Khảo sát đặc điểm lâm sàng, sinh học, đáp ứng điều trị ở bệnh nhân giảm tiểu cầu miễn dịch người lớn có xét nghiệm ana tại bệnh viện chợ rẫy

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH -oOo - NGUYỄN THỊ NGỌC SANG KHẢO SÁT ĐẶC ĐIỂM LÂM SÀNG, SINH HỌC, ĐÁP ỨNG ĐIỀU TRỊ Ở BỆNH NHÂN GIẢM TIỂU CẦU MIỄN DỊCH NGƢỜI LỚN CÓ XÉT NGHIỆM ANA TẠI BỆNH VIỆN CHỢ RẪY LUẬN VĂN BÁC SĨ NỘI TRÚ TP HỒ CHÍ MINH – NĂM 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH -oOo - NGUYỄN THỊ NGỌC SANG KHẢO SÁT ĐẶC ĐIỂM LÂM SÀNG, SINH HỌC, ĐÁP ỨNG ĐIỀU TRỊ Ở BỆNH NHÂN GIẢM TIỂU CẦU MIỄN DỊCH NGƢỜI LỚN CÓ XÉT NGHIỆM ANA TẠI BỆNH VIỆN CHỢ RẪY CHUYÊN NGÀNH: HUYẾT HỌC – TRUYỀN MÁU MÃ SỐ: NT62722501 LUẬN VĂN BÁC SĨ NỘI TRÚ Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS Suzanne Monivong Cheanh Beaupha TP HỒ CHÍ MINH – NĂM 2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Thành phố Hồ Chí Minh, ngày tháng năm Tác giả luận văn Nguyễn Thị Ngọc Sang MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT i DANH MỤC ĐỐI CHIẾU ANH VIỆT iii DANH MỤC BẢNG iv DANH MỤC BIỂU ĐỒ vi DANH MỤC SƠ ĐỒ vii DANH MỤC HÌNH viii ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Lịch sử 1.2 Đặc điểm tiểu cầu 1.2.1 Sự hình thành phát triển tiểu cầu 1.2.2 Cấu trúc chức tiểu cầu liên quan đến miễn dịch 1.3 Giảm tiểu cầu miễn dịch 1.3.1 Định nghĩa 1.3.2 Dịch tễ học 10 1.3.3 Cơ chế bệnh sinh .11 1.3.4 Chẩn đoán 13 1.3.5 Điều trị 17 1.4 Giảm tiểu cầu miễn dịch thứ phát liên quan bệnh lí tự miễn dịch .20 1.4.1 Giảm tiểu cầu miễn dịch thứ phát liên quan lupus ban đỏ hệ thống 20 1.4.2 Diễn tiến thành bệnh lupus ban đỏ hệ thống bệnh nhân giảm tiểu cầu miễn dịch .20 1.5 Xét nghiệm kháng thể kháng nhân .21 1.6 Các nghiên cứu nước 22 1.6.1 Trong nước 22 1.6.2 Ngoài nước 23 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 2.1 Thiết kế nghiên cứu 29 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 29 2.3 Đối tượng nghiên cứu .29 2.3.1 Dân số lấy mẫu: 29 2.3.2 Dân số chọn mẫu 29 2.3.3 Cỡ mẫu nghiên cứu: 30 2.3.4 Một số thuật ngữ, định nghĩa 31 2.4 Các bước tiến hành nghiên cứu 38 2.4.1 Lần nhập viện .38 2.4.2 Điều trị đợt 39 2.4.3 Theo dõi điều trị 39 2.5 Định nghĩa biến số nghiên cứu 39 2.6 Phương pháp thu thập xử lí số liệu 43 2.6.1 Xử lý phân tích số liệu 43 2.6.2 Sơ đồ bước tiến hành nghiên cứu 44 2.7 Vấn đề y đức 46 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 47 3.1 Đặc điểm chung mẫu nghiên cứu .48 3.1.1 Đặc điểm tuổi giới tính 48 3.1.2 Đặc điểm vị trí xuất huyết 49 3.1.3 Đặc điểm mức độ xuất huyết 50 3.1.4 Đặc điểm xét nghiệm tự miễn .51 3.2 So sánh đặc điểm lâm sàng, xét nghiệm hai nhóm ANA dương ANA âm 53 3.2.1 So sánh đặc điểm lâm sàng hai nhóm ANA dương ANA âm 53 3.2.2 So sánh đặc điểm xét nghiệm cơng thức máu lúc nhập viện hai nhóm ANA dương âm 54 3.3 So sánh đặc điểm điều trị tỉ lệ biến cố hai nhóm ANA dương ANA âm 57 3.3.1 Đặc điểm điều trị lần nhập viện 57 3.3.2 Đáp ứng điều trị sớm 59 3.3.3 Đáp ứng điều trị thời gian theo dõi 62 3.3.4 Thời gian đạt đáp ứng 62 3.3.5 Tỉ lệ đáp ứng điều trị 63 3.3.6 Tỉ lệ bệnh nhân chuyển giai đoạn bệnh dai dẳng .64 3.3.7 Tỉ lệ bệnh nhân chuyển giai đoạn bệnh mạn tính .66 CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 67 4.1 Đặc điểm chung mẫu nghiên cứu 67 4.1.1 Đặc điểm tuổi giới tính 67 4.1.2 Đặc điểm vị trí xuất huyết 69 4.1.3 Đặc điểm mức độ xuất huyết 70 4.1.4 Đặc điểm xét nghiệm tự miễn .71 4.2 So sánh đặc điểm lâm sàng xét nghiệm hai nhóm BN