau nhuộm có màu tím rõ Vậy 16 chủng vi khuẩn lựa chọn thuộc vi khuẩn gram dƣơng 49 Hình 4.11 Nhuộm gram 50 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận 16 chủng vi khuẩn Bacillus sp thí nghiệm có khả sinh tổng hợp xylanase Hoạt độ xylanase chủng trung bình đạt 174.04 U/ml Trong đó, chủng B1.5 biểu hoạt độ xylanase cao đạt 196 U/ml hoạt độ xylanase chủng G1.6 thấp 141.33 U/ml Khảo sát ảnh hƣởng điều kiện nuôi cấy tới khả sinh trƣởng hoạt tính xylanase chủng vi khuẩn thí nghiệm cho thấy: thời gian ni thích hợp 24h (với chủng có hoạt độ enzyme cao G1.1 L1.4), pH thích hợp 7, nguồn nitơ Peptone nồng độ chất 3g/l xylan cho hoạt độ xylanase cao Hầu hết chủng vi khuẩn tuyển chọn dƣơng tính với phản ứng sinh hóa nhƣ catalase, MR, biến dƣỡng citrate, sinh enzyme protease cellulase 5.2 Kiến nghị Nghiên cứu thêm điều kiện môi trƣờng ảnh hƣởng đến chủng vi khuẩn để ni cấy cho nguồn enzyme xylanase có hoạt tính tốt Ứng dụng khả sinh enzyme ngoại bào chủng vi khuẩn để tạo chế phẩm sinh học lĩnh vực sống 51 PHẦN VI TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt Vũ Văn Lợi, Nguyễn Văn Hiếu, Nguyễn Thị Hồng Liên, Phạm Thị Bích Hợp Phan Thị Hồng Thảo (2013) Xạ khuẩn Streptomyces chartreusis CP23X9 sinh xylanase: Đặc điểm sinh học phân loại, Tạp chí sinh học, 35:45-50 Nguyễn Hoàng Anh N V G (2017) Tuyển chọn, định danh vi khuẩn Bacillus sinh enzyme Protease xác định đặc tính chịu nhiệt enzyme, Tạp chí Khố học Nơng nghiệp Việt Nam 15(8): 1062-1069 Đặng Tất Thành Nguyễn Thanh Thuỷ, V N T., George E Anasontzis, Lisbeth Olsson (2016) Phân lập đánh giá đặc tính chủng Aspergillus brunneoviolaceus FEC 156 sinh tổng hợp hệ enzyme Huỳnh Thị Cẩm Tiên H V T (2019) Phân lập định danh số chủng Bacillus spp có hoạt tính cao tầng đất mặt đƣợc thu thập từ tỉnh Bình Thuận Tạp chí Khoa học Công nghệ Thực phẩm, 18(2): 48-62 Nhiên N T (2011) Lựa chọn điều kiện lên men xốp tối ƣu nghiên cứu đặc tính xylanase từ chủng vi khuẩn ƣu nhiệt, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên Nguyễn Thanh Tịnh, Phan Thị Phới, Trần Thị Xuân Lan, Trần Văn Bé Năm, Đỗ Tấn Khang & Trần Nhân Dũng (2020) Tuyển chọn vi khuẩn phân giải Lignocellulose để xử lý chất trồng nấm rơm Hóa học Cơng nghệ thực phẩm Nguyễn Thị Lâm Đoàn & Lƣu Thị Thùy Dƣơng (2017) Tuyển chọn vi khuẩn lactic có số hoạt tính sinh học để ứng dụng xử lý phế phụ phẩm nông nghiệp làm thức ăn chăn nuôi cho gia súc nhai lại Tạp chí Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam 15(11): 1556-1564 52 Tiếng anh Abbas A S., Shokoofeh, G Maryam, A S (2011) Cost-Effective Production and Optimization of Alkaline Xylanase by Indigenous Bacillus mojavensis AG137 Fermented on Agricultural Waste, Enzyme Research, 2011: 593624 Alvira P T.-P E., Ballesteros M, Negro M (2010) Pretreatment technologies for an efficient bioethanol production process based on enzymatic hydrolysis: a review Bioresour Technol, 101(13): 4851–4861 Ammoneh, Harba, Akeed, Al-Halabi Bakri (2014) Isolation and identification of local Bacillus isolates for xylanase biosynthesis, (2008-3289 (Print)) Bajpai Pratima (2014) Industrial Applications of Xylanases: 69104 Bakry M M Salem, S S A., Hossam M El-Gamal, Mamdouh S Fouda, Amr (2022) Xylanase from thermotolerant Bacillus haynesii strain, synthesis, characterization, optimization using Box-Behnken Design, and biobleaching activity, Biomass Conversion and Biorefinery Bedford M R Classen, H L (1992) The influence of dietary xylanase on intestinal viscosity and molecular weight distribution of carbohydrates in rye-fed broiler chick In: Visser J., Beldman G., vanSomeren M.A.K., Voragen A.G.J (Eds) Xylans and xylanases., Elsevier, Amsterdam: 361-370 Beg, Bhushan, Kapoor M Hoondal G.S (2000) Production and characterization of thermostable xylanase and pectinase from a Streptomyces sp QG11-3 Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology, 24: 396-402 53 Bhardwaj K., Dogra, A., Kapoor, S., Mehta, A Gupta, R (2020) Purification and Properties of an Esterase from Bacillus licheniformis and itΓÇƯs Application in Synthesis of Octyl Acetate, The Open Microbiology Journal, 14: 113-121 Burlacu A., Petruța, C Israel, C F (2016) MICROBIAL XYLANASE: A REVIEW, Scientific Bulletin Series F Biotechnologies, XX 10 Collins T., Gerday, C Feller, G (2005) Xylanases, xylanase families and extremophilic xylanases, FEMS microbiology reviews, 29(1): 3-23 11 Contributors W (2022) Xylanase, Wikipedia, The Free Encyclopedia Retrieved 08:00, January 10, 2023 XYLAN HYDROLOGY, Science and Technology Magazine, 54(4A): 267-274 12 Dũng N L (2010) Vi sinh vật học, NXB Giáo dục Việt Nam 13 Ganga M A., Piđaga, F., Vallés, S., Ramón, D Querol, A (1999) Aroma improving in microvinification processes by the use of a recombinant wine yeast strain expressing the Aspergillus nidulans xlnA gene, Int J Food Microbiol, 47: 171-178 14 Garg, Mahatman Kumar (2010) Xylanase: Applications and Biotechnological 15 Aspects, Lambert Academic Publishing AG & Co KG, Germany 16 Goswami G Pathak, R R (2013) Microbial xylanases and their biomedical applications: a review, International Journal of Basic & Clinical Pharmacology, 2: 237-246 17 Guan N., & Liu, L (2020) Microbial Response to Acid Stress: Mechanisms and Applications Applied Microbiology and Biotechnology, 104(1), 51-65 (2020) Microbial response to acid 54 stress: mechanisms and applications Applied microbiology and biotechnology, 104(1): 51-65 18 Gaur, R., Tiwari, S., Rai, P., & Srivastava, V (2015) Isolation, production, and characterization of thermotolerant xylanase from solvent tolerant Bacillus vallismortis RSPP-15 International Journal of Polymer Science, 2015 19 Ghasemi, Y., Sadeghi, H., Gholami, A., Mohkam, M., & Kargar, M (2014) Isolation and identification of highly xylanase producing bacterium Sphingobacterium sp SaH-05 from soil Int J Sci Eng Res, 5, 205-209 20 Gupta U K., Rita (2009) Xylanase production by a thermo-tolerant Bacillus species under solid-state and submerged fermentation, Brazilian Archives of Biology and technology, 52: 1363-1371 21 Gilbert Hazlewood, G P (1993) Bacterial cellulases and xylanases, Journal of General Microbiology, 139: 187-194 22 Harris A.D Ramalingam (2010) Xylanases and its application in food industry: a review., J Exp Sci., (7): 1-11 23 Heinen, Bauermeister, Ribeiro, Messias, Almeida, Moraes VargasRechia, C G., De Oliveira, A H C., Ward, R J., Filho, E X F., Kadowaki, M K., Jorge, J A., Polizeli, Mltm (2018) GH11 xylanase from Aspergillus tamarii Kita: Purification by one-step chromatography and xylooligosaccharides hydrolysis monitored in real-time by mass spectrometry, Int J Biol Macromol, 108: 291-299 24 Huang, Yuhong Zheng, Xianliang Pilgaard, Bo Holck, Jesper Muschiol, Jan Li, Shengying Lange Lene (2019) Identification and characterization of GH11 xylanase and GH43 xylosidase from the chytridiomycetous fungus, Rhizophlyctis rosea, Applied Microbiology and Biotechnology, 103 55 25 Irfan Muhammad A U., Nadeem Muhammad, Nelofer Rubina, Syed Quratulain (2016) Optimization of process parameters for xylanase production by Bacillus sp in submerged fermentation, Journal of Radiation Research and Applied Sciences, 9(2): 139-147 26 Juturu V Wu, J C (2012) Microbial xylanases: Engineering, production and industrial applications, Biotechnology Advances, 30(6): 1219-1227 27 Kumar Wyman (2010) Enzymatic hydrolysis of cellulosic biomass through enhanced removal of oligomers 28 Kumar, P S., Yaashikaa, P R., & Saravanan, A (2018) Isolation, characterization and purification of xylanase producing bacteria from sea sediment Biocatalysis and agricultural biotechnology, 13, 299-303 29 Kurrataa'yun Y., Meryandini, Anja (2015) Characterization of Xylanase activity produced by PaeniBacillus sp XJ18 from TNBD Jambi, Indonesia, HAYATI Journal of Biosciences, 22(1): 20-26 30 Lacey L A., Frutos R., H., K P, V (2001) Insect pathogens as biological control agents: they have a future? Biological control, 21(3): 230-248 31 Logan N A Vos, P D (2015) Bacillus: 1-163 32 Mandal (2015) Review on microbial xylanases and their applications, International Journal of Life Sciences, 4(3): 178-187 33 Miller G L (1959) Use of Dinitrosalicylic Acid Reagent for Determination of Reducing Sugar, Analytical Chemistry, 31(3): 426-428 34 Moreau R.A P M J., Whitaker B.D., Bailey B.A., Anderson J.D (1994) Xylanase treatment of plant cells induces glycosylation and fatty acylation of phytosterols Physiologia Plantarum, 91: 575-580 35 Motta, Andrade Santana (2013) A Review of Xylanase Production by the Fermentation of Xylan: Classification, Characterization and 56 Applications Sustainable Degradation of Lignocellulosic Biomass Techniques, Applications and Commer, Intechopen 36 Muhammad I Asghar, U N., Muhammad Nelofer, Rubina Syed, Quratulain (2016) Optimization of process parameters for xylanase production by Bacillus sp in submerged fermentation, Journal of Radiation Research and Applied Sciences, 9(2): 139-147 37 Nascimento R P D., Coelho, R R R., Marques, S., Alves, L S., Girio, F M., Bon, E P S Amaral-Colla├ºo, M T (2002) Production and partial characterisation of xylanase from Streptomyces sp strain AMT3 isolated from Brazilian cerrado soil, Enzyme and Microbial Technology, 31: 549-555 38 Nagar, S., Mittal, A., & Gupta, V K (2012) A cost effective method for screening and isolation of xylan degrading bacteria using agro waste material Asian Journal of Biological Sciences, 5(8), 384-394 39 Polizeli, Ac, R., Monti, F., Fau, M R., Terenzi, Fau, T H., Jorge, Fau, J J Amorim (2005) Xylanases from fungi: properties and industrial applications Applied microbiology and biotechnology., 67(5)(577–591) 40 Polizeli, M D L T D M., Rizzatti, A C S., Monti, R., Terenzi, H F., Jorge, J A., & Amorim, D D S (2005) Xylanases from fungi: properties and industrial applications Applied microbiology and biotechnology, 67, 577-591 41 Rifaat H M (2006) PRODUCTION OF XYLANASES BY STREPTOMYCES SPECIES AND THEIR BLEACHING EFFECT ON RICE STRAW PULP, Applied Ecology and Environmental Research, 4: 151-160 42 Shanthi, V., & Roymon, M G (2018) Isolation, identification and partial optimization of novel xylanolytic bacterial isolates from Bhilai- 57 Durg Region, Chhattisgarh, India Iranian Journal of Biotechnology, 16(3) 43 Singh D., Sharma, A Saini, G K (2013) Biochemical and molecular characterisation of the bacterial endophytes from native sugarcane varieties of Himalayan region, Biotech, 3(3): 205-212 44 Sinner M, Dietrichs H-H, Puls J, Schweers W K-H, B (1998) Process for production of xylitol from lignocellulosic raw materials, US Patent 4520105 45 Soule M H (1932) Identity of Bacillus Subtilis, Cohn 1872, The Journal of Infectious Diseases, 51(2): 191-215 46 Subramaniyan S Prema, P (2002) Biotechnology of microbial xylanases: enzymology, molecular biology, and application Critical Reviews in Biotechnology., 22(1): 33-64 47 Sunna A Antranikian, G (1997) Xylanolytic enzymes from fungi and bacteria, Critical reviews in biotechnology, 17(1): 39-67 48 Venugopal S K K., Venkatesan Ramkumar, A Ramar, Ramesh a, Stephen Kumaresan, S (2018) Isolation, Screening, Identification, and Optimization of Xylanase Producing Bacteria from Forests of Western Ghats, India, International Journal of Agriculture, Environment and Biotechnology, 11: 173-179 49 Walia, Guleria, Mehta, Chauhan Parkash (2017) Microbial xylanases and their industrial application in pulp and paper biobleaching: a review, (2190-572X (Print)) 50 Wibowo, Atiqa, R Ragil, Y (2022) Isolation, Characterization, and Optimization of Keratinase from Bacillus cereus BRAW_KM, Pertanika Journal of Tropical Agricultural Science, 45 51 Wilson (2009) Cellulases and biofuels Curr Opin Biotechnol 20(3): 295–299 58 52 Wu Yanwen G H., Rahman Md Shafiqur, Chen Xuantong, Zhang Jinchi, Liu Yun, Qin Wensheng (2021) Biological pretreatment of corn stover for enhancing enzymatic hydrolysis using Bacillus sp P3, Bioresources and Bioprocessing, 8(1): 92 59 PHỤ LỤC Phụ lục Khảo sát khả phân giải xylanase chủng vi khuẩn Hình 4.2 Dãy nồng độ pha loãng xylose phản ứng với thuốc thử DNS Tiến hành đo với OD540nm lập đƣờng chuẩn 60 Phụ lục Khảo sát ảnh hƣởng pH: thuộc thử DNS với dãy nồng độ 61 Phụ lục Khảo sát thời gian nuôi cấy: thuộc thử DNS với dãy nồng độ 62 Phụ lục Khảo sát nồng độ chất: thuộc thử DNS với dãy nồng độ 63