Bg hoa tri lieu phan 1 3638

TRƯỜNG ĐẠI HỌC VÕ TRƯỜNG TOẢN KHOA DƯỢC f BÀI GIẢNG HỐ TRỊ LIỆU Giảng viên biên soạn: TRƯƠNG HUỲNH KIM NGỌC Hậu Giang – Năm 2019 TÀI LIỆU CHUYÊN KHẢO Bài Giảng HỐ TRỊ LIỆU 2019 TÀI LIỆU CHUYÊN KHẢO BÀI GIẢNG HỐ TRỊ LIỆU LƯU HÀNH NỘI BỘ 2019 MỤC LỤC Phần Sinh học bệnh ung thư Chương Sinh học bệnh ung thư Sinh học phân tử tế bào Sinh học bệnh ung thö 10 Chương Diễn tiến tự nhiên bệnh ung thư .23 Phần Dịch tễ học chẩn đoán bệnh ung thư 37 Chương Dịch tễ học nguyên nhân ung thư .38 Dịch tễ học ung thư 38 Nguyên nhân ung thư 43 Chương Chẩn đoán bệnh ung thư 46 Chẩn đoán hình ảnh ung thư .54 Chẩn đoán mô học tế bào học ung thư 124 Chẩn đoán sinh học phân tử ung thư 133 Phần Điều trị bệnh ung thö 147 Chương Phẫu trị ung thư 148 Cấp cứu ngoại khoa ung thư 159 Chương Xạ trị ung thư 165 Biến chứng xạ trị 176 Chương Hóa trị ung thư .191 Cấp cứu nội khoa ung thö 204 Chương Liệu pháp đa mô thức 227 Chương Liệu pháp miễn dịch .236 Liệu pháp nhắm trúng đích 236 Lieäu pháp miễn dịch 240 Chương 10 Chăm sóc giảm nhẹ ung thư 242 Phần Tầm soát phòng ngừa bệnh ung thư 275 Chương 11 Tầm soát phát sớm ung thư 276 Chương 12 Phòng ngừa ung thư 285 Chương 13 Thuốc bệnh ung thư 290 Chương 14 Các chiến lược phòng chống ung thư 295 Xây dựng chương trình phòng chống ung thư TP Hồ Chí Minh 295 Chương trình phòng chống bệnh ung thư giai đoạn 2002 ‟ 2010 298 Phần Ung thư phụ khoa ‟ tuyến vuù 305 Chương 15 Ung thư cổ tử cung .306 Chương 16 Ung thư nội mạc tử cung 318 Điều trị sarcôm thân tử cung .323 Chương 17 Ung thư âm hộ 325 Chương 18 Ung thư buồng trứng 333 Chương 19 Ung thư vú 341 Chương 20 Bệnh lành tính tuyến vuù 364 Phần Ung thư đầu cổ 367 Chương 21 Ung thư tuyến giáp .368 Xử trí trường hợp phình giáp đơn 386 Điều trị nang ống giáp lưỡi 389 Chương 22 Ung thư tuyến nước bọt 395 Điều trị bướu tuyến đa dạng tuyến nước bọt .403 Chương 23 Ung thư quản 409 Chương 24 Ung thư vòm hầu 422 Chương 25 Ung thư hốc miệng ‟ hầu 428 Chỉ định nạo hạch cổ 442 Chương 26 Ung thư hốc mũi xoang cạnh mũi 452 Phần Ung thư hệ tiêu hoùa 462 Chương 27 Ung thư thực quản 463 Chương 28 Ung thư dày 472 Chương 29 Ung thư đại trực tràng 485 Chương 30 Ung thư gan 497 Chương 31 Ung thư tụy tạng 506 Phaàn Ung thư tổng quát 512 Chương 32 Ung thư phổi .513 Bướu trung thất 523 Chương 33 Ung thư xương, da, mô mềm 532 Ung thư xương 532 Ung thö phần mềm 539 Ung thö da 546 Tạo hình khuyết hổng vùng maët 560 Mêlanôm ác .573 Chương 34 Ung thư niệu dục 584 Ung thö dương vật .584 Ung thư tinh hoàn .591 Ung thư bàng quang 598 Ung thư tiền liệt tuyến 605 Ung thư thận .613 Chương 35 Ung thư hệ tạo huyết 618 Lymphoâm 618 Bệnh bạch cầu 632 Chương 36 Ung thư chưa rõ nguyên