Khả sát điều kiên nuôi cấy vi khuẩn nitrobacter trong nồi lên men 10l

Khả sát điều kiên nuôi cấy vi khuẩn nitrobacter trong nồi lên men 10l

Tổng quan tài liệu 1. Giới thiệu vi khuẩn Nitrobacter 2. Ứng dụng vi khuẩn Nitrobacter 2.1 Chu trình nitơ trong nước 2.1.1 Quá trình amôn hóa 2.1.2 Quá trình nitrat hóa 2.4 Quá trình phản nitrat hóa 2.2 Vấn đề ô nhiễm môi trường nước 2.2.1. Nguyên nhân gây ô nhiễm môi trường ao nuôi(bỏ) 2.2.1.1 Nguồn gây ô nhiễm NH 3 và NO 2 trong ao nuôi(bỏ) 2.2.1.2 Quá trình phân giải urê 2.2.1.3 Quá trình amon hóa protein 2.2.1.4 Các chất thải khác trong ao nuôi 2.2.2 Tác hại của NH 3 , NO 2 trong ao nuôi(trong môi trường nước) 2.3. Ứng dụng vi khuẩn nitrat hóa 3. Công nghệ lên men 2.1. Khái niệm về lên men 2.2. Nguyên lý chung 2.3. Các phương pháp lên men 2.3.1 Lên men bề mặt 2.3.2. Lên men chìm 4. Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình nuôi cấy thu sinh khối vi khuẩn 4.1. Yếu tố dinh dưỡng. 4.1.1 Nguồn cacbon 4.1.2 Nguồn thức ăn nitơ 4.1.3 Chất khoáng 4.2 Yếu tố môi trường 4.2.1 Nhiệt độ 4.2.2 pH 4.2.3 Oxi 4.3 Nguồn gốc chủng 4.4 Tỉ lệ giống 4.5 Thiết bị lên men 4.6 Tốc độ khuấy 4.7 Lưu lượng thông khí VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1. Vật liệu 2.1.1 Chủng giống 2.1.2 Môi trường 2.1.2.1 Môi trường Winogradsky 2.1.2.2 Môi trường Hottinger 2.1.3 Hóa chất 2.1.3.1 Nước muối sinh lý 2.1.3.2 Thuốc thử Griess I 2.1.3.3 Thuốc thử Griess II 2.1.3.4 Thuốc nhuộm Gram 2.1.4 Dụng cụ 2.1.5 Thiết bị 2.2Phương pháp nghiên cứu(in hoa) 2.2.1 Phương pháp nuôi cấy vi khuẩn Nitrobacter sp. 2.2.2 Phương pháp làm tiêu bản quan sát hình thái vi khuẩn và khuẩn lạc(đổi vào mục2.1.1) 2.2.3 Phương pháp xác định thời gian thế hệ của vi khuẩn(bỏ) 2.2.4 Phương pháp kiểm tra vô trùng 2.2.5 Phương pháp kiểm tra độ sống 2.2.6. Phương pháp kiểm tra OD canh cấy trong quá trình lên men. 2.2.7 Phương pháp xây dựng đường cong sinh trưởng của vi khuẩn trong điều kiện nuôi cấy tĩnh. 2.2.8 Xác định các điều kiện thích hợp cho lên men vi khuẩn Nitrobacter sp. 2.2.9 Phương pháp kiểm tra khả năng Nitrate hóa của vi khuẩn Nitrobacter sp.(bỏ) 2.2.10 Phương pháp xử lý số liệu Phần 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Hình thái tế bào, khuẩn lạc và tính chất nuôi cấy của chủng Nitrobacter sp. 3.1.1. Tế bào 3.1.2 Khuẩn lạc và tính chất nuôi cấy 3.1.3 Thời gian thế hệ của vi khuẩn Nitrobacter sp.(bỏ) 3.2 Kết quả định tính vi khuẩn Nitrobacter sp 3.3 Kết quả khảo sát sự sinh trưởng của Nitrobacter sp. trong nồi lên men 10L 3.3.1 Kết quả nuôi cấy Nitrobacter sp trên môi trường Winogradsky. 3.3.1.1 Loạt 1 (W 1) 3.3.2.2 Loạt 2 (W2) 3.3.2 Kết quả nuôi cấy Nitrobacter trên môi trường Hottinger 3.3.2.1 Loạt 1 (H1)( .(bỏ) 3.3.2.2 Loạt 2 (H2) .(bỏ) 3.3.3 Đường cong sinh trưởng cùa vi khuẩn Nitrobacter sp. 4. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 1. Kết luận 1.1 Các đặc tính sinh học.(bỏ) 1.2 Các thông số nuôi cấy vi khuẩn Nitrobacter sp. trên nồi lên men 10 lít.