BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ THỊ TÚ UYÊN KHẢO SÁT THÀNH PHÀN HÓA HỌC CỦA QUÀ THẢO QUẢ (AMOMUM AROMATICUM ROXB ), HỌ GỪNG ZINGIBERACEAE KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC sĩ HÀ NỘI 2022 BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠ[.]
BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ THỊ TÚ UYÊN KHẢO SÁT THÀNH PHÀN HÓA HỌC CỦA QUÀ THẢO QUẢ (AMOMUM AROMATICUM ROXB.), HỌ GỪNG - ZINGIBERACEAE KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC sĩ HÀ NỘI - 2022 BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ THỊ TÚ UYÊN 1701658 KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA QUẢ THÀO QUÀ (AMOMUM AROMATICUM ROXB.), HỌ GỪNG ZINGIBERACEAE KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC sĩ Người hưởng dẫn: PGS TS ĐỖ Thị Hà TS Đào Thị Thanh Hiền Nơi thực hiện: Bộ môn Dưọc học cổ truyền Viện Dược liệu LỜI CẢM ƠN Khóa luận kết trình học tập, rèn luyện em Trường Đại học Dược Hà Nội trình nghiên cứu, thực hành Khoa Hóa Phân tích - Tiêu chuẩn, Viện Dược liệu Trong trình nghiên cứu hồn thành khóa luận này, em đà nhận nhiều giúp đỡ quý báu từ Thầy Cô Bộ môn Dược học cổ truyền, nhà khoa học Viện Dược liệu gia đình bạn bè Trước hết, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Đỗ Thị Hà TS Đào Thị Thanh Hiền - người Thầy đà hết lịng tận tình, bảo em q trình làm khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Thầy Cô Bộ môn Dược học cố truyền Trường Đại học Dược Hà Nội cán nghiên cứu Khoa Hóa Phân tích - Tiêu chuẩn Viện Dược liệu đà tạo điều kiện, giúp đờ hướng dẫn em q trình thực hồn thành khóa luận Em xin gửi lời cám on Nghị định thư Việt - Hàn "Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư điều hòa miễn dịch số thuốc Việt Nam"' hỗ trọ kinh phí để em thực đề tài Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn tới gia đình bạn bè động viên, giúp đỡ em trình học tập làm đề tài tốt nghiệp Trong trình làm khóa luận khơng tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận góp ý Thầy Cơ đế khóa luận em hồn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 27 tháng 06 năm 2022 Sinh viên Lê Thị Tú Uyên MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT, CÁC KÝ HIỆU DANH MỤC CÁC BẢNG ĐẶT VẮN ĐỀ CHƯƠNG TÔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Amomum 1.1.1 Thực vật học 1.1.3 Tác dụng dược lý 10 1.1.4 Công dụng y học cố truyền 11 1.2 Tổng quan Thảo 12 1.2.1 Đặc điếm thực vật, phân bố sinh thái Thảo 12 1.2.2 Thành phần hóa học Thảo 12 1.2.4 Công dụng Thảo Y học cổ truyền 20 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cúư 21 2.1 Nguyên vật liệu thiết bị 21 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 21 2.1.2 Dung môi, hóa chất 21 2.1.3 Máy móc, thiết bị dụng cụ 22 2.2 Nội dung nghiên cứu 22 2.3 Phuong pháp nghiên cứu 22 2.3.1 Phương pháp định tính chất có Thảo 22 2.3.2 Phương pháp chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc hợp chất 25 CHƯƠNG THỤC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 28 3.1 Kết định tính 28 3.2 Kết chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc họp chất 29 3.2.1 Kết chiết xuẫt phân lập 29 3.2: Bàn luận 34 3.2.1: định tính 34 3.2.2 chiết xuất phân lập 34 3.2.3: xác định cấu