Tiểu luận môn kiểm nghiệm các sản phẩm công nghệ sinh học đề tài kiểm nghiệm các sản phẩm nuôi trồng thủy, hải sản

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP HCM BỘ CÔNG THƯƠNG KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO TIỂU LUẬN MÔN: KIỂM NGHIỆM CÁC SẢN PHẨM CÔNG NGHỆ SINH HỌC ĐỀ TÀI: KIỂM NGHIỆM CÁC SẢN PHẨM NUÔI TRỒNG THỦY, HẢI SẢN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, THÁNG 08 NĂM 2021 MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH DANH MỤC BẢNG LỜI MỞ ĐẦU PHẦN 1: GIỚI THIỆU TỔNG QUAN .5 Các sản phẩm nuôi trồng thủy, hải sản .5 Mục đích kiểm nghiệm sản phẩm nuôi trồng thủy, hải sản Một số trang thiết bị kiểm nghiệm sản phẩm nuôi trồng thủy, hải sản .6 PHẦN 2: KIỂM NGHIỆM THỨC ĂN HỖN HỢP TRONG NUÔI TRỒNG THỦY, HẢI SẢN Các tiêu chí đánh giá Quy trình kiểm nghiệm .7 2.1 Chuẩn bị điều kiện kiểm nghiệm 2.2 Phương pháp nguyên tắc kiểm nghiệm 2.3 Cách lấy mẫu kiểm nghiệm 10 2.4 Quy trình kiểm nghiệm 11 Tiêu chuẩn kỹ thuật 20 3.1 Trạng thái cảm quan 20 3.2 Chỉ tiêu hóa lý 20 3.3 Chỉ tiêu vi sinh 20 Bao gói, ghi nhãn, bảo quản vận chuyển 20 PHẦN 3: KẾT LUẬN 21 TÀI LIỆU THAM KHẢO .23 DANH MỤC HÌNH Hình.1 Máy sắc ký lỏng HPLC cao áp Hình.2 Hệ thống sắc ký lỏng HPLC hiệu cao .8 Hình.3 Máy quang phổ hấp thụ nguyên tử ASS Hình.4 Sơ đồ máy quang phổ hấp thụ nguyên tử ASS Hình.5 Nồi hấp tiệt trùng 10 Hình.6 Máy sấy 10 DANH MỤC BẢNG Bảng Diễn giải kết phép thử khẳng định 20 Bảng Đánh giá cảm quan 21 Bảng Chỉ tiêu hóa lý .21 Bảng Chỉ tiêu vi sinh 21 LỜI MỞ ĐẦU Trên thị trường ngày có nhiều sản phẩm dành cho ngành nuôi trồng thủy, hải sản với nhiều loại, mẫu mã đa dạng khác khiến người tiêu dùng khó nắm bắt chất lượng sản phẩm Kèm theo có nhiều vụ ngộ độc thức ăn diễn khiến cho thủy, hải sản chết hàng loạt đe dọa nghiêm trọng đến kinh tế người nơng dân nói riêng GDP đất nước nói chung Dó cần phải kiểm tra sản phẩm nuôi trồng thủy, hải sản nhằm giúp người ni nắm bắt rõ thơng tin chi tiết thành phần có sản phẩm an tâm việc chọn lựa sản phẩm phù hợp, đạt tiêu chuẩn để tin dùng Bởi sản phẩm ni trồng thủy, hải sản nói chung đặc biệt thức ăn thủy sản nói riêng làm ảnh hưởng tới chất lượng sản phẩm thủy sản, đồng thời chiếm 65-80% chi phí ni trồng nên thức ăn thủy sản trở thành mối quan tâm hàng đầu sở nuôi trồng Tuy nhiên, thực tế, nhiều sản phẩm thức ăn thủy sản không đạt tiêu chất lượng, gây nhiều khó khăn cho hoat động ni trồng Điều dẫn đến người nuôi cẩn trọng việc lựa chọn thức ăn thủy sản, quan chức siết chặt khâu quản lý chất lượng sản phẩm Khơng vậy, việc kiểm nghiệm cịn giúp nhà sản xuất khẳng định chất lượng sản phẩm có điểm trội khắc phục nhược điểm lỡ sản phẩm bị lỗi Đó khâu thiếu trước nhà sản xuất muốn tiến hành công bố thị trường Vì vậy, việc kiểm nghiệm chất lượng sản phẩm đời để giải lo ngại cho người tiêu dùng, giúp nhà sản xuất khẳng định đặc điểm bật sản phẩm Kiểm nghiệm nói chung phương pháp để xác định thành phần, giá trị chất lượng sản phẩm kiểm nghiệm thủy hải sản nói riêng khâu quan trọng, tiêu chuẩn đầu mà sở, doanh nghiệp kinh doanh thủy hải sản cần thực để cấp phép hoạt động kinh doanh theo quy định pháp luật Trên sở kết kiểm nghiệm, quan chức đánh giá quản lý chất lượng sản phẩm thủy, hải sản Bởi biết, thức thủy sản có nhiều hợp chất có khả sinh độc chúng sinh từ trình bảo quản không đảm bảo hạn sử dụng Đặc biệt độc tố nấm thức ăn nuôi trồng thủy sản khó phát hiện, mức độc tố tìm thấy thức ăn có ảnh hưởng tiêu cực đến hiệu suất tăng trưởng sử dụng thức ăn, làm cho động vật thủy sản dễ bị nhiễm bệnh Do đó, cần tìm giải pháp để kiểm tra độc tố thức ăn thủy sản có nguồn gốc từ thực vật độc tố chứa thức ăn thành phẩm để tạo điều kiện tốt cho thủy sản phát triến Hơn nữa, thu hoạch chế biến thủy sản thành sản phẩm đến tay người tiêu dùng đảm bảo chất lượng, tính an tồn vệ sinh tốt Vậy kiểm nghiệm sản phẩm từ thủy sản cần kiểm tra tiêu gì? Cần lưu ý kiểm nghiệm? Giới hạn tối đa ô nhiễm sinh học hóa học sản phẩm bao nhiêu? Để trả lời câu hỏi sau tìm hiểu thơng qua báo cáo “Kiểm nghiệm sản phẩm nuôi trồng thủy, hải sản” nhóm chúng em PHẦN 1: GIỚI THIỆU TỔNG QUAN Các sản phẩm nuôi trồng thủy, hải sản Thủy hải sản: tên gọi chung sinh vật, sản vật đem lại nguồn lợi cho người từ môi trường nước người khai thác, nuôi trồng thu hoạch để sử dụng làm thực phẩm, nguyên liệu bày bán thị trường Các loài thủy hải sản phổ biến: cá, giáp xác (tôm, cua), thân mềm (bạch tuột, mực, sò, nghêu, ốc, hến, trai, hàu,…), bò sát, lưỡng cư, rong, vi tảo Nuôi trồng thủy sản hoạt động người dùng để tất hình thức nuôi trồng động thực vật thủy sinh môi trường nước ngọt, lợ, mặn Các sản phẩm ni trồng thủy, hải sản là: Hóa chất thủy sản (Thuốc tím, vơi, formalin, vacxin,…), thức ăn thủy, hải sản (thức ăn hỗn hợp, thức ăn bổ sung,…), chế phẩm xử lý nguồn nước, chế phẩm sinh học (Probiotics, Prebiotic),… Thức ăn thủy sản sản phẩm cung cấp thức ăn dinh dưõng, thành phần có lợi cho phát triển động vật thủy, hải sản dạng tươi sống qua chế biến, bảo quản Mục đích kiểm nghiệm sản phẩm ni trồng thủy, hải sản Kiểm nghiệm sản phẩm nuôi trồng thủy hải sản khâu quan trọng mà sở, doanh nghiệp kinh doanh thủy hải sản cần phải thực để cấp phép hoạt động kinh doanh Trên sở kết kiểm nghiệm, quan chức đánh giá quản lý chất lượng sản phẩm nuôi trồng thủy, hải sản Đó phương án giảm thiểu rủi ro chất lượng trước nhà sản xuất đưa sản phẩm thị trường Đây sở để đánh giá chất lượng, giảm thiểu khiếu nại từ khách hàng chất lượng, độ an toàn sản phẩm Không vậy, quan chức dễ dàng quản lý chất lượng, kịp thời thu hồi sản phẩm chất lượng để tránh làm ảnh hưởng đến người tiêu dùng Còn người tiêu dùng an tâm chất lượng, tính an toàn sản phẩm để tin dùng Từ sản phẩm nuôi trồng thủy, hải sản chất lượng an tồn giúp người ni trồng thủy, hải sản có vụ mùa bội thu tạo nguồn thủy, hải sản đạt tiêu chuẩn, góp phần gia tăng kinh tế cho người nuôi Và sở kinh doanh sản phẩm nuôi trồng thủy, hải sản khẳng định uy tín, thương hiệu thị trường sản phẩm họ đạt tiêu chuẩn Một số trang thiết bị kiểm nghiệm sản phẩm nuôi trồng thủy, hải sản - Hệ thống phân hủy chưng cất tự động theo Kjeldalh - Hệ thống chiết tự động Soxhlet - Máy sắc ký ion (Ion Chromatography - IC, HPAEC-PAD) - Hệ thống sắc ký lỏng (HPLC-DAD, HPLC-FLD, HPLC-RI, HPLC-ELSD) - Máy sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS/MS) - Máy sắc ký khí (GC-FID, GC-MS) - Máy sắc ký khí với đầu dò khối phổ ECD (Gas Chromatography Mass - Máy quang phổ hấp thu nguyên tử (Graphite Furnace Atomic Absorption - Các thiết bị dùng phân tích vi sinh vật gây bệnh… Spectrometry GC-EDC/MS) Spectroscopy - GF-AAS) PHẦN 2: KIỂM NGHIỆM THỨC ĂN HỖN HỢP TRONG NUÔI TRỒNG THỦY, HẢI SẢN Các tiêu chí đánh giá  Chỉ tiêu hóa lý: - Hàm lượng Aflatoxin B1 - Hàm lượng Ethoxyquin - Hàm lượng chì (Pb), cadimi (Cd), thủy ngân (Hg) asen (As) vô  Chỉ tiêu vi sinh: Hàm lượng Salmonella Quy trình kiểm nghiệm 2.1 Chuẩn bị điều kiện kiểm nghiệm - Mục đích: Tạo điều kiện thuận lợi cho cơng việc kiểm nghiệm đạt kết xác tin cậy - Điều kiện:  Toàn dụng cụ q trình kiểm nghiệm phải đảm bảo vơ trùng  Môi trường nuôi cấy vi sinh vật sử dụng môi trường tổng hợp pha theo cơng thức cần xác đảm bảo điều kiện sinh trưởng vi sinh vật phát tiển phù hợp  Xử lí mơi trường sau cấy vi sinh vật đảm bảo tính an toàn vệ sinh lao động 2.2 Phương pháp nguyên tắc kiểm nghiệm 2.2.1 Chỉ tiêu hóa lý: - Kiểm tra hàm lượng Aflatoxin B1:  Phương pháp: Sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC)  Giới hạn xác định thấp mg/kg  Thiết bị: Hình.1 Máy sắc ký lỏng HPLC cao áp Hình.2 Hệ thống sắc ký lỏng HPLC hiệu cao  Nguyên tắc: Chiết mẫu chloroform Phần chiết lọc phần dịch lọc làm cột Florisil cột C18 Sự xác định phân tách cuối thu sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) dùng cột C18 pha ngược, dẫn xuất hóa sau cột iod brom, sử dụng detector huỳnh quang - Kiểm tra hàm lượng chì (Pb):  Phương pháp: Quang phổ hấp thụ nguyên tử  Thiết bị: Hình.3 Máy quang phổ hấp thụ nguyên tử ASS Hình.6 Máy sấy  Nguyên tắc: Việc phát Salmonella cần qua bốn giai đoạn nhau: + Tăng sinh sơ môi trường lỏng không chọn lọc + Tăng sinh môi trường chọn lọc + Nuôi cấy môi trường đặc chọn lọc + Khẳng định: Các khuẩn lạc Salmonella giả định cấy truyền khẳng định để nhận dạng chúng phép thử sinh hóa huyết thích hợp 2.3 Cách lấy mẫu kiểm nghiệm Mẫu lấy phải đại diện cho lô hàng đồng khơng lượng mẫu cần phân tích 2.3.1 Lấy mẫu hóa lý - Kiểm tra hàm lượng Aflatoxin B1:  Mẫu kiểm tra: khoảng 2kg thức ăn chăn nuôi có chứa khoảng 5mg/kg aflatoxin B1 cách trộn mẫu xác định trước với 5mg/kg aflatoxin B1  Mẫu thử: Chuẩn bị lượng mẫu thử đủ cho yêu cầu tất phép xác định lượng mẫu thử không 100g (thường 500g) Nghiền cho hồn tồn lọt qua sàng có đường kính lỗ sàng mm Trộn - Kiểm tra hàm lượng chì (Pb): Cân phần mẫu thử chứa khơng q 10g chất khơ khơng 3μg chì, chuyển vào cốc chịu nhiệt 500ml bình Kjeldahl 2.3.2 Lấy mẫu vi sinh  Kiểm tra Salmonella:  Chuẩn bị mẫu thử huyền phù ban đầu (dung dịch pha loãng ban đầu): ＋ Cân 25g mẫu nghiền nhỏ đổ nước đệm pepton làm dịch pha loãng, với lượng dung dịch pha lỗng lớn gấp chín lần hạt to lắng xuống (nếu có) ＋ Làm ấm trước nước đệm peptone (BPW) đến nhiệt độ phòng trước sử dụng ＋ Bổ sung lượng phần mẫu thử (khối lượng thể tích) vào lượng BPW (khối lượng thể tích) để thu độ pha lỗng mười lần Để thực điều này, trộn 25g phần mẫu thử với 225 ml BPW 2.4 Quy trình kiểm nghiệm 2.4.1 Kiểm tra tiêu hóa lý 2.4.1.1 Kiểm tra hàm lượng Aflatoxin B1 - Mục đích: Thức ăn ni trồng thủy, hải sản có khả nhiễm độc tố nguy hiểm aflatoxin B1 loài vi nấm điển hình Aspergillus flavus Aspergillus paraciticus gây nên Mà aflatoxin lại chất độc gây ung thư - Cách tiến hành:  Đối với lần đo thêm vào mẫu trắng 10mg/kg aflatoxin B1 hóa chất chứng nhận mẫu kiểm tra Thêm vào mẫu trắng hóa chất để kiểm tra nhiễm bẩn từ dụng cụ thủy tinh  Xác định phổ hấp thụ dung dịch tiêu chuẩn aflatoxin B1: Trong cuvet khoảng bước sóng 330nm 370nm phổ kế Lấy chloroform làm mẫu trắng đo độ hấp thụ 363nm  Chiết: Cân 50g mẫu thử cho vào bình tam giác Rồi thêm 25g Celite 545 Filter Aid, 250ml chloroform 25 ml nước Để bình cố định, khuấy nhẹ giải phóng áp suất Đặt bình vào máy lắc 30 phút, sau lọc qua giấy lọc gấp nếp (phải bọc tồn phễu để tránh tượng bay chloroform trình lọc chậm) Thu 50ml dịch lọc (Vs) Nếu cần lấy phần dịch pha loãng thành 50 ml (Vf) chloroform Dùng dịch lọc mẫu làm  Làm sạch: Thực trình liên tục: + Làm Florisil: Chuẩn bị cột làm cho dịch lọc thu (Vs Vf) vào dãy cột để tự chảy tác dụng trọng lực Rửa 5ml chloroform, rửa tiếp 20ml metanol, gạn phần dung môi rửa giải (Phải đảm bảo dãy cột không bị khô) Rửa giải aflatoxin B1 50 ml hỗn hợp axeton - nước thu chất rửa giải vào bình đáy trịn thiết bị cất quay Cô đặc phần dung môi rửa giải thiết bị cất quay khoảng nhiệt độ 40-50oC đến khơng cịn axeton Thêm 1ml metanol, khuấy để hịa tan aflatoxin B1 bám bình, thêm ml nước khuấy Tháo bỏ cột Rửa cột thủy tinh nước phần tử lại bước làm cột C18 + Làm cột C18: Chuẩn bị dãy cột cho phần chiết vào cột thủy tinh, rửa bình hai lần 5ml hỗn hợp nước-metanol để chảy (Đảm bảo dãy cột không bị khô) Nếu thấy xuất bọt khí chỗ thắt, dừng dịng chảy mở vịi đỉnh cột thủy tinh để loại bỏ bọt khí Sau lại tiếp tục q trình Rửa giải 25ml hỗn hợp nước - metanol Lấy phần dung môi rửa giải Rửa giải aflatoxin B1 25 ml hỗn hợp nước - axeton thu phần dung môi rửa giải vào bình định mức dung tích 50ml Pha loãng đến vạch nước lắc Dùng dung dịch cho phần sắc ký  Sắc ký lỏng hiệu cao: + Đặt chế độ nạp cho HPLC: Nếu dùng dẫn xuất hóa Iod đặt tốc độ dòng khoảng 0,4 ml/phút 0,2 ml/phút tương ứng với tốc độ dòng pha động (4.18) 0,5 ml/phút 0,3 ml/phút Nếu dùng dẫn xuất hóa brom dùng detector huỳnh quang với bước sóng kích thích 365 nm bước sóng truyền 435 nm (đối với thiết bị lọc có bước sóng phát > 400 nm) Điều chỉnh suy giảm detector để phát khoảng 80 % ng aflatoxin B1 + Nạp: Thể tích nạp 250 ml + Kiểm tra phân tách sắc ký: Nạp dung dịch thử sắc ký, phần lõm xuống phải nhỏ 5% tổng chiều cao pic liền kề + Kiểm tra tính ổn định hệ thống: Trước lần phân tích, nạp liên tục dung dịch hiệu chuẩn đến thu chiều cao pic ổn định Các pic aflatoxin B1 lần nạp liên tiếp không khác 6% + Kiểm tra độ tuyến tính: Nạp dung dịch hiệu chuẩn aflatoxin B1 Mỗi lần nạp thứ ba dùng dung dịch hiệu chuẩn (4.26.3) để hiệu chỉnh chênh lệch kết Các pic dung dịch hiệu chuẩn không khác 10 % 90 phút Biểu đồ chuẩn đường thẳng qua gốc tọa độ Các giá trị thu không khác 3% giá trị danh định + Nạp mẫu chiết: Nạp liên tiếp dung dịch hiệu chuẩn, dịch chiết thức ăn khơng có aflatoxin B1, dịch chiết thức ăn có aflatoxin B1, dung dịch hiệu chuẩn, dịch chiết chất so sánh công nhận mẫu kiểm tra dung dịch hiệu chuẩn Nạp dịch chiết mẫu làm sạch, sau nạp hai mẫu dịch chiết, nạp lại dung dịch hiệu chuẩn Nạp 10 mẫu, lần nạp cuối dung dịch hiệu chuẩn aflatoxin B1 - Tính tốn:  Hàm lượng aflatoxin B1 dung dịch thử: ma= Trong đó: ma hàm lượng flatoxin B1 dung dịch thử (ng) As diện tích pic ứng với hàm lượng aflatoxin B1 dung dịch thử, đơn vị diện tích mc hàm lượng aflatoxin B1 dung dịch hiệu chuẩn nạp (ng) Ac1 diện tích pic ứng với hàm lượng aflatoxin B1 thu trước nạp dung dịch hiệu chuẩn, đơn vị diện tích Ac2 diện tích pic ứng với hàm lượng aflatoxin B1 thu sau nạp dung dịch hiệu chuẩn, đơn vị diện tích  Hàm lượng aflatoxin B1 có mẫu thử : Wa = Wa hàm lượng aflatoxin B1 có mẫu thử (μg/ kg) ma hàm lượng aflatoxin B1 dung dịch thử (ng) Vs thể tích dịch chiết mẫu khơng pha lỗng thu được(Vs = 50 ml khơng cần pha loãng dịch lọc thu được) ms lượng mẫu thử, (ms = 50g) Vis thể tích dịch chiết mẫu nạp (Vis = 0,25 ml) Vf thể tích dịch lọc sử dụng cho làm (8.4), (Vf = 50 ml), tính mililit; Vc thể tích clorofooc sử dụng để chiết mẫu (Vc = 250 ml) Nếu ms = 50g, Vs = 50ml, Vis = 0,25ml, Vf = 50ml Vc = 250ml công thức trở thành: Wa = 20 g-1 x ma 2.4.1.2 Kiểm tra hàm lượng chì (Pb) - Mục đích: Chì kim loại nặng, độc hại tiếp xúc gây tổn thương não, tê liệt, thiếu máu triệu chứng tiêu hóa Phơi nhiễm lâu dài gây tổn hại cho thận, chức sinh sản hệ thống miễn dịch - Cách tiến hành:  Phân hủy mẫu: Lấy mẫu thử thêm 1ml dung dịch stronti 2% vài viên bi thủy tinh Chuẩn bị mẫu trắng tiến hành thao tác giống mẫu thử Thêm 15 ml hỗn hợp ba acid (20ml H2SO4 0.5M vào 100ml nước, lắc thêm tiếp 100ml HNO3 1M 40 ml axit pecloric 70% trộn) gam chất khô để yên 2h Đun tủ hút với hệ thống ống hút chân khơng vịi nước bình cịn lại H2SO4 muối vơ (Để tránh thất thoát mẫu tạo bọt gia nhiệt lần đầu tạo bọt xuất sau nguyên vật liệu bị than hóa Tắt bếp lắc bình trước tiếp tục phân hủy Thêm HNO 1M cần)  Tách chì: + Làm nguội phần phân hủy vài phút (phần phân hủy cần làm nguội đủ để bổ sung khoảng 15 ml nước cách an toàn, đủ nóng để làm sơi thêm nước vào) Rửa phần phân hủy cịn nóng cho vào ống ly tâm 40-50ml có thắt đáy lắc Để nguội, ly tâm 10 phút 350 x g1) gạn chất lỏng cho vào cốc chứa chất thải Tách chiết kết tủa máy ly tâm Để chuyển hết, thêm 20ml nước 1ml H2SO4 0.5 M vào cốc đun nóng Khơng bỏ qua bước Rửa nóng lượng chứa bình phân hủy ban đầu cho vào ống ly tâm có chứa chất kết tủa Khuấy để trộn đều, làm nguội, ly tâm gạn phần chất lỏng vào cốc chứa chất thải + Trộn chất kết tủa cách khuấy mạnh, thêm 25ml dung dịch [(NH4) 2CO3] bão hòa (khoảng 20%) khuấy tất phần kết tủa phân tán hết Để yên 1h, ly tâm, gạn phần chất lỏng vào cốc chứa chất thải Lặp lại trình xử lý với [(NH4)2CO3], hai lần + Sau gạn, lật úp ống ly tâm lên khăn giấy để Thêm 5ml HNO3 1M (nếu hàm lượng chì dự đốn >25μg, mẫu thử mẫu trắng sử dụng lượng thể tích dung dịch HNO3 1M lớn hơn), khuấy mạnh để đuổi khí CO2 sử dụng bể siêu âm từ 2-3 phút, để yên 30 phút ly tâm chất kết tủa (sử dụng kỹ thuật cho tất phần mẫu thử)  Xác định: Thiết lập điều kiện tối ưu cho thiết bị, sử dụng lửa oxi hóa khơng khí axetylen bước sóng cộng hưởng 217nm 283.3nm Xác định độ hấp thụ dung dịch thử dung dịch trắng chuẩn dải làm việc tối ưu (10-80% T) trước sau đọc mẫu Rửa đầu đốt HNO 1M kiểm tra điểm “0” lần đọc - Tính tốn:  Xác định hàm lượng chì từ đường chuẩn độ hấp thụ A dựa theo nồng độ chì μg/ml  Hàm lượng chì (X), tính μg/g, theo cơng thức: X= Trong đó: m1 hàm lượng chì từ đường chuẩn tương ứng với độ hấp thụ A (μg/ml) v thể tích dung dịch HNO3 1M (ml) m2 khối lượng phần mẫu thử (g) 2.4.2 Kiểm tra tiêu vi sinh Giúp giảm tình trạng ngộ độc hay nhiễm bệnh vi sinh gây bệnh Đồng thời đánh giá tình trạng nhiễm, tình trạng vệ sinh mẫu kiểm nghiệm 2.4.2.1 Kiểm tra Salmonella - Mục đích: Salmonella vi khuẩn gây bệnh nhiễm khuẩn đường ruột Nhiễm khuẩn lây lan từ ruột vào máu nơi khác thể - Cách tiến hành:  Chuẩn bị huyền phù ban đầu: Sử dụng môi trường tăng sinh sơ để pha lỗng  Tăng sinh sơ khơng chọn lọc: Ủ huyền phù ban đầu nhiệt độ từ 34 °C đến 38 °C 18h ± 2h  Tăng sinh chọn lọc: + Quy trình mẫu thức ăn thủy sản:  Chuyển 0.1ml dịch cấy tăng sinh sơ thu vào ống chứa 10ml canh thang RSV sang bề mặt đĩa thạch MSRV (Dùng để phát chủng Salmonella di động) Cấy từ đến ba điểm cách bề mặt môi trường thạch MSRV  Chuyển ml dịch cấy tăng sinh sơ thu vào ống có chứa 10ml canh thang MKTTn (Novobioxin tetrathionat muller-kauffmann)  Ủ canh thang RVS cấy 41.5°C 24h ± 3h  Ủ đĩa thạch MSRV cấy 41.5 °C 24h ± 3h Không lật úp đĩa  Ủ canh thang MKTTn cấy 37 °C 24 h ± h  Các khuẩn lạc đĩa MSRV nghi ngờ cho thấy màu xám-trắng, quầng đục lan rộng xung quanh giọt cấy  Nuôi cấy mơi trường thạch chọn lọc + Quy trình mẫu thức ăn thủy sản:  Từ dịch cấy thu canh thang RVS, cấy vòng 10 μl lên bề mặt đĩa thạch XLD thu khuẩn lạc riêng rẽ Thực tương tự với môi trường đĩa thạch chọn lọc thứ hai  Từ vị trí cho thấy khuẩn lạc dương tính thu thạch MSRV, xác định điểm có quầng đục rộng sử dụng que cấy vòng μl nhúng vào mép quầng đục khuẩn lạc dương tính thạch MSRV Rút que cấy vịng cho không lấy theo mảng lớn thạch MSRV Cấy lên bề mặt đĩa thạch XLD cho thu khuẩn lạc riêng rẽ Thực tương tự với môi trường đĩa thạch chọn lọc thứ hai  Từ dịch cấy thu canh thang MKTTn, cấy vòng 10 pl lên bề mặt đĩa thạch XLD cho thu khuẩn lạc riêng rẽ Thực tương tự với môi trường đĩa thạch chọn lọc thứ hai  Khẳng định: + Chọn khuẩn lạc để khẳng định: Đánh dấu khuẩn lạc nghi ngờ đĩa Chọn khuẩn lạc điển hình nghi ngờ để cấy truyền khẳng định Nếu khuẩn lạc âm tính chọn nhiều bốn khuẩn lạc nghi ngờ để chắn khuẩn lạc cấy truyền hỗn hợp môi trường phân lập/môi trường tăng sinh chọn lọc khác cho thấy khuẩn lạc nghi ngờ phát triển Cấy ria khuẩn lạc chọn bề mặt môi trường thạch không chọn lọc làm khô trước, cho khuẩn lạc phát triển riêng rẽ Ủ đĩa cấy nhiệt độ từ 34-38 °C 24h ± 3h  Phép thử sinh hóa: ＋ Thạch TSI : Cấy ria bề mặt nghiêng thạch cấy đâm sâu xuống đáy Ủ 37 °C 24h ± h ＋ Thạch urê: Cấy ria bề mặt nghiêng thạch Ủ 37 °C đến 24h ＋ Môi trường L-Lyzin Decarboxylation: Cấy phía bề mặt mơi trường lỏng Ủ 37 °C 24 h ± h Mơi trường đục có màu đỏ tía sau ủ cho thấy phản ứng dương tính Màu vàng cho thấy phản ứng âm tính ＋ Phát β-galactosidase: Phép thử β-galactosidase sử dụng để phân biệt Salmonella enterica phân loài arizonae diarizonae loài khác họ Enterobacteriaceae (tất cho phản ứng dương tính) với phân lồi khác Salmonella enterica (nhìn chung phân lồi cho phản ứng âm tính)  Mơi trường thử phản ứng indol: Cấy khuẩn lạc nghi ngờ vào ống chứa ml môi trường trypton/tryptophan Ủ 37 °C 24 h ± h Sau ủ, thêm ml thuốc thử Kovacs Sự xuất vòng màu đỏ (lớp bề mặt) chứng tỏ phản ứng dương tính vòng màu nâu vàng (lớp bề mặt) chứng tỏ phản ứng âm tính + Phép thử huyết  Loại bỏ chủng tự ngưng kết Cho giọt dung dịch nước muối lên lam kính thủy tinh Dùng que cấy vòng trộn dung dịch nước muối với khuẩn lạc cần thử nghiệm, để thu huyền phù đục đồng Lắc nhẹ lam kính từ s đến 60 s (tùy theo hướng dẫn nhà sản xuất) Quan sát huyền phù màu đen Nếu vi khuẩn kết dính thành hạt huyền phù chủng xem tự ngưng kết việc khẳng định huyết phức tạp  Kiểm tra kháng nguyên O Kiểm tra có mặt kháng nguyên O với khuẩn lạc xác định khơng có khả tự ngưng kết, tiến hành theo ( loại bỏ chủng tự ngưng kết), sử dụng giọt huyết kháng nguyên K đa giá thay cho dung dịch nước muối Nếu xuất ngưng kết phản ứng coi dương tính  Kiểm tra kháng nguyên Vi Kiểm tra có mặt kháng nguyên Vi với khuẩn lạc xác định khơng có khả tự ngưng kết, tiến hành theo (loại bỏ chủng tự ngưng kết), sử dụng giọt huyết kháng nguyên Vi thay cho dung dịch nước muối Nếu xuất ngưng kết phản ứng coi dương tính  Kiểm tra kháng nguyên H Kiểm tra có mặt kháng nguyên H với khuẩn lạc xác định khơng có khả tự ngưng kết, tiến hành theo (loại bỏ chủng tự ngưng kết) sử dụng giọt huyết kháng nguyên H đa giá thay cho dung dịch nước muối Nếu xuất ngưng kết phản ứng coi dương tính + Diễn giải phản ứng sinh hóa huyết Phản ứng sinh hóa Tự ngưng kết Phản ứng huyết Diễn giải Điển hình Khơng Kháng ngun O H dương tính (và Vi dương tính thử nghiệm) Kháng ngun O và/hoặc H Điển hình Khơng Điển hình Có âm tính Khơng thử nghiệm tự Phản ứng khơng điển - ngưng kết - hình Các chủng coi Salmonella Có thể Salmonella Khơng coi Salmonella Bảng Diễn giải kết phép thử khẳng định + Xác định typ huyết Các chủng khẳng định Salmonella spp (xem Bảng 1) thử nghiệm tiếp để xác định serovar Tiêu chuẩn kỹ thuật 3.1 Trạng thái cảm quan Tiêu chí đánh giá Yêu cầu Màu sắc Từ vàng đến nâu Mùi Có mùi đặc trưng nguyên liệu phối chế, khơng có mùi mốc mùi lạ Trạng thái Phương pháp đánh giá TCVN 3215-79 Rắn, không vón cục, khơng vụn nát, khơng lẫn tạp chất có độ đồng cao Bảng Đánh giá cảm quan 3.2 Chỉ tiêu hóa lý Chỉ tiêu Aflatoxin B1 Ethoxyquin Chì (Pb) Cadimi (Cd) Thủy ngân (Hg) Asen (As) vơ Đơn vị tính μg/kg mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg Giới hạn tối đa cho phép 10 150 0.4 Bảng Chỉ tiêu hóa lý 3.3 Chỉ tiêu vi sinh Chỉ tiêu Salmonella Đơn vị tính Giới hạn cho phép CFU/25g Không phát Bảng Chỉ tiêu vi sinh Bao gói, ghi nhãn, bảo quản vận chuyển - Bao gói:  Thức ăn thủy, hải sản đựng bao bì màng phức hợp bao pp dệt (bao làm từ vải woven polypropylene)  Công bố định lượng thành phần  Thực phẩm chiếu xạ - Ghi nhãn:  Tên sản phẩm: Thức ăn thủy, hải sản  Danh mục thành phần  Khối lượng tịnh khối lượng nước  Cơ sở sản xuất nước sản xuất  Lô sản phẩm  Ngày sản xuất hạn sử dụng  Hướng dẫn bảo quản sử dụng - Bảo quản:  Tùy loại thức ăn chọn địa điểm cất giữ khác  Không đặt sàn nhà, không dựa vào tường  Đảm bảo 100% khơng chạm đến nước, ảnh hưởng nhiệt độ, độ ẩm sản phẩm  Sử dụng biện pháp hạn chế ảnh hưởng, quấy phá nấm mốc, loại côn trùng, chuột, bụi bẩn, mùi lạ tác động xấu từ môi trường  Bảo quản nơi khơ ráo, thống mát, tránh ánh nắng trực tiếp - Vận chuyển:  Phương tiện vận chuyển thực phẩm chế tạo vật liệu không làm ô nhiễm thực phẩm bao gói thực phẩm, dễ làm  Bảo đảm điều kiện bảo quản thực phẩm suốt q trình vận chuyển  Khơng vận chuyển thực phẩm hàng hố độc hại gây nhiễm chéo ảnh hưởng đến chất lượng thực phẩm PHẦN 3: KẾT LUẬN Như vậy, thấy thức ăn thủy sản đạt chuẩn thức ăn đảm bảo tiêu hóa lý vi sinh Người nuôi trồng thủy sản cần phải lưu ý cân nhắc việc lựa chọn thức ăn đạt chuẩn phù hợp không chứa hàm lượng chất gây hại để tạo điều kiện thuận lợi cho sinh trưởng phát triển giống quan trọng hết mang lại lợi nhuận kinh tế cao, đảm bảo nguồn thủy, hải sản sạch, đạt chuẩn cung cấp cho thị trường nước, bảo vệ sức khỏe người tiêu dùng Tránh việc tiền oan chẳng biết nguồn thức ăn có ảnh hưởng lớn đến chất lượng thủy sản chiếm tới 65-80% chi phí ni trồng Cịn người sản xuất thức ăn thủy sản cần phải kiểm nghiệm nguồn thức ăn trước tung sản phẩm thị trường để tránh trường hợp bị khiếu nại truy cứu trách nhiệm nguồn thức ăn khơng đạt chuẩn gây hậu nghiêm trọng, chí bị thu hồi sản phẩm giấy phép kinh doanh Tóm lại, sản phẩm trước tung thị trường để tiêu thụ cần phải kiểm nghiệm trước việc kiểm nghiệm cần phải thực cách xác khách quan TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Giáo trình Kiểm nghiệm sản phẩm sinh học - Đỗ Thị Hiền [2] QCVN 02 - 31 - 1:2019/BNNPTNT [3] TCVN 6953 : 2001 (ISO 14718:1998); TCVN 6952 : 2001 (ISO 9498:1998); TCVN 3215 - 79; TCVN 11923:2017 [4] TCVN 7602:2007 xây dựng sở AOAC 972.25 Lead in Food Atomic absorption spectrophotometric method [5] AOAC 935.50 Lead Suitability of methods and precautions [6] AOAC 934.07 Lead in food General Dithizone Method [7] TCVN 10780-1:2017 (ISO 6579-1:2017), Vi sinh vật chuỗi thực phẩm Phương pháp phát hiện, định lượng xác định typ huyết Salmonella Phần 1: Phát Salmonella spp