Chọn nguồn nguyên liệu và điều kiện nuôi cấy thích hợp cho quá trình tạo sinh khối của chủng lactobacillus fermentum ha6

LỜI CẢM ƠN Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến cô giáo hướng dẫn PGS TS LÊ THANH MAI, người tận tình động viên, giúp đỡ em suốt q trình hồn thành luận văn Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến cô giáo hướng dẫn ThS HỒ PHÚ HÀ giúp đỡ em nhiều q trình hồn thành luận văn Em xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo Viện Công nghệ Sinh học – Thực phẩm cho em kiến thức quý báu suốt thời gian học đại học Cuối em xin gửi tới gia đình, bạn bè, tình cảm tốt đẹp động viên, quan tâm, giúp đỡ người dành cho em thời gian làm luận văn Sinh viên Trần Minh Trang TÓM TẮT Probiotic vi sinh vật dạng sản phẩm thực phẩm chất bổ sung có khả cư trú đường ruột, tác động có lợi cho sức khỏe vật chủ Chủng Lactobacillus fermentum HA6 có tác dụng kháng vi nấm, ức chế tăng sinh tế bào ung thư nên dùng làm chế phẩm probiotic Tuy nhiên, việc thu hồi sinh khối chủng Lactobacillus fermentum HA6 nuôi môi trường MRS đắt tiền, không phù hợp với điều kiện Việt Nam Để giảm giá thành sản phẩm, chúng tơi tiến hành nghiên cứu tìm mơi trường thích hợp cho phát triển chủng Lactobacillus fermentum HA6 với tỷ lệ tiếp giống g/l, đường Saccaroza hàm lượng 40 g/l, thay 50% Nitơ dịch nấm men thủy phân, nuôi điều kiện pH = 6.1, yếm khí 5% CO2 SUMMARY Probiotics are defined as living microorganisms in forms of food or supplement in sufficient number, which colonize in a compartment of the host and express health benefits to the host One of the potential strain is Lactobacillus fermentum HA6 which was found to have antifungal activity and the inhibitory toward proliferation of cancer cells However, taking Lactobacillus fermentum HA6 biomass on MRS culture is very expensive and not fit well with Vietnamese condition In order to decrease the price of the product, we have studied new suitable culture with the initial concentration g/l, Sucrose 40 g/l, replace 50% of Nitrogen by yeast hydrolysis solution, pH = 6.1, in anaerobic 5% CO2 condition Results show the good development of Lactobacillus fermentum HA6 MỤC LỤC MỞ ĐẦU PHẦN I TỔNG QUAN TÀI LIỆU Vi khuẩn lactic I.1.1 Lịch sử nghiên cứu vi khuẩn lactic I.1.2 Phân loại vi khuẩn lactic I.1.3 Đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa vi khuẩn lactic I.1.4 Một số đặc điểm Lactobacillus L.fermentum Probiotic I.2.1 Đặc điểm chức pribiotic I.2.2 Dạng chế phẩm ứng dụng probiotic I.1 I.2 I.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình tạo sinh khối 10 vi khuẩn lactic I.3.1 Hoạt động chuyển hóa vi khuẩn lactic 10 I.3.2 Ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng lên khả sinh 11 trưởng phát triển vi khuẩn lactic I.3.2.1 Ảnh hưởng nguồn cacbon 12 I.3.2.2 Ảnh hưởng nguồn nitơ 14 I.3.2.3 Ảnh hưởng muối vô chất kích thích sinh 15 trưởng I.3.3 Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy lên khả sinh 17 trưởng phát triển vi khuẩn lactic I.3.3.1 Ảnh hưởng tỷ lệ tiếp giống 17 I.3.3.2 Ảnh hưởng pH 17 I.3.3.3 Ảnh hưởng nhiệt độ 17 I.3.3.4 Ảnh hưởng Oxy 18 PHẦN II II.1 NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 19 NGHIÊN CỨU Nguyên vật liệu - hóa chất - thiết bị 19 II.1.1 Đối tượng nghiên cứu 19 II.1.2 Hóa chất 19 II.1.3 Thiết bị 20 Phương pháp nghiên cứu 20 II.2.1 Chuẩn bị môi trường 20 II.2.2 Phương pháp vi sinh 21 II.2.3 Phương pháp hóa lý 22 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 Đặc tính chủng Lactobacillus fermentum HA6 29 III.1.1 Đặc điểm hình thái 29 III.1.2 Kiểm tra kiểu lên men 30 III.1.3 Kiểm tra chức chủng HA6 30 II.2 PHẦN III III.1 III.2 Nghiên cứu điều kiện ảnh hưởng tới trình 32 tạo sinh khối chủng Lactobacillus fermentum HA6 III.2.1 Lựa chọn nguồn dinh dưỡng thích hợp cho q trình tạo 32 sinh khối chủng Lactobacillus fermentum HA6 III.2.1.1 Ảnh hưởng nguồn Cacbon 32 III.2.1.2 35 III.2.2 Ảnh hưởng nguồn Nitơ Lựa chọn điều kiện thích hợp cho trình ni cấy 37 chủng Lactobacillus fermentum HA6 III.2.2.1 Ảnh hưởng tỷ lệ tiếp giống 37 III.2.2.2 Ảnh hưởng pH 38 III.2.2.3 Ảnh hưởng chế độ thơng khí 40 III.2.3 III.3 Động học q trình sinh trưởng phát triển 41 chủng HA6 Ứng dụng chủng HA6 sản xuất sữa chua 42 probiotic KẾT LUẬN TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 45 KÍ HIỆU VIẾT TẮT VTM: vitamin EMP: Embden-Meyergof-Parnas DBS: Dịch thủy phân tinh bột sắn SK: Sinh khối HS: Hiệu suất thu hồi sinh khối HLA: Hàm lượng axit HLD: Hàm lượng đường sót KpH: Khơng trì pH MỞ ĐẦU Các vi khuẩn lactic sử dụng rộng rãi tự nhiên nói chung ngành thực phẩm nói riêng, đồng thời loại vi sinh vật nghiên cứu nhiều từ trước tới Qua nhiều kỉ, người tiêu dùng biết đến sản phẩm thực phẩm góp phần cải thiện nâng cao sức khoẻ người như: sữa chua, mát hay thuốc uống: men tiêu hố Những sản phẩm chứa nhiều vi sinh vật sống có lợi đặc biệt vi khuẩn lactic [15] Năm 1989 Parker đưa định nghĩa:”Probiotics vi sinh vật dạng thực phẩm chất bổ sung, có khả cư trú đường ruột, tác động có lợi cho sức khoẻ vật chủ” [15] Elie Metchknikoff người đặt móng cho việc sử dụng probiotic Nhiều nghiên cứu lĩnh vực nhận thấy chế phẩm probiotic tạo thay đổi khu hệ vi sinh vật đường ruột theo hướng cân có lợi, vi khuẩn có ích tăng đáng kể, số lượng vi khuẩn có khả gây bệnh giảm mạnh [5] Thuật ngữ probiotic đời từ Probiotic có nghĩa tăng cường sống, người ta giả thiết probiotic có lẽ ghép hai chữ tiếng anh: prophylaxia-phịng bệnh biotic-sự sống [5] Trong Lactobacillus fermentum vi khuẩn an tồn, có khả kháng vi sinh vật gây hại, hỗ trợ vi khuẩn có ích nên ứng dụng vào chế phẩm probiotic Hiện nay, Việt Nam, chế phẩm probiotic hầu hết phải nhập ngoại với giá cao chưa đáp ứng đủ nhu cầu người tiêu dùng Một yêu cầu cấp thiết đặt phải nghiên cứu thu hồi sinh khối vi khuẩn lactic với hiệu suất thu hồi cao đồng thời đảm bảo hiệu kinh tế để sản xuất với quy mơ lớn Với muc đích tiến hành đề tài: Chọn nguồn nguyên liệu điều kiện ni cấy thích hợp cho q trình tạo sinh khối chủng Lactobacillus fermentum HA6 PHẦN I TỔNG QUAN TÀI LIỆU I.1 Vi khuẩn lactic I.1.1 Lịch sử nghiên cứu vi khuẩn lactic (LAB): Vi khuẩn lactic gì? Một câu hỏi lớn đặt cho nhà khoa học nghiên cứu để có câu trả lời đồng Trở lại lịch sử thời kì trước kỉ 20, thuật ngữ vi khuẩn lactic sử dụng để vi khuẩn làm chua sữa Năm 1873 J.Lister lần phân lập đươc loại vi khuẩn đặt tên “Bacterium lactis” (hay gọi Lactococcus Lactis) Khi nghiên cứu việc phân loại vi khuẩn lactic người ta tìm thấy nét tương tự vi khuẩn lactic sữa vi khuẩn sản phẩm chứa axit lactic khác thịt, rượu vang, loại vi khuẩn lactic có ích đường ruột [16] Trong định nghĩa trước vi khuẩn lactic coi nhóm vi khuẩn có khả lên men đông tụ sữa, bao gồm vi khuẩn đường ruột vi khuẩn lactic Năm 1901, Beijernick miêu tả sinh vật có tên lactobacillus dạng vi khuẩn G(+) phân biệt hẳn vi khuẩn đường ruột với vi khuẩn lactic Chúng vi khuẩn lactic hữu ích nhất, hầu hết tìm thấy máy tiêu hoá Bước vào kỉ 20 quan tâm Lactobacillus xuất thực đơn người tăng lên Elie Metchnikoff viện Pasteur Paris phát triển ứng dụng loại vi khuẩn để bổ sung vào phần ăn nhằm ngăn ngừa chữa bệnh Nhưng lý thuyết ông việc kéo dài sống khoẻ mạnh nhờ vào việc ăn dạng thực phẩm chứa vi khuẩn gây tai tiếng cho ông Bởi tác dụng sản phẩm không mong muốn người tiêu dùng hiển nhiên chưa đủ sở khoa học để chứng minh ưu việt Từ tới có nhiều nghiên cứu vi khuẩn lactic nhờ vào kĩ thuật đại người miêu tả đầy đủ hình dáng, cấu tạo, đặc điểm sinh lý, sinh hoá vi khuẩn lactic Trong kỹ thuật di truyền trở thành công cụ phân loại vô quan trọng với việc xác định hàm lượng phần trăm mol C+G chứa DNA hay phương pháp điện di để xác định gen [4,8] I.1.2 Phân loại vi khuẩn lactic Có nhiều cách phân loại vi khuẩn lactic Dựa vào tính chất chúng mà người ta phân loại theo: hình thái học, kiểu lên men, khả phát triển nhiệt độ khác nhau, khả chịu muối, chịu axit hay chịu kiềm… Năm 1919, Orla – Jensen người tiên phong việc nghiên cứu, phân loại có hệ thống vi khuẩn lactic Về hình dáng ơng phân chúng thành bốn giống: Lactobacillus; Pediococus; Streptococus lactococus; Leuconostoc Ngày người ta bổ sung thêm giống Bifidobacterium có hình dạng biến đổi [16, 17, 22] - Lactobacillus: Trực khuẩn, xếp đơi, chuỗi đứng riêng lẻ Nhiệt độ tối ưu 300C - 450C Lên men galactoza, glucoza, sacaroza, fructoza Bao gồm ba nhóm có ba lồi đặc trưng: L.bulgaricus, L brevis, L casei -Leuconostoc: Cầu khuẩn, có hình ovan hình trứng Lên men đường dextran, trioza, sản phẩm tạo thành axit D- lactic, etanol, CO Có hai lồi đặc trưng L.mensenteroides L lactic -Pediococus: Cầu khuẩn, tồn dạng bát cầu khuẩn, tụ cầu khuẩn Lên men đường glucoza theo đường EMP, axit lactic tạo thành có dạng DL, D(-) hay D(+) Có ba lồi đặc trưng P.acidilactici, P.dextranicum, P halophilus -Streptococus Lactococus: Dạng cầu khuẩn, xếp đơi chuỗi Có khả lên men đường hexoza thành axit lactic loại đường khác Có ba lồi đặc trưng sử dụng sữa: S lactis, S.cremoris, S.thermophilus -Bifidobacterium: Lên men dị hình, có hình dạng biến đổi, đơi có hình ovan, có lúc lại hình que Có khả lên men lactoza sản phẩm tạo thành axit lactic axit axetic I.1.3 Đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa vi khuẩn lactic Các vi khuẩn lactic xếp chung vào họ Lactobacteriacae Chúng không đồng mặt hình thái,các giống vi khuẩn khác có hình dạng kích thước khác Ngồi hình dạng kích thước tế bào vi khuẩn lactic cịn phụ thuộc vào mơi trường, điều kiện ni cấy, có mặt oxy tuổi tế bào [6] Tuy nhiên mặt sinh lý chúng lại tương đối đồng Chúng vi khuẩn Gram(+), không tạo bào tử, không di động, thu lượng nhờ phân giải hydratcacbon tiết Sữa chua có chủng Vinamilk, lượng giống ban đầu bổ sung vào sữa 2,5 106 CFU/ml , sau lên men số tế bào 1,5.109 CFU/ml, pH giảm từ 6,4 xuống 4,1 Sữa có chủng HA6 lượng giống ban đầu bổ sung vào sữa 1,2.10 CFU/ml, sau lên men số tế bào 0,8.109 CFU/ml Sữa chua bổ sung hỗn hợp chủng có kết quả: Lượng giống ban đầu bổ sung vào sữa chế phẩm Vinamilk 2,5.106 CFU/ml Lactobacillus fermentum 1,2.106 CFU/ml Sau lên men số tế bào 2.109 CFU/ml, pH giảm trình lên men 6,1 xuống 4,0 Kết thí nghiệm thể qua bảng 3.7 bảng 3.8 Bảng 3.7: Số tế bào sống sót trước sau lên men Số tế bào CFU/ml HA6 Vinamilk Hỗn hợp Trước lên men 1,2 106 2,5 106 3,7.106 Sau lên men 0,8.109 1,5.109 2,0.109 Bảng 3.8: Biến thiên pH trong trình lên men sữa chua Thời gian (h) pH Vinamilk HA6+Vinamilk 6,5 6,1 6,1 5,7 5,6 5,3 5,1 4,9 4,7 4,5 4,3 4,2 4,2 4,1 4,1 4,0 4.1 Hình 3.11a:sản phẩm sữa chua sử dụng hỗn hợp chế phẩm 4,0 Hình 3.11b :sản phẩm sữa chua sử dụng chế phẩm vinamilk Qua bảng kết 3.7 nhận thấy lên men sữa chua có bổ sung chủng HA6, sản phẩm thu có chất lượng khơng khác nhiều so với sản phẩm có chủng Vinamilk Số tế bào sống chủng hỗn hợp nhỏ không nhiều chủng phát triển riêng biệt Vậy chủng sống cộng sinh trình sản xuất sữa chua Về mặt cảm quan hình 3.11a, 3.11b cho thấy sản phẩm sữa chua bổ sung HA6 có bề mặt bóng, mịn, độ kết dính tốt, độ chua gắt có mùi sữa chua đặc trưng khơng sản phẩm sữa chua có chủng Vinamilk Như ứng dụng HA6 vào sản phẩm sữa chua probiotic, tạo sản phẩm sữa chua mới, kết hợp hai chủng HA6 Vinamilk Sản phẩm có ưu điểm tiêu hóa tốt, giúp thể hấp thụ chất dinh dưỡng, thành phần vitamin K giúp giữ lại vi sinh vật có lợi cho đường ruột ức chế vi sinh vật có hại KẾT LUẬN Sau q trình thí nghiệm, chúng tơi thu kết sau: Chủng L fermentum HA6 trực khuẩn, xếp đơn đôi, mang đầy đủ tính chất đặc trưng vi khuẩn lactic, sinh CO2 trình lên men Chủng HA6 chủng an tồn, có lợi cho sức khỏe vật chủ nên dùng để sản xuất chế phẩm probiotic Chọn mơi trường thích hợp cho q trình ni cấy: Tỷ lệ tiếp giống g/l, đường sacaroza 40g/l, thay 50% dịch nấm men thủy phân làm nguồn N, thành phần cịn lại giống mơi trường MRS Chọn điều kiện ni cấy thích hợp: Chủng ni pH ban đầu 6,1; điều kiện yếm khí 5% CO2, khơng trì pH Ứng dụng vào sữa chua: Phát triển tốt với chủng Vinamilk, không bị ức chế Đề nghị • Cần nghiên cứu thêm việc nâng cao hiệu suất thu hồi sinh khối chủng Lactobacillus fermentum HA6 để sản xuất quy mô công nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến,Phạm Văn Ty, 1997 Vi sinh vật học NXB Giáo dục, Hà Nội TS Nguyễn Xuân Hiền,PGS.TS Lê Thanh Mai,GS.TS Nguyễn thị Hiền,PGS.TS Lương Đức Phẩm, Nghiên cứu ứng dụng Công nghệ sinh học vào trình chế biến rau Đề tài cấp bộ, Hà Nội PGS.TS Lê Thanh Mai, PGS.TS.Nguyễn Thị Hiền, PGS.TS Phạm Thu Thủy, TS Nguyễn Thị Thanh Hằng, ThS Lê Lan Chi, 2004 Các phương pháp phân tích ngành cơng nghệ lên men NXB Khoa Học Kĩ Thuật, Hà Nội Vũ Hồng Minh , 2005 Nghiên cứu trình thu hồi sinh khối tạo chế phẩm vi khuẩn Streptococcus Thermophilus Luận văn thạc sĩ khoa học ngành Công nghệ thực phẩm Đại học Bách khoa Hà Nội PGS.TS Lương Đức Phẩm, 2004 Công nghệ vi sinh vật NXB Nông nghiệp, Hà Nội Phan Thị Hồng Thảo, 2000 Nghiên cứu số đặc điểm sinh li, sinh hóa thăm dị khả ứng dụng chủng Lactobacillus sản phẩm vào bả quản cá.Luận văn tốt nghiệp, Viện công nghệ sinh học-công nghệ thực phẩm, trường Đại học Bách Khoa Hà Nội Đặng Thị Thu, Nguyễn Thị Xuân Sâm,Tô Kim Anh, 1997 Thí nghiệm hóa sinh cơng nghiệp Trường đại học Bách khoa Hà Nội TIẾNG NƯỚC NGOÀI Caplice, E.,Fitzgerald,G.,F ,1999 Food fermentation role of microorganisms in food production and preservation, International Journal of Food Microbiology, 50, 131-149, Elsrvier Science B.V+27 Carvalho, A., S., Silva, J, Ho ,P., Teixeia, P., Malcata., F., X., Gibbs, 2004 Relevant factor for the preparation of freeze-died lactic acid bacteria International Dairy Journal, 14, 835-847, Elsrvier Science B.V 10 F.Dellaglio, S Torri and G E Felis, 2004 Reclassification of L.cellobiosus rogosa et al 1953 as a later synonym of L fermentum Beijerinck 1901 International of systematic and evolutionary microbiol 54, 809-812 11 Ho Phu Ha and Michelle Catherine Adams, 2007 Selection and identification of a novel probiotic strain of Lactobacillus fermentum isolated from VietNamese fermented foood School of Environmental and Life Science, Faculty of Science and Information Technology, The University of Newcastle, Australia 12 Ik-Keun Yoo, Ho Nam Chang, Eun Gyo Lee, Yong Keun Chang, Seun Hyeon Moon, 1996 Effects of B vitamin supplenmentation on lactis acid production by Lactobacillus casei Jerment Bioeng.Vo181.N03, 279280 13 J A Navrhus, L Axelson Future aspect of research and product development of LAB Agricultural University of Norway, Mat Forsk, Norwegian Food trsearch institue, Aas, Norway 14 Jon A Vanderhoof, 2001 Probiotics : future directions The American Journal of Clinical Nutrition, 73 (2Suppl), 1152S-5S 15 Jurgen Schrenmeir and Michael de Vrese,2001 Probiotic, prebiotic, synbiotics-appraching a definition The American Journal of Clinical Nutrition, 73 (2Suppl), 361S-364S 16 LARS AXELSSON, 2004 Lactic Acid Bacteria: Classification and Physiology MATFORSK, Norwegian Food Research Institute, A ° s, Norway 17 L Axeslson, J A Narvhus, 2003 Lactic acid bacteria Agricultural University of Norway, MASFORSK, Norwergian Food Research Institute Aas, Norway 18 Ledesma, O.V, Holgado.A.P, Oliver.G, Giori.G.S, Raibaud, P and Galpin, J.V A synthetic medium for coparative nutritional studies of lactobacilli 19 Mark A Brudnak, Oct 2001 Probiotic Applications: Pulse and Rotation Townsend Letter for Doctors and Patients 20 R.P.Ross, C.Desmond, G.F.Fitzgerald and C Stanton, 2005 Overcoming the technological hurdles in the development of probiotic food 21 Steffen C.Cheesemaking and cheese research in Switzerland IDFDOC.1980 1126-16 22 Stiles.M.E, Holzapfel,W.H, 1997 Lactic acid bacteria of food and their taxonomy International Journl of Food Microbiology, 36, 1-29, Elservier Science B.V 23 T.Mattila-Sandholm, P.Myllarinen, R.Crittenden, G Mogensen, R.Fonden, M.Saarela, 2002 Technological challenges for future probiotic foods 173-182 24 Volume2 Wiliam and Wilkins, 1986 Bergey’smanual of systermat bacteriology Baltimotr London, Los Angeles, Sydney 25 http://www.biovita.fi/english/biolacte.html 26 http://www.celltech.com/réources/healthbenefitsofAxitoph.asp 27 http://www.consumerlab.com/results/probiotic.asp 28 http://en.Wikipedia.org/wiki/probiotics PHỤ LỤC Bảng 1: Khả phát triển HA6 loại đường khác Hàm lượng sinh khối g/l Saccaroza Lactoza Thời gian Glucoza DịchTPTB Maltodextrin 0.57 0.61 0.57 0.60 0.65 1.23 1.20 0.93 2.03 0.98 3.36 3.53 1.62 3.87 1.47 8.25 7.79 3.65 4.79 1.60 11 14.16 12.75 8.34 7.42 1.73 14 15.78 14.58 11.66 10.34 1.34 16 16.51 14.38 14.68 10.98 1.37 18 16.90 14.48 15.71 11.58 1.14 19 16.71 14.46 15.80 11.46 1.14 21 16.61 13.83 15.50 11.26 1.41 24 16.67 13.67 15.47 11.16 1.40 Bảng 2: Ảnh hưởng hàm lượng đường sacaroza đến phát triển HA6 Chỉ tiêu Hàm lượng đường Sacaroza (g/l) MRS 20 40 60 80 Hàm lượng sk (g/l) 17 14,6 26,1 29,1 24,2 HS (%) 34 29,2 26,1 19,4 12,1 Tổn thất (%) 8,5 12,15 18,1 20,2 28,4 Hàm lượng axit (g/l) 9,8 10,06 17,1 17,47 17,38 Hàm lượng đường sót (g/l) 1,7 1,13 5,2 18,77 30,22 Tế bào sống CFU/ml 3.108 8.107 3.108 3.108 7.109 Bảng 3: Đánh giá khả phát triển HA6 hàm lượng dịch nấm men thủy phân Hàm lượng sinh khối g/l 25%dtp 50%dtp Thời gian h MRS 75%dtp 100%dtp 0.60 0.58 0.80 0.74 0.56 1.07 1.04 1.01 0.96 0.57 3.40 2.78 2.50 2.10 0.58 8.53 4.75 3.85 3.76 1.47 10 13.07 10.01 7.38 5.74 2.62 12 14.94 13.17 13.07 10.18 2.99 15 16.09 14.94 14.48 11.12 3.73 18 16.82 15.60 14.88 11.75 4.27 19 16.62 15.80 14.64 11.75 4.36 20 16.72 15.90 14.68 11.32 4.42 22 16.92 15.80 14.55 11.16 4.56 24 16.88 15.50 14.81 11.18 4.42 26 16.72 15.60 14.61 11.33 3.17 Bảng Ảnh hưởng hàm lượng dịch nấm men thủy phân đến phát triển HA6 Chỉ tiêu Hàm lượng dịch nấm men thủy phân thay % 25 % 50 % 75 % 100 % Hàm lượng sk (g/l) 15,9 15 11,8 4,6 Hsthsk (%) 31,8 30 23,6 9,2 Bảng 5: Ảnh hưởng tỷ lệ tiếp giống đến phát triển HA6 Chỉ tiêu Tỷ lệ tiếp giống g/l 1,5 Hàm lượng sk (g/l) 26,1 29,8 34,5 36,1 Hsthsk (%) 26,1 29,8 34,5 36,1 Tổn thất (%) 18,1 13,7 12 10,65 Hàm lượng axit (g/l) 17,1 18,5 19,2 20 Hàm lượng đường sót (g/l) 5,2 4,1 2,2 1,3 Bảng Ảnh hưởng pH đến phát triển HA6 Chỉ tiêu Chế độ ni cấy Duy trì pH Khơng trì pH Hàm lượng sk ẩm (g/l) 35,9 34,5 HSTHSK (%) 35,9 34,5 Tổn thất (%) 8,6 12 Hàm lượng axit (g/l) 21 19,2 Hàm lượng đường sót (g/l) 1,2 2.2 Bảng 7: Ảnh hưởng chế độ thơng khí đến phát triển HA6 Chỉ tiêu Chế độ nuôi cấy Ni yếm khí 5%CO2 Ni tĩnh Hàm lượng sk ẩm (g/l) 43,5 34,5 HSTHSK (%) 43,5 34,5 Tổn thất (%) 11,3 12 Hàm lượng axit (g/l) 16,8 19,2 Hàm lượng đường sót (g/l) 1,7 2,2 Hình1: Biến thiên pH q trình ni cấy chủng L fermentum Ha6 Bảng 8: Biến thiên hàm lượng sinh khối, hàm lượng axit hàm lượng đường sót tạo trình phát triển chủng L.fermentum HA6 Thời gian (h) Hàm lượng sk (g/l) Hàm lượng axit (g/l) Hàm lượng đường sót (g/l) 1,8 40 4,1 2,9 30,9 9,2 5,5 26,3 18,6 8,5 19,54 11 28,2 10,1 14,1 14 35,6 12,6 8,64 16 39,9 14,5 5,02 18 43,2 15,8 2,1 21 42,5 16,4 2,08 24 43 16,8 1,48 26 42 16,5 1,4 Thời gian (h) Sinh (g/l) 0,53 0,84 2,00 5,26 9,57 10 12,57 12 14,09 14 15,39 16 16,08 18 16,67 20 16,91 22 17,07 24 16,76 26 16,99 khối OD Sinh khối (g/l) 3,689 12 2,28 2,12 1,37 0,92 0,664 0,48 1,5 0,37 1,2