ANA dương ANA âm 75 4.2.1 So sánh đặc điểm lâm sàng hai nhóm ANA dương ANA âm 75 4.2.2 So sánh đặc điểm xét nghiệm cơng thức máu lúc nhập viện hai nhóm ANA dương ANA âm 76 4.3 So sánh đặc điểm điều trị hai nhóm ANA dương âm .78 4.3.1 Đặc điểm điều trị lần nhập viện 78 4.3.2 Đáp ứng điều trị sớm 79 4.3.3 Đáp ứng điều trị thời gian theo dõi 81 4.3.4 Thời gian đạt đáp ứng 82 4.3.5 Tỉ lệ đáp ứng điều trị 83 4.3.6 Tỉ lệ chuyển giai đoạn bệnh dai dẳng 83 4.3.7 Tỉ lệ chuyển giai đoạn mạn tính 84 4.4 Hạn chế đề tài nghiên cứu 86 KẾT LUẬN 86 KIẾN NGHỊ .88 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC PHỤ LỤC PHỤ LỤC i DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT TÊN ĐẦY ĐỦ TÊN VIẾT TẮT Tiếng Anh ANA Antinuclear antibodies anti dsDNA Antidouble-stranded-DNA ASH American Society of Hematology CR Complete response Hb Hemoglobin HBsAg Hepatitis B surface antigen HBV Hepatitis B virus HCV Hepatitis C virus HIV Human immunodeficiency virus ITP Immune Thrombocytopenic Purpura IWG International Working Group NR Non response R Response TPO Thrombopoietin ii Tiếng Việt BN Bệnh nhân GTCMD Giảm tiểu cầu miễn dịch LPBĐHT Lupus ban đỏ hệ thống SLTC Số lượng tiểu cầu TC Tiểu cầu XN Xét nghiệm iii DANH MỤC ĐỐI CHIẾU ANH VIỆT Tiếng Anh Tiếng Việt American Society of Hematology Hiệp hội Huyết học Hoa Kỳ antinuclear antibodies Kháng thể kháng nhân antiphospholipid antibodies Kháng thể kháng phospholipid complete response Đáp ứng hoàn toàn erythrocyte sedimentation rate Tỉ lệ hồng cầu lưới ELISA Xét nghiệm miễn dịch hấp thụ liên kết enzym Immune Thrombocytopenic Giảm tiểu cầu miễn dịch Purpura International Working Group Nhóm hành động Quốc tế bệnh giảm tiểu cầu miễn dịch Non response Không đáp ứng điều trị Response Đáp ứng tCR Thời gian đáp ứng hoàn toàn TPO-Ras Đồng vận thụ thể TPO tR Thời gian đáp ứng iv DANH MỤC BẢNG Bảng 1-1: Khuyến cáo đánh giá chẩn đoán giảm tiểu cầu miễn dịch Nhóm hành động Quốc tế bệnh giảm tiểu cầu miễn dịch 2019 14 Bảng 1-2: Chẩn đoán phân biệt giảm tiểu cầu .16 Bảng 1-3: Tóm tắt kết luận nghiên cứu ảnh hưởng ANA nhóm bệnh nhân giảm tiểu cầu miễn dịch người lớn 27 Bảng 2-1: Phân độ mức độ xuất huyết 32 Bảng 2-2: Kết xét nghiệm ANA 36 Bảng 2-3: Định nghĩa biến số nghiên cứu 40 Bảng 3-1: Đặc điểm chung bệnh nhân mẫu nghiên cứu .48 Bảng 3-2: Đặc điểm xét nghiệm tự miễn lúc nhập viện .52 Bảng 3-3: So sánh mức độ xuất huyết mẫu nghiên cứu 54 Bảng 3-4: Các số xét nghiệm công thức máu lúc nhập viện hai nhóm ANA dương âm 55 Bảng 3-5: Đánh giá đáp ứng điều trị lần nhập viện 58 Bảng 3-6: Đặc điểm điều trị lần nhập viện 59 Bảng 3-7: Đánh giá đáp ứng điều trị sớm .60 Bảng 3-8: Yếu tố liên quan đến không đáp ứng điều trị sớm .61 Bảng 3-9: Đáp ứng điều trị thời gian theo dõi 62 Bảng 3-10: Thời gian Đáp ứng điều trị thời gian theo dõi 62 Bảng 3-11: Tỉ lệ bệnh nhân hai nhóm chuyển giai đoạn bệnh dai dẳng .64 Bảng 3-12: Yếu tố liên quan tỉ lệ chuyển bệnh dai dẳng 65 Bảng 3-13: Tỉ lệ bệnh nhân hai nhóm chuyển giai đoạn bệnh mạn tính 66 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh  Nghiên cứu tiến hành bệnh viện Chợ Rẫy Có khoảng 150 bệnh nhân tham gia vào nghiên cứu Những bệnh nhân có chuẩn đốn phù hợp giảm tiểu cầu miễn dịch chẩn đoán  Sau anh/chị ký vào chấp thuận này, thông tin điều trị anh/chị ghi nhận lại vào sở liệu Thông tin dịch tể học tuổi, giới, nghề nghiệp… ghi nhận Bất hiệu quả, biến cố trình điều trị thu thập cách hệ thống chi tiết  Mọi điều trị, định cận lâm