BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRÀN HUYỀN TRANG CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ DƯỢC LIỆU CHÈ VẲNG uas minum subtrỉplỉnerve Blume) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC sĩ HÀ NỘI 2022 BỘ YTÉ TRƯỜNG ĐẠI[.]
BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRÀN HUYỀN TRANG CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ DƯỢC LIỆU CHÈ VẲNG uas minum subtrỉplỉnerve Blume) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC sĩ HÀ NỘI - 2022 BỘ YTÉ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRÀN HUYỀN TRANG 1701616 CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẮT TỪ DƯỢC LIỆU CHÈ VẰNG (Jasminum subtriplỉnerve Blume) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC sĩ Người hướng dẫn: TS Hà Vân Oanh ThS Hoàng Thị Diệu Hưong Nơi thực hiện: Bộ mơn Dưực học cổ truyền Khoa Hóa Phân tích - Tiêu chuẩn - Viện Dưọc liệu • • • HÀ NỘI - 2022 LỜI CẢM ƠN Trong trình nghiên cứu thực khóa luận Khoa Hóa Phân tích - Tiêu chuẩn - Viện Dược liệu Bộ môn Dược học cổ truyền - Trường Đại học Dược Hà Nội, em nhận nhiều quan tâm, hỗ trợ giúp đỡ quý báu từ Thầy Cơ, gia đình bạn bè Lời đầu tiên, tất lòng chân thành, em xin bày tỏ biết ơn sâu sắc tới: TS Hà Vân Oanh, người nhà giáo đáng kính, người dẫn dắt định hướng em đến với nghiên cứu khoa học, cô tạo điều kiện, quan tâm hỗ trợ em nhiều suốt q trình thực khóa luận ThS Hồng Thị Diệu Hương, người ln tận tình hướng dẫn, quan tâm, bảo, truyền động lực cho em suốt trình thực đề tài Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới PGS TS Đỗ Thị Hà, ThS Nguyễn Thị Thu, ThS Vũ Thị Diệp, Dược sĩ Nguyễn Trà My nhà khoa học Khoa Hóa Phân tích - Tiêu chuẩn - Viện Dược liệu tạo điều kiện sở vật chất nhiệt tình giúp đỡ em mặt từ ngày đầu thực khóa luận hoàn thành Những tháng ngày nghiên cứu Viện Dược liệu giúp em trưởng thành hoàn thiện thân kiến thức lẫn kỹ sống Em xin cảm ơn đề tài "Nghiên cứu phân lập phát triển phương pháp định lượng chất đánh dấu HPLC dược liệu chè vằng (Jasminum subtrỉplỉnerve Blume)" - Đề tài nghiên cứu cấp sở Viện Dược liệu, Bộ Y tế tạo điều kiện hồ trợ kinh phí để em thực đề tài Em xin gửi biết ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè ln sát cánh, động viên, giúp đờ đề em hồn thành đề tài khóa luận Cuối cùng, em xin trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu toàn thể Thầy Cô giáo, cán Trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện dạy dỗ em suốt khoảng thời gian học tập trường Em xin kính chúc Thầy Cơ ln mạnh khỏe công tác tốt Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 20 thảng 06 năm 2022 Sinh viên Trần Huyền Trang MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ĐẶT VẤN ĐÈ CHƯƠNG I: TỐNG QUAN .2 1.1 Tổng quan chi Jasminum 1.1.1 Vị trí, phân loại .2 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Sinh thái phân bố 1.1.4 Thành phần hóa học .3 1.1.5 Tác dụng sinh học 1.1.6 Công dụng 1.2 Tổng quan Chè vằng 1.2.1 Đặc điểm thực vật phân bố 1.2.2 Thành phần hóa học 10 1.2.3 Tác dụng sinh học 11 CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 13 2.1 Đối tượng nghiên cứu 13 2.2 Hóa chất, dung mơi 13 2.3 Máy móc, trang thiết bị nghiên cứu 14 2.4 Nội dung nghiên cứu 14 2.5 Phương pháp nghiên cún 14 2.5.1 Phương pháp định tính nhóm chất thường gặp mẫu dược liệu 14 2.5.2 Phương pháp chiết xuất 17 2.5.3 Phương pháp phân lập họp chất 18 2.5.4 Phương pháp xác định cắn trúc hợp chất 20 CHƯƠNG III: THỤC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 21 3.1 Kết định tính nhóm chất hữu thường gặp có dược liệu 21 3.2 Kết chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc hợp chất 21 3.2.1 Kết chiết xuất phân lập 21 3.2.2 Xác định câu trúc hợp clỉât phân lập 25 3.3 Bàn luận 29 3.3.1 Vê kêt định tính 29 3.3.2 kết chiết xuất 29 3.3.3 kêt phân lập họp chất 30 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 33 Kết luận 33 Kiến nghị 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO 34 PHỤ LỤC 43 DANH MỤC CÁC KỶ HIỆU, CHỮ VIẾT TẲT STT 13C-NMR Tiếng Việt Tiếng Anh Ký hiệu, chữ viết tắt Carbon 13 Nuclear Phổ cộng hưởng từ hạt Magnetic Resonance nhân cacbon 13 Spectroscopy ‘H-NMR Proton Nuclear Magnetic Phố cộng hưởng từ hạt Resonance Spectroscopy nhân proton br s Broad singlet brd Broad doublet d Doublet dd Doublet of doublets m Multiplet J Hằng số tương tác (đơn vị Hz) Độ dịch chuyển hóa học ỗ (đơn vị ppm) Cơng thức cấu tạo 10 CTCT 11 DCM Dicloromethan 12 DEPT Distortionless Phố DEPT Enhancement by Polarization Transfer 13 DL Dược liệu 14 DM Dung môi 15 DPPH 2,2-Diphenyl-l- picrylhydrazyl 16 ESI-MS Electronspray Ionization Phố khối ion hóa phun mù Mass Spectrum điện tử 17 EtOH Ethanol 18 EtOAc Ethyl acetat 19 IC50 Inhibitory Concentration at Nồng độ ức chế 50% 50% 20 GAE Gallic acid equivalent Đương lượng acid gallic chuẩn 21 HMBC Heteronuclear Multiple Phố tương tác dị hạt nhân Bond Correlation 22 MeOH Methanol 23 MIC Minimum Inhibitory qua nhiều liên kết Nồng độ ức chế tối thiểu Concentration Khối lượng/điện tích 24 m/z 25 PCA Acid protocatechuic 26 QE Quercetin equivalent Đương lượng quercetin chuẩn 27 SKLM Sắc ký lớp mỏng 28 SKC Sắc ký cột 29 STT Số thứ tự 30 SC50 31 TLC Scavenging Concentration Nồng độ trung hòa at 50% 50% gốc tự DPPH Thin Layer Sắc ký lớp mỏng Chromatography 32 TLTK Tài liệu tham khảo 33 TT Thuốc thử 34 v/v Thể tích/thể tích 35 v/v/v Thể tích/thể tích/thế tích DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số hợp chắt iridoid glycosid phân lập từ Jasminum .3 Bảng 1.2 Một sơ hợp chất nhóm flavonoid có chi Jasminum Bảng 1.3 Một so hợp chat phenol có chi Jasminum Bảng 1.4 Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm chi Jasminum Bảng 1.5 Một sỏ họp chât phân lập từ Chề văng .10 Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chắt thường gặp Chè vằng 21 Bảng 3.2 Dữ liệu phố hợp chất JS1 acid protocatechuic 26 Bảng 3.3 Dữ liệu phố JS2 verbascosid 27 DANH MỤC CÁC HÌNH VÊ Hình 1.1 Cấu trúc hóa học số hợp chất nhóm sesquiterpenoỉd có Jasminum Hĩnh 1.2 Cấu trúc hóa học số hợp chất nhóm phenylethanoỉd glycosỉd có Jasininum .6 Hĩnh 1.3 Câu trúc hóa học sơ họp chât có tinh dâu loài thuộc chi Jasminum .6 Hình 2.1 Thân Chề vãng 13 Hình 3.1 Sơ đồ chiết xuất phân đoạn từ thân Chèvẳng 23 Hình 3.2 Sắc kỷ đồ hợp chất phân lập 24 Hình 3.3 Sơ quy trình phân lập hai hợp chat JS1 JS2 25 Hình 3.4 Cấu trúc hóa học họp chat JS1 26 Hình 3.5 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC chỉnh (^>)của hợp chất JS2 29 ĐẶT VẤN ĐÈ Với lợi điều kiện tự nhiên khí hậu, Việt Nam có nguồn tài ngun thực vật phong phú đa dạng, bao gồm nhiều loại dùng làm thuốc chừa bệnh cho người Theo cuồn "Danh lục thuốc Việt Nam", tính đến cuối năm 2015, tổng số lồi thuốc biết Việt Nam đạt tới số 5117 loài loài, thuộc 1823 chi, 360 họ ngành thực vật bậc cao có mạch, với so taxon thuộc nhóm Rêu, Tảo Nấm lớn [12] Tuy vậy, loài làm thuốc sử dụng chủ yếu theo kinh nghiệm dân gian theo y học cổ truyền mà chưa nghiên cứu cách đầy đủ Hiện nay, xu hướng sử dụng dược phẩm có nguồn gốc tự nhiên ngày tăng, điều cho thấy việc nghiên cứu phát triển sản phẩm thuốc từ dược liệu hướng day hứa hẹn ngành y dược Việt Nam Chè vằng có tên khoa học Jasminum subtrỉplinerve Blume, họ Nhài (Oleaceae) thuốc quen thuộc với người dân Việt Nam Chè vằng sử dụng từ lâu dân gian với tác dụng bật chống nhiễm trùng, lợi sữa phụ nữ sau sinh, trị mụn nhọt, man ngứa, Ớ số địa phương, nhân dân dùng nước nấu từ Chè vằng để uống ngày thay cho trà xanh Tuy nhiên, sử dụng rộng rãi tới nay, số lượng nghiên cứu nước thành phần hóa học hoạt tính sinh học cúa Chè vằng cịn hạn chế Do đó, đề góp phần bổ sung vào sở liệu thành phần hóa học Chè vằng, đề tài "Chiết xuất, phân lập số họp chất từ dưọc liệu chè vằng (Jasminum subtriplinerve Blume)" thực với mục tiêu: Định tính nhóm chất thường gặp có thân Chè vằng phản ứng hóa học đặc trung Chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc 1-2 hợp chất từ thân Chè văng JS2-MeOD-C13CPD I • 85 ip »p HưiOLn^r-(Nn CMOCOcnoiO'Dv 00 cn m co r- o m xp ơx m cn -4 00 xp *r XP 00 xpxpcnợ DSWH-ơơ©w-jsr o re in re o in H o ă Phụ lục 4.3 Phổ HMBC hợp chất JS2 JS2-MeOD-C13CPD &DEPT DEPT90 I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I .I 210 200 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm DEPT135 "I I I J I J I I J I J [ I 'T'”-'-'-’?'’ ị I ! J 210 200 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm JS2-MeOD-C13CPD &DEPT DEPT90 DEPT135 CH2 150 C13CPD 145 140 135 130 125 120 115 110 105 ppm JS2-MeOD-C13CPD &DEPT DEPT90 -r—y - „ - -y—. - -y—1 - - 80 75 70 65 I - - —y—- -r— y— - - r—y _ -1 - -, - - y—, - - - 60 55 50 45 40 35 I I - -y— - y—, - —V—y- —, - -y 30 25 20 ppm DEPT135 1—■—•—•—•—I—1—'—•—•—I—■—'—’—•—I—■—'—'—■—I—'—'—'—■—F"■■—'—■—■—I—'—•—'—'—r~'•—•—'—•—F“’•—■—'—'—I—'—■—'—'—F“■•—■—'—•—r~’—■—'—•—I—•—1—'—'—I ”1—'—'—■—'—I—'—’—'—'—I—'—■—'—'—I—'—'—'—■—I—’—'—’—'—■—'—■—■—'—I—'—'—'—'—I—■—'—■—'—I—'—'—'—1—I—’—'—’—'—I—’—'—'—■—I—'—'—'—'—■—'—'—'—'—1 80 75 70 65 60 55 50 45 40 Phụ lục 4.4 Pho DEPT hop chat JS2 35 30 25 20 ppm Print of window 80: MS Spectrum MS Spectrum CM CO a Ma::: 49136 100- 80- 60- 40- ự) CD 20- 4500 LCMS SQ 6/11/2022 5:07:05 PM SYSTEM Iflll 550 6C0 650 I 700 750 m/j Page of Print of window 80: MS Spectrum MS Spectrum CXỊ r- 100- Max: 3805 80- 60- 40- 20- ỉ CN i Q g § 580 _560 LCMS SQ 6/11/2022 5:06:48 PM SYSTEM 600 620 640 660 680 700 720 740 m/ỉ Page Phụ lục 4.5 Phô ESI-MI cúa hợp chât JS2 of PHỤ LỤC 5: PHIẾU KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH MẪU CHÈ VẰNG BỘ Y TÊ VIF.N DƯỢC LIỆU CỘNG HOÀ XẢ HỘI CHỦ NGIIỈA VIỆT NAM Dộc lập - Tự - Hạnh phúc PHIẾU KÉT QUẢ GIÁM DỊNỊ1 MẢU (Kẻt i/ua giâm định chi có giá trị vởi mau đem thư) SỐ: Mầu giám định' Chè vằng số lượng mẫu: 01 màu cảnh mang thân, hoa quà (Mầu lưu Phòng Tiều bân Trung tàm Tài nguyên Dược liệu - Viện Dược liệu với số hiệu: DL-040222) Ngày lấy mẫu: 04/02/2022 Nơi lấy: Xả Hương Son huyện Mỹ Đức Tp Hà Nội Nội dung yêu cầu: Xác định tên khoa hục Người u cầu: Hồng Thị Diệu Hương Dơn vị cơng tác: Khoa Hóa Phân tích - Ticu chuẩn Viện Dược liệu Phương pháp giâm định: So sánh hĩnh thái, dồi chiếu khóa phàn loại VI Cán hộ giám dịnh: ThS Nguyen Vân Hiếu KS Lè rhị ú Linh Sau phân tích mầu có số hiệu DL-040222 kể trên, tham khao tài liệu^^ỊL có kết hợp đối chiếu với tiêu ban cùa loài Jasminum suhtriplinerve Blutnc lưu giừ Phòng Tiêu ban cùa Trung tàm Tài nguyên Dược liệu, Viện Dược liệu (có số hiệu TB-0000856; TB-000NN: TB-0005899: TB-0009678 7/70009891) dã xác dịnh dược tên khoa học cứa mầu, cụ thề sau: Yêu cầu Ten khoa học: Kct quã Jasmin um suhtrìpHnerve Blume Jasminum nervosum Lour hemsleyi Yamam Tên dồng nghía (Synonyms): J lindleyanum Blume J trinerve Roxb J trineuron Kobuski Tên phố thông: Chè văng Nhài gân vảng Nhài mạng Nhài tam kinh Lài gian lọ thực vật: Olcaccac Hoffmanns & Link - Họ Nhải Tài liệu tham khào • Phạm Hoàng Hộ (2003), Cây cỏ Việt Nam (An illustrated Flora of I 'ietnamỉ 2: 891-898 Nxb Trẻ, Tp Hồ Chí Minh • Trần Đinh Lý Nguyền Tiến Bân (chủ biên) (2003), Danh lục loài thực vật Việt Nam (Checklist of Plant Species of Vietnam) 2: 1162-1166 Nxb Nơng Nghiệp Hà Nội • ĐỖ l ất Lợi (1995) Những thuốc vị íhuổc Việt Nam 655-656 Nxb Khoa học & Kỳ thuật Hà Nội • Backer, c A & Bakhuizcn R c van den Brink (1965), Jasminum Flora of Java 2: 216-217 NoordhotY, Groningen Netherlands • Green., p s in Smitinand T Larsen K (2000), Oleaceae, Flora of Thailand Vol 7(2): 306-340 Bangkok _ Hà Nội ngàyùS thảng ỉ năm 2022 TRƯNG TÂM TÀI NGUYEN Dược LIỆU Phạm Thanh Huyên ’ươc L í «ŨÍIYẺN ĩến Hùin PHỤ LỤC: Anh mầu DL - 040222 Cánh mang hoa va Phần thân mang cụm hoa hoa Phần thân mang cum quà vá Chi tiết \a phần cùa hoa