Nghiên cứu hoá học và hoạt tính sinh học của một số cây thuốc dân tộc việt nam nhằm tạo sản phẩm thuốc có giá trị cao phục vụ cuộc sống

Do đó, việc điều tra nghiên cứu về hoá học và hoạt tính sinh học của các loài cây thuốc có giá trị cao nhằm đặt cơ sở khoa học cho việc phát triển các dược phẩm và sử dụng chúng một cách

mét sè c©y thuèc d©n téc ViÖt Nam nh»m t¹o s¶n phÈm thuèc cã gi¸ trÞ cao phôc vô

Mục lục

Trang

3.3.1 Các hoạt chất từ cây chổi xuể (Baeckea frutescens) 57

3.3.2 Các hoạt chất từ cây mỡ Phú Thọ (Manglietia phuthoensis) 62

3.3.3 Các hoạt chất từ cây cúc gai Silybum marianum (L.) Gaertn 69

3.3.4 Các hoạt chất từ cây bạch thược Paeonia lactiflora Pall

(Paeoniaceae)

75

3.3.5 Các hoạt chất từ cây bách bệnh (Eurycoma longifolia Jack) 78

3.3.6 Các hoạt chất từ cây Ôrô nước (Acanthus ilicifolius L.) 83

3.3.7 Các hoạt chất từ cây Hoàng liên ô rô Mahonia nepalensis DC (M

Annamica Gagnep.)

86

3.3.8 Các hoạt chất từ cây mâm xôi (Rubus alceaefolius Poir.,) 88

3.3.9 Các hoạt chất từ quả cây bồ kết (Gleditschia australis Hemsl) 93

4.2 Xác định cấu trúc hóa học và đánh giá htsh của các hợp chất

97

4.2.2 Các hợp chất tách chiết từ cây mỡ phú thọ 139

4.2.4 Các hợp chất tách chiết từ cây bạch thược 212

4.2.7 Các hợp chất tách chiết từ cây hoàng liên ôrô 290

4.5 Nghiên cứu an toàn và tác dụng chống viêm loét dạ dày của chế phẩm PG1

Thông tin tóm tắt về nhiệm vụ

1 Tên nhiệm vụ: Nghiên cứu hoá học và hoạt tính sinh học của một số cây thuốc dân tộc Việt Nam nhằm tạo sản phẩm thuốc có giá trị cao phục vụ cuộc sống

Phytochemical and Biological studies of Vietnamese plants for the development of value healthcare products

high-2 Mã số: 18MHhigh-2

3 Thời gian thực hiện: Từ tháng 4/2006 đến tháng 11/2008)

4 Cơ quan thực hiện:

Phía Việt Nam:

Viện Hoá học các Hợp chất thiên nhiên

Địa chỉ: 18 Hoàng Quốc Việt, Cầu Giấy, Hà Nội

Điện thoại: 84-4-8363375

Fax: 84-4-7564390

Email: daoco@hn.vnn.vn

Phía Italia:

Trường Đại học tổng hợp Pisa, Italia

Địa chỉ: Khoa Sinh hoá Hữu cơ và Hoá Dược, Trường Đại học Pisa

Via Bonanno, 33, I-56126 Pisa, Italy

Phía Italia:

Department of Bio-Organic Chemistry and Bio-pharmaceutics, Pisa University

6 Mục tiêu của đề tài:

- Đánh giá được tiềm năng của một số cây thuốc dân tộc Việt Nam theo hướng hoạt tính chống oxi hoá, gây độc tế bào và kháng sinh thông qua sàng lọc hoạt tính sinh học

- Tìm kiếm được một số hợp chất có hoạt tính sinh học cao theo mô hình nghiên cứu hoá học theo định hướng hoạt tính sinh học nhằm tạo chế phẩm thuốc chữa bệnh phục

vụ cuộc sống

- Đào tạo cán bộ trong lĩnh vực hoá hợp chất thiên nhiên

7 Danh s¸ch c¸n bé tham gia

Häc hµm häc vÞ Chuyªn m«n

Phần I Tổng quan tài liệu

Trải suốt lịch sử nhân loại, thực vật, động vật và vi sinh vật trên đất liền cũng như dưới biển đã trở thành một nguồn không thể thiếu của các sản phẩm tự nhiên sử dụng làm thuốc Một phần quan trọng của các sản phẩm bắt nguồn từ con đường trao đổi thứ cấp có vai trò như là các tác nhân bảo vệ chống lại các con đường gây bệnh (như côn trùng, nấm hay vi khuẩn) hay các phân tử điều tiết sự phát triển (các hợp chất dạng hoocmôn kích thích hay kìm hãm sự phân chia tế bào và sự phát triển hình thái) Tác dụng chữa bệnh của cây cỏ

là do các hợp chất tự nhiên có ở trong chúng quyết định Do đó, nói tới nguồn tài nguyên thực vật làm thuốc phong phú trên đất nước ta cũng là nói tới khả năng sinh tổng hợp, chuyển hóa và tích lũy các hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học của nguồn gen thực vật

Đã có một thời, các sản phẩm hóa dược chiếm ưu thế trên thị trường Còn các cây thuốc, bài thuốc dân tộc có lúc chỉ được quan tâm rất ít hoặc gần như không được coi trọng Tuy nhiên, sau nhiều năm sử dụng, một số sản phẩm thuốc có nguồn gốc tổng hợp đã bộc

lộ những nhược điểm như gây ra những tai biến hoặc các tác dụng phụ có hại về lâu dài