sàng anh/chị bác sĩ điều trị định theo phác đồ chuẩn bệnh viện Chúng không đưa thay đổi hay lời khuyến nghị dựa liệu mà thu nhận từ hồ sơ anh/chị  Bất thay đổi kế hoạch điều trị bác sĩ anh/chị thông báo trực tiếp thông tin ghi nhận sở liệu chúng tơi Những lợi ích anh/chị tham gia nghiên cứu Anh/chị khơng có lợi ích trực tiếp từ việc tham gia nghiên cứu này, nhiên, thông tin anh/chị giúp khảo sát đặc điểm lâm sàng việc điều trị tương ứng Từ đó, giúp thay đổi phác đồ bệnh viện dành cho bệnh nhân mắc bệnh lý tương tự Các nguy bất lợi • Do nghiên cứu dựa hồ sơ, tổn hại thể chất nghiên cứu gây hồn tồn khơng có Mọi nguy q trình điều trị khơng khác biệt so với bệnh nhân khơng tham gia vào nghiên cứu, tất nhận chung phác đồ chuẩn bệnh viện Có nguy anh/chị bị số người biết thông tin sức khỏe cá nhân Chúng cố gắng cách ngăn điều xảy mã hóa tên, số hồ sơ anh/chị sở liệu Chúng chia sẻ thơng tin mã hóa thành viên nhóm nghiên cứu để đảm bảo khơng nhận anh/chị Bồi thƣờng/điều trị có tổn thƣơng liên quan đến nghiên cứu: Do nghiên cứu dựa hồ sơ nên không gây tổn thương liên quan đến nghiên cứu chúng tơi khơng bồi thường cho tổn thương q trình điều trị Ngƣời liên hệ Nếu anh/chị có câu hỏi hay mối bận tâm liên quan đến nghiên cứu vào thời điểm Anh/chị liên lạc với nghiên cứu viên sau:  Họ tên: Nguyễn Thị Ngọc Sang, số điện thoại: 0765550460 Sự tự nguyện tham gia • Anh/chị có quyền tự định, không bị ép buộc tham gia Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh • Anh/chị có quyền rút lui thời điểm mà khơng bị ảnh hưởng đến việc điều trị/chăm sóc mà họ đáng hưởng Tính bảo mật • Mọi thơng tin anh/chị giữ bí mật, nghiên cứu viên chịu trách nhiệm lưu trữ Các thơng tin mang tính đính dạng nghiên cứu viên sử dụng cần thiết phải liên lạc trực tiếp với anh/chị, không tiết lộ công bố cho người khác II CHẤP THUẬN THAM GIA NGHIÊN CỨU Tôi đọc hiểu thơng tin đây, có hội xem xét đặt câu hỏi thông tin liên quan đến nội dung nghiên cứu Tơi nói chuyện trực tiếp với nghiên cứu viên trả lời thỏa đáng tất câu hỏi Tôi nhận Bản Thông tin cho người tham gia nghiên cứu chấp thuận tham gia nghiên cứu Tôi tự nguyện đồng ý tham gia Ngƣời tham gia nghiên cứu: Họ tên _ Ngày tháng năm _ Chữ ký Nghiên cứu viên/ngƣời lấy chấp thuận: Tôi, người ký tên đây, xác nhận người tình nguyện tham gia nghiên cứu ký chấp thuận đọc tồn thơng tin đây, thơng tin giải thích cặn kẽ cho anh/chị anh/chị hiểu rõ chất, nguy lợi ích việc anh/chị tham gia vào nghiên cứu Họ tên _ Chữ ký _ Ngày tháng năm _ Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh BẢN THÔNG TIN DÀNH CHO NGƢỜI GIÁM HỘ HỢP PHÁP ĐỒNG Ý CHO NGƢỜI ĐƢỢC GIÁM HỘ TỪ 15 ĐẾN 18 TUỔI VÀ CHẤP THUẬN THAM GIA NGHIÊN CỨU Kính thưa: Ơng/bà Tơi là: NGUYỄN THỊ NGỌC SANG, học viên Bác sĩ nội trú năm thứ chuyên ngành Huyết học – Truyền máu, khóa 2018 – 2021 Đại học Y dược Thành phố Hồ Chí Minh Tơi viết thơng tin gửi đến Ơng/Bà với mong muốn mời Ông/bà người thân ông/bà tham gia nghiên cứu với tên gọi “KHẢO SÁT ĐẶC ĐIỂM LÂM SÀNG, SINH HỌC, ĐÁP ỨNG ĐIỀU TRỊ Ở BỆNH NHÂN GIẢM TIỂU CẦU MIỄN DỊCH NGƢỜI LỚN CÓ XÉT NGHIỆM ANA TẠI BỆNH VIỆN CHỢ RẪY” Nghiên cứu viên chính: BS Nguyễn Thị Ngọc Sang Người hướng dẫn: TS Suzanne Monivong Cheanh Beaupha Đơn vị chủ trì: khoa Y, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Mẫu thơng tin giúp Ông/bà hiểu đầy đủ nghiên cứu trước định chấp thuận tham gia nghiên cứu I.THÔNG TIN VỀ NGHIÊN CỨU Con/cháu/em Ông/Bà đề nghị tham gia vào nghiên cứu quan sát hồi cứu tiến cứu Sự tham gia con/cháu/em Ơng/Bà hồn tồn tự nguyện Nếu Ông/Bà chọn tham gia vào nghiên cứu, Ông/Bà rút khỏi nghiên cứu thời điểm Ông/Bà đề nghị tham gia nghiên cứu con/cháu/em Ơng/Bà bác sĩ chẩn đốn Giảm tiểu cầu miễn dịch Con/cháu/em Ông/Bà điều trị theo phác đồ chuẩn bệnh viện Chúng cần thu thập thông tin người thân Ông/Bà trình điều trị để khảo sát hiệu điều trị mà người thân Ơng/Bà trải qua Nếu Ông/Bà lựa chọn tham gia nghiên cứu này, Ông/Bà yêu cầu ký chấp thuận tham gia nghiên cứu này, để xác nhận nghiên cứu giải thích rõ ràng với Ông/Bà, câu hỏi trả lời Ông/Bà thực mong muốn tham gia Việc tham gia vào nghiên cứu khơng làm thay đổi chăm sóc y khoa mà bác sĩ thực cho người thân Ơng/Bà Mục đích tiến hành nghiên cứu  Mục đích nghiên cứu thu thập thông tin điều trị mà bác sĩ ghi nhận hồ sơ Việc ghi nhận phân tích thông tin giúp cho biết đặc điểm lâm sàng hiệu điều trị giảm tiểu cầu miễn dịch có xét nghiệm ANA Nhờ chúng tơi có chiến lược ngăn ngừa điều trị hiệu tương lai Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh  Nghiên cứu tiến hành bệnh viện Chợ Rẫy Có khoảng 150 bệnh nhân tham gia vào nghiên cứu Những bệnh nhân có chuẩn đốn phù hợp giảm tiểu cầu miễn dịch chẩn đốn  Sau Ơng/Bà ký vào chấp thuận này, thông tin điều trị người thân Ơng/Bà chúng tơi ghi nhận lại vào sở liệu Thông tin dịch tể học tuổi, giới, nghề nghiệp… ghi nhận Bất hiệu quả, biến cố q trình điều trị chúng tơi thu thập cách hệ thống chi tiết  Mọi điều trị, định cận lâm sàng người thân Ông/Bà bác sĩ điều trị định theo phác đồ chuẩn bệnh viện Chúng không đưa thay đổi hay lời khuyến nghị dựa liệu mà thu nhận từ hồ sơ người thân Ông/Bà  Bất thay đổi kế hoạch điều trị bác sĩ người thân Ơng/Bà thơng báo trực tiếp thông tin ghi nhận sở liệu chúng tơi Những lợi ích ngƣời thân Ông/Bà tham gia nghiên cứu Người thân Ơng/Bà khơng có lợi ích trực tiếp từ việc tham gia nghiên cứu này, nhiên, thơng tin người thân Ơng/Bà giúp khảo sát đặc điểm lâm sàng việc điều trị tương ứng Từ đó, giúp thay đổi phác đồ bệnh viện dành cho bệnh nhân mắc bệnh lý tương tự Các nguy bất lợi • Do nghiên cứu mô tả hồi cứu hồ sơ, tổn hại thể chất nghiên cứu gây hồn tồn khơng có Mọi nguy q trình điều trị không khác biệt so với bệnh nhân khơng tham gia vào nghiên cứu, tất nhận chung phác đồ chuẩn bệnh viện Có nguy người thân Ơng/Bà bị số người biết thông tin sức khỏe cá nhân Chúng cố gắng cách ngăn điều xảy mã hóa tên, số hồ sơ người thân Ông/Bà sở liệu Chúng chia sẻ thông tin mã hóa thành viên nhóm nghiên cứu để đảm bảo không nhận người thân Ông/Bà Bồi thƣờng/điều trị có tổn thƣơng liên quan đến nghiên cứu: Do nghiên cứu dựa hồ sơ nên không gây tổn thương liên quan đến nghiên cứu chúng tơi khơng bồi thường cho tổn thương trình điều trị Ngƣời liên hệ Nếu Ơng/Bà có câu hỏi hay mối bận tâm liên quan đến nghiên cứu vào thời điểm Ơng/Bà liên lạc với nghiên cứu viên sau:  Họ tên: Nguyễn Thị Ngọc Sang, số điện thoại: 0765550460 Sự tự nguyện tham gia Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh • Ơng/bà quyền tự định, khơng bị ép buộc tham gia • Ơng/bà có quyền rút lui thời điểm mà không bị ảnh hưởng đến việc điều trị/chăm sóc mà họ đáng hưởng Tính bảo mật • Mọi thơng tin người tham gia giữ bí mật, nghiên cứu viên chịu trách nhiệm lưu trữ Các thơng tin mang tính đính dạng nghiên cứu viên sử dụng cần thiết phải liên lạc trực tiếp với người tham gia, không tiết lộ công bố cho người khác II CHẤP THUẬN THAM GIA NGHIÊN CỨU Tôi đọc hiểu thông tin đây, có hội xem xét đặt câu hỏi thông tin liên quan đến nội dung nghiên cứu Tơi nói chuyện trực tiếp với nghiên cứu viên trả lời thỏa đáng tất câu hỏi Tôi nhận Bản Thông tin cho người tham gia nghiên cứu chấp thuận tham gia nghiên cứu Tôi tự nguyện đồng ý tham gia Chữ ký ngƣời đại diện/giám hộ hợp pháp ngƣời tham gia: Họ tên _ Chữ ký _ Ngày tháng năm _ Ngƣời tham gia nghiên cứu: Họ tên _ Ngày tháng năm _ Chữ ký Nghiên cứu viên/ngƣời lấy chấp thuận: Tôi, người ký tên đây, xác nhận ông/bà ký chấp thuận đọc tồn thơng tin đây, thơng tin giải thích cặn kẽ cho Ơng/Bà người thân ơng/bà Ơng/Bà hiểu rõ chất, nguy lợi ích việc Ông/Bà người thân tham gia vào nghiên cứu Họ tên _ Chữ ký _ Ngày tháng năm _ Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh BẢN THƠNG TIN DÀNH CHO NGƢỜI THAM GIA NGHIÊN CỨU VÀ CHẤP THUẬN THAM GIA NGHIÊN CỨU Kính thưa: Ơng/bà Tơi là: NGUYỄN THỊ NGỌC SANG, học viên Bác sĩ nội trú năm thứ chuyên ngành Huyết học – Truyền máu, khóa 2018 – 2021 Đại học Y dược Thành phố Hồ Chí Minh Tơi viết thơng tin gửi đến Ơng/Bà với mong muốn mời Ông/bà tham gia nghiên cứu với tên gọi “KHẢO SÁT ĐẶC ĐIỂM LÂM SÀNG, SINH HỌC, ĐÁP ỨNG ĐIỀU TRỊ Ở BỆNH NHÂN GIẢM TIỂU CẦU MIỄN DỊCH NGƢỜI LỚN CÓ XÉT NGHIỆM ANA TẠI BỆNH VIỆN CHỢ RẪY” Nghiên cứu viên chính: BS Nguyễn Thị Ngọc Sang Người hướng dẫn: TS Suzanne Monivong Cheanh Beaupha Đơn vị chủ trì: khoa Y, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Mẫu thơng tin giúp Ông/bà hiểu đầy đủ nghiên cứu trước định chấp thuận tham gia nghiên cứu I.THÔNG TIN VỀ NGHIÊN CỨU Ông/Bà đề nghị tham gia vào nghiên cứu quan sát hồi cứu tiến cứu Sự tham gia ông bà hồn tồn tự nguyện Nếu Ơng/Bà chọn tham gia vào nghiên cứu, Ơng/Bà rút khỏi nghiên cứu thời điểm Ông/Bà đề nghị tham gia nghiên cứu Ơng/Bà bác sĩ chẩn đốn Giảm tiểu cầu miễn dịch Ơng/Bà điều trị theo phác đồ chuẩn bệnh viện Chúng tơi cần thu thập thơng tin Ơng/Bà trình điều trị để khảo sát hiệu điều trị mà Ơng/Bà trải qua Nếu Ông/Bà lựa chọn tham gia nghiên cứu này, Ông/Bà yêu cầu ký chấp thuận tham gia nghiên cứu này, để xác nhận nghiên cứu giải thích rõ ràng với Ơng/Bà, câu hỏi trả lời Ông/Bà thực mong muốn tham gia Việc tham gia vào nghiên cứu không làm thay đổi chăm sóc y khoa mà bác sĩ thực cho Ơng/Bà Mục đích tiến hành nghiên cứu  Mục đích nghiên cứu thu thập thông tin điều trị mà bác sĩ Ông/Bà ghi nhận hồ sơ Việc ghi nhận phân tích thơng tin giúp cho biết đặc điểm lâm sàng hiệu điều trị giảm tiểu cầu miễn dịch có xét nghiệm ANA Nhờ chúng tơi có chiến lược ngăn ngừa điều trị hiệu tương lai  Nghiên cứu tiến hành bệnh viện Chợ Rẫy Có khoảng 150 bệnh nhân tham gia vào nghiên cứu Những bệnh nhân có chuẩn đoán phù hợp giảm tiểu cầu miễn dịch chẩn đốn  Sau Ơng/Bà ký vào chấp thuận này, thơng tin điều trị Ơng/Bà ghi nhận lại vào sở liệu Thông tin dịch tể học Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh tuổi, giới, nghề nghiệp… ghi nhận Bất hiệu quả, biến cố q trình điều trị Ơng/Bà thu thập cách hệ thống chi tiết  Mọi điều trị, định cận lâm sàng Ơng/Bà bác sĩ Ơng/Bà định theo phác đồ chuẩn bệnh viện Chúng không đưa thay đổi hay lời khuyến nghị dựa liệu mà thu nhận từ hồ sơ Ông/Bà  Bất thay đổi kế hoạch điều trị bác sĩ Ông/Bà thông báo trực tiếp cho Ông/Bà thông tin ghi nhận sở liệu chúng tơi Những lợi ích Ơng/Bà tham gia nghiên cứu Ơng/Bà khơng có lợi ích trực tiếp từ việc tham gia nghiên cứu này, nhiên, thơng tin Ơng/Bà giúp chúng tơi khảo sát đặc điểm lâm sàng việc điều trị tương ứng Từ đó, giúp thay đổi phác đồ bệnh viện dành cho bệnh nhân mắc bệnh lý tương tự Ông/Bà Các nguy bất lợi Do nghiên cứu mô tả hồi cứu hồ sơ, tổn hại thể chất nghiên cứu gây hồn tồn khơng có Mọi nguy q trình điều trị Ơng/Bà khơng khác biệt so với bệnh nhân khơng tham gia vào nghiên cứu, tất nhận chung phác đồ chuẩn bệnh viện Có nguy Ơng/Bà bị số người biết thông tin sức khỏe cá nhân Ơng/Bà Chúng tơi cố gắng cách ngăn điều xảy mã hóa tên, số hồ sơ Ông/Bà sở liệu Chúng tơi chia sẻ thơng tin mã hóa thành viên nhóm nghiên cứu để đảm bảo khơng nhận nhân thân Ơng/Bà Bồi thƣờng/điều trị có tổn thƣơng liên quan đến nghiên cứu: Do nghiên cứu dựa hồ sơ nên không gây tổn thương liên quan đến nghiên cứu chúng tơi khơng bồi thường cho tổn thương trình điều trị Ngƣời liên hệ Nếu Ông/Bà có câu hỏi hay mối bận tâm liên quan đến nghiên cứu vào thời điểm Ơng/Bà liên lạc với nghiên cứu viên sau:  Họ tên: Nguyễn Thị Ngọc Sang, số điện thoại: 0765550460 Sự tự nguyện tham gia • Ơng/bà có quyền tự định, khơng bị ép buộc tham gia • Ơng/bà có quyền rút lui thời điểm mà không bị ảnh hưởng đến việc điều trị/chăm sóc mà họ đáng hưởng Tính bảo mật Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh • Mọi thơng tin ơng/bà giữ bí mật, nghiên cứu viên chịu trách nhiệm lưu trữ Các thơng tin mang tính đính dạng nghiên cứu viên sử dụng cần thiết phải liên lạc trực tiếp với ông/bà, không tiết lộ công bố cho người khác II CHẤP THUẬN THAM GIA NGHIÊN CỨU Tôi đọc hiểu thơng tin đây, có hội xem xét đặt câu hỏi thông tin liên quan đến nội dung nghiên cứu Tơi nói chuyện trực tiếp với nghiên cứu viên trả lời thỏa đáng tất câu hỏi Tôi nhận Bản Thông tin cho người tham gia nghiên cứu chấp thuận tham gia nghiên cứu Tôi tự nguyện đồng ý tham gia Chữ ký ngƣời tham gia: Họ tên _ Chữ ký _ Ngày tháng năm _ Chữ ký ngƣời làm chứng ngƣời đại diện hợp pháp (nếu áp dụng): Họ tên _ Chữ ký _ Ngày tháng năm _ Chữ ký Nghiên cứu viên/ngƣời lấy chấp thuận: Tôi, người ký tên đây, xác nhận ông/bà ký chấp thuận đọc tồn thơng tin đây, thơng tin giải thích cặn kẽ cho Ông/Bà Ông/Bà hiểu rõ chất, nguy lợi ích việc Ơng/Bà tham gia vào nghiên cứu Họ tên _ Chữ ký _ Ngày tháng năm _ Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh QUI TRÌNH XÉT NGHIỆM KHÁNG THỂ KHÁNG NHÂN CHUẨN BỊ MẪU BỆNH PHẨM: - Mẫu máu XN: Mẫu máu đông VẬT TƢ- TRANG THIẾT BỊ- THUỐC THỬ: 2.1 Thuốc thử: - Nước cất - Bộ hóa chất XN:  Khay vi giếng chứa kháng thể: khay có 12 thanh, giếng bẻ rời, phủ lên lớp hỗn hợp kháng nguyên (đã nhắc đến trên)  Enzyme liên hợp (Conjugate): có màu đỏ, chứa Horseradish Peroxidase liên kết kháng thể dê đa dòng kháng với IgG IgM người, 5% BSA, 10 nM đệm Tris pH 6.8+/- 0.1, 0.1% kathon GC 0.02% gentamicine Sulphate chất bảo quản  Chứng dƣơng (CONTROL +): có màu xanh lá, huyết dương tính với kháng thể IgG ANA, 2% casein, 10 mM đệm Na-citrate pH 6.0 +/-0.1, 0.1% Tween 20, 10% huyết thai nhi bê, 0.09% Nazide 0.1% Kathon GC để giữ  Chứng âm (CONTROL -): có màu vàng nhạt trong, huyết âm tính với kháng thể IgG ANA, 2% casein, 10 mM đệm Na-citrate pH 6.0 +/-0.1, 0.1% Tween 20, 10% huyết thai nhi bê (Fetal Calf Serum - FCS), 0.09% Nazide 0.1% Kathon GC để bảo quản  Dung dịch pha lỗng mẫu (DILSPE): có màu xanh tím, chứa 2% casein, 10 mM đệm Na-citrate pH 6.0 + / -0.1, 0.2% Tween 20, 10% huyết thai nhi bê (Fetal Calf Serum - FCS), 0,09% Na-azide 0,1% Kathon GC chất bảo quản Được sử dụng cho pha loãng mẫu  Chất tạo TMB (SUBS TMB): không màu, Chứa 50 mM citrate-đệm phosphate đệm pH 3.5-3.8, 4% dimethylSulphoxide, 0.03% tetramethylbenzidine (hay TMB) 0.02% hydrogen peroxide H2O2 Lưu ý: cần lưu trữ tránh ánh sáng nhạy ánh sáng cường độ mạnh  Dung dịch rửa đậm đặc (WASHBUF 20X): 20x nồng độ dung dịch, pha loãng 60ml WASHBUF 20X với 1200ml ED Sau pha loãng, dung dịch rửa chứa 10 mM đệm phosphate pH 7,0 + / -0.2, 0,05% Tween 20 0,1% Kathon GC  Dung dịch ngừng phản ứng (H2SO4 0.3M): không màu, chứa 0.3M H2SO4 2.2 Thiết bị - dụng cụ: - Máy ly tâm - Máy đọc kết - Máy in - Giấy A4, đồng hồ hẹn Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh - Pipet nhựa - Đầu tip (nhỏ mẫu hóa chất) - Giấy thấm, bút quang NGUYÊN TẮC, PHƢƠNG PHÁP VÀ ĐẶC TÍNH CỦA XÉT NGHIỆM: 3.1 NGUYÊN TẮC- PHƢƠNG PHÁP: ELISA phương pháp hấp thụ miễn dịch liên kết với enzyme dùng để phát kháng thể kháng nhân có huyết bệnh nhân Xét nghiệm hấp thụ miễn dịch kết hợp enzyme vững dựa nguyên tắc sandwich Các giếng phủ hỗn hợp kháng nguyên Các kháng thể đặc hiệu mẫu bệnh phẩm liên kết với giếng có chứa kháng nguyên phát dung dịch kháng thể kết hợp men enzyme đặc hiệu cho kháng thể IgG người Sau phản ứng với dung dịch sinh màu, cường độ màu phát triển tương ứng với lượng kháng thể đặc hiệu IgG phát Kết mẫu tính cách sử dụng giá trị ngưỡng (Cutt-off) Sử dụng máy đo quang phổ để đọc độ màu giếng bước sóng 450nm 3.2 ĐẶC TÍNH: nghiên cứu nhà sản xuất/kết xác nhận giá trị sử dụng phương pháp/test kit độ đúng, độ xác, độ khơng đảm bảo đo…của xét nghiệm QUY TRÌNH: Kiểm tra hành Đạt - Kiểm tra phiếu định - Kiểm tra tube máu: tube huyết 2ml - Kiểm tra phù hợp tube máu phiếu định - Ghi vào sổ xét nghiệm Tiến hành quy trình xét nghiệm Đạt Khơng Đo mẫu, phân tích đánh giá kết Đạt Ghi nhận kết Trả kết Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn đạt Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Bƣớc Tiến trình thực Trách nhiệm Ghi Biểu mẫu - Chuẩn bị mẫu sinh phẩm: Đưa sinh phẩm nhiệt độ phòng 30 phút trước xét nghiệm Pha nước rửa với nước cất theo tỷ lệ 1/2 Ly tâm tube máu đông bệnh nhân Xếp mẫu theo thứ tự Chuẩn bị giếng thuốc xét nghiệm Kiểm tra thay túi rác máy Immunomat đầy Kiểm tra châm thêm bình nước rửa, bình nước cất cần Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn KTV xét nghiệm Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh I Quy trình thực xét nghiệm máy tự động Khởi động máy tính máy Immunomat, chọn chương trình Immunomat hình Destop Đặt lọ hóa chất vào rack hóa chất theo vị trí: - Chứng âm - Chứng dương - Dung dịch pha loãng mẫu (Dilspe) - Dung dịch đệm(Conjugate) - Chất tạo (SUBS TMB) - Dung dịch dừng phản ứng (H2SO4 0.3M) Đưa rack hóa chất vào máy (khi đèn đỏ nháy chuyển vị trí, máy chấp nhận rack hóa chất) Kiểm tra mẫu máu, mở nắp đặt mẫu vào rack mẫu, xoay phần mã code mẫu bên Đưa rack mẫu vào máy (khi đèn đỏ nháy chuyển vị trí được), hình máy tính hiển thị mã code mẫu đưa vào - Kiểm tra số lượng mẫu rack số lượng mẫu hiển thị có trùng khớp không, thiếu kiểm lại mẫu thiếu, nhập quét mã code vào vị trí tương ứng - Chọn tơ đen tồn mẫu cần chạy, chọn định xét nghiệm tương ứng máy (00701Diapro_ANA_Screen) Chọn Close để hồn thành Mở New Worklist, hình hiển thị khung Lot Specific_ANA_Screen, chọn OK Chuẩn bị plate có giếng tương ứng với số lượng mẫu cần thực giếng chứng (2 chứng âm, chứng dương) đặt plate vào máy Chọn PLAY, hình hiển thị khung LOAD - Kiểm tra vị trí nước rửa nước cất - Chọn Open Reagent Layout, chọn ana.rea - Kiểm tra số lượng giếng plate pha loãng đầu tip 300ul 1100ul - Chọn OK để hoàn thành Đặt tên cho plate đo mẫu (Plate ID): ANA-ddmmyy Chọn OK để hoàn thành, máy tiến hành bước thực nhỏ mẫu Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn KTV xét nghiệm Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh II Quy trình thực xét nghiệm đo máy Immunomat: Pha loãng mẫu 1:101 lần vào ống pha lỗng có vạch chia ống (ví dụ: 1000µl dung dịch pha lỗng mẫu + 10µl mẫu) Nhỏ 100µl chứng âm vào giếng liên tiếp, 100µl chứng dương vào giếng sau 100µl mẫu pha lỗng vào giếng xác định Ủ khay vi giếng 45 phút 37°C Lưu ý quan trọng: giếng phải đậy với dán, xét nghiệm thực tay Rửa khay vi giếng lần/350ul cho giếng Nhỏ 100µl Conjugate vào giếng, Ủ khay vi giếng 45 phút 37°C Rửa khay vi giếng lần/350ul cho giếng Hút 100µl chất TMB vào giếng Sau ủ khay nhiệt độ phòng (18-24°C) tối 15 phút Nhỏ 100µl axit sulfuric để ngừng phản ứng enzyme phản ứng giếng 10 Đo cường độ màu dung dịch giếng, KTV xét bước sóng 450nm (đọc) bước sóng 620-630nm nghiệm (tham chiếu) vịng 20 phút Sơ đồ xét nghiệm: Máy tự động Phƣơng pháp Vận hành Immunonat Mẫu pha loãng tỷ lệ 1:101 chất 100µl chứng Ủ lần 45 phút Nhiệt độ +37oC Bước rửa 4-5 lần Enzyme liên kết 100 µl Ủ lần 45 phút Nhiệt độ +37oC Bước rửa 4-5 lần TMB/H2O2 100µl Ủ lần 15 phút Nhiệt độ Nhiệt độ phịng Axit Sulphuric 100µl OD đọc 450nm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh  Lưu hồ sơ: - Ngày thực xét nghiệm - Tên test kit sử dụng - Số Lot hạn sử dụng thuốc - Người thực xét nghiệm - Người giám sát ký kết KTV xét nghiệm => Lưu vào sổ kết DIỄN GIẢI VÀ GHI NHẬN KẾT QUẢ: 5.1 Kiểm tra kết Trường hợp kết không phù hợp cần xem xét lại bước tiến hành quy trình 5.2 Phân tích biện luận kết quả: - Giá trị ngưỡng (COV): COV= Negative control + 0.250 - Điều kiện: * Chứng âm: 0.050 – 0.070 OD450nm Giá trị trung bình: 0.060 OD 450nm Thấp 0.200 – chấp nhận * Chứng dương: 2.350 OD450nm Cao 0.750 – chấp nhận * Chứng ngưỡng = 0.060 + 0.250 = 0.310 5.3 Giải thích kết Kết xét nghiệm giải thích theo tỷ số giá trị ngưỡng OD450nm mẫu (hoặc S/Co) theo bảng sau: S/Co < 0.8 0.8 - 1.1 > 1.1 Giải thích Âm tính Khơng xác định Dương tính - Những mẫu thử có giá trị hấp thu lớn COV xem huyết có kháng thể kháng nhân (dương tính) - Những mẫu thử có giá trị hấp thu nhỏ COV xem huyết khơng có kháng thể kháng nhân (âm tính) - Những mẫu thử có giá trị hấp thu nằm khoảng COV ± 20% chưa xác định khuyến cáo bệnh nhân làm lại xét nghiệm sau 30 ngày NGUYÊN NHÂN SAI LẦM: - Trong giai đoạn rửa giếng sau giai đoạn ủ với men, rửa khơng nhỏ dung dịch phát triển màu vào, mẫu thử cho kết sai dẫn đến dương tính giả Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh - Mẫu máu đơng lạnh chứa hạt fibrin tủa sau làm tan gây sai sót kết - Khơng tn thủ quy trình xét nghiệm dẫn đến sai lầm vế kết (nhầm lẫn mẫu, thời gian ủ - rửa - đo) TÀI LIỆU THAM KHẢO: - Quy trình dựa tài liệu cơng ty Dia.Pro Diagnostic Bioprobes Srl - Tài liệu ANA Screening IgG - Autoantibody to a nuclear antigen in proliferating cells K Miyachi, MJ Fritzler, EM Tan - The Journal of Immunology, 1978 - Am Assoc Immnol - Autoantibodies to nuclear antigens (ANA): their immunobiology and medicine.EM Tan - Advances in immunology, 1982 - ncbi.nlm.nih.gov - Antinuclear antibody with distinct specificity for polymyositis JF Wolfe, E Adelstein, GC Sharp - Journal of Clinical Investigation, 1977 pubmedcentral.nih.gov Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn