Xây dựng quy trình phân tích đồng thời đồng phân quang học citalopram và mirtazapin bằng phương pháp hplc và ce

NGUYỄN ĐAN VY - KHÓA 2019 – 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN ĐAN VY XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH ĐỒNG THỜI ĐỒNG PHÂN QUANG HỌC CITALOPRAM VÀ MIRTAZAPIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC VÀ CE NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NĂM 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN ĐAN VY XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH ĐỒNG THỜI ĐỒNG PHÂN QUANG HỌC CITALOPRAM VÀ MIRTAZAPIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC VÀ CE NGHÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 87202010 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: GS.TS NGUYỄN ĐỨC TUẤN TS LÊ THỊ THU CÚC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NĂM 2021 LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết trình bày luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Người cam đoan Nguyễn Đan Vy Luận văn Thạc sĩ – Khóa 2019– 2021 Ngành: Kiểm nghiệm thuốc độc chất – Mã số: 8720210 XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH ĐỒNG THỜI ĐỒNG PHÂN QUANG HỌC CITALOPRAM VÀ MIRTAZAPIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC VÀ CE Nguyễn Đan Vy Hướng dẫn khoa học: GS.TS Nguyễn Đức Tuấn, TS Lê Thị Thu Cúc Từ khóa: HPLC, CE, citalopram, mirtazapin, đồng phân quang học Mở đầu: Citalopram (CIT) thuốc ức chế tái hấp thu chọn lọc serotonin thuộc dẫn chất phthalen vịng đơi Mirtazapin (MIR) thuốc chống trầm cảm khơng điển hình thuộc nhóm piperazinoazepin Cả hai dược chất sử dụng điều trị trầm cảm Tuy nhiên, đồng phân quang học CIT MIR khác hoạt tính sinh học tác dụng dược lý Cho đến chưa có nghiên cứu ứng dụng phương pháp HPLC hay CE để phân tích đồng thời hai dược chất quang hoạt CIT MIR Vì vậy, nghiên cứu thực với mục tiêu xây dựng quy trình phân tích đồng thời đồng phân quang học CIT MIR phương pháp HPLC CE Đối tương phương pháp nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu: đồng phân quang học CIT MIR Phương pháp nghiên cứu: Khảo sát điều kiện sắc ký điều kiện điện di để phân tách hoàn toàn đồng phân quang học CIT MIR, thẩm định quy trình phân tích theo hướng dẫn ICH, áp dụng quy trình sau thẩm định để phân tích số chế phẩm thị trường có chứa CIT MIR Kết quả: Đã xác định điều kiện sắc ký điều kiện điện di thích hợp để tách hoàn toàn đồng phân quang học CIT MIR phương pháp HPLC CE Cả hai quy trình có tính chọn lọc, độ xác cao (RSD ≤ 2% HPLC RSD ≤ 3% CE), độ cao với tỷ lệ phục hồi 98-102% với HPLC 97–103% CE Với phương pháp HPLC, khoảng tuyến tính (S)-MIR, (R)-MIR (S)-CIT, (R)-CIT từ 75 – 450 µg/ml 50 - 300 µg/ml Với phương pháp CE, khoảng tuyến tính (S)-MIR, (R)-MIR (S)-CIT, (R)-CIT từ – 188 µg/ml 2,5 – 125 µg/ml Đã ứng dụng quy trình HPLC để định tính phân biệt đồng phân MIR, định lượng (S)-CIT xác định tạp (R)-CIT số chế phẩm chứa dược chất đồng phân (S)-CIT Kết luận: Đã xây dựng thành công hai quy trình phân tích đồng thời đồng phân quang học citalopram mirtazapin phương pháp HPLC CE Cả hai quy trình có tính chọn lọc, độ xác độ cao Trong đó, quy trình HPLC áp dụng để phân tích số chế phẩm thị trường có chứa CIT MIR Master’s Thesis – Academic course: 2019 – 2021 Specialty: Drug Quality Control & Toxicology – Code: 8720210 DEVELOPMENT OF TWO HPLC AND CE METHODS FOR SIMULTANEOUS DETERMINATION OF ENANTIOMERIC CITALOPRAM AND MIRTAZAPINE Nguyen Dan Vy Supervisor: Prof Dr Nguyen Duc Tuan; Dr Le Thi Thu Cuc Keywords: HPLC, CE, citalopram, mirtazapin, enantiomers Introduction: Citalopram (CIT) is a serotonin reuptake inhibitor (SSRI) and a phthalane derivative Mirtazapin (MIR) is an atypical antidepressant of piperazinoazepines group Both of them are used as antidepressants However, the (S) and (R) isomers of CIT and MIR have distinct pharmacological and biological activities There have not been studies on simultaneous determination of enantimeric CIT and MIR by HPLC and CE so far Therefore, this study was conducted with the aim of application of HPLC and CE techniques for simultaneous analysis of CIT and MIR enantiomers Material and methods: Object of the study: Enantiomers of CIT and MIR Methods: Investigation of chromatographic and electrophoretic conditions to completely separate enantiomers of CIT and MIR; Validation of HPLC and CE methods based on ICH guidelines; Application of the validated methods for analysis of several available CIT and MIR pharmaceuticals Results: The suitable chromatographic and electrophoresis conditions for complete separation of CIT and MIR enantiomers by HPLC and CE were established The validation results showed that these methods were proven to have selectivity, high precision (RSD ≤ 2% for HPLC and RSD ≤ 3% for CE), and high accuracy with recovery rate from 98-102% for HPLC and 97–103% for CE The HPLC method showed a linear range from 75 to 450 µg.mL-1 for (S)-MIR, (R)-MIR and from 50 to 300 µg.mL-1 for (S)-CIT, (R)-CIT The CE method showed a linear range from to 188 µg.mL-1 for (S)-MIR, (R)-MIR and from 2.5 – 125µg.mL-1 for (S)-CIT, (R)-CIT Finally, the validated HPLC method was applied for distinct qualitative determination of (R)-MIR and (S)-MIR, quantitative determination of (S)-CIT, and for (R)-CIT impurity test in several available (S)-citalopram drug products Conclusion: Two HPLC and CE methods for simultaneous determination of enantiomeric citalopram and mirtazapine were successfully developed Both procedures are selective, highly precise and accurate In which, the HPLC method was applied for analysis of several available CIT and MIR pharmaceuticals i MỤC LỤC Trang MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT .ii DANH MỤC CÁC BẢNG .iiv DANH MỤC CÁC HÌNH viii MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Citalopram 1.2 Mirtazapin 1.3 Đồng phân đối quang 1.4 Sắc ký lỏng hiệu cao phân tích đồng phần đối quang 10 1.5 Điện di mao quản phân tích đồng phân đối quang 12 1.6 Một số cơng trình phân tích đồng phân đối quang citalopram, mirtazapin phương pháp HPLC CE 14 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Đối tượng nghiên cứu 18 2.2 Nguyên vật liệu 18 2.3 Phương pháp nghiên cứu 20 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 35 3.1 Xây dựng quy trình phân tích đồng thời đồng phân đối quang citalopram mirtazapin phương pháp HPLC 35 3.2 Xây dựng quy trình phân tích đồng thời đồng phân đối quang citalopram mirtazapin phương pháp điện di mao quản 58 3.3 Ứng dụng quy trình để phân tích citalopram, mirtazapin vài chế phẩm thị trường 79 CHƯƠNG BÀN LUẬN 83 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 87 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, Từ nguyên chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt ACN Acetonitrile ALIPH Aliphtalique Hợp chất không vòng AROM Aromatic Chất thơm BGE Background Electrolyte Dung dịch điện ly β-CD Beta-cyclodextrin CE Capillary Eletrophoresis CD Cyclodextrin CIT Citalopram CM-β-CD Carboxymethyl-β- Điện di mao quản cyclodextrin CorrArea Corrected Area CPDP Cổ phần Dược phẩm CSPs Chiral Stationary Diện tích pic chuẩn hóa Pha tĩnh bất đối Công ty Cổ phần Sản xuất – CTCPSX-TM Thương mại Capillary Zone CZE Electropheresis Điện di mao quản vùng DEA Diethylamin EFF Electric Field Force Lực điện trường EOF Electro-osmotic Flow Dòng điện thẩm EP European Pharmacopoeia Dược điển Châu Âu HPCE High Performance Capillary Điện di mao quản hiệu Electrophoresis cao ICDs Impulse Control Disorders Rối loạn kiểm sốt xung động ICH International Conference On Hội nghị hịa hợp quốc tế Harmonization IPA Isopropanol iii Ký hiệu, Từ nguyên Nghĩa tiếng Việt International Organization for Tổ chức Tiêu chuẩn hóa Quốc Standardization tế LC Liquid Chromatography Sắc ký lỏng LOD Limit of Detection Giới hạn phát LOQ Limit of Quantitation Giới hạn định lượng MeOH Methanol MIR Mirtazapin NaSSA Noradrenaline and Specific Đối kháng thụ thể Serotonin Antagonists noradrenalin serotonin PDA Photo Diode Array Dãy diod quang (R)-CIT (R)-citalopram (R)-MIR (R)-mirtazapin RP-HPLC Reversed Phase – High chữ viết tắt ISO Performance Liquid Chromatography RSD Relative Standard Devitation (S)-CIT (S)-citalopram S-β-CD Sulfated beta-cyclodextrin SKĐ Sắc ký đồ (S)-MIR (S)-mirtazapin Sắc ký lỏng hiệu cao pha đảo Độ lệch chuẩn tương đối Selective Serotonin Reuptake Ức chế chọn lọc tái hấp thu Inhibitor serotonin TRC Toronto Research Chemicals Cơng ty hóa chất Toronto USP United States Pharmacopoeia Dược điển Mỹ SSRI VKNT TP.HCM Viện Kiểm nghiệm thuốc Thành phố Hồ Chí Minh iv DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Tóm tắt số cơng trình phân tích đồng phân quang học CIT phương pháp CE .15 Bảng 1.2 Tóm tắt số cơng trình phân tích đồng phân quang học MIR phương pháp CE .15 Bảng 1.3 Tóm tắt số cơng trình phân tích đồng phân quang học CIT MIR phương pháp HPLC 15 Bảng 2.1 Danh mục chất chuẩn đối chiếu sử dụng nghiên cứu .18 Bảng 2.2 Danh mục dung mơi, hóa chất sử dụng nghiên cứu .18 Bảng 2.3 Danh mục trang thiết bị sử dụng nghiên cứu 19 Bảng 2.4 Các chế phẩm sử dụng nghiên cứu .20 Bảng 2.5 Chuẩn bị dung dịch mẫu chuẩn citalopram, mirtazapin với quy trình HPLC 24 Bảng 2.6 Chuẩn bị dung dịch mẫu chuẩn (S)-citalopram với quy trình HPLC25 Bảng 2.7 Chuẩn bị dung dịch mẫu chuẩn citalopram, mirtazapin với quy trình CE 31 Bảng 2.8 Chuẩn bị dung dịch mẫu chuẩn (S)-citalopram với quy trình CE 31 Bảng 3.1 Kết khảo sát cột sắc ký mẫu chuẩn citalopram 35 Bảng 3.2 Kết khảo sát tỷ lệ pha động 37 Bảng 3.3 Kết khảo sát nhiệt độ cột sắc ký .38 Bảng 3.4 Kết khảo sát tốc độ dòng 39 Bảng 3.5 Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống quy trình phân tích đồng phân citalopram mirtazapin HPLC mẫu chuẩn (n=6) 40 Bảng 3.6 Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống quy trình phân tích đồng phân citalopram mirtazapin HPLC mẫu thử (n=6) 40 Bảng 3.7 Kết khảo sát tương quan nồng độ (S)-MIR, (R)-MIR, (S)-CIT, (R)-CIT diện tích pic quy trình HPLC 45 v Bảng 3.8 Kết khảo sát tương quan nồng độ (S)-CIT diện tích pic quy trình HPLC 45 Bảng 3.9 Kết đánh giá tính tương thích phương trình hồi quy ý nghĩa hệ số phương trình hồi quy quy trình HPLC 46 Bảng 3.10 Kết xác định LOD LOQ quy trình HPLC 46 Bảng 3.11 Kết thẩm định độ xác quy trình HPLC mẫu thử mirtazapin (đồng phân (S)-MIR) (Phụ lục 1) 47 Bảng 3.12 Kết thẩm định độ xác quy trình HPLC mẫu thử mirtazapin (đồng phân (R)-MIR) (Phụ lục 1) 48 Bảng 3.13 Kết thẩm định độ xác quy trình HPLC mẫu thử citalopram (đồng phân (S)-CIT) (Phụ lục 1) 48 Bảng 3.14 Kết thẩm định độ xác quy trình HPLC mẫu thử citalopram (đồng phân (R)-CIT) (Phụ lục 1) 49 Bảng 3.15 Kết thẩm định độ xác quy trình HPLC mẫu thử escitalopram ((S)-CIT) (Phụ lục 1) 50 Bảng 3.16 Kết thẩm định độ quy trình HPLC (đồng phân (S)-MIR) (Phụ lục 1) 50 Bảng 3.17 Kết thẩm định độ quy trình HPLC (đồng phân (R)-MIR) (Phụ lục 1) 51 Bảng 3.18 Kết thẩm định độ quy trình HPLC (đồng phân (S)-CIT) (Phụ lục 1) 52 Bảng 3.19 Kết thẩm định độ quy trình HPLC (đồng phân (R)-CIT) (Phụ lục 1) 53 Bảng 3.20 Kết thẩm định độ quy trình HPLC mẫu escitalopram (đồng phân (S)-CIT) (Phụ lục 1) 54 Bảng 3.21 Kết khảo sát pH dung dịch điện ly 60 Bảng 3.22 Kết khảo sát nồng độ S-β-CD .61 Bảng 3.23 Kết khảo sát nồng độ dung dịch điện ly 62 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 77 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 78 Phụ luc 3: Định lượng số chế phẩm chứa (S)-citalopram xác định tạp (R)-citalopram phương pháp HPLC Sắc ký đồ mẫu chuẩn (S)-CIT mẫu thử (S)-CIT Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 79 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 80 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 81 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 82 Phụ lục 4: Định tính phân biệt đồng phân mirtazapin phương pháp HPLC Sắc ký đồ mẫu chuẩn mirtazapin mẫu thử mirtazapin Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 83 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 84 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 85 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 86 Phụ lục 5: Giấy chứng nhận đề tài chuyển giao, triển khai kết nghiên cứu Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 87 Phụ lục 6: Giấy chứng nhận chất đối chiếu sử dụng nghiên cứu Chất đối chiếu citalopram HBr Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 88 Chất đối chiếu mirtazapin Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 89 Chất đối chiếu (S)-citalopram oxalat Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 90 Chất đối chiếu (R)-citalopram oxalat Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 91 Chất đối chiếu (S)-mirtzapin Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn