Định lượng vitamin a bằng phương pháp HPLC

Đinh lượng vitamin A bằng pp HPLC

TRƯỜNG ĐH CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM Tp.HCM PHÂN TÍCH HÓA LÝ HIỆN ĐẠI XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG VITAMIN A BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC Gvhd: Cô Vũ Hoàng Yến Nhóm sinh viên thực hiện  Lê Phạm Thảo Uyên MSSV:2022110403  Phan Thanh Tâm Mssv:2022110172  Nguyễn Thị Dưỡng 2022110312 Lý do chọn đề tài • Vai trò của vitamin A đối với sức khỏe con người. • Một số phương pháp định lượng vitamin A Sơ lược về vitamin A • Vitamin A tồn tại dưới hai dạng: • Vitamin A1 C 20 H 30 O • Vitamin A2 Tính chất vật lý • Vitamin A tan trong dầu và các dung môi hữu cơ,dễ bị oxi hóa khi tiếp xúc với oxi ngoài không khí,tuy nhiên lại khá bền với acid và bazo (điều kiện không tiếp xúc với oxi) • Vitamin A 1 có quang phổ hấp thu tối đa ở bước sóng 610 đến 620 nm,vitamin A 2 có bước sóng 692 đến 696 nmứng dụng phương pháp đo quang để xác định hàm lượng vitamin A. Vai trò Vai trò Tăng trưởng Tăng trưởng Thị giác Thị giác Bảo vệ biểu mô Bảo vệ biểu mô Miễn dịch Miễn dịch Tăng đề kháng,phòng ngừa ung thư Tăng đề kháng,phòng ngừa ung thư Khô da Viêm loét dạ dày Đục thuỷ tinh thể Triệu chứng khi thiếu hụt Vitamin A Nhu cầu vitamin cho cơ thể • Nhu cầu hàng ngày được khuyến cáo (RDI) về vitamin A theo nhu cầu tham chiếu ăn uống của Hoa Kỳ là: • 900 microgam (3.000 IU) đối với nam giới • 700 microgam (2.300 IU) đối với nữ giới • Giới hạn trên – 3.000 microgam (10.000 IU). Một số phương pháp xác định hàm lượng vitamin A • Phương pháp Sắc kí lỏng hiệu năng cao • Phương pháp so màu • Phương pháp hóa học [...]... lượng c a mẫu thử, tính bằng gam (g) TÀI LIỆU THAM KHẢO • • • • • Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN:7081-1:2002 S a bột gầy,xác định hàm lượng vitamin A Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 8674:2011 Thức ăn chăn nuôi - xác định hàm lượng vitamin a - phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN:6400:1998 ISO 707:1997 Hướng dẫn lấy mẫu s a Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN đối với s a bột http://ods.od.nih.gov/factsheets/vitamina.asp... thay thế c a dịch chiết mẫu và dung dịch chuẩn • • Thủy phân all-trans-retinyl axetat để hiệu chuẩn • Dùng buret 5 ml với vạch chia 0,02 ml, chuyển 2,5 ml ± 0,02 ml dung dịch này sang bình cầu 150 ml • • • • • • • Chuẩn bị dung dịch c a all-trans-retinyl axetat trong etanol sao cho 1 ml ch a khoảng 15 000 IU vitamin A Thêm 20 ml etanol, 1 ml dung dịch kali hydroxit và 5 ml dung dịch natri ascorbat... pha loãng bằng nước đến 1 lít • Etanol, w(C2H5OH) = 95% (theo thể tích), hoặc dùng cồn đã metyl h a công nghiệp tương đương • 2-propanol (C3H7OH) • 0 0 Dầu nhẹ, có điểm sôi trong khoảng từ 40 C đến 60 C • Lượng cặn còn lại sau khi bay hơi phải nhỏ hơn 20 mg/l • Chất chuẩn vitamin A • All-trans-retinyl axetat, vitamin A axetat (C22H32O2) 328,5 g/mol, có độ tinh khiết ít nhất 90% • All-trans-retinol, ancol... c a 2-propanol để có được nồng độ retinol theo yêu cầu và trộn Lọc dung dịch chuẩn qua bộ lọc màng nếu cần Biểu thị kết quả • Tính hàm lượng vitamin A c a mẫu thử, bằng công thức sau:   WA = 20 000 x • • Trong đó: • • c là nồng độ retinol c a dịch chiết, tính bằng đơn vị quốc tế trên mililit (IU/ml); wA là hàm lượng vitamin A c a mẫu thử, tính bằng đơn vị quốc tế trên kilogam (IU/kg); m là khối lượng. .. phân cực Pha động trong HPLC • Pha động có độ phân cực thấp(xyclopentan, n-pentan, n-heptan, n-hexan, 2chloropropan, cacbondisulfua (CS2), chlorobutan, CCl4, toluene) • Pha động có độ phân cực cao: nước(MeOH, ACN) Detector trong HPLC • • • Detector quang phổ hấp thụ phân tử UV-VIS: Detector huỳnh quang RF: Detector độ dẫn PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH Nguyên tắc • Mẫu được xà phòng h a với dung dịch kali hydroxit... r a qua bộ lọc vào bình cầu làm bay hơi R a bộ lọc tiếp hai lần, mỗi lần dùng 25 ml dầu nhẹ và cho nước r a vào bình làm bay hơi Làm bay hơi dịch chiết dầu nhẹ đến khô dưới chân không ở nhiệt độ không quá 40 0C Khôi phục lại áp suất khí quyển bằng cách nạp khí trơ Sắc ký lỏng hiệu năng cao • • • • • • • H a tan cặn bằng một lượng tối thiểu 2-propanol và chuyển định lượng sang bình định mức 20 ml R a. .. và chuyển lượng ch a trong bình sang phễu chiết Tráng bình cầu bằng 50 ml nước tiếp theo là 25 ml etanol cho nước tráng sang phễu chiết Chiết pha nước bằng một phần 80 ml dầu nhẹ và sau đó chiết tiếp hai lần mỗi lần 50 ml dầu nhẹ Gộp tất cả các dịch chiết bằng dầu nhẹ, sau đó r a hai lần mỗi lần 50 ml nước Thêm 2 g natri sulfat khan Chuyển dịch chiết dầu nhẹ sang bình định mức 250 ml và pha loãng đến... ancol vitamin A (C20H30O), 286,5 g/mol, có độ tinh khiết ít nhất 90% • Metanol, dùng cho HPLC • Pha động dùng cho sắc ký lỏng • Trộn metanol với nước theo tỷ lệ 770:30 (theo thể tích) • Lọc qua bộ lọc màng nếu cần • Natri sulfat (Na2SO4), dạng khan Cách tiến hành Yêu cầu chung • Vì vitamin A nhạy với bức xạ tia cực tím và không khí, nên cần thực hiện tất cả các thao tác nhanh tránh ánh sáng huỳnh quang... dịch kali hydroxit trong etanol và vitamin A được tách chiết trong dầu nhẹ Loại bỏ dầu nhẹ bằng cách cho bay hơi và phần cặn được h a tan trong 2-propanol Nồng độ vitamin A trong dịch chiết 2propanol được xác định bằng sắc ký lỏng pha đảo dưới các điều kiện cho pic đơn lẻ đối với tất cả các đồng phân retinol Thiết bị • Hệ thống sắc ký lỏng khối phổ khối phổ LC/MS/MS c a Thermo bao gồm: bộ phận bơm dung... chung về phương pháp HPLC Pha tĩnh trong HPLC • Sắc ký pha thường: _pha tĩnh có bề mặt là các chất phân cực _pha động:các dung môi hữu cơ không phân cực như tách các chất không phân cực hay ít phân cực • Sắc ký pha ngược: _pha tĩnh là các silica đã được ankyl hoá, không phân cực, loại thông dụng nhất là –C 18H37 _pha động phân cực: nước, methanol, axetonitril tách các chất có độ phân cực rất a dạng: . tài • Vai trò c a vitamin A đối với sức khỏe con người. • Một số phương pháp định lượng vitamin A Sơ lược về vitamin A • Vitamin A tồn tại dưới hai dạng: • Vitamin A1 C 20 H 30 O • Vitamin A2 Tính. Một số phương pháp xác định hàm lượng vitamin A • Phương pháp Sắc kí lỏng hiệu năng cao • Phương pháp so màu • Phương pháp h a học Nguyên tắc chung về phương pháp HPLC Pha tĩnh trong HPLC • Sắc. oxi) • Vitamin A 1 có quang phổ hấp thu tối a ở bước sóng 610 đến 620 nm ,vitamin A 2 có bước sóng 692 đến 696 nmứng dụng phương pháp đo quang để xác định hàm lượng vitamin A. Vai trò Vai trò Tăng trưởng Tăng