phát .652 Chương 37 Bướu hệ thần kinh trung ương 659 Chương 38 Ung thư trẻ em 663 Tài liệu tham khaûo 681 Phuï luïc 683 Phần Sinh học Bệnh Ung Thư Bài Giảng Ung Bướu Học Hình Các bước chẩn đoán HMMD để phân loại bướu chưa rõ nguồn gốc Xác định nguồn gốc di melanôm, việc phát vài tế bào di có ảnh hưởng đến tiên lượng câu hỏi bỏ ngỏ Trong số tình bệnh nhân đến với bệnh cảnh khối di không rõ nguyên phát, HMMD giúp xác định bướu nguyên phát dựa tính chuyên biệt theo mô, chẳng hạn carcinôm tuyến tuyến tiền liệt biểu khối di nơi khác, nhiên phần lớn carcinôm tuyến tuyến tiền liệt dương tính với PSA prostein (P501s), người ta sử dụng hai chất đánh dấu để xác định nguồn gốc từ tiền liệt tuyến khối di Xác định tiên lượng đáp ứng điều trị Trong điều trị ung thư vú nay, việc khảo sát thụ thể nội tiết (ER, PR) Her2-neu thực thường qui nhằm đưa hướng điều trị thích hợp Nhiều kháng thể phát triển nhằm xác định sản phẩm gen sinh ung, gen đè nén bướu, giúp việc điều trị trở nên xác hiệu HMMD có bước phát triển mạnh mẽ, nhiên thực tế việc ứng dụng cần phải có qui trình kỹ thuật chuẩn nghiên cứu lâm sàng xác định ý nghóa đánh dấu đời Xác định di vi thể (micrometastasis) HMMD xác định vài tế bào di hạch mà khảo sát mô học thường qui bỏ sót, người ta áp dụng nhiều khảo sát hạch lính gác (sentinel node) vú 132 Chẩn đoán sinh học phân tử ung thư CHẨN ĐOÁN SINH HỌC PHÂN TỬ TRONG UNG THƯ Chẩn đoán phân tử rà tìm sai sót gây bệnh mức độ phân tử Tùy mức độ thương tổn mà chọn phương pháp, kỹ thuật thích hợp để điều trị Bảng Các phương pháp chẩn đoán phân tử PHƯƠNG PHÁP Khảo sát nhiễm sắc thể Khảo sát nucleic acid Khảo sát protein Chúng ta phân thành ba nhóm (1) khảo sát nhiễm sắc thể, (2) khảo sát nucleic acid, (3) khảo sát protein KỸ THUẬT Nhiễm sắc thể đồ Lai chỗ phát huỳnh quang Southern blot Northern blot PCR Giải trình tự DNA Western blot Bảng Mức độ thương tổn DNA chẩn đoán phân tử CÁC CẶP BASE BỊ ẢNH KỸ THUẬT HƯỞNG ‟ 106 Southern blot PCR Chip DNA Phân đoạn Cắt đoạn protein 106 ‟ 108 Phân tích nhiễm sắc thể, FISH 109 Đo đạc nhiễm sắc thể tế bào (Cytometry) 133 VÍ DỤ LÂM SÀNG Lymphôm, clôn dân số tế bào H-ras đột biến điểm Các khiếm khuyết lớn p53 Đột biến BRCA1 Các đột biến khác BRCA1 t(9;22) BCR/ABL t(15;17) RARa/PML Lệch bội carcinôm đại tràng vú Bài Giảng Ung Bướu Học NHIỄM SẮC THỂ ĐỒ Đầu tiên, nhiễm sắc thể nuôi cấy nhuộm băng Sau đó, nhiễm sắc thể quan sát kính hiển vi tiêu sau nhuộm (Hình 1) Các bất thường nhiễm sắc thể thường phát rối loạn số lượng nhiễm sắc thể cấu trúc nhiễm sắc thể đoạn, chuyển đoạn, thêm đoạn, đảo đoạn, tạo vòng (ring) chèn đoạn Nhiễm sắc thể đồ phát nhiều dạng bất thường nhiễm sắc thể bệnh nhân Tuy nhiên, để thực phải thu tế bào kỳ giữa, bất thường nhiễm sắc thể phải tương đối lớn, kết thu sau ngày, không phát trường hợp tái xếp ẩn không phát khuếch đại gen Ứng dụng cytometry (Đo đạc nhiễm sắc thể tế bào) Cytometry hỗ trợ xếp giai đoạn dự đoán diễn tiến bướu Ung thư đại tràng có lưỡng bội, xâm lấn sinh học loại có lệch bội Ung thư vú, đại tràng, buồng trứng, nội mạc tử cung tiền liệt tuyến loại ung thư thường nghiên cứu cytometry để biết dự hậu Ứng dụng phân tích nhiễm sắc thể Trong CML có chuyển vị nhánh dài nhiễm sắc thể 22 Hình Nhiễm sắc thể đồ 134 Chẩn đoán sinh học phân tử ung thư PHƯƠNG PHÁP LAI PHÂN TỬ Có nhiều kỹ thuật FISH ứng dụng FISH tế bào phân chia, FISH tế bào không phân chia, FISH kính phết (smear FISH), FISH sợi DNA (DNA fiber FISH) Lai chỗ phát huỳnh quang (Fluorescent Insitu Hybridization: FISH) Khảo sát nhiễm sắc thể hỗ trợ phối hợp phân tích thăm dò gen Phương thức gọi FISH (Hình 2) Dùng “đầu dò phân tử” (probe) gắn đoạn base đặc hiệu đồng với nhiễm sắc thể làm tiến khả khảo sát nhiễm sắc thể Các đầu dò phân tử dùng kỹ thuật FISH mang đuôi hóa học phát huỳnh quang gắn vị trí đặc hiệu nhiễm sắc thể quan sát kính hiển vi Nhiều đầu dò phân tử dùng với nhiều màu khác Ứng dụng FISH Trong ung thư hệ tạo huyết, giúp chẩn đoán đánh giá đáp ứng điều trị CML, đánh giá tiên lượng ALL AML Trong hệ bướu đặc, FISH dùng để khảo sát biểu mức HER2neu ung thư vú (Hình 3), khuếch đại EGFR ung thư phổi ung thư đại trực tràng, tổ hợp gen TMPRSS2/ERG ung thư tiền liệt tuyến Hình Lai chỗ phát huỳnh quang 135 Bài Giảng Ung Bướu Học Hình Sự biểu HER2-neu Ưu khuyết điểm FISH Lai so sánh gen (Comparative FISH phát bất thường NST tế bào không phân chia Xét nghiệm cho kết nhanh vòng 24 giờ, mồi đặc hiệu nên phát tái xếp ẩn, phân tích nhiều tế bào (200 - 500 tế bào) với độ nhạy để phát clôn bất thường 1%, phát khuếch đại gen Tuy nhiên, khuyết điểm FISH không phát bất thường kèm không quan sát toàn cấu trúc NST genomic hybridization ‟ CGH) Đây phương pháp di truyền học phân tử tế bào để phân tích thay đổi cấu trúc DNA (thêm đoạn/ đoạn) qua so sánh DNA chứng DNA bệnh nhân CGH phát thay đổi nhiễm sắc thể bất đối xứng Phương pháp thường định cho tế bào bướu đặc nuôi cấy (Hình 4) Hình Lai so sánh gen 136 Chẩn đoán sinh học phân tử ung thư Southern blot gen mô Nhược điểm phương pháp nhiều thời gian thao tác phức tạp Southern blot phương pháp thăm dò gen gọi “kỹ thuật tái tổ hợp DNA”, blot phương pháp phân tích DNA (1) cắt DNA thành mảnh enzym giới hạn, (2) điện di mảnh tách rời chúng theo kích thước, (3) thăm dò phương pháp lai phân tử để khảo sát đoạn DNA đơn độc Chip DNA DNA microarray (còn gọi DNA chip hay gene chip) thủy tinh nhựa có gắn đoạn DNA thành hàng siêu nhỏ Các nhà nghiên cứu sử dụng chip để sàng lọc mẫu sinh học nhằm kiểm tra có mặt hàng loạt trình tự lúc Các đoạn đầu dò DNA gắn chip Trên điểm chip có hàng ngàn đầu dò Đầu tiên mẫu DNA xử lý với enzym làm vỡ mô phóng thích DNA DNA đích gắn đuôi có chất đánh dấu phát huỳnh quang để phục vụ cho phát tín hiệu sau lai tạo Sau lai tạo xảy dung dịch xét nghiệm Chip laser quét để xem vị trí chip Hiện nay, người ta áp dụng kỹ thuật chẩn đoán HIV, BRCA1 Ứng dụng Phát thay đổi cấu trúc DNA (mất đoạn, thêm đoạn) Có thể phát đột biến điểm làm thay đổi điểm cắt enzyme giới hạn Khuyết điểm Kỹ thuật đòi hỏi lượng DNA lớn, kỹ thuật phức tạp, nhiều thời gian Northern blot Đây kỹ thuật tương tự southern blot, để khảo sát RNA (Hình 6) Kỹ thuật northern blot chủ yếu sử dụng để khảo sát biểu Hình Quy trình kỹ thuật Southern blot 137 Bài Giảng Ung Bướu Học Hình Quy trình kỹ thuật Northern blot KỸ THUẬT PCR PCR thử nghiệm nhân đoạn DNA ống nghiệm dựa vào chu kỳ nhiệt Thử nghiệm thực ống nghiệm nhỏ chứa dung dịch phản ứng (gọi PCR mix) tích vào khoảng từ 10ml đến 50ml với thành phần chủ yếu (1) enzyme polymerase chịu nhiệt, thường gọi Taq polymerase, có hoạt tính tối đa 720C bền với nhiệt độ; (2) loại desoxyribonucleotide (dNTP) laø Adenine, Thymine, Guanine, vaø Cytosine (dATP, dTTP, dGTP, dCTP); (3) DNA chứa đoạn DNA đích nhân ống phản ứng; (4) đoạn mồi (primer) xuôi ngược đoạn oligonucleotide có chiều dài khoảng 20 ‟ 30 nucleotide có trình tự bổ sung cách đặc hiệu với trình tự đầu đoạn DNA nhân bản; (5) ion Mg2+ muối MgCl2 nồng độ thích hợp, (6) dung dịch đệm TrisKCl để làm dung môi thích hợp cho phản ứng Khi ống nghiệm phản ứng cho vào buồng ủ chu kỳ nhiệt máy luân nhiệt (thermal cycler), mà thường gọi máy PCR, chương trình nhiệt độ máy làm cho nhiệt độ buồng ủ nhiệt máy thay đổi theo chu kỳ, nhờ mà phản ứng nhân DNA xảy Nguyên tắc PCR Về mặt nguyên tắc, chu kỳ nhiệt độ bao gồm giai đoạn nhiệt độ (Hình 7) (1) Đầu tiên nhiệt độ 138 Chẩn đoán sinh học phân tử ung thư đưa lên 940C, nhiệt độ liên kết hydro mạch đôi DNA bị đi, nhờ DNA đích bị biến tính thành mạch đơn; giai đoạn nhiệt độ gọi giai đoạn biến tính (2) Kế nhiệt độ hạ đến 550C ‟ 650C nhiệt độ thích hợp để đoạn mồi tìm đến bắt cặp bổ sung vào hai đầu đoạn DNA đích, giai đoạn nhiệt độ gọi giai đoạn bắt cặp (3) Cuối cùng, nhiệt độ đưa lên 72oC nhiệt độ thích hợp cho hoạt tính enzyme Taq polymerase để kéo dNTP lại đầu 3’ đoạn mồi bắt cặp đầu 5’ sợi DNA đích để bắt nguồn cho tổng hợp nên mạch bổ sung Như vậy, qua chu kỳ nhiệt, DNA đích nhân thành hai sao; chu kỳ lặp lặp lại liên tục 30 đến 40 lần từ DNA đích nhân thành 230 đến 240 sao, tức đến hàng tỷ Hình Nguyên tắc PCR nhân DNA đích qua chu kỳ nhiệt Hình Tổ hợp gen TMPRSS2/ERG ung thư tiền liệt tuyến 139 Bài Giảng Ung Bướu Học Ứng dụng PCR ung thư Phát (terminator, ddNTP: dideoxynucleotide triphosphate, dNTP, có loại ddNTP tương ứng với base A, T, C G) Phản ứng thực ống, ống cho loại ddNTP khác Bắt đầu từ đoạn mồi, men DNA polymerase kéo dNTP vào để tổng hợp mạch đơn bổ sung với mạch DNA chèn vector, tổng hợp mạch đơn bị dừng lại vị trí mà ddNTP kéo vào thay dNTP Lý tổng hợp bị dừng lại ddNTP có cấu trúc hóa học bị gốc OH vị trí carbon thứ đường deoxyribose, mà gốc OH vị trí nơi để dNTP gắn vào Nhờ ống phản ứng có mạch đơn DNA có chiều dài khác tương ứng với vị trí trình tự nucleotide đoạn DNA gốc (Hình 9) Để giải trình tự, người ta dùng phương pháp điện di gel polyacrylamide biến tính Với phương pháp đánh dấu mồi hay dNTP đồng vị phóng xạ 32P hay 35S, sau hoàn tất điện di, mạch đơn bị dừng vị trí khác nhau, tùy thuộc vào mạch đơn dài ngắn khác nhau, theo hàng dọc suốt chiều dài gel Áp gel điện di phim nhạy tia X, vị trí dừng lại mạch đơn gel điện di tạo thành vạch phim vị trí bị đánh dấu phóng xạ mạch đơn có đầu đánh dấu 32P Từ vạch phim xạ ký tự ghi (autoradiography), đọc trình tự nucleotide đoạn DNA tổ hợp gen TMPRSS2/ERG (do đoạn) ung thư tiền liệt tuyến (Hình 8) GIẢI TRÌNH TỰ DNA DNA sở hóa học gen Phân tử DNA chuỗi xoắn kép hai mạch đơn cấu tạo từ loại nucleotide khác nhờ base chúng, A (adenine), C (cytosine), G (guanine) T (thymine) Các nucleotide nối kết liên tiếp với theo thứ tự xác định Giải trình tự gen tức phát thứ tự xếp loại nucleotide phân tử DNA Trước đây, năm 1977, Maxam Gilbert sử dụng phương pháp hóa học giải trình tự DNA, thời gian này, Sanger cs phát minh phương pháp enzyme giải trình tự Hiện nay, đa số phòng thí nghiệm sử dụng máy tự động để giải trình tự Phương pháp enzyme giải trình tự Trước hết chèn đoạn DNA cần phải xác định trình tự vào vector phage hay plasmid vị trí mà trình tự chuỗi vị trí xác định rõ Chuyển thể tức đưa vector mang đoạn chèn DNA vào tế bào vi khuẩn để nhân vector thành nhiều sao, sau tách chiết tinh khiết vector từ vi khuẩn để thành vector tự Dùng đoạn mồi bổ sung cách đặc hiệu với trình tự vector vị trí chèn đoạn DNA Thêm vào ống phản ứng men DNA polymerase loại nucleotide tự (gọi dNTP: deoxynucleotide triphosphate) lượng giới hạn nucleotide tận 140 Chẩn đoán sinh học phân tử ung thư Hình Phương pháp Enzyme giải trình tự DNA Đoạn DNA chèn vào vector vị trí biết rõ trình tự, nhờ tổng hợp mạch đơn có đầu mồi, đầu nucleotide tận Trong hình nucleotide đánh dấu * nucleotide dánh dấu 35S, nhờ mạch đơn đánh dấu 141 Bài Giảng Ung Bướu Học Hình 10 Hình ảnh xạ ký tự ghi kết giải trình tự DNA gel polyacrylamide Từ kết này, đọc trình tự DNA Giải trình tự máy tự động lưu lại thành đỉnh cường độ sáng biểu đồ Từ biểu đồ đỉnh cường độ sáng này, máy so dòng đỉnh tương ứng với màu để cuối phân tích thành trình tự đoạn DNA Với máy hệ sau này, người ta dùng màu huỳnh quang khác để đánh dấu loại ddNTP, nhờ phản ứng giải trình tự thực ống nghiệm giải trình tự cần điện di hàng mà không cần phải hàng khác trước Nếu dùng điện di mao quản tùy thuộc vào số mao quản chạy lần mà người làm thí nghiệm có số mẫu cho lần chạy nhiều hay Tùy thuộc vào qui mô phòng thí nghiệm với số mẫu giải trình tự mà phòng thí nghiệm trang bị giải trình tự hay nhiều mao quản Các hệ máy sau ngày có chương trình kèm để hiển thị tự động ký tự hoá học trình tự DNA mà giúp nhà nghiên cứu (1) phát Các phòng thí nghiệm dùng phản ứng giải trình tự phương pháp enzyme, làm giải trình tự thường dùng máy tự động không dùng kỹ thuật xạ ký tự ghi trước Để thực giải trình tự máy tự động mạch DNA đơn sản sinh ống phản ứng giải trình tự phải đánh dấu huỳnh quang để vạch điện di mạch đơn phát sáng qua chùm tia laser Cấu tạo máy tự động giải trình tự gồm hai phần yếu, là: phần điện di với gel polyacrylamide phần phát vạch điện di Phần điện di polyacrylamide gel ống mao quản chứa gel Phần phát vạch điện di mắt cảm quang chùm tia laser qua trước Nguyên tắc hoạt động máy suốt trình điện di, có vạch điện di qua chùm tia laser vạch điện di phát sáng lên phát sáng mắt cảm quang ghi nhận 142 Chẩn đoán sinh học phân tử ung thư chi tiết cần thiết trình tự mã khởi đầu, mã kết thúc, vùng đọc mở (ORF: Open Reading Frame), trình tự đặc hiệu cho enzyme cắt giới hạn (restriction enzyme), dấu ấn di truyền mà chi tiết cần thiết để lập đồ gen; (2) phiên dịch trình tự vùng đọc mở (tức vùng trình tự có ý nghóa) thành trình tự acid amin protein, nhờ xác định, đoán, hay làm sở ban đầu để hiểu chức gen; (3) tự động so sánh trình tự DNA thí nghiệm hay trình tự DNA nạp vào máy, hay trình tự acid amin protein, với trình tự khác có ngân hàng liệu để phát tương đồng với trình tự biết, nhờ làm sở để xác định gen chức gen Ứng dụng giải trình tự DNA ung thư Chẩn đoán diện gen gây bệnh BCR/ABL bạch cầu mạn dòng tủy (kháng điều trị imatinib), PML/RARA bạch cầu cấp dòng tủy (điều trị retinoic acid), FIP1L1/PDGFRA hội chứng tăng eosinophil (điều trị imatinib), EML4/ALK ung thư vú, ung thư đại trực tràng, ung thư phổi Hình 11 Giải trình tự máy tự động 143 Bài Giảng Ung Bướu Học Đột biến EGFR ung thư phổi có nhiều kiểu đột biến, tùy theo kiểu đột biến mà đáp ứng với điều trị gefitinib thay đổi Trong ung thư vú, giúp xác định đột biến gen BRCA1, RAS, PI3KCA Trong melanôm, ung thư tuyến giáp xác định đột biến điểm BRAF, GIST đột biến KIT, PDGFRA, đại trực tràng KRAS, p53 mẫu mô cần khảo sát Tương tự southern blot northern blot, kỹ thuật sử dụng điện di gel để tách riêng không biến tính hay biến tính protein theo chiều dài chuỗi polypeptid (biến tính) hay theo cấu trúc ba chiều protein (không biến tính) Các protein chuyển sang màng (nitrocellulose hay PVDF), protein đích gắn đầu dò kháng thể đặc hiệu để phát WESTERN BLOT Đây kỹ thuật phân tích sử dụng phát protein đặc hiệu Bảng Ứng dụng PCR ‟ giải trình tự DNA Gen đột biến Bệnh lý Ý nghóa P53 Ung thư vòm họng, vú, đại trực tràng, Tiên lượng? KRAS Ung thư đại trực tràng, phổi, tụy Đánh giá đáp ứng kháng thể đơn dòng BRAF Melanomas, ung thư giáp Đích điều trị sorafenib? PIK3CA Ung thư gan, ung thư vú Đích điều trị everolimus? JAK2 Rối loạn tăng sinh tủy Tiêu chuẩn chẩn đoán FLT3, NPM1 Bạch cầu cấp Tiên lượng, đích điều trị BRCA1/2 Ung thư vú, buồng trứng Nguy EGFR Ung thư phổi Gefitinib, erlotinib KIT, PDGFRA U mô đệm đường tiêu hóa Imatinib, sunitinib BCR/ABL Bạch cầu mạn dòng tủy Imatinib, nilotinib, dasatinib VHL Von Hippel-Lindau Chẩn đoán 144 Chẩn đoán sinh học phân tử ung thư Hình 12 Kỹ thuật western blot Các enzym polymerase MỘT SỐ ENZYM SỬ DỤNG TRONG KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ Polymerase enzym xúc tác tổng hợp DNA tổng hợp RNA Các DNA polymerase xúc tác tổng hợp DNA theo chiều 5’  3’ Trong đó, DNA polymerase I xúc tác tổng hợp mạch đơn DNA mới, đồng thời có vai trò sửa chữa sai sót trình nhân đôi DNA T4 DNA polymerase có hoạt tính exonuclease 3’  5’ mạnh Taq DNA polymerase enzym chịu nhiệt tốt thường sử dụng phản ứng PCR Reverse transcriptase nhằm chép gen RNA thành DNA bổ sung (cDNA ‟ complementary DNA) Các RNA polymerase sử dụng việc tổng hợp RNA, có ba loại sử dụng nhiều SP6, T3 T7 RNA polymerase Enzym giới hạn (restriction enzyme) Tế bào vi khuẩn nhiễm vào thể bị hệ thống thực bào tiêu diệt Tuy nhiên, số tế bào vi khuẩn có chứa enzym cắt DNA thực bào thành đoạn nhỏ, đó, tế bào vi khuẩn không bị tiêu diệt Đây tượng giới hạn, cho nên, enzym có khả vừa kể gọi enzyme giới hạn Enzyme giới hạn thuộc nhóm enzym endonuclease, cắt liên kết phosphodieste phân tử DNA Vd: Hae III cắt DNA cặp nucleotid, Sma I cắt DNA cặp nucleotid, EcoR I cắt DNA lệch cặp nucleotid Người ta phân enzym giới hạn thành ba loại Enzym giới hạn loại II, nhận biết trình tự cắt vị trí nhận biết, nhóm sử dụng kỹ thuật sinh học phân tử 145 Bài Giảng Ung Bướu Học Các ligase Các nuclease Ligase enzym xúc tác tạo liên kết nối hai đoạn DNA (DNA ligase) hay RNA (RNA ligase) Đây enzym cắt DNA (DNase) enzym cắt RNA (RNase) Các enzym giới hạn nuclease mang tính chuyên biệt trình tự cao Hình 13 Một số enzym giới hạn 146