trúc họp chất phân lập 34 KÉT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 38 PHỤ LỤC 43 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẢT, CÁC KÝ HIỆU Tên viết tắt Tên viết đầy đủ AAE Cao chiết ethyl acetat từ loài Amomum aromaticum AAH Cao chiết n-hexan từ loài Amomum aromaticum AAT Cao chiết tổng ethanol 70% từ loài Amomum aromaticum AAW Căn nước từ loài Amomum aromaticum BPH Benign Prostatic Hyperplasia (Tăng sản lành tính tuyến tiền liệt) CD3OD Deuterated methanol 13C-NMR Carbon 13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy (Phố cộng hưởng từ hạt nhân carbon 13) COSY Correlation Spectroscopy (Phổ COSY) CVD Cardiovascular disease (Bệnh tim mạch) DCM Dichloromethane Dulbecco's modified Eagle's medium (Môi trường Eagle sửa DMEM đối Dulbecco) DPPH 2,2-Diphenyl-1 -picrylhydrazyl Eos Tinh dầu Electronspray Ionization Mass spectrum ESI-MS (Phổ khối ion hóa phun mù điện tử) EtOAc Ethyl acetate EtOH Ethanol FBS Fetal bovine serum (Huyết thai bò) Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy 'H-NMR (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton) HPLC High Performance Liquid Chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) Heteronuclear Single Quantum Correlation HSQC (Phổ tương tác dị hạt nhân lượng tử đơn) IC50 50% Inhibitory Concentration (Nồng độ ức chế 50%) LPS Lipopolysaccharide MeOH Methanol STT Số thứ tự Real-time polymerase chain reaction (Phản ứng tổng họp chuỗi RT-PCR polymerase thời gian thực) TLTK Tài liệu tham khảo v/v Thể tích/ thể tích V/v/v/v Thể tích/ thể tích/ thể tích/thể tích DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số hợp chất flavonoid thuộc chi Amomum Bảng 1.2 Một số hợp chất terpenoid chi Amomum Bảng 1.3 Một số họp chất nhóm diarylheptanoid có chi Amomum Bảng 1.4 Một số hợp chất nhóm khác có chi Amomum Bảng 1.5 Các hợp chất phân lập tù’ Thảo 13 Bảng 3.1 Kết định tính sơ nhóm chất dược liệu Thảo 28 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ TQH3 chất tham khảo 33 DANH MỤC CÃC HÌNH VẼ, so ĐỊ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Các flavonoid phân lập từ Thảo 16 Hình 1.2 Các phenolic sterol phân lập từ Thảo 16 Hình 1.3 Các diarylheptanoid phân lập đưọc từ Thảo 17 Hình 1.4 Một số họp chất khác phân lập từ Thảo 18 Hình 2.1 Mẩu dược liệu Thảo (Amomum aromaticum) 21 Hình 3.1 Sắc ký đồ cao tổng cao phân đoạn tù’ Thảo 29 Hình 3.2 Sơ đồ quy trình chiết cao tổng cao phân đoạn Thảo 3O Hình 3.3 Quy trình phân lập họp chất tù’ cao n-hexan 31 Hình 3.4 Sắc ký đồ họp chất TQH1 p-sitosterol (P-s) 31 Hình 3.6 Cấu trúc hóa học p-sitosterol 32 Hình 3.6 Sắc ký đồ họp chất TQH2 Daucosterol (Dc) 32 Hình 3.7 Cấu trúc hóa học daucosterol 32 Hình 3.8 Cấu trúc hóa học Tsaokoin 34 ĐẶT VẤN ĐÈ Việt Nam nằm vùng nhiệt đới gió mùa, có hệ thực vật phong phú đa dạng, trải dài từ Bắc vào Nam Theo ước tính nhà thực vật học, hệ thực vật nước ta có khoảng 12.000 lồi [4] Theo nghiên cứu Viện Dược liệu, nước có khoảng 3948 lồi thực vật nấm lớn, 52 loài tảo biền, 408 loài động vật khoảng 72 lồi khống sản có cơng dụng làm thuốc Thảo (Amomum aromaticum Roxb., họ Gừng - Zingiberaceae) thuốc quý, có nguồn gốc từ vùng cận Himalaya, phân bố Đông Bắc Ấn Độ, Nepan, Tây Nam Trung Quốc Bắc Việt Nam [3] Trong thực phâm, Thảo sử dụng làm gia vị, làm chất thơm cho bánh kẹo Trong Y học cổ truyền, Thảo làm thuốc chữa đau bụng, đầy chướng, nấc cụt, nôn, tiêu chảy, sốt rét lách to, đờm ấm tích tụ, miệng [3J Các nghiên cứu đại cho thấy, Thảo có thành phần tinh dầu [2], flavonoid [16], [25], diarylheptanoid [12], sterol [25] acid phenolic [25] Bên cạnh đó, nghiên nghiên cứu dược lý rằng, cao chiết hợp chất từ Thảo có tác dụng chống ung thư [31], chống oxy hóa [36], kháng khuẩn [36] tác dụng tim mạch [23] Mặc dù sử dụng Y học cổ truyền từ lâu sử dụng làm gia vị thực phẩm nghiên cứu giới, nhiên Thảo chưa nghiên cứu nhiều Việt Nam đặc biệt thành phần hóa học Nhằm góp phần cung cấp dừ liệu khoa học tạo sở cho nghiên cứu Thảo quả, khóa luận “Kháo sát thành phần hóa học Thảo (Amomum aromaticum Roxb.), họ Gừng (Zingiberaceae)” thực với mục tiêu sau: Định tính nhóm chất hóa học có Thảo Chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc hợp chất từ Thảo CHƯƠNG TÔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Amomum 1.1.1 Thực vật học 1.1.1.1 VỊ trí phân loại Chi Amomum thuộc [4]: Giới: Plantae Ngành: Magnoliophyta Lớp: Liliopsida Bộ: Zingiberales Họ: Zingiberaceae 1.1.1.2 Đặc điểm thực vật Các loài thuộc chi Amomum thường có thân rễ leo rộng, kéo dài Bẹ dài, phiến thường hình mác, thn dài, tuyến tính Cụm hoa phát sinh từ thân rễ, cành hoa dày đặc chùm hoa chùy; cuống ngắn dài, bao bọc bẹ giống hình vả, sần sùi; bắc hình thoi, bắc thường hình ống Đài hoa thường hình ống, đỉnh có Tràng hoa ống hình trụ, thùy thn dài, thùy mọc thẳng, thường rộng lồi thùy bên Các đốt bên phụ, nhỏ khơng có Nhị hoa dễ thấy, thường có màu vàng cam trung tâm với số đường vân vết màu dở, thường có màu trắng rìa, thường có hình trứng, rộng lõm Nhụy hoa phát triển tốt; bao phấn song song phân kỳ; phần phụ liên kết kéo dài ngồi đỉnh bao phấn, có thùy Buồng trứng ơ, nỗn nhiều ơ, xếp chồng lên Đầu nhụy thường hình phễu, nhỏ, có lông tơ Quả nang không không liên tục, nhẵn, có gai, có cánh Hạt thn dài nhiều góc cạnh; lóp vỏ ngồi hạt thịt màng [34] 1.1.1.3 Phân bố Chi Amomum có khoảng 150 loài, phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới châu Á châu Đại Dương, có khoảng 24 loài ghi nhận phát triển miền nam Trung Quốc [12] 1.1.2 Thành phần hóa học Tinh dầu thành phần lồi thuộc chi Amomum Ngồi tinh dầu, có khoảng 166 hợp chất khác báo cáo thuộc nhóm flavonoid, terpenoid, diarylheptanoid, coumarin, Trong đó, triterpen flavonoid thành phần đóng vai trị quan trọng hoạt động trực tiếp gián tiếp loài chi [9] ỉ ĩ.2.1 Tinh dầu Hiện có khoảng 29 lồi giống thuộc chi Amomum đà nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu Tinh dầu loài A subulatum, A tsao-ko, A kravanh, A aromaum, A compactum, A korarima A verum giàu 1,8-cineol Những loài Sa nhân sử dụng làm gia vị hương vị Bornyl acetat, long não, methyl chavicol, transp-(l-butenyl) anisol, santolina trien, a-pinen yổ-pinen thành phần khác tinh dầu loài Amomum khác Thành phần tinh dầu bị ảnh hưởng yếu tố kiểu gen thực vật, phặn cây, mùa vụ thu hái, sinh thái, kỹ thuật phân lập phân tích [27] 1.1.2.2 Flavonoid 35 flavonoid (Bảng 1.1) phân lập từ lồi thuộc chi Amomum, thuộc nhóm: flavanon, flavonol, chalcon flavan-3-ol Hầu hết flavanon chalcon tách từ A tsao-ko Flavonol dẫn xuất 3-glycosid chia thành hai nhóm với dẫn xuất kaempferol quercetin dạng methyl hóa Bên cạnh đó, phần đường flavonoid glycosid thường tạo thành từ glucose rhamnose, bản, pyranoflavanon pyranochalcon geranyl hóa thường tách khỏi loài họ Leguminosae Moraceae Bảng 1.1 Một sô hợp chât flavonoid thuộc chi Amomum Họp chắt STT Loài TLTK Alpinetin A tsao ko [17] Naringenin-5-ơ-methyl eter A tsao ko [17] Naringenin A tsao ko [17] Hesperetin A tsao ko [17] Tsaokonol A A tsao ko [15] Tsaokonol B A tsao ko [15] Tsaokonol c A tsao ko [15] Tsaokonol D A tsao ko [15] Tsaokonol E A tsao ko [15] 10 Tsaokonol F A tsao ko [15] 11 Tsaokonol G A tsao ko [15] 12 Tsaokonol H A tsao ko [15] 13 5-Hydroxy-3,7,4'-trimethoxyflavon A koenigii [11] 14 5-Hydroxy-3,7,3',4 '-tetramethoxyílavon A koenigii [11] KÉT LUẬN VÀ ĐÈ XUẤT Kết luận Sau trình nghiên cứu thực nghiệm, khóa luận đà thu đuợc số kết nhu sau: - Đã định tính đuợc nhóm chất phản ứng hóa học đặc trung, kết cho thấy Thảo có chứa nhóm chất gồm chất béo, flavonoid, acid amin, đuờng khử tự polysarcharid - Đã chiết xuất, phân lập xác định đuợc cấu trúc cùa hợp chất từ cao /2-hexan Thảo là: yổ-sitosterol (TQH1), daucosterol (TQH2) tsaokoin (TQH3) Đề xuất Tiếp tục phân lập hợp chất từ phân đoạn n-hexan, ethyl acetat nước Thảo 38 TÃI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ môn Dược liệu (2010), Thực tập Dược liệu, Nhà xuất Y học, Hà Nội Đỗ Huy Bích (2006), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Tập 2, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Đỗ Tất Lợi (2013), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Hồng Đức, Hà Nội Lê Đình Bích (2007), Thực vật học, Nhà xuất Y học, Hà Nội, tr.207-213 Trần Hùng (2012), Phương pháp nghiên cứu dược liệu, Trường Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh, Thành phố Hồ Chí Minh Bộ môn Dược liệu (2012), Phương pháp nghiên cứu dược liệu, Trường Đại học Y dược thành phố Hồ Chí Minh Bộ Y tế (2011), Dược liệu học, Nhà xuất Y học, Hà Nội, Tập Tiếng Anh Bouic, p., et al (1999), "The effects of B-sitosterol (BSS) and B-sitosterol glucoside (BSSG) mixture on selected immune parameters of marathon runners: inhibition of post marathon immune suppression and inflammation", International journal of sports medicine, 20(04), pp 258-262 Cai, R., et al (2021), "Chemistry and bioactivity of plants from the genus Amomum", J Ethnopharmacol, 281, p 114563 10 Cui Qi et al (2017), "Rapid extraction of Amomum tsao-ko essential oil and determination of its chemical composition, antioxidant and antimicrobial activities", Journal of Chromatography B 1061, pp 364-371 11 Dong, H., Gou, Y L., Cao, s G., Chen, s X., Sim, K Y., Goh, s H., & Kini, R M (1999) Eicosenones and methylated flavonols from Amomumkoenigii Phytochemistry, 50(5), 899-902 12 He, X.-F., et al (2020), "Amomutsaokols A-K, diarylheptanoids from Amomum tsaoko and their a-glucosidase inhibitory activity", Phytochemistry, 177, p 112418 13 Hong, S.S., et al (2021), "Monoterpenoids from the fruits of Amomum tsao-ko have inhibitory effects on nitric oxide production", 10(2), p 257 14 Jiang, L.