(bỏ) 2. Kiến nghị PHẦN 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu vi khuẩn Nitrobacter Vi khuẩn Nitrobater thuộc nhóm vi khuẩn Nitrat hóa. Những vi khuẩn thuộc nhóm này có tế bào đa hình dạng: hình que, hình bầu dục, hình cầu hoặc dạng xoắn. Chúng là vi khuẩn gram âm, có thể di động với những tiên mao ở đầu cực hoặc ở bên hông hoặc không di động. Hầu hết những loài thuộc nhóm vi khuẩn nitrat hóa là những loài hiếu khí. Một số vi khuẩn thuộc trường hợp ngoại lệ có thể phát triển bằng cách hô hấp yếm khí. Nhiều nghiên cứu cho thấy một số vi khuẩn thuộc nhóm nitrat hóa có khả năng oxi hóa nitrit thành nitrat, những vi khuẩn này dinh dưỡng bằng cách oxi hóa hợp chất vô cơ, trong đó quan trọng nhất là oxi hóa hợp chất nitrit thành nitrat. Năng lượng tạo ra trong quá trình oxi hóa được sử dụng để cung cấp cho quá trình cố định CO 2 trong chu trình Calvin. Đặc biệt những Nitrobacter do sở hữu loại enzyme ribulose 1,5 diphosphate carboxylase nên quá trình cố định CO 2 diễn ra mạnh mẽ hơn. Nhóm Nitrobacter gồm những loài vi khuẩn ôn đới(bỏ) (ưa nhiệt độ trung bình), biên độ nhiệt từ 5-40 0 C, nhiệt dộ tối ưu kảng 28 và biên độ pH từ 5,8- 8,5 với giá trị tối thích 7,6-7,8 [15]. Vi khuẩn nitrat hóa phân bố rộng khắp, trong đất, nước ngọt, nước lợ, nước biển, hệ thống nước thải và trên bề mặt những tảng đá xây dựng lâu năm [21]. Do có khả năng oxi hóa các hợp chất vô cơ đặc biệt là oxi hóa nitrit thành nitrat để thu năng lượng, nhóm vi khuẩn nitrat có vai trò quan trọng trong vòng tuần hoàn nitơ, chúng sử dụng hệ enzyme đặc hiệu để thực hiện quá trình chuyển hóa theo phương trình tổng quát như sau: NO 2 + O 2 → NO 3 Một số giống vi khuẩn vi khuẩn nitrat hóa thường gặp như: Nitrobacter, Nitrospina, Nitrococcus, Nitrospira,… • Giống Nitrobacter Tế bào Nitrobacter có nhiều hình dạng khác nhau, hình que, hình quả lê, hình bầu dục… Chúng là những vi khuẩn gram âm, hiếu khí bắt buộc, không di động hoặc di động bằng tiên mao ở đầu cực hoặc ở bên hông tế bào. Biên độ nhiệt phát triển từ 5-40 0 C, pH thích hợp 6,5- 8,5 [15]. Về mặt dinh dưỡng, nitrit là nguồn năng lượng chính, năng lượng tạo ra trong phản ứng nitrit thành nitrat được sử dụng cho quá trình cố định CO 2 của tế bào. Khi có măt cả nitrit và các hợp chất hữu cơ, tế bào thường có sự đổi pha trong quá trình phát triển. Trước tiên, nitrit được sử dụng và sau đó là giai đoạn ức chế khi chất hữu cơ bị oxi hóa. Tuy nhiên, sự phát triển nhờ hợp chất hữu cơ thường diễn ra chậm hơn [14]. Do phần lớn năng lượng được sử dụng cho quá trình cố định CO 2 nên phần sử dụng cho quá trình sinh sản rất thấp dẫn đến thời gian thể hệ của vi khuẩn Nitrobacter khá dài, chúng cần có thời gian tích lũy đủ năng lượng để nhân đôi. Dưới điều kiện tối ưu, cứ 13 giờ Nitrobacter mới phân chia một lần và trong điều kiện thực tế, khoảng thời gian này kéo dài 15-24 giờ [15]. Tất cả các loài thuộc giống Nitrobacter đều không có bào tử. Một số loài được biêt đến như N.vulgaris, N.hambugensis, N.winogradskyi… 1.2Ứng dụng vi khuẩn Nitrobacter 1.2.1 Chu trình nitơ trong nước Chu trình nitơ về cơ bản cũng giống như các chu trình khí khác, được sinh vật sản xuất hấp thụ và đồng hóa rồi được chu chuyển qua các nhóm tiêu thụ, cuối cùng bị sinh vật phân hủy trả lại cho môi trường. Chu trình nitơ bao gồm nhiều công đoạn theo từng bước: cố định đạm, amon hóa, nitrit hóa, nitrat hóa và phản nitrat hóa [2]. Chu trình nitơ trong ao nuôi là quá trình các chất thải của cá và các chất mùn hữu cơ khác được chuyển hóa từ NH 3 hoặc NH 4 thành nitrit và nitrat. Sau đó, nitrat được chuyển thành nitơ tự do (ở dạng khí) nhờ hoạt động của thực vật và các vi khuẩn phản nitrat hóa. Hoạt động cuả nhóm vi khuẩn nitrat hóa là quan trọng nhất của chu trình nitơ [14]. Nếu quá trình này không được duy trì, cá và các vi sinh vật khác cư trú trong ao sẽ gần như không thể sống. Nguyên nhân là do NH 3 có tính độc cao ngay cả ở nồng độ rất thấp (NH 4 không có hại nhưng ở pH cao nó nhanh chóng chuyển thành NH 3 ). Nitrit cũng gây độc cho cá và các vi sinh vật khác, tuy nhiên độc tính của nó thấp hơn nhiều so với NH 3 . Vì vậy, việc xây dựng vòng tuần hoàn nitơ trong ao nuôi thủy sản là rất quan trọng [24]. Hình 1: Chu trình nitơ trong nước 1.3 2.1.1 Quá trình amôn hóa Vi sinh vật dị dưỡng sử dụng chất hữu cơ của quá trình mùn hóa như một nguồn cacbon của chúng và qua đó, nitơ trong các hợp chất hữu cơ chứa nitơ từ thực vật hay động vật được chuyển thành NH 3 . Quá trình này còn được gọi là quá trình khoáng hóa, là kết quả của quá trình chuyển hóa thức ăn [14]. 2.1.2 Quá trình nitrat hóa Nitrat hóa là quá trình oxi hóa acmoniac và muối amon để hình thành axit nitro và axit nitric, qua đó vi sinh vật thu năng lượng cần thiết cho hoạt động sống của mình. Nitrat hóa xảy ra theo 2 giai đoạn do 2 nhóm vi khuẩn khác nhau thực hiện [1]. Vi khuẩn nitrit hóa như Nitrosomonas, Nitrosocystis, Nitrosospira phân hủy acmoniac thành chất ít độc hơn là nitrit [16]. Trong suốt quá trình này, vi khuẩn nitrit hóa lấy các phân tử hidro của acmoniac như một nguồn năng lượng [17]. Sau đó các phân tử oxi kết hợp với các phân tử nitơ không còn hydro để tạo thành dạng NO theo phản ứng: 2NH 3 + 3O 2 → 2HNO 2 + H 2 O + 158Cal Quá trình này xảy ra theo nhiều giai đoạn trung gian khác nhau và rất phức tạp. Có giả thuyết cho rằng sản phẩm trung gian có thể là Hydroxilmin (NH 2 OH), nhưng giả thuyết này không tồn tại lâu. Sau này người ta cho rằng sản phẩm trung gian có thể là HNO. Trong mỗi giai đoạn đều tạo ra một năng lượng nhất định. Năng lượng này được vi khuẩn sử dụng trong quá trình phát triển của chúng [9]. Giai đoạn nitrat hóa được thực hiện bởi một nhóm vi khuẩn khác, điển hình là các loài thuộc giống Nitrobacter, các giống khác có thể gặp như Nitrococus, Nitrosystis, Nitrospira.Chúng sử dụng enzyme nitrit oxidase xúc tác cho quá trình chuyển hóa nitrit thành nitrat theo phản ứng: 2HNO 2 → HNO 3 +48Cal Dạng nitrat tạo ra có thể được thực vật sử dụng như một nguồn dinh dưỡng hoặc có thể bị bẻ gãy liên kết tạo thành khí N 2 nhờ hoạt động của một vài loài vi khuẩn kị khí [10]. Cả hai quá trình trên đều dẫn tới giải phóng năng lượng. Vi khuẩn nitrat hóa sẽ sử dụng năng lượng này để tiến hành phản ứng khử CO 2 thành hợp chất hữu cơ, song song với các phản ứng oxi hóa NH 3 và HNO 2 . Quá trình có thể theo phản ứng sau [15]: CO 2 + 4H + + X Cal → HCHO + H 2 O 2.4 Quá trình phản nitrat hóa Phản nitrat hóa là quá trình chuyển hóa nitrit thành N 2 đồng thời oxi hóa các chất hữu cơ như đường, rượu, axit hữu cơ thành CO 2 và H 2 O [11]. Năng lượng sinh ra khi oxi hóa cơ chất được vi sinh vật sử dụng trong các hoạt động sống của chúng. Trong chu trình nitơ, sự phản nitrat hóa giúp cân bằng các hợp chất ni tơ bằng cách chuyển ni tơ đã bị cố định vào trong sinh quyển. phần lớn vi khuẩn phản nitrat hóa là vi khuẩn dị dưỡng, chúng sử dụng cacbon hữu cơ, hydro, hydrosunfit như một chất nhường điện tử và nitrat là chất nhận điện tử. Chất nhường điện tử bị oxi hóa thành CO 2 , H 2 O hoặc sunfat, đồng thời nitrat bị khử thành N 2 theo phản ứng: 6NO + 5CH 3 OH → 3N 2 + 5CO 2 + 7H 2 O + 6OH - Quá trình phản nitrat có thể xảy ra trong điều kiện kị khí lẫn hiếu khí, nhưng đặc biệt mạnh trong điều kiện kị khí [11]. Do vậy, quả trình này thường gặp trong đất yếm khí và trong đáy sâu của các hồ, biển…không có oxi hoặc giàu các chất hữu cơ đang phân hủy. Các vi sinh vật thực hiện quá trình này phân bố rất rộng rãi trong tự nhiên. Phần lớn chúng thuộc loại dị dưỡng hóa năng hữu cơ, kị khí tùy nghi gồm một số giống như: Pseudomonas, Achromobacter, Bacillus, Clostridium, Micrococcus… [13]. 2.2 Vấn đề ô nhiễm môi trường nước Môi trường ao nuôi là yếu tố quan trọng quyết định năng suất nuôi trồng thủy sản. Hiện nay, việc làm sạch và giữ sạch môi trường ao nuôi vẫn còn nhiều bất cập khiến người nuôi tôm gặp rất nhiều rủi ro. Phần bùn ao,nơi các chất thải tích tụ trong quá trình nuôi là môi trường lý tưởng cho các vi trùng và kí sinh trùng gây bệnh phát triển. Mỗi năm, lượng bùn tích tụ ở đáy a nuôi tôm thâm canh hình thành lớp bùn dày 10-15cm, là một khối lượng lớn chất khô giàu hữu cơ, bao gồm sinh khối vi sinh vật, xác động thực vật thủy sinh. Khi các chất hữu cơ này phân hủy sẽ làm giảm lượng oxi hòa tan và sinh các chất độc hại cho thủy sản như NH 3 , CH 4 , H 2 S… [18] Kết quả phân tích chỉ tiêu hóa lý của bùn ao nuôi tôm công nghiệp tại một số địa phương của Viện Công nghệ môi trường đã cho thấy tổng chất hữu cơ của bùn ao công nghiệp khá cao, đặc biệt trong ẫu bùn ao nuôi tôm của các tỉnh phía nam, nơi có thời gian nuôi công nghiệp vài năm nay. Bên cạnh đó, số lượng vi sinh vật hoại sinh hiếu khí tổng số không nhiều ở hầu hết các mẫu phân tích. Đây là hậu quả của việc sử dụng không hợp lý các thuốc kháng sinh và chất diệt khuẩn [19] 2.2.1. Nguyên nhân gây ô nhiễm môi trường ao nuôi 2.2.1.1 Nguồn gây ô nhiễm NH 3 và NO 2 trong ao nuôi Trong nước và trong đất luôn tồn tại nhều xác động thực vật, xác động thực vật chứa rất nhiều hợp chất hữu cơ có mặt nitơ.Các hợp chất hữu cơ thường không được sử dụng trong quá trình trao đổi chất ở thực vật, thực vật chỉ sử dụng các hợp chất vô cơ ở dạng hòa tan. Do đó,các hợp chất hữu cơ được thải vào môi trường nước nếu không được vi sinh vật phân giải thành các hợp chất vô cơ hòa tan sẽ không được thực vật sử dụng. Như vậy, vi sinh vật vừa có khả năng làm sạch môi trường ô nhiễm bởi các hợp chất chứa ni tơ, vừa như một tác nhân trung gian chuyển hóa các hợp chất khó tiêu thành các hợp chất dễ tiêu cho thực vật sử dụng. Các hợp chất hữu cơ trong nước còn bị phân hủy bởi các động vật khác [21]. 2.2.1.2 Quá trình phân giải urê Urê là sản phẩm quá trình trao đổi chất của người và động vật. Urê chủ yếu có trong nước tiểu, ngoài ra ure còn được đưa vào môi trường nước từ việc sử dụng phân bón hóa học. Urê không được sử dụng trực tiếp bởi thực vật mà chúng còn được chuyển hóa thành NH 3 hay muối amon nhờ các vi sinh vật có trong đất và nước. Vi khuẩn tham gia quá trình chuyển hóa gồm Sarcuna hanseni, Bacillus freudenreichui, Sporocinaurea…. Cơ chế chuyển hóa của chúng rất đơn giản, được tiến hành dưới tác động của enzyme urease: CO 2 + H 2 O → CO + NH 3 → (NH 4 ) 2 CO 3 Tuy nhiên, muối amon cacbonat là hợp chất không bền nên rất dễ chuyển hóa nếu không được hấp thụ ngay [5]: (NH 4 ) 2 CO 3 → NH 3 +CO 2 +H 2 O 2.2.1.3 Quá trình amon hóa protein [...]... thể tích dịch lên men 1.6 Thiết bị lên men Trong công nghệ lên men vi sinh vật, thiết bị lên men là một yếu tố vô cùng quan trọng Trong quá trình nuôi cấy, vi sinh vật sống trong điều kiện vô trùng tuyệt đối nhưng vẫn được cung cấp đầy đủ oxy hòa tan và môi trường nuôi cấy cho vi sinh vật hô hấp Trong lên men công nghiệp, thiết bị lên men gọi là Fermentor (nòi lên men) , đây là thiết bị lên men có dung... vân tròn đồng tâm Hình 6: Khuẩn lạc vi khuẩn Nitrobacter sp 3.1.3 Thời gian thế hệ của vi khuẩn Nitrobacter sp Lên men vi khuẩn Nitrobacter sp và kiểm tra mật độ vi khuẩn tại các thời điểm khác nhau ta tính được thời gian thế hệ của vi khuẩn này Thời gian thế hệ của vi khuẩn Nitrobacter sp khoảng 65 phút 3.2 Kết quả định tính vi khuẩn Nitrobacter sp Sau 24 giờ nuôi cấy vi khuẩn Nitrobacter sp trên môi... cấp 1 trong bình tam giác chứa 150ml môi trường lỏng, nuôi ở nhiệt độ 320C trong 24 giờ (máy lắc) - Bổ sung giống đã nuôi trong môi trường lỏng vào thể tích môi trường lớn hơn trong bình tam giác, nuôi ở 320C trong 24 giờ • Sản xuất thu sinh khối trong nồi lên men - Sau khi nhân giống, tiến hành lên men trong nồi lên men 10L với tỷ lệ giống bổ sung vào môi trường lên men là 10% - Sau 25 giờ nuôi cấy. .. thái tế bào, khuẩn lạc và tính chất nuôi cấy của chủng Nitrobacter sp 3.1.1 Tế bào Tế bào vi khuẩn Nitrobacter sp hình que, kích thước tương đối đồng đều, thường liên kết thành từng chuỗi ngắn Vi khuẩn Nitrobacter sp là vi khuẩn Gram âm Hình 5: Hình thái vi khuẩn Nitrobacter sp quan sát dưới kính hiển vi quang học 3.1.2 Khuẩn lạc và tính chất nuôi cấy Sau 6-8 giờ nuôi cấy trên môi trường dinh dưỡng lỏng,... con người trong quá trình nuôi cấy vi sinh vật Vi c nuôi cấy vi sinh vật với qui mô lớn từ khoảng 10 lít đến hàn ngàn lit được gọi là lên men công nghiệp (industrial fermentation) Công nghiệp lên men đã hình thành từ cuối thế kỷ XIX và phát triển mạnh vào nửa cuối thế kỷ XX với hàng lọat thương phẩm 2.2 Nguyên lý chung Quá trình lên men công nghiệp đều được thực hiện trong nồi lên men Fermentor hay... nuôi cấy tĩnh Nuôi cấy vi khuẩn Nitrobacter sp và kiểm tra mật độ vi khuẩn trong dịch lên men vào các thời điểm khác nhau sau đó vẽ đường đồ thị biểu diễn sự thay đổi của mật độ vi khuẩn trong dịch lên men theo thời gian ta được đường cong sinh trưởng của vi khuẩn Nitrobacter sp xác định mật độ tế bào tại mỗi thời điểm bằng phương pháp đếm khuẩn lạc Tiến hành: pha loãng mẫu canh khuẩn đến các độ pha... cấy trong quá trình lên men Thực hiện nuôi cấy vi khuẩn Nitrobacter, lấy mẫu và đo pH vào các thời điểm 0 giờ, 3 giờ, 6 giờ, 10 giờ, 14 giờ, 18 giờ, 21 giờ, 23 giờ, 24 giờ, 25 giờ, 26 giờ Lấy khoảng 9ml canh khuẩn Nitrobacter sp cho vào ống nghiệm và tiến hành đo pH bằng máy đo pH và ghi lại các thông số 2.2.7 Phương pháp xây dựng đường cong sinh trưởng của vi khuẩn trong điều kiện nuôi cấy tĩnh Nuôi. .. ống đong Que cấy vô trùng, đèn cồn, pipete, lam kính 2.1.5 Thiết bị Tủ cấy vô trùng Laminar- Aura V130 Ehret Tủ lạnh HITACHI Tủ ấm Memmert Tủ sấy Memmert Nồi lên men 10l t - Chemap Fermenter Nồi hấp thanh trùng Hyrayama Cân phân tích Máy đo OD Máy đo pH Kính hiển vi quang học 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp nuôi cấy vi khuẩn Nitrobacter sp Hình 4: Nồi lên men Chủng giống Nitrobacter sp... dưỡng, và hạn chế chất độc trong quá trình chuyển hóa lên men Khuấy trộn có thể làm ảnh hưởng đến tỉ lệ trao đổi oxi trong môi trường lên men và làm tăng nhiệt độ do sự ma sát Sự khuấy trộn quá mức sẽ làm ảnh hưởng đến tế bào vi sinh vật, do đó cần điều chỉnh hợp lý để không ảnh hưởng xấu đến tế bào vi sinh vật Nitrobacter sp là vi khuẩn hiếu khí ví vậy trong thời gian nuôi cấy cần điều chỉnh tốc độ khuấy... thành sau khi đã đạt đến mức tối đa Một quá trình lên men cổ điển được tiến hành theo các bước sau: Chế tạo môi trường Khử trùng môi trường Giống vi sinh vật Nhân giống (cấp 1, cấp Lên men 2…) Kiểm tra các thông số và sản phẩm Thu hồi sản phẩm Hình 2: Sơ đồ mô tả quá trình lên men 2.3 Các phương pháp lên men 2.3.1 Lên men bề mặt Lên men bề mặt là nuôi cấy vi sinh vật trên bề mặt rắn xốp như cám, gạo, ngô, . canh cấy trong quá trình lên men. 2.2.7 Phương pháp xây dựng đường cong sinh trưởng của vi khuẩn trong điều kiện nuôi cấy tĩnh. 2.2.8 Xác định các điều kiện thích hợp cho lên men vi khuẩn Nitrobacter. NO 2 trong ao nuôi( trong môi trường nước) 2.3. Ứng dụng vi khuẩn nitrat hóa 3. Công nghệ lên men 2.1. Khái niệm về lên men 2.2. Nguyên lý chung 2.3. Các phương pháp lên men 2.3.1 Lên men bề. đa. Một quá trình lên men cổ điển được tiến hành theo các bước sau: Hình 2: Sơ đồ mô tả quá trình lên men 2.3. Các phương pháp lên men 2.3.1 Lên men bề mặt Lên men bề mặt là nuôi cấy vi sinh vật trên