BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRƯƠNG THỊ HƯƠNG BƯỚC ĐÀU NGHIÊN CỨU THÀNH PHÀN HÓA HỌC PHÂN ĐOẠN W HEXAN TỪ LÁ CÂY KHẾ (Averrhoa carambola L ) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ HÀ NỘI 2022 BỘ YTẾ TRƯỜNG[.]
BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRƯƠNG THỊ HƯƠNG BƯỚC ĐÀU NGHIÊN CỨU THÀNH PHÀN HÓA HỌC PHÂN ĐOẠN W-HEXAN TỪ LÁ CÂY KHẾ (Averrhoa carambola L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ HÀ NỘI - 2022 BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRƯƠNG THỊ HƯƠNG 1701252 BƯỚC ĐÀU NGHIÊN CỨU THÀNH PHÀN HÓA HỌC PHÂN ĐOẠN n-HEXAN TỪ LÁ CÂY KHẾ (Averrhoa carambola L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ Người hướng dẫn: TS Bùi Thị Thúy Luyện Nơi thực hiện: Bộ môn Công nghiệp dược HÃ NỘI - 2022 LỜI CẢM ƠN Trong suốt q trình nghiên cứu hồn thành khóa luận tốt nghiệp môn Công Nghiệp Dược, em nhận bảo tận tình giúp đỡ thầy bạn bè, gia đình Với lịng biết ơn sâu sắc, em xin chân thành cảm ơn TS Bùi Thị Thúy Luyện người hướng dẫn trực tiếp em suốt q trình thực đề tài Cơ truyền đạt nhiều kiến thức, kinh nghiệm quan tâm, giúp đỡ, tận tình hướng dẫn tạo điều kiện để em hồn thành khóa luận Em xỉn chân thành cảm ơn Ban Giảm hiệu thầy cô môn Công Nghiệp Dược tạo điều kiện sở vật chất nhiệt tình giúp đỡ em trình nghiên cứu Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn đến gia đình, bạn bè động viên, quan tâm, đồng hành ủng hộ suốt q trình hồn thành khóa luận suốt quãng thời gian học tập Do thời gian thực khóa luận kiên thức thăn có hạn hẹp, khóa luận cịn nhiều thiếu sót, em mong nhận góp ý Thầy để khóa luận hồn thiện Xỉn chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng năm 2022 Sinh Viên Trương Thị Hương MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC BẢNG VÀ sơ ĐỒ DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VÁN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỐNG QUAN 1.1 Giới thiệu khế (Averrhoa carambola L.) 1.1.1 Vị trí phân loại [4] 1.1.2 Đặc điểm thực vật [2] 1.1.3 Phân bố [4] 1.1.4 Bộ phận dùng, tính vị, cơng [4] 1.1.5 Công dụng liều dùng [41 1.1.6 Một số thuốc có khế: 1.2 Các nghiên cứu khế: 1.2.1 Các nghiên cứu thành phần hóa học khế 1.2.2 Các nghiên cứu tác dụng sinh họccủa khế: 12 CHƯƠNG 2: ĐÔI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN củư 16 2.1 Đối tượng nghiên díu: 16 2.2 Nguyên liệu 16 2.2.7 Hóa chất 16 2.2.2 Trang thiết bị nghiên cứu 17 2.3 Nội dung nghiên cứu: 17 2.4 Phương pháp nghiên cún 17 2.4.1 Định tính nhóm chất thường gặp phân đoạn n-hexan mẫu dược liệu 17 2.4.2 Phương pháp chiết xuất 17 CHƯƠNG 3: THỤC NGHIỆM, KÉT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 20 3.1 Chiết xuất dịch chiết ethanol toàn phần dịch chiết phân đoạn 20 3.2 Định tính thành phần dịch chiết n - hexan mẫu dưọc liệu 21 3.2.1 Định tính chất béo: 21 3.2.2 Định tính phytosterol 21 3.3 Phân lập họp chất từ phân đoạn n-hexan khế 21 3.3.1 Sắc ký cột phân đoạn H7 .22 3.3.2 Sắc ký cột phân đoạn AC2-3 22 3.3.3 Sắc ký cột phân đoạn AC4 22 3.4 Dữ liệu phố xác định cấu trúc họp chất phân lập đưọc 24 3.4.1 Hợp chất NH02 24 3.4.2 Hợp chất NH04 27 CHƯƠNG 4: BÃN LUẬN 33 4.1 kết định tính họp chất hữu có phân đoạn n-hexan dược liệu 33 4.2 kết phân lập chất 33 4.2.1 họp chất NH02 (1 - o - linolenoyl - - o - linoleoyl - - o - p D - galactopyranosyl - rac - glycerol) 33 4.2.2 hợp chất NH04 (6" - o - (icosa - 9",12"- dienoyl) - p - D - glucosyl - p - sitosterol) 34 KÉT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO 38 DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT Kí hiệu viết tắt Thứ tụ ‘H-NMR Giải nghĩa Proton Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton) 13C-NMR Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon 13) CH2C12 Dichloromethan DG-75 u lympho tế bào B DPPH 2,2-Diphenyl-l-picrylhydrazyl DU-145 Tế bào ung thư tuyến tiền liệt EtOAc Ethyl acetat EtOH Ethanol HDL-C High Density Lipoprotein Cholesterol 10 HepG2 Te bào ung thư gan người 11 HMG - CoA Hydroxymethylglutaryl coenzyme A IC50 Half - maximal inhibitory concentration 12 (Nồng độ ức chế 50%) 13 J Hệ số tương tác (đon vị Hz) 14 Jurkat Tế bào bạch cầu lympho T 15 K562, HL-60 Tế bào ung thư máu người 16 LPS Lypopolysaccharid 17 SKLM Sắc ký lớp mỏng 18 STT Số thứ tự 19 STZ Kháng sinh streptozocin 20 TG Triglyceride 21 TT Thuốc thử 22 Độ chuyến dịch hóa học (đơn vị ppm) DANH MỤC CÁC BẢNG VÀ so ĐÒ Bảng 1.1: Một số hợp chất phân lập từ khế Bảng 2.1: Tên hóa chất nguồn gốc 16 Bảng 3.1: Dữ liệu phổ hợp chất NH02 hợp chất TK [16] 26 Bảng 3.2: Dữ liệu phổ hợp chất NH04 hợp chất TK [32] 31 Sơ đồ 2.1: Quy trình thực nghiệm chiết xuất dịch chiết phân đoạn chiết khế 20 Sơ đồ 2.2: Quy trình thực nghiệm phân lập họp chất từ phân đoạn n - hexan .23 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1: Hình ảnh khế 16 Hình 3.1: sắc kí đồ phân đoạn AC2 - 6, hệ dung môi Ăĩ-hexan: aceton (2:1, v/v) 22 Hình 3.2: sắc ký đồ hợp chất NH04, hệ dung môi dichloromethan: ethyl acetat: methanol (2:1:0.1, v/v/v) 23 Hình 3.3: sắc ký đồ họp chất NH02, hệ dung môi 77-hexan: ethyl acetat: MeOH (1: l:0.1,v/v/v) 23 Hình 3.4: Phổ ESI-MS hợp chất NH02 24 Hình 3.5: Phổ ‘H-NMR hợp chất NH02 24 Hình 3.6: Phổ 13C-NMR họp chất NH02 25 Hình 3.7: Công thức cấu tạo họp chất NH02 26 Hình 3.8: Phổ ’H-NMR hợp chất NH04 .28 Hình 3.9: Phổ 13c - NMR hợp chất NH04 28 Hình 3.10: Phổ HSQC hợp chất NH04 29 Hình 3.11: Phổ HMBC hợp chất NH04 30 Hình 3.12: Cơng thức cấu tạo họp chất NH04 30 ĐẶT VẤN ĐÈ Ở nước ta, điều kiện thiên nhiên ưu đãi cho hệ sinh thái phong phú, đa dạng có tiềm to lớn tài nguyên thuốc Thực vật dùng làm thuốc lĩnh vực chăm sóc sức khỏe cộng đồng sử dụng từ xa xưa theo đơn thuốc y học cổ truyền giá trị sử dụng ngày Tuy nhiên, có nhiều thuốc chưa nghiên cứu nghiên cứu chưa có hệ thống Cùng với phát triển tống hợp hóa dược, việc nghiên cứu phát triển thuốc có nguồn gốc từ dược liệu góp phần nâng cao tính an tồn hiệu điều trị Cây khế tên khoa học Averrhoa carambola L Vào kỷ thứ 12 Averhoes thầy thuốc kiêm triết gia Á rập phát khế dược liệu quý nên khế mang tên ông Cây khế (Averrhoa carambola L.) thuộc họ Chua me đất (Oxalidacea) loại thích nghi với vùng khí hậu nóng âm vùng nhiệt đới cận nhiệt đới, trồng chủ yếu Ân Độ Đông Nam Á Ở Việt Nam, thuộc họ có lồi Averrhoa carambola L Averrhoa bilimbỉ L phân bố vùng miền đặc biệt vùng nông thôn Khồng loại ăn mà khế biết có giá trị dược liệu cao Trong dân gian, loại thường sử dụng thuốc dân gian chữa bệnh như: mề đay, mẫn ngứa, mụn nhọt, cảm nắng [2], [3] Tống quan nghiên cứu cho thấy khế có chứa nhóm chất như: flavonoid [5], phenolic [30], sterol [4] với tác dụng dược lý cao chiết hợp chất tinh khiết đà công bố hạ đường huyết [5], chống viêm [4], hạ huyết áp [27], chống tăng lipid máu [6], chống oxy hóa [13], chống nấm Candida albicans [15] Tuy nhiên nghiên cứu nước thành phần hóa học tác dụng sinh học lồi cịn hạn chế Vì nhằm mục đích chuẩn hóa nguồn dược liệu góp phần xây dựng dừ liệu thành phần hóa học, qua giúp định hướng cho nghiên cứu tác dụng dược lý, đề tài “Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học phân đoạn w-hexan từ khế (Averrhoa carambola L.)” thực với mục tiêu: Chiết xuất, phân lập số hợp chất từ phân đoạn n-hexan từ khế (Avenhoa carambola L.) Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập 1.1 1.1.1 CHƯƠNG 1: TƠNG QUAN Giói thiệu khế (Averrhoa carambola L.) Vị trí phân loại [4] Ngành: Ngọc Lan (Magnoliophyta) Lóp: Ngọc Lan (Magnoliopsida) Phân lớp: Hoa hồng (Rosida) Bộ: Chua me đất (Oxalidales) Họ : Chua me đất (Oxalidaceae) Chi: Averrhoa Loài: A carambola L 1.1.2 Đặc điễm thực vật [2] Khế gỗ cao 4-6 m Lá mọc so le, kép lơng chim, dìa lẻ, dài 11-17cm, chét gồm 3-5 đơi, ngun, mềm, hình trứng nhọn, chét phía lớn đạt tới 8.5cm chiều dài, 3.5cm chiều rộng Hoa mọc thành chùm xim dài 3-7 cm, kẽ lá, màu hồng hay tím nhạt nhị hữu thụ xem kẽ với nhị thối hóa Lá nỗn hợp thành bầu thuợng ơ, chứa nỗn Quả mọng có cạnh, vị chua 1.1.3 Phân bố [4] Cây khế có nguồn gốc từ vùng nhiệt đới châu Mỹ (Brazin) hay vùng Ân Độ - Malaysia, trồng phố biến khắp vùng nhiệt đới cận nhiệt đới Ở Việt Nam, khế quen thuộc lâu đời khắp địa phương từ đồng đến vùng núi thấp 1000m Khế loại thích nghi với vùng khí hậu nóng ẩm vùng nhiệt đới cận nhiệt đới Cây sinh trưởng tốt nhiệt độ trung bình năm từ 20 độ đến 33 độ Cây trồng tỉnh phía bắc, mùa đơng chịu nhiệt độ 10 độ Cây tái sinh chủ yếu hạt chồi gốc sau bị chặt 1.1.4 Bộ phận dùng, tính vị, cơng [4] a) Bộ phận dùng: Lá vỏ thu hái quanh năm Lá dùng tươi, vỏ vàng Hoa thu hái vào mùa hạ, thu dùng tươi b) Tính vị, cơng năng: Lá khế vị chua chát, tính bình có tác dụng nhiệt, mát huyết, tiêu viêm, lợi tiểu Hoa khế vị chua, chát, ngọt, tính bình, có tác dụng bổ thận sinh tinh, nhuận phế, trừ ho, khải E 0Z-Z9-\ 93-39^ - K? NH02 —CDC13— C13CPD CM CM 68*fr2 - fr9*92^_ £9*92-^ ỊP CM SP CM 22*L2 - CM 90*62ạ CO CM IT*62-A frl’62