-h., et al (2015), "Daucosterol protects neurons against oxygen-glucose deprivation/reperfusion-mediated injury by activating IGF1 signaling pathway", The Journal of Steroid BiochemistryMolecular Biology, 152, pp 45-52 39 15 Kamchonwongpaisan, s., Nilanonta, c., Tarnchompoo, B., Thebtaranonth, c., Thebtaranonth, Y., Yuthavong, Y., & Clardy, J (1995) An antimalarial peroxide from Amomum krervanh Pierre Tetrahedron letters, 36(11), 1821-1824 16 Kim, J.G., et al (2019), "Pyranoflavanones and pyranochalcones from the fruits of Amomum tsao-ko", Journal of natural products, 82(7), pp 1886-1892 17 Kim, J G., Le, T p L., Hong, H R., Han, J s., Ko, J H., Lee, s H., & Hwang, B Y (2019) Nitric oxide inhibitory constituents from the fruits of Amomum tsaoko Natural Product Sciences, 25(1), 76-80 18 Kim, Ki Hyun, et al "Terpene glycosides and cytotoxic constituents from the seeds of Amomum xanthioides." Planta medica 76.05 (2010): 461-464 19 Kim, Y Y., Je, I G., Kim, M J., Kang, B c., Choi, Y., Baek, M c., & Kim, s H (2017) 2-Hydroxy-3-methoxybenzoic acid attenuates mast cell-mediated allergic reaction in mice via modulation of the FceRI signaling pathway Acta Pharmacologica Sinica, 38( 1), 90-99 20 Kikuzaki, Hiroe "Antioxidants from some tropical spices." 2003 176-189 21 Kumar, Gopal, Baby Chauhan Mohammed Ali "Phân lập xác định phytoconstitu từ dịch chiết Sa nhân (Amomum subulatum Roxb)." Nghiên cứu Sản phẩm Tự nhiên 28.2 (2014): 127-133 22 Lee, K.Y., et al (2008), "Inhibitory constituents of lipopolysaccharide-induced nitric oxide production in BV2 microglia isolated from Amomum tsao-ko", Planta medica, 74(08), pp 867-869 23 Li Wei et al (2011), Chemical composition and antimicrobial activity of essential oil from Amomum tsao-ko cultivated in Yunnan area, Advanced Materials Research, Trans Tech Publ, pp 910-914 24 Liu, H., Yan, Q., Zou, D., Bu, X., Zhang, B., Ma, X., & Wang, c (2018) Identification and bioactivity evaluation of ingredients from the fruits of Amomum tsaoko Crevost et Lemaire Phytochemistry letters, 28, 111-115 25 Martin, T.S., et al (2000), "Constituents of Amomum tsao-ko and their radical scavenging and antioxidant activities", Journal of the American Oil Chemists' Society, 77(6), pp 667-673 26 Moon Surk-Sik, Soon-Chang Cho and Ji-Young Lee (2005), "Tsaokoarylone, a cytotoxic diarylheptanoid from Amomum tsao-ko fruits", Bull Korean Chem Soc 26(3), pp 447-450 40 27 Nikitha Sabulal & Sabulal Baby (2021), "Chemistry of Amomum essential oils", Journal of Essential Oil Research, 33:5, 427-441 28 Ovesnaâ, z., Lkovaâ, A.V., Thovaâ, K.H (2004), "Taraxasterol and b-sitosterol: new naturally compounds with chemoprotective/chemopreventive effects Minireview", Neoplasma, 51(6), p 407 29 Owen, P.L., Johns, T (2002), "Antioxidants in medicines and spices as cardioprotective agents in Tibetan highlanders", Pharmaceutical Biology, 40(5), pp 346357 30 Qin Li, Liang-Liang Zhang, Jian-Guo Xu (2021) Antioxidant, DNA damage protective, antibacterial activities and nitrite scavenging ability of essential oil of Amomum kravanh from China Natural Product Research 35:23, pages 5415-5419 31 Sudarsanan, D., Suresh Sulekha, D., Chandrasekharan, G (2021), "Amomum aromaticum Induces Apoptosis in Tumor Cells and Reduces Tumor Burden in Experimental Animals via Modulating Pro-Inflammatory Cytokines", Cancer Invest, 39(4), pp 333-348 32 Verma, S.K., Jain, V., Singh, D.p (2012), "Effect of greater cardamom (Amomum subulatum Roxb.) on blood lipids, fibrinolysis and total antioxidant status in patients with ischemic heart disease", Asian Pacific Journal of Tropical Disease, 2, pp S739-S743 33 Wilt, T.J., et al (1999), "Beta-sitosterols for benign prostatic hyperplasia", Cochrane database of systematic reviews(3) 34 Wu, z., Raven, p (2000), Flora of China, vol 24 Missouri Botanical Garden, St Louis, Zingiberaceae, Sciences Press, Beijing 35 Zhao, c., et al (2015), "Daucosterol inhibits cancer cell proliferation by inducing autophagy through reactive oxygen species-dependent manner", Life sciences, 137, pp 37-43 36 Yang Y., Yan R w., Cai X Q., et al (2008) Chemical composition and antimicrobial activity of the essential oil of Amomum tsao-ko Journal of the Science of Food and Agriculture, 88(12):2111-2116 37 Yang Yang et al (2010), "Cytotoxic, apoptotic and antioxidant activity of the essential oil of Amomum tsao-ko", Bioresource Technology 101(11), pp 4205-4211 38 Yin, H., Jiang, N., Guo, c., & Gao, JM (2021) Một sesquiterpenoid bergamotane từ thân rễ Amomum Villosum var xanthioides Nghiên cứu sản phàm tự nhiên , 35 (3), 377-383 41 39 Yin, Hong, Jian-Guang Luo, and Ling-Yi Kong "Tetracyclic diterpenoids with isomerized isospongian skeleton and labdane diterpenoids from the fruits of Amomum kravanh." Journal of Natural Products J62 (2013): 237-242 40 Zhang, Tian-Tian, Chuan-Li Lu, and Jian-Guo Jiang "Bioactivity evaluation of ingredients identified from the fruits of Amomum tsaoko Crevost et Lemaire, a Chinese spice." Food & function 5.8 (2014): 1747-1754 41 Zhang, z., Leng, X., Yang, s., Liang, c., Huang, s., & Wang, X (2017) A novel total synthesis of aculeatin A via a stepwise approach RSC advances, 7(16), 9813-9818 42 PHU LUC PHỤ LỤC Dữ LIỆU PHÓ CỦA HỢP CHẤT TQH3 Phụ lục 1.1 Phổ ^-NMR (500 MHz, CD3OD) cùa hợp chất TQH3 Phụ lục 1.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất TQH3 Phụ lục 1.3 Phổ HSQC hợp chất TQH3 Phụ lục 1.4 Phổ NOESY hợp chất TQH3 TQH3-CDC13-1H BRUKER Ợ» cn Current Data Parameters TQH3 NAME EXPNO 10 PROCKO F2 - Acquisi tion Parar^eters Dote_ 20220316 T ime 16.32 h INSTRCM AvanceNEO_600MHz PROBKD ZB14601-0129 ( PULPRO5 zg30 TD 65536 SOLVENT CDC13 ws 16 DS SXH 11904.762 Hz 0.363304 Hz FXDRES AQ 2.7525120 sec RG 32 DX 42.000 usee DE 9.0B usee 299.B X TE D1 1.00000000 sec TDD SFO1 600.4037075 MKz NUC1 1H Pũ 2.77 usee P1 6.30 usee PLW1 13.3660001B M i 1nrr u w W» u.ol ft 65536 600.3999982 MKz EM f2 — Pre sx SF XDW SSB LB GB PC 13 10 in à 43 ppm 0.30 Hz 1.00 TQH3-CDC13-1H T o T 9.5 r-< KP •r 05 KP m un T KP »p KP \p • • \p *p KP \p u> 05 04 • r» 05 9.0 8.5 8.0 7.5 BRUKER 7.0 — O"» 05 CM CM IW/V *r r< rl Current Data Parameters KAÍS 7QH3 EXFN0 PRCCND F2 - At«Tjisition Parameters Date 20220317 Time 14.24 h INSĨRIM A7anceKEO_6C0raz zẽ14601.0129 ( FRC3HD ■Ỉỉụ rJL?R35 ĨD CDC13 SCƯ.IÍ.T 512 NS DS 38461.539 Hz SWM 1.173753 Hz FIZP.ZS 0.8519693 set AO 101 RG 13.000 usee cw 6.50 uses DE 300.1 K TE D1 2.C3000C30 set D11 0.03000C03 set TZ0 SFO1 150.9973C69 HEX >F-’C1 13c FÕ 5.33 usee 16.00 usee FLX1 113.90000153 M SFO2 600.4024016 HEX ĨH >F-'C2 ƠZPR3(2 xaltz65 70.00 usee FCFD2 13.3660001? K FLX2 0110792000 ii FLW12 FLX13 O.C9452C33 K F2 - Frccessing parare te rs 3276? SI 150.9707C31 HEx EM 1.00 Hz 1.40 220 200 180 160 140 120 100 80 60 40 20 ppm Phụ lục 1.2 Phổ 13C-NMR (150 MHz, CD30D) hợp chất TQH3 45 46 rc-HJ D - crcl J -Es cc —I l—1 cw I■ Ck LI ■■ II u IB 'J IB M LI Phụ lục 1.3 Phổ HSQC họp chất TQH3 47 TQH3-CDC13-NOESY BRU Carrent Data Poioaeteri NAME TQB3 EXPNO PROCNO PPm F2 - Acquisition Parameters 20220319 Date Time 1.25 h INSTRUN AvanceNEƠ—60 Ohs z PRƠ33D Z814601-0129 i PULPROG ooesygpphpp TD 2048 SOLVENT CBC13 N3 DS 32 SMB 6578.947 Bz FIBRES 6.424753 Bz 0.1556480 sec AƠ SG 64 D* 76.000 □sec DE 13.72 □sec TE 300.3 r DO 0.00006543 sec 2.01630389 sec Di D9 0.30000001 sec Dll 03000000 sec D12 00002000 sec 00020000 sec D16 INO 0.00015200 sec TDav SFOl 600.4030795 XHr NUC1 IB Pl S.30 □sec P2 16.60 □sec Pl 2500.00 □sec pzrl 13.36600018 IT pzrio 1.47329998 M GPKAMÍU SMSQ10.100 GPZ1 40 00 t P16 1000.00 □sec o tdl SV-F1 Pl rcnrcrrT nnfTM.q Ti 256 10.957551 Fl — Acquisition parameters TD 256 SFO1 600.4031 NHz 51.398026 St FIBRES 10.958 PP" SM FnMDDE States—TPPX F2 — Proceaxing parameters SI 1024 SF 600.4000004 NBz MDr Q3INE sss ZB Bl 1.00 10 ppm TQH3-CDC13-NOESY rl — Processing parameters SI 1024 NC2 Btates-TPPI SF 600.4000004 KHz Q3INE ND* SS8 LB GB BRU Current Data Parameters NAME TQH3 EXPtfO PRCXXO F2 - Acquisition Parameters 20220319 Daterime 1.25 h INSTRƠN A van ceNEO_600MBz PRO88D Z8146O1_O129 Ỉ PULPROG noesygp^pp TD 2048 SOLVENT CDC13 NS DS 32 SNB 6578.947 Bz FIORES 6.424753 Bz AQ 0.15564 80 sec RG 64 76.000 □sec DN DE 13.72 □ sec 300.3 E TE DO 0.00006543 sec Dl 2.01638389 sec D9 0.30000001 sec Dll 0.03000000 sec D12 0.00002000 sec 00020000 sec D16 inO 0.00015200 sec TDav SFO1 600.4030795 NBz NUCI IB Pl 8.30 □sec P2 16.60 □sec 2500.00 □sec Pl PLN1 13.36600018 IT PLN10 1.47329998 w GPKAMÍỈ1 SXSQ10.100 40.00 GF II P16 1000.00 □sec tdl S*_F1 rT JMlZxA&C/X rimr nrk ri OX#UsTlZf JI 256 10.957551 Fl — Acquisition parameters TD 256 SFOl 600.4031 NHz FIBRES 51.398026 Hz SM 10.958 pp* FnMODE States-TPPT F2 — Processing parameters ' ■ 1024 SI SF 600 4000004 MHz NDV 03INE S9B LB Bl GB PC 1.00 Fl — Processing parameters SI 1024 NC2 States-TPPI SF 600.4000004 NHz NDV OSINE SSB LB GB 48 TQH3-CDC13-NOESY BRU Corrent Data Parameters NANE TtfHj EXPNO PROCNO ppm F2 — Ẳcqaiiition Parameters Date 20220319 Tine 1.25 h INSTR GW A van ceNEO_ 60 ŨMH z PROBED E814601-0129 i PULPROG noeaytjppbpp 2049 ID SOLVENT CDC13 NS 32 DS SNB 6578.947 Bz FIORES 6.424753 Bz 0.15564 00 tec AQ KG 64 DN 76.000 □sec DE 13.72 □sec TE 300.3 E DO 0.00006543 tec Dl 2.01638399 sec D9 0.30000001 sec 0.03000000 sec Dll 0.00002000 sec D12 D16 00020000 sec 0.00015200 sec INO TDav SFO1 600.4030795 NHz NUC1 IB Pl 8.30 □sec P2 16.60 □sec Pl 2500.00 □sec 13.36600019 IT PX»I PLN10 1.47329999 N GPKAMlU SNSQ10.100 GPZ1 40.00 P16 1000.00 □sec 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 — FlINDIRECT DIMENSION ===== tdl 256 SS—F1 10.957551 5.0 Fl — ẦỉXỊQiiition parameters ID 256 SFO1 600.4031 NBz FI ORES 51.398026 Bz SN 10.959 PP" FilMDOE States-TPPI 5.5 FĨ — Pĩocetĩinq parameters SI 1024 SF 600.4000004 MBz KDV QSINE SSB Ex LB GB PC 1.00 6.0 6.5 7.0 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 ppm TQH3-CDC13-NOESY rl — Processing parameters SI 1024 NC2 States—TPPI SF 600.4000004 NHz MDtr Q3INE SS8 LB GB BRUKER carrent Data Paraseters NAME TOflJ EXPNO PRCCNO ppm 3.0 F2 — Acqoisition Parameters Date 20220319 rime 1.25 h INSTRUN A van C*NEO_ 600MB z PROBBD Z8146O1_O129 ( PULPROG ocesj'gpphpp 7D 2049 SOLVENT CDC13 NS DS 32 SNB 6578.947 Bz FIORES 6.424753 Bz A0 0.1556490 sec KG 64 Dir 76.000 osec DK 13.72 asec TE 300.3 E DO 0.00006543 sec 2.01638399 sec Dl D9 0.30000001 sec Dll 0.03000000 sec D12 0.00002000 sec D16 0.00020000 sec 0.00015200 sec IN0 TDav SFO1 600.4030795 NBz NUC1 IB Pl 8.30 asec P2 16.60 asec Pl 2500.00 asec pxrl 13.36600019 N PXV10 1.47329999 tf GPKANÍU SMSQ10.100 GPZ1 40.00 % P16 1000.00 asec 3.2 tdl SS_F1 1.4 1.6 1.8 2.0 2.2 2.4 2.6 2.8 256 10.957551 Fl - Acquisition parameters ID 256 SFO1 600.4031 MBZ FIORES 51.398026 Bz SN 10.959 ppm FnNOOE Statea-TPPI 3.4 3.6 F2 — Pxoceaainq parameters SI 1024 SF 600.4000004 NBz MD» QSINE SSB LB B* GB PC 1.00 3.8 4.0 4.2 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 49 1.5 ppm Fl - Pxoceaaing parameters SI 1024 NC2 Statea-TPPI SF 600.4000004 NBZ MDV Q3INE S3B LB Ba GB Phụ lục 1.4 Phổ NOESY hợp chất TQH3 PHỤ LỤC PHIẾU KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH MẪU IIỒ X HỌl CHỦ NGHÍA VIỆT NAM Dộc lập - Tự - llynh phúc BỘYTỀ VIỆN DƯỢC I.IỆV PHIẾU KẾT QUẢ GIẤM ĐỊNH MÀI (Kct quà giám đinh chi có già rrỊ vởt mỏu đem thứ) MỈU giám định Thào Số lương mẫu 01 mẫu cảnh mang rẻ thân rè la hoa vá quã (MỈU lưu tai Phòng Ttéu bán cùa Trung ứm Tểi nguyên Dươc liệu - Viện Duơc lrfu với số hiệu DL-I252Ữ) Ngtylầymỉu 12/05/2020 Nen lảy Huyện Sin HÒ ùnh Lai Chầu NỘI dung yèu câu Xấc đinh tên khoa hoe Người yêu câu Đỏ Thi Hà Don vị cơng tâc Khoa Hóa Phân tlch - Tiíu chuẩn v>ện Dược liíu — VIỆN Phưưng pháp gìưm định: So sanh hỉnh thái, địi chỉẻu khoa phàn Ioội Cản giant định: ThS Nguyen Vân I l»ểu, ThS Nguyvn Quýnh Nga I ĩtas' Sau phân tích mlu có sỏ hiẽu DL-12520 kể uẻn tham kháo ÚI l»ẽu h»in có két hợp địi chiéu vớt cức tiêu bân cùa loài Amomum aromaticum Roxb lưu giữ tai Phong Tiéu bàn cùa Trung tảm Tải nguyên Dược liệu Vi£n Dược liệu (cố số hiệu TB-I124) chúng tỏi đfl xảc đinh ten khoa học cùa mỉu cu thê sau Kít qua Yêu CMU Tẽn khoa học Amontunt arontaíừum Roib H'urjboinia aromaỉicaịRồKb ) Skơmick & A D Poulsen Renailmiafasaculaia Roscoe Tên địng nghía (Synonyms): Geocalhs fasciculata (Roscoe) I loran Alpưuafasciculata (Roscoe) Steud Cardamomum arumaticum (Roxb ) Kuntze 50 UnrbSrhỏnị Thto qwk Su Ahifl «te, H6 Kợ ứw»M Z«C>henKX« MmIww - Ku Owns f4 ft(*w/h-rm • Phwn Hoang Hơ (200.H Z«njpJvnx.w hự Gm'V “ Cứyco frờ ,v«w Mff IftwroHdHơracýlìfữu**v ỉ 4)2-461 N%b Tre Tp HỏChiMinh • Trin Vàn ơnímiktkợpNÍnnxMncưuchi Sa rhũi (.4mmu««l ho (iưĩự, l/ingAcracetcr, ujn tto lh« íỹ rvữn£ Dji hửc Dav Hi NỘ4 • BaAơ C A (I968X VmpbcrxoK' Hora of Jna »vl ) 41-76 lhe ScthcrlMKh • Bmh NfMyen Qiwc "xlm^uMv R*i»b " Pluil Re«rxco of South E« Asai 12 Mojrc no! Mid Pcoonmn pl*nt» 113-119 Leiden Hứ NẠ w e J rxân TRI NC TẰM TÀI SGl \ ÊN DƯỢC LIỆU 51 m PHU LUC: Anh mâu DL - 12520 (Al Hụ> thio quứ (H) Cụm hoa vâ hoa (O Ọuỉ 52