Nghiên cứu và khảo sát thành phần hóa học một số dịch chiết của hoa trúc đào đỏ (nerium oleander) tại thành phố đà nẵng

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HÓA NGUYỄN THỊ MỸ TRINH Tên đề tài: NGHIÊN CỨU VÀ KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC MỘT SỐ DỊCH CHIẾT CỦA HOA TRÚC ĐÀO ĐỎ (NERIUM OLEANDER) TẠI THÀNH PHỐ ĐÀ NẴNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN SƢ PHẠM Đà Nẵng, 05/2015 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HÓA Tên đề tài: NGHIÊN CỨU VÀ KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC MỘT SỐ DỊCH CHIẾT CỦA HOA TRÚC ĐÀO ĐỎ (NERIUM OLEANDER) TẠI THÀNH PHỐ ĐÀ NẴNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN SƢ PHẠM Sinh viên thực : Nguyễn Thị Mỹ Trinh Lớp : 11SHH Giáo viên hƣớng dẫn: TS Giang Thị Kim Liên Đà Nẵng, 05/2015 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐHSP Độc lập – Tự – Hạnh phúc KHOA HÓA NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: NGUYỄN THỊ MỸ TRINH Lớp: 11SHH Tên đề tài: NGHIÊN CỨU VÀ KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC MỘT SỐ DỊCH CHIẾT CỦA HOA TRÚC ĐÀO ĐỎ (NERIUM OLEANDER) TẠI THÀNH PHỐ ĐÀ NẴNG Nguyên liệu, dụng cụ thiết bị: - Nguyên liệu: Hoa trúc đào đỏ (Nerium oleander) thu hái thành phố Đà Nẵng - Dụng cụ thiết bị: tủ sấy, cân phân tích, dụng cụ thủy tinh, máy quang phổ hấp thụ nguyên tử AAS hiệu AAnalyst 100, máy đo sắc ký lỏng – khối phổ (LC – MS) Xevo TQ hãng Waters, Mỹ máy đo sắc ký khí – khối phổ (GC – MS) Aligent 7890A/5975C Nội dung nghiên cứu: - Xác định thơng số hóa lý hoa trúc đào đỏ - Chiết phương pháp ngâm chiết tĩnh với dung mơi có độ phân cực tăng dần n-hexan, etyl axetat methanol - Xác định thành phần dịch chiết n-hexan etyl axetat phương pháp GC – MS Xác định thành phần dịch chiết etyl axetat methanol phương pháp LC - MS - Thử nghiệm hoạt tính sinh học - Thực hành phản ứng phân tích định tính glycoside tim hoa trúc đào - Chiết tách glycoside tim có hoa trúc đào Giáo viên hướng dẫn: TS GIANG THỊ KIM LIÊN Ngày giao đề tài: 07/01/2014 Ngày hoàn thành: 08/04/2015 Chủ nhiệm khoa Giáo viên hướng dẫn (ký ghi rõ họ tên) (ký ghi rõ họ tên) Sinh viên hoàn thành nộp báo cáo cho khoa ngày 27 tháng năm 2015 Kết điểm đánh giá: Ngày … tháng … năm 2015 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG (ký ghi rõ họ tên) LỜI CẢM ƠN Trên thực tế khơng có thành cơng mà khơng gắn liền với hỗ trợ, giúp đỡ dù hay nhiều, dù trực tiếp hay gián tiếp người khác Để hồn thành đề tài này, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến giáo viên hướng dẫn khoa học cô TS.Giang Thị Kim Liên Người định hướng nghiên cứu, dẫn tận tình cho tơi thực luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn đến thầy cô giáo thuộc khoa Hóa – trường Đại học Sư phạm Đà Nẵng nhiệt tình giúp đỡ, hỗ trợ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình thực luận văn, với cán phòng cấu trúc, Viện Hóa học, Viện hóa học hợp chất thiên nhiên – Viện khoa học công nghệ Việt Nam, Viện hàn lâm khoa học công nghệ Việt Nam Qua đây, xin gởi lời cảm ơn chân thành đến gia đình, người thân bạn sinh viên khoa hóa niên khóa 2011 -2015 động viên giúp đỡ nhiều trình thực Do bước đầu tiến hành làm thử nghiệm nên khơng tránh khỏi thiếu sót Kính mong q thầy giáo bạn bè đóng góp ý kiến để luận văn hoàn chỉnh Đà Nẵng, ngày 27 tháng 04 năm 2015 Sinh viên Nguyễn Thị Mỹ Trinh MỤC LỤC MỞ ĐẦU 10 Lý chọn đề tài Đối tƣợng nghiên cứu Mục đích nghiên cứu Phƣơng pháp nghiên cứu 4.1 Nghiên cứu lý thuyết: 4.2 Phương pháp thực nghiệm Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 5.1 Ý nghĩa khoa học 5.2 Ý nghĩa thực tiễn Bố cục đề tài CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN VỀ TÀI LIỆU 1.1 Sơ lƣợc trúc đào 1.2 Khái quát trúc đào Việt Nam 1.3 Một số tác dụng trúc đào thực tế 1.3.1 Tác dụng dược lý 1.3.2 Độc tính 1.4 Tình hình nghiên cứu trúc đào giới Việt Nam 12 CHƢƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Nguyên liệu, dụng cụ hóa chất 15 2.1.1 Nguyên liệu 15 2.1.2 Xử lí nguyên liệu 15 2.1.3 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 16 2.2 Các phƣơng pháp nghiên cứu để xác định thơng số hóa lý 17 2.2.1 Xác định độ ẩm 17 2.2.2 Xác định hàm lượng tro phương pháp tro hóa mẫu 17 2.2.3 Xác định hàm lượng kim loại phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) 17 2.3 Phƣơng pháp ngâm chiết 18 2.4 Khảo sát thành phần hóa học phƣơng pháp sắc ký khí ghép khối phổ 19 2.4.1 Phương pháp sắc ký khí (GC) 19 2.4.2 Phương pháp khối phổ (MS) 19 2.4.3 Sắc ký khí ghép khối phổ (GC - MS) 20 2.5 Khảo sát thành phần hóa học phƣơng pháp sắc ký lỏng – khối phổ 20 2.5.1 Phương pháp sắc ký lỏng LC 20 2.5.2 Phương pháp sắc ký lỏng – khối phổ (LC- MS) 21 2.6 Thăm dị hoạt tính sinh học 22 2.6.1 Hoạt tính gây độc tế bào ung thư 22 2.6.2 Thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định 23 2.7 Định tính glycoside tim mạch có hoa trúc đào 24 2.7.1 Đại cương hợp chất glycoside 24 2.7.2 Tổng quan hợp chất glycoside tim 24 2.7.3 Các thuốc thử để định tính: 26 2.8 Định lƣợng glucoside tim hoa trúc đào 27 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 29 3.1 Xác định thông số hóa lý 29 3.1.1 Độ ẩm 29 3.1.2 Hàm lượng tro 30 3.1.3 Xác định hàm lượng kim loại 31 3.2 Khảo sát thành phần hóa học dịch chiết 31 3.2.1 Quy trình khảo sát thành phần hóa học hoa trúc đào đỏ 31 3.2.2 Khối lượng cặn khô 33 3.2.3 Khảo sát thành phần hóa học DC1 34 3.2.4 Khảo sát thành phần hóa học DC2 39 3.2.5 Sắc ký đồ LC-MS dịch chiết hoa trúc đào đỏ dung môi methanol 46 3.3 Kết thử hoạt tính sinh học 47 3.3.1 Kết hoạt tính gây độc tế bào ung thư 47 3.3.2 Kết hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định 48 3.4 Kết định tính glycoside tim có hoa trúc đào 49 3.4.1 Cách chiết glycoside tim để tiến h`ành phản ứng phân tích định tính 49 3.4.2 Thuốc thử tác dụng lên phần đường 50 3.5 Định lƣợng glycoside tim có hoa trúc đào 53 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT GC Sắc ký khí LC Sắc ký lỏng MS Khối phổ GC – MS Sắc ký khí ghép nối khối phổ LC – MS Sắc ký khí ghép nối khối phổ DC1 Dịch chiết lỏng hoa trúc đào dung môi n-hexan C1 Cặn sau chiết kiệt với n – hexan DC2 Dịch chiết lỏng hoa trúc đào dung môi etyl axetat C2 Cặn sau chiết kiệt với etyl axetat DC3 Dịch chiết lỏng hoa trúc đào dung môi methanol C3 Cặn sau chiết kiệt với methanol EE Hợp chất hóa học dung mơi etyl axetat EM Hợp chất hóa học dung mơi methanol KB Tế bào ung thư biểu mô Hep–G2 Tế bào ung thư gan LU Tế bào ung thư phổi MCF–7 Tế bào ung thư vú FBS Huyết phơi bị OD Giá trị mật độ quang CD4 Tế bào bạch cầu E.C Escherichia coli P.A Pseudomonas aeruginosa B.S Bacillus subtilis S.A Staphylococcus aureus C.A Candida albicans DMSO Dimetyl sunfoxit C2H6OS (CH3)2SO MIC Giá trị nồng độ ức chế tối thiểu IC50 Giá trị nồng độ ức chế 50% số tế bào thử DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Hình ảnh số giống khác hoa trúc đào Hình 1.2: Nerium oleander 11 Hình 1.3: Nerium indicum Hình 1.4: Cấu trúc số glucoside tim trúc đào 11 Hình 2.1 Hoa trúc đào đỏ (Nerium oleander) 15 Hình 2.2 Mẫu bột khơ hoa trúc đào 15 Hình 2.3 Sơ đồ thiết bị sắc ký khí ghép khối phổ 20 Hình 2.4 Sơ đồ thiết bị sắc ký lỏng ghép khối phổ 21 Hình 3.1: Quy trình khảo sát thành phần hóa học hoa trúc đào đỏ 32 Hình 3.2: Dịch chiết với n-hexan (DC1) 33 Hình 3.3: Dịch chiết với ethyl acetat (DC2) 33 Hình 3.4: Dịch chiết với methanol (DC3) 33 Hình 3.5: Sắc ký đồ GC hoa trúc đào đỏ dung môi n-hexan 35 Hình 3.6: Sắc ký đồ GC hoa trúc đào dung môi etyl axetat 40 Hình 3.7: Sắc ký đồ LC DC2 46 Hình 3.8: Sắc ký đồ LC DC3 47 Hình 3.9: Cắn thu sau bay dung môi 50 Hình 3.10: Chất thử hòa tan aceton 50 Hình 3.11: Hỗn hợp sau nhúng vào nước nóng 50 Hình 3.12: Hình ảnh xuất lớp dung dịch màu đỏ hai dung dịch 51 Hình 3.13: Hình ảnh thay đổi màu sắc sau lắc ống nghiệm phản ứng Keller- Kiliani 51 Hình 3.14: Hình ảnh xuất lớp dung dịch màu đỏ hai dung dịch 52 Hình 3.15: Hình ảnh thay đổi màu sắc phản ứng Lieberman sau lắc ống nghiệm lên 52 Hình 3.16: Hình ảnh màu thuốc thử Baljet 53 Hình 3.17: Hình ảnh màu thuốc thử Baljet ống nghiệm chứa chất thử tan ethanol 53 Hình 3.18: Cốc thủy tinh chứa glucoside thơ 54 DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1: Kết khảo sát độ ẩm hoa trúc đào đỏ 29 Bảng 3.2: Kết khảo sát hàm lượng tro hoa trúc đào đỏ 30 Bảng 3.3: Hàm lượng số kim loại có hoa trúc đào đỏ 31 Bảng 3.4: Kết khối lượng cặn khô 33 Bảng 3.5: Thành phần hóa học dịch chiết hoa trúc đào đỏ n-hexan 36 Bảng 3.6: Thành phần hóa học dịch chiết hoa trúc đào đỏ etyl axetat 41 Bảng 3.7: Kết thử hoạt tính gây độc tế bào ung thư hoa trúc đào đỏ 48 Bảng 3.8: Kết thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định 48 60 PHỤ LỤC Hình A: Phổ khối 1,6-Octadien-3-ol, 3,7-dimethylHình B: Phổ khối alpha.-Farnesene Hình C: Phổ khối Butylated Hydroxytoluene Hình D: Phổ khối 9-Tricosene, (Z)Hình E: Phổ khối Squalene Hình F: Phổ khối 2-Propenal, 3-phenylHình G: Phổ khối Benzene -1-methoxy-4-(1-propenyl) Hình H: Phổ khối gamma- sitosterol Hình I: Phổ khối β-Amyrin Hình K: Phổ khối 3-methoxy-,(3.beta.)-Olean-12-ene Phụ lục 1: Khối phổ ED1 Phụ lục 2: Khối phổ ED2 Phụ lục 3: Khối phổ ED3 Phụ lục 4: Khối phổ ED4 Phụ lục 5: Khối phổ ED5 Phụ lục 6: Khối phổ ED6 Phụ lục 7: Khối phổ ED7 Phụ lục 8: Khối phổ ED8 Phụ lục 9: Khối phổ ED9 Phụ lục 10: Khối phổ EM1 Phụ lục 11: Khối phổ EM2 Phụ lục 12: Khối phổ EM3 Phụ lục 13: Khối phổ EM4 Phụ lục 14: Khối phổ EM5 Phụ lục 15: Khối phổ EM6 Phụ lục 16: Khối phổ EM7 Phụ lục 17: Khối phổ EM8 Phụ lục 18: Khối phổ EM9 Phụ lục 19: Khối phổ EM10 Phụ lục 20: Kết thử hoạt tính kháng sinh Phụ lục 21: Kết thử hoạt tính gây độc tế bào Phụ lục 22: Kết giám định tên loài thực vật PHỤ LỤC Hình A: Phổ khối 1,6-Octadien-3-ol, 3,7-dimethyl- Hình B: Phổ khối alpha.-Farnesene Hình C: Phổ khối Butylated Hydroxytoluene Hình D: Phổ khối 9-Tricosene, (Z)- Hình E: Phổ khối Squalene Hình F: Phổ khối 2-Propenal, 3-phenyl- Hình G: Phổ khối Benzene-1-methoxy-4-(1-propenyl) Hình H: Phổ khối gamma- sitosterol Hình I: Phổ khối β-Amyrin Hình K: Phổ khối 3-methoxy-,(3.beta.)-Olean-12-ene Phụ lục 1: Khối phổ ED1 Phụ lục 2: Khối phổ ED2 Phụ lục 3: Khối phổ ED3 Phụ lục 4: Khối phổ ED4 Phụ lục 5: Khối phổ ED5 Phụ lục 6: Khối phổ ED6 Phụ lục 7: Khối phổ ED7 Phụ lục 8: Khối phổ ED8 Phụ lục 9: Khối phổ ED9 Phụ lục 10: Khối phổ EM1 Phụ lục 11: Khối phổ EM2 Phụ lục 12: Khối phổ EM3 Phụ lục 13: Khối phổ EM4 Phụ lục 14: Khối phổ EM5 Phụ lục 15: Khối phổ EM6 Phụ lục 16: Khối phổ EM7 Phụ lục 17: Khối phổ EM8 Phụ lục 18: Khối phổ EM9 Phụ lục 19: Khối phổ EM10 Phụ lục 20: Kết thử hoạt tính kháng sinh Phụ lục 21: Kết thử hoạt tính gây độc tế bào Phụ lục 22: Kết giám định tên loài thực vật ...ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HÓA Tên đề tài: NGHIÊN CỨU VÀ KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC MỘT SỐ DỊCH CHIẾT CỦA HOA TRÚC ĐÀO ĐỎ (NERIUM OLEANDER) TẠI THÀNH PHỐ ĐÀ NẴNG KHÓA... NGHIÊN CỨU VÀ KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC MỘT SỐ DỊCH CHIẾT CỦA HOA TRÚC ĐÀO ĐỎ (NERIUM OLEANDER) TẠI THÀNH PHỐ ĐÀ NẴNG Nguyên liệu, dụng cụ thiết bị: - Nguyên liệu: Hoa trúc đào đỏ (Nerium oleander). .. lồi hoa trúc đào để xem hoa có chứa chất có độc có khả chữa bệnh khơng nên tơi chọn đề tài ? ?Nghiên cứu khảo sát thành phần hóa học số dịch chiết hoa trúc đào đỏ (Nerium oleander) thành phố Đà Nẵng? ??