đối với sức khỏe con người mà phải sau hàng chục năm mới phát hiện ra

Ngày nay, các hợp chất có nguồn gốc thiên nhiên được dùng làm thuốc chữa bệnh

đã và đang được các nhà khoa học trong và ngoài nước quan tâm do tính ít độc và khả năng dung nạp tốt của chúng với cơ thể sống Các hợp chất thiên nhiên từ thực vật cũng như các sinh vật khác rất phong phú về mặt cấu trúc hóa học và thể hiện nhiều hoạt tính đáng quan tâm như: kháng sinh, kháng viêm, chống ôxy hóa, chống ung thư, kìm hãm HIV, điều hòa miễn dịch, chống sốt rét Đây là nguồn nguyên liệu lý tưởng để nghiên cứu, phát triển các dược phẩm, thuốc mới chữa các bệnh hiểm nghèo, các chất bảo quản thực phẩm Theo

đánh giá của Tổ chức Y tế thế giới (WHO) thì có tới 80% dân số thế giới sử dụng cây thuốc cho việc chăm sóc sức khỏe ban đầu Nhiều tài liệu đã cho rằng, 80-90% dân số vùng nông thôn của các nước nghèo, các nước đang phát triển lấy cây cỏ là nguồn thuốc chữa bệnh chủ yếu Theo dự đoán, dân số thế giới sẽ đạt 10 tỷ người vào nửa cuối thế kỷ 21 Với sự gia tăng dân số khổng lồ, nhu cầu sử dụng hiệu quả các phương pháp chăm sóc sức khỏe cộng đồng ngày càng là một thách thức lớn đối với nhân loại Cùng với sự cạn kiệt của các nhiên liệu tự nhiên như than đá, dầu mỏ, việc sử dụng các dược phẩm tổng hợp cũng sẽ gặp rất nhiều khó khăn Bên cạnh đó, việc phát sinh các loại bệnh mới cũng như sự kháng thuốc của các nhân tố viêm nhiễm cũng là một thách thức lớn cần giải quyết Hướng đi phù hợp giải quyết các vấn đề trên có lẽ là phát triển các dược phẩm mới có nguồn gốc thực - động vật phục vụ cho việc chăm sóc sức khỏe và kéo dài tuổi thọ con người Theo các tài liệu thống kê hiện nay, có tới trên 50% các loại thuốc đã và đang được sử dụng trên thế giới có nguồn gốc từ thực vật Rất nhiều biệt dược ở các nước công nghiệp đều phải nhập nguyên liệu thực vật từ các nước nhiệt đới [5]

Thảo dược ngày nay được sử dụng chủ yếu ở 2 dạng: Một là trong hỗn hợp các thành phần khác nhau (hỗn hợp tinh dầu, dịch chiết, dịch cô, chưng cất…) và hai là các hoạt chất đơn lẻ Các hoạt chất đơn lẻ được cho là các thành phần có hoạt tính chính trong thảo dược, chúng thể hiện hoạt tính rất cao, đặc hiệu, yêu cầu liều dùng và cách sử dụng chính xác Ngược lại, việc sử dụng các dịch chiết, hỗn hợp thường được áp dụng cho các thảo dược thể hiện dược tính thấp hoặc hoạt chất chủ yếu của chúng chưa được phát hiện Nhiều hoạt chất từ cây cỏ đã và đang được ứng dụng là mặt hàng làm thuốc và được quan

tâm sản xuất ở nhiều nước như reserpin từ cây ba gạc (Rawolfia serpantina (L.) Benth ex Kurz.), vinblastin từ cây dừa cạn (Catharathus roseus (L.) D.Don.), quinidin, quinin từ cây canh ki na (Cinchona spp.), diosgenin từ cây củ mài (Dioscorea deltoidea Wall ex

Kunth) Gần đây, nhiều hoạt chất sinh học có tác dụng chữa trị các bệnh hiểm nghèo (chống ung thư, chống HIV, tăng cường hệ miễn dịch của cơ thể ) đã được phát hiện từ

cây cỏ như taxol, 10-deacetyl baccatin từ loài thông đỏ (Taxus spp.), cepharanthin từ bình vôi hoa đầu (Stephania cepharantha Hayata), (+)-calanoid A và (-)-calanoid B từ các loài

mù u (Calophyllum lanigerum Miq., C teysmanii Miq.), baicalin từ cây thuẫn baican

(Scutellaria baicalensis Georgi), các nhóm ent-labdan, diterpene glucoside,

dehydroandrographolid succinic acid monoester và các dẫn xuất từ loài xuyên tâm liên

(Andrographis paniculata (Burm.f.) Wallich ex Nees), alternanthin, α-spinasterol, β- spinasterol từ một loài trong chi rau rệu (Alternanthera spp.), các nhóm chất curcumin từ chi nghệ (Curcuma L.), hợp chất trichosanthin từ loài qua lâu (Trichosanthes kirilowii

Maxim) và rất nhiều hợp chất thiên nhiên khác có trong nhiều loài thực vật [5]

Lãnh thổ Việt Nam nằm trong vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa Có tới 3/4 diện tích của cả nước là rừng núi trùng điệp, địa hình chia cắt nên điều kiện khí hậu cũng rất đa dạng, có nhiều tiểu vùng khí hậu khá đặc trưng Đất đai của cả nước đều thể hiện tính chất nhiệt đới ẩm điển hình, rất phức tạp, rất đa dạng về loại hình, về phân bố và về chất lượng Những yếu tố đó tạo nên những điều kiện sinh thái, những thảm thực vật nhiệt đới rậm, ẩm, thường xanh, hoặc thưa, nửa rụng lá và cả các thảm thực vật mang tính cận nhiệt đới ở các khu vực núi cao Theo ước tính, Việt Nam có khoảng gần 13000 loài thực vật bậc cao có mạch (chiếm khoảng 5% tổng số loài thực vật bậc cao đã biết trên thế giới và khoảng 25%

số loài thực vật bậc cao đã biết ở châu á) trong đó có khoảng hơn 4000 loài được sử dụng làm thuốc

Đất nước ta đã có lịch sử lâu đời sử dụng cây cỏ tự nhiên để chữa bệnh cho con người Từ thời Văn Lang dựng nước, cha ông ta đã biết dùng trầu, gừng và rượu Đến thời

kỳ An Dương Vương, người ta đã biết dùng tên tẩm độc trong săn bắn và chiến đấu Trải qua thời kỳ 1000 năm Bắc thuộc, việc sử dụng thuốc cổ truyền Trung Quốc trong chữa bệnh đã trở nên phổ biến ở nước ta Danh y Tuệ Tĩnh, người viết cuốn “Nam dược thần diệu” và “Thập tam phương gia giảm”, đã liệt kê 580 cây thuốc và 3932 bài thuốc dân tộc

ông cũng chính là người đã khơi gợi ý tưởng “Dùng thuốc Việt để chữa cho người Việt”

Đến thời kỳ 1720-1791, Hải Thượng Lãn ông đã biên soạn bộ Bách khoa thư về Y học cổ truyền Việt Nam “Hải Thượng Y Tông Tâm Lĩnh” Công trình của ông là sự đúc rút kinh nghiệm, tri thức về sử dụng cây cỏ để chữa bệnh và chăm sóc sức khoẻ từ xa xưa của dân tộc ta Trải qua một thời kỳ dài không được sử dụng rộng rãi do sự du nhập của Tây dược, ngày nay y học dân tộc đã tìm lại vị trí của mình trong điều trị và chăm sóc sức khoẻ người dân Đặc biệt, với sự hỗ trợ của các phương pháp nghiên cứu mới, tiên tiến và xu thế “Quay

về với tự nhiên”, y học cổ truyền nay đã và đang được áp dụng rộng rãi bênh cạnh y học hiện đại [3-6]

Đến nay, theo những thống kê ban đầu, đã có 39813 bài thuốc và phương thuốc cổ truyền ở nước ta Đây chính là kho tàng tri thức vô giá cần được bảo tồn, khai thác và ứng dụng trong đời sống, phục vụ cho công tác bảo vệ, chăm sóc sức khỏe cộng đồng.Với truyền thống sử dụng thuốc dân tộc từ lâu năm, Việt Nam đã thực hiện việc nghiên cứu áp dụng y học cổ truyền vào hệ thống y học hiên đại từ những năm 1950 Toàn quốc có 03 Viện nghiên cứu y học cổ truyền, 45 bệnh viện y học dân tộc, 242 bệnh viện có sử dụng thuốc dân tộc trong điều trị bệnh và khoảng hơn 30.000 thầy thuốc hành nghề y học cổ truyền ở khắp nơi Những nghiên cứu gần đây cho thấy hầu hết các công ty dược phẩm đều

sử dụng nguồn nguyên liệu tự nhiên để sản xuất thuốc và có khoảng 60% người dân được hỏi cho biết họ lựa chọn thuốc dân tộc như là lựa chọn hàng đầu trong phòng chữa bệnh [3-6]

Việt Nam, với lợi thế nguồn tài nguyên thực vật phong phú, với hơn 4000 loài thực vật được sử dụng trong y học cổ truyền đang thu hút được sự quan tâm của các nhà khoa học trong nước và trên thế giới Do đó, việc điều tra nghiên cứu về hoá học và hoạt tính sinh học của các loài cây thuốc có giá trị cao nhằm đặt cơ sở khoa học cho việc phát triển các dược phẩm và sử dụng chúng một cách hợp lý, có hiệu quả có một tầm quan trọng đặc biệt

Thông qua chương trình Dự án này, chúng tôi đã sàng lọc hoạt tính sinh học theo các hướng kháng sinh, chống ôxi hóa và độc tế bào của 102 loài thực vật Việt Nam Kết quả là đã lựa chọn được 9 loài có triển vọng cả về hoạt tính sinh học và nguồn dược liệu để

tiến hành nghiên cứu hóa học theo hoạt tính sinh học, đó là các cây chổi xuể (Baeckea

frutescens), mỡ Phú Thọ (Manglietia phuthoensis), cúc gai (Silybum marianum), ô rô

nước Acanthus ilicifolius, bạch thược (Paeonia lactiflora), mẫu đơn (Paeonia suffruticosa), mâm xôi (Rubus alceaefolius) và hoàng liên ô rô (Mahonia nepalensis) Dưới

đây là một số nghiên cứu tổng quan các nghiên cứu đã được tiến hành trên thế giới về các cây thuốc đã được lựa chọn

1 Cây chổi xuể (Baeckea frutescens)

Chổi xuể (Baeckea frutescens L.) là một loài cây nhỏ thuộc họ Sim (Myrtaceae)

Cây thường mọc thành bụi, cao khoảng 0,5-2m, thân mềm, phân cành nhiều, phân nhánh từ gốc, có vỏ màu nâu, mùi thơm Lá mọc đối, hình sợi hẹp, không có cuống, nhẵn bóng, phiến có tuyến mờ nâu, chỉ có một gân giữa Hoa nhỏ, màu trắng, mọc riêng lẻ ở kẽ lá, lá bắc rất nhỏ, rụng sớm; nụ hoa hình chóp ngược; ống đài chia 4-5 thuỳ hình tam giác hơi nhọn đầu; cánh hoa tròn, rời nhau; nhị 8 - 10 có chỉ nhị ngắn; bầu dưới, 3 ô, rất nhiều noãn Quả nang, mở theo đường nứt ngang, hạt có cạnh Mùa hoa quả vào tháng 4-6 [3],[6]

Cây chổi xuể - Baeckea frutescens L

Phân bố và sinh thái

Các đại diện của chi Baeckea L chỉ thấy phân bố ở vùng nhiệt đới châu á và châu

Đại Dương Cây chổi xuể phân bố rải rác ở một số nơi thuộc Campuchia, Thái Lan, ấn Độ,

đảo Hải Nam của Trung Quốc và phân bố rộng rãi ở các vùng đồng bằng, trung du Bắc bộ

và Trung bộ ở Việt Nam Chổi xuể là loại cây ưa sáng, chịu hạn tốt, thường mọc trên các

đồi đất khô cằn Nguồn chổi xuể ở Việt Nam nhìn chung rất dồi dào [3],[6]

Công dụng

Lá cho vào chum đựng đậu xanh để trừ mối, mọt và để vào trong tủ quần áo để trừ nhậy cắn Chổi xuể có vị đắng, tính hàn, có tác dụng khư ứ, chỉ thống, thông lâm lợi tiểu và sát khuẩn Chổi xuể được dùng để chữa đau bụng, cảm sốt nhức đầu, sổ mũi, thấp khớp, vàng da, sởi Cũng được dùng để chữa chảy máu cam, lở ngứa và đi ngoài ra máu

Hoa và lá chổi xuể chữa kinh nguyệt không đều, ăn uống khó tiêu Phụ nữ sau khi

đẻ uống nước sắc chổi xuể để ăn ngon cơm, chóng đói Nước sắc đặc cây chổi xuể dùng để ngâm rửa chữa nấm lở ngứa ở kẽ chân Tinh dầu được chế biến thành dầu xoa, rượu chổi xuể dùng xoa bóp chữa tê thấp, cảm cúm ở Trung Quốc, cây chổi xuể được ủ rượu để chữa sốt rét Tuy nhiên chổi xuể không được sử dụng cho phụ nữ có thai [3],[6]

Các nghiên cứu về thành phần hoá học và hoạt tính sinh học

Các bộ phận của cây chổi xuể chứa tinh dầu nhiều hơn ở lá Theo Đỗ Tất Lợi, toàn cây chổi xuể thu hái ở Quảng Bình, Bắc Cạn và Thái Nguyên có hàm lượng tinh dầu trong cây tươi là 0,5-0,7%, trong lá khô từ 1-3%

Tinh dầu chổi xuể có màu vàng nhạt, mùi thơm dễ chịu Thành phần tinh dầu chổi xuể ở Đông Triều gồm 15% cineol, 35% +α-thuyen, và α-pinen, 4% linonen, 14% ylangen

Ngoài ra tinh dầu chổi xuể còn chứa α-terpineol, linalool, humulen, fenchol, baeckeol, borneol, artranscarveol, myrtenal, d-carvone, α-copane, ocidentalol guaiazulence, blemol, nerol, thymol, calamenene và δ-cardinol [3]

Một số công trình nghiên cứu nước ngoài đã thông báo về thành phần hoá học của cây chổi xuể, trong đó chủ yếu là các hợp chất thuộc lớp flavonoid

O

O O

OH

O O

BF 4, C 30 H 32 O 6 [7]

O

O O

OH

O O

BF 5, C 30 H 32 O 6 [7]

O

O O

OH O O

BF 6 [7]

OH HO

(ư)-Clovanediol [8]

O

O O

BF 2 [11]

O

O OH

O

OH

4-chromanone [10]

2,5-Dihydroxy-7-methoxy-2,6-dimethyl-O O

OH

4-chromanone [10]

O

OH

6-methyl-4-chromanone [10]

2,5-Dihydroxy-2-isopropyl-7-methoxy-O

O OH

H 3 CO

5-Hydroxy-2-isopropyl-7-methoxy-4H-1-benzopyran-4-one [10] Công thức phân tử: C 13 H 14 O 4

O

O OH

O

5-Hydroxy-2-isopropyl-7-methoxy-6-methylchromone [10]

O OH

O

O

methylchromone [10]

OH

6-C-β-D-Glucopyranosyl-5,7-dihydroxy-2-O

O OH

HO O HO OH O O

OH OH

HO

OH OH OH

isopropylchromone [12] 2-isopropylchromone;

2'-O-(3,4,5-trihydroxybenzoyl) [12]

2-isopropylchromone [12]

8-C-β-D-Glucopyranosyl-5,7-dihydroxy-O

O OH

methylpropylidene)-3- methoxy-2,4,4-trimethyl-2- cyclopenten-1-one [9]

methoxy-4-chromanone [10]

2,5-Dihydroxy-2-isopropyl-7-Theo Hwang và cộng sự, dịch chiết MeOH của chổi xuể có tác dụng kháng vi

khuẩn Streptococcus mutans [13]

2 Cây mỡ Phú Thọ (Manglietia phuthoensis) [3, 4, 6]

Mỡ Phú Thọ (manglietia phuthoensis), thuộc họ Mộc Lan (Ngọc Lan, Dạ Hợp), đại

mộc không lông, vỏ nâu xám, lá có cuống dài 2cm, phiến xoan thuôn ngược, to 17x6 cm,

đầu tà đáy nhọn, không lông, màu nâu; hai mặt gần như một màu hay mặt trên nâu đen, gân phụ 13-15 cặp, mịn Hoa to ở chót nhánh, cánh hoa cao 4.5cm, tiểu nhụy nhiều, nhụy cái cao 2cm Manh nang xoan cao 2cm, đơm thành khối cao 10cm, cứng Mùa hoa tháng 4-5, mùa quả tháng 7-9

Cây mỡ Phú Thọ -m anglietia phuthoensis

Phân bố, sinh thái

Cây mỡ Phú Thọ (manglietia phuthoensis Dandy ex Gagnep) thuộc họ Mộc Lan (Ngọc Lan, Dạ hợp) Magnoliaceae cũng như một số loài khác thuộc chi Magnolia (Manglietia), là một trong những loài cây có hoa lâu đời nhất trên thế giới, từng sống suốt

thời đại khủng long Phân bố ở nhiều nơi như châu á, châu Âu, Bắc Mỹ Tại Việt Nam gồm khoảng 9 loài, chủ yếu là cây gỗ mọc dải dác trong các rừng nguyên sinh và thứ sinh, tâp trung ở Lào Cai, Yên Bái, Tuyên Quang, Phú Thọ, Hà Tây, Vĩnh Phúc Với nhiều tên gọi: Giổi, Vàng Tâm, Mỡ

Theo Phạm Hoàng Hộ thì họ Mộc Lan có khoảng 13 chi, 218 loài, đa số là các cây

có lá xanh quanh năm chủ yếu trồng ở ôn đới bán cầu Bắc, rất phổ biến tại Hoa Kỳ

Manglietia cho hoa rất đẹp, thơm và có màu sắc thay đổi tùy loài từ màu trắng đến hồng,

đỏ, đỏ đậm và từ vàng nhạt, vàng chanh đến vàng tươi Nhiều cây được trồng làm hoa cảnh

rất nổi tiếng như M grandiflora hoa lớn, màu trắng rất thơm M coco là loại cây bụi, cánh hoa lúc non hơi xanh sau thành trắng, hoa rất thơm, nở quanh năm M sieboloii nguồn gốc

từ Nhật, hoa màu trắng, mùi hương ngọt ngào, rất được ưa chuộng tại các tiểu bang Tây

Bắc-Hoa Kỳ M denudata trồng tại các sân chùa Trung Hoa, cánh hoa màu vàng xanh khi

mới nở, sau đó nhạt dần chuyển sang màu trắng, biểu tượng cho sự tinh khiết M acuminata, M stellata đều rất đẹp, hoa thơm ngọt ngào, rất được ưa chuộng tại mỹ Mộc

Lan được trồng để lấy bóng mát, gỗ của nó được dùng để đóng những canô lớn và đồ đạc nội thất Hoa được cất lấy để chế tạo nước hoa Nụ hoa được sắc lên, pha uống như một loại thuốc bổ Người Trung Quốc sử dụng hoa mộc Lan để trị viêm xoang và làm thông mũi

Dược lý học và ứng dụng trong y học cổ truyền của Manglietia

Các hoạt chất chính trong vỏ cây M officinalis là những tinh dầu và alkaloid Thành

phần tinh dầu (1%) chính (thuộc loại những hợp chất phonoloc): Magnolol (0.03%), allylmagnolol, Machiolol, Tetrahydro-magnolol, isomagnolol và Honokiol Còn Alkaloids: Magnocurarine (0.07%), Maghoflorine và Tubocurarine

Các hoạt chất chính trong nụ hoa M liliflora và M biondii là tinh dầu trong đó có

Eugenol, Safrole.cineol, alpha-pinene, chavicol methyl- pinoresnol dimethylether, citrol và

Anethol Riêng trong M Biondii còn có fargesin và trong M liliflora có các flavonoids

glycosides

Trong lá của M grandiflora có những sesquiterpenoid phức tạp như

magnograndiolide trong lá của M.obavata có những alkaloid loại apomorphine có hoạt tính kháng tiểu cầu như N-acetylanonaine, N-acetylxylopine, N-formyl anonaine, Liriodenine và Lanuginosine

Theo Đỗ Tất Lợi trong cây giổi (M Talauma gioi Chev), thành phần quả và hạt

chứa chủ yếu safrol, metyl eugenol, camphor Còn tinh dầu trích từ vỏ cây chứa 15.7% camphor;14.3% safrol, 15.6% β-caryophyllen và 13.7% elemicin

Các ứng dụng trong dược học

ắ Manglietia trong tây y

• Tác dụng kháng sinh :

Nghiên cứu tại Đại Học Y Khoa Kaohsung, Đài Loan ghi nhận hoạt tính kháng sinh

của Honokiol và Magnolol, ở nồng độ tối thiểu ức chế (MIC = 25 gà /ml) chống lại các vi

khuẩn Actinobacillus actilomycetem conco- mitans, porphiromonas gingivanis, prevoter intermedia, micrococccus luteus và Bacillus subtilis, nhưng không có tác dụng kháng sinh

(Mic ≥ 100àg/ml) đối với sihgella flexneii, p.vulagaris, e.coli Các thí nghiệm cho thấy

tuy honokiol và magnonol không mạnh bằng tetra cycline, nhưng còn tác dụng diệt trùng

rõ rệt với các vi khuẩn gây bệnh nhac hu

• Tác dụng bảo vệ bắp thịt tim của honokiol:

Honokiol được cho là có tiềm lực mạnh hơn α-tocopheron đến một 1000 lần trong việc ức chế lipid peroxidation nơi ty thể của chuột Nghiên cứu tại khoa gây mê, bệnh viện taipei vetarans general hospital, taiwan trên chuột đã gây mê bằng urethane, cho thấy honokiol ở nhiều liều thử nghiệm khác nhau có những khả năng bảo vệ bắp thịt tim chống lại các tổn thương do nghẽn mạch và cũng loại trừ được sự rối loạn nhịp nơi tâm thất khi có

sự nghẽn tim

• Hoạt tính chống nấm của Magnolol và Honokiol:

Magnolol và Honokiol là hai hợp chất loại neolignan có hoạt tính chống một số

nấm gây bệnh nơi người như Trichophiton mentagrophtes, Microsporiun gypseun, Epidermophiton phloccosum, Aspergillus niger, Criptococcus neoformans và Candida alpicans ở nồng độ ức chế tối thiểu MIC trong khoảng 25-100àg/ml

Tác dụng tạo apoptosis nơi cơ trơn hệ tim mạch:

Magnol được nghiên cứu về tác dụng trên tiến trình tạo chương trình cho tế bào tự huỷ nơi các tế bào cơ trơn hệ tim mạch (vascular smooth muscle cells = VSMCs) ở chuột: Magnonol làm gia tăng hoạt tính caspase-3 và caspase-9 đồng thời giảm tiềm lực ti thể Nồng độ các tế bào B-cell leukemia/lymphoma-2 (Bcl-2) sụt giảm tương ứng với nồng độ Magnonol sử dụng Kết luận ghi nhận Magnonol tạo ra tiến trình apotosis nơi VSMs qua

đường tự huỷ của mitochondria, hiệu ứng này được trung chuyển bằng sự gây giảm điều hoà nồng độ protein Bcl-2, xảy ra cả invitro lẫn invivo do đó Magnonol được xem là có tiềm năng dùng làm thuốc mới chữa atherosclerosis và restenosis

• Hoạt tính chống sưng viêm của Honokiol trên tế bào neutrophils

Nghiên cứu tại ĐH y khoa National Yang-Ming, Đài Bắc ghi nhận Honokiol có khả năng bảo vệ chống lại các tổn thương do nghẽn máu nơi não, cùng với tác dụng ức chế

sự tạo thành các loại-phản ứng oxi hóa nơi các neutrophils bằng cách điều hoà các hệ thống men sinh học liên hệ đến các tiến trình phản ứng với oxygen như các men NADPH oxidase, myeloperoxidase, Cyclooxigennase và GSH peroxidase

Magnolol có hoạt tính chống sưng, có thể làm giảm mức prosaglandin E2 (PGE-2)

và leukotrien-B4 (LTB4) trong dịch phổi của chuột đồng thời ức chế được sự tổng hợp thromboxane-B2 (TXB2) Trong những nghiên cứu trên chuột bình thường và chuột đã bị cắt bỏ tuyến adrenal, ngoài ra magnolol còn có tác dụng chống sưng và chỉ chống nơi cả hai loại chuột, do đó hiệu ứng chống sưng không phải là do gia tăng hoạt động của corti costerone hay do ở sự tiết các hormone loại steroid từ tuyến nang thượng thận, mà có lẽ do

ở sự giảm nồng độ các chất trung chuyển eicosanoid

• Tác dụng ức chế giai đoạn di căn của bướu ưng thư

magnonol có hoạt tính kháng di căn khá mạnh Khả năng được thử nghiệm trên các trường hợp ung thư gan và tỳ tạng kiểu mẫu dùng các tế bào lymphoma L5178Y-ML25 và trường hợp ung thư phổi đột biến dùng tế bào melanoma B16-BL6 khi chích qua màng phúc toan chuột thử nghiệm magnolol (10 mg/kg) trước và sau khi cấy tế bào ung thư cho thấy magnolol ức chế được metastasis tế bào ung thư phổi, ngăn chặn được sự sinh sản của các tế bào ung thư

• Khả năng trị bệnh kiết lị do amib

Vỏ Manglietia được dùng làm thuốc để trị kiết lị amib tại các bệnh viện Trung Hoa:

trong một thử nghiệm trên 46 bệnh nhân: 43 khỏi bệnh hoàn toàn, 2 thuyên giảm, đa số các triệu chứng mất dần sau 3 ngày dùng thuốc và kết quả thử nghiệm âm tính (hết amib trong phân) sau 5 ngày điều trị

• Hậu phác: ( Hou po)

Hậu phác là vỏ Manglietia officinalis hay M bilola, thu hoạch nơi các cây từ 15-20 năm tuổi, trong các tháng 4-6, phơi khô (Tại Trung hoa: Manglietia mọc nhiều ở Tứ Xuyên, Hồ

Bắc, Triết Giang, Giang Tây )

• Hậu phác có những tác dụng:

Khởi động sự di chuyển của ‘Khí’, biến đổi ‘Thấp’, phá ‘ứ’: được dùng khi Thấp gây rối loạn nơi Tỳ và Vị hay Trung, trường hợp thực phẩm bị ứ gây ra các triệu chứng như đau tức ngực, bụng dưới , có cảm giác đầy bụng, ăn không ngon, ói mửa và tiêu chảy Hậu phác

được phối hợp với khương truật (cang-zhu = Rhizoma Atratylodis) và trần bì (chen-pi = Pericarpium Citri Recticulatae) để trị các chứng đầy, cứng bao tử, ợ chua acid, buồn nôn, ói mửa Nếu đau bụng do ăn không tiêu, Hậu phác được dùng với Chỉ kế (Zhi-ke = Fructus Citri Aurantii)

Làm ấm và biến đổi ‘đờm’, dẫn các nghịch khí xuống: dùng để trị khó thở do đờm ứ tắc, ho và tức ngực Hậu phác dùng chung với táo nhân và ma hoàng

Hoa M offcinalis hay Hậu phác hoa (hou po hua) được xem là có vị cay, tính ấm và

thơm Có những tác dụng trị liệu như vỏ nhưng yếu hơn và tác động chủ yếu vào thượng tiêu và trung tiêu và điều hoà can khí, thường dùng để trị các chứng đau tức ngực, đau bao

tử do mất quân bình giữa can và vị Liều dùng từ 3-6g Mới đây tại Trung Quốc người ta phát hiện tác dụng kháng sinh của nước sắc hậu phác với vi trùng thương hàn, thổ tả,

Staphylococ và lỵ Shiga

• Tân di hoa (xin yi hua) (BarbarrianBud)

Vị thuốc là nụ hoa của các cây M liliflora, M biondii hay M denudata, thu hái vào

đầu mùa xuân khi hoa chưa nở hoàn toàn Nhật dược gọi vị thuốc là Shini và Triều Tiên là Sinihwa

Vị thuốc, ghi chép trong Thần Nông bản thảo, được xem là có vị cay, tính ấm có tác

động vào các kinh mạch thuộc phế và vị, có những tác dụng: trị được phong hàn và làm thông thoáng đường thở qua mũi, thường được dùng để trị các trường hợp nghẹt mũi, chảy nước mũi, không ngửi thấy mùi, và các chứng nhức đầu liên hệ Tác dụng trị liệu tuỳ thuộc thêm vào các dược thảo cùng sử dụng như Tế Tân, Bạc Hà, Hoàng Cầm

Tại Trung Hoa ngoài những dạng thuốc viên và thuốc sắc, vị thuốc còn được chế tạo dưới dạng dầu thoa, thuốc xông

Cho đến nay, theo tra cứu của chúng tôi, người ta mới chỉ tìm được 1 hợp chất

Mangochinine từ cả chi Manglietia [13]

3 Cây cúc gai Silybum marianum (L.) Gaertn

Các tên đồng danh khác:

Carduus marianus L (Species Plantarum 2: 823 1753)

Carduus mariae Crantz (Inst 1: 248 1766)

Mariana mariana (L.) Hill (Hortus Kewensis 61 1768)

Mariana lactea Hill (Herbarium Britannicum 1: 76 1769)

Cirsium maculatum Scop (Flora Carniolica, Editio Secunda 2: 130-131 1772)

Carthamus maculatum (Scop.) Lam (Encyclopộdie Mộthodique, Botanique 1(2): 638

1783)

Silybum maculatum (Scop.) Moench (Methodus 555 1794)

Silybum mariae (Crantz) Gray (A Natural Arrangement of British Plants 2: 436 1821)

Đặc điểm hình thái và phân bố [6], [14], [15], [16], [17]:

Cây thảo hai năm, cao 30-150cm Thân thẳng và phân nhánh Lá xanh, không có lá kèm, bóng láng, thường có nhiều đốm trắng dọc theo các gân, mép có răng dạng gai, gai màu vàng và rất nhọn; các lá phía trên và ở giữa ôm lấy thân; các lá ở dưới rất to, có phiến chia thuỳ và có cuống

Cụm hoa đầu đơn độc, rộng 3-10cm Lá bắc

ngoài và giữa có một phần phụ hình tam giác màu

lục thu lại thành một gai to, ở gốc có 4-6 gai nhỏ,

ngắn hơn, ở mỗi bên Hoa màu tím, hiếm gặp màu

trắng, hơi giống nhau, đều có 5 cánh hoa, 5 nhị và

bầu 1 ô với 2 lá noãn và 2 vòi nhuỵ phình ở gốc Quả

bế hình bầu dục thuôn, dài 7-8mm, màu đen bóng có

vân vàng nhiều hay ít

Ra hoa vào tháng 5 đến tháng 8 của năm thứ

hai

Cây có nguồn gốc ở Địa Trung Hải và mọc

hoang dại ở nhiều nơi trên thế giới như miền Nam và

Trung Âu, Bắc Phi, Trung Đông, ấn Độ, Trung

Quốc, Bắc và Nam Mỹ [6], [14], [17] Cây cúc gai Silybum marianum

(L.) Gaertn

Về thành phần hóa học

Quả cúc gai Silybum marianum (L.) Gaertn là bộ phận được dùng làm thuốc theo

kinh nghiệm cổ truyền của Châu Âu từ xa xưa nên đã được chú ý quan tâm nghiên cứu Các

nhà nghiên cứu người Đức là những người đầu tiên đặt vấn đề nghiên cứu thành phần hoá học của quả cúc gai Năm 1960 B Janiak và R Hansel đã phân lập được 2 hợp chất phenol

đặt tên là Silybum substance E5 và E6 và ban đầu mới chỉ dự đoán đó là các flavon dựa trên phổ UV, IR và các phản ứng màu [18] Đến năm 1967, Hansel và Schopflin làm sáng tỏ

được một phần cấu trúc của chất E6 là 3’-methyltaxifolin liên kết với một chromandiol và gọi chất đó là silybin [19] Một năm sau Pelter và Hansel xác định được silybin là một chất

kết hợp bởi taxifolin và coniferyl alcol (1) Silybin là chất đầu tiên được biết có kiểu cấu

trúc này và nhóm chất mới được gọi là nhóm flavonolignan [20]

Tuy nhiên, việc xác định được cấu

trúc không gian của silybin là một

quá trình lâu dài và khó khăn Năm

OH O

OH

CH2OH

OCH3OH

1

trí C-2 và C-3 là 2R, 3R Arnone và cs nhận thấy silybin là một hỗn hợp 2 đồng phân lập thể với tỷ lệ 1:1 do quan sát thấy các tín hiệu cộng hưởng từ của H-7’ và nhóm methoxy bị chia thành 2 nhóm pic có cùng cường độ khi đo phổ trong benzene-d6 [21]

O

O

HO

OH OH

H

H

H 3

2

7' 8'

2

2 3 O

O

HO

OH OH

H

H

H 7' 8'

3

Để giải quyết vấn đề hoá học lập thể của silybin, năm 1983 Lotter H và Wagner H

đã dùng phương pháp nhiễu xạ tia X Kết quả cho thấy tinh thể silybin là một hỗn hợp đồng phân lập thể chưa tách riêng được ra khỏi nhau [22] Sau đó nhiều tác giả đã tìm cách nhận dạng hai đồng phân này trong hỗn hợp bằng các phổ 1H và 13C-NMR nhưng sự khác biệt ở các phổ này không dễ nhận thấy Gần đây, có hai nhóm nghiên cứu đã thành công trong việc tách riêng chúng nhờ HPLC pha đảo điều chế và cấu trúc lập thể của chúng được xác

định rõ ràng là silybin A (2): 2R, 3R, 7’R, 8’R và silybin B (3): 2R, 3R, 7’S, 8’S dựa trên

cơ sở phân tích phổ nhiễu xạ tia X, độ quay cực, các phổ 1H và 13C-NMR, COSY, HMQC

và HMBC [23], [24]

Hợp chất Silybum substance E5 do B Janiak và

R Hansel phân lập được lần đầu tiên vào năm 1960 sau

này cũng đã được Wagner H và cs phân lập và xác

định được cấu trúc dựa trên phổ khối, phổ NMR và phổ

nhiễu xạ tia X [25] Chất này được đặt tên là silydianin

(4) Đây cũng là một flavonolignan và là đồng phân của

silybin Hai chất này khác nhau ở cách liên kết của

taxifolin với coniferyl alcol Cùng với silybin và

silydianin, một flavonolignan khác là silychristin cũng

O

O OH

H H

4

trúc (5) lần đầu tiên vào năm 1971 Sau đó dựa trên phân tích phổ khối, phổ NMR và phổ

nhiễu xạ tia X nhóm tác giả đã xác định được hoá học lập thể ở các vị trí carbon số 2 và 3

là 2R, 3R [25] Năm 1976, Hansel và cs đưa ra một đề xuất cấu trúc khác với sự thay đổi

về vị trí của 2 nhóm hydroxyl ở vòng B dựa vào phân tích sản phẩm dehydrat hoá của silychristin Nhưng sau đó Wagner đã khẳng định lại cấu trúc đưa ra ban đầu nhờ phổ 13C-NMR của cả silychristin và sản phẩm dehydrat hoá của nó [25], [26], [27] Tiếp đó cấu

hình ở các vị trí α và β của vòng dihydrofuran được xác định là αR và βS Gần đây, Smith

và cs đã phân lập và xác định cấu trúc được thêm một đồng phân lập thể của chất

silychristin đã biết từ quả Silybum marianum (L.) Gaertn và gọi tên nó là silychristin B (6)

CH2OH

Năm 1979, Arnone A và cs lần đầu tiên phân lập được isosilybin, một đồng phân khác của silybin từ quả cúc gai Đây cũng là một hỗn hợp hai đồng phân lập thể rất khó tách riêng tương tự như silybin [29] Mãi đến năm 2003, hai nhóm nghiên cứu của Lee D.Y và của Kim Nam-Cheol mới tách được chúng bằng HPLC pha đảo điều chế và khẳng

định cấu trúc lập thể của chúng là isosilybin A(7): 2R, 3R, 7’R, 8’R và isosilybin B(8):

7' 8'

Năm 1972, dehydrosilybin được phân lập lần đầu tiên bởi các tác giả ấn Độ cùng với silychristin và silybin [30] Năm 1975, Takemoto (Nhật Bản) thông báo 2 chất flavonolignan mới có trong hạt cúc gai là 2,3-dehydrosilymarin (chính là tên khác của dehydrosilybin) và 2,3-dehydrosilychristin [31] Năm 1981, một nhóm nghiên cứu người

Đức khác là Kaloga M và cs đã phát hiện thêm một flavonolignan là isosilychristin [32]

Nhóm flavonoid

Trong khi flavonolignan chỉ tìm thấy trong quả thì flavonoid được tìm thấy ở cả các

bộ phận khác của cây cúc gai Silybum marianum (L.) Gaertn như taxifolin và quercetin,

naringenin, eriodictyol, apigenin và chrysoeriol [33], dihydrokaempferol [34] Phần trên mặt đất có apigenin, luteolin, apigenin-4’-7-diglucosid, apigenin-7-glucosid, luteolin-7-glucosid, kaempferol-7-glucosid và kaempferol-3-sulphat [35]

7 flavonoid khác đã được phân lập từ cao chiết methanol nước của hoa Silybum marianum (L.) Gaertn.: apigenin-7-O-β-(2”-O-α-rhamnosyl)galacturonid, kaempferol 3-

O-α-rhamnosid-7-O-β-galacturonid, O-β-glucoronid 6”-ethyl ester, O-β-glucosid, apigenin-7-O-β-galactosid, kaempferol-3-O-α-rhamnosid và kaempferol [36]

apigenin-7-Về tác dụng dược lý

Silymarin và silybin ức chế tác dụng độc với gan của carbon tetraclorid, paracetamol, amitriptylin, ethanol, erythromycin estolat, galactosamin, nortriptylin và tert-butyl

hydroperoxyd trên tế bào gan chuột cống trắng in vitro [36], [37]

Silymarin với liều 15-800mg/kg thể trọng tiêm phúc mạc cho chó hoặc cho chuột nhắt và chuột cống trắng uống đã chống được các tổn thương gan gây bởi carbon tetraclorid Tác dụng này là nhờ vào hoạt tính chống oxy hóa và ổn định màng tế bào gan của silymarin [38]

Silymarin và silybin đã ức chế rõ rệt tổn thương gan gây bởi paracetamol, các chất

độc của nấm Amanita falloides (phalloidin và α-amanitin), ethanol, galactosamin, halothan,

hydrocarbon thơm đa vòng và cả tia xạ trên các mô hình động vật thực nghiệm khác nhau [39]

- Tác dụng sinh học của cúc gai đã được các nhà khoa học trên khắp thế giới chú ý nghiên cứu Hỗn hợp flavonolignan chiết xuất từ quả cúc gai với tên gọi là silymarin được xác

định là thành phần hoạt chất và là đối tượng nghiên cứu chính

- Tác dụng bảo vệ gan là tác dụng nổi bật của silymarin Phần lớn các nghiên cứu chứng minh cơ chế tác dụng và khẳng định tác dụng bảo vệ gan của silymarin chủ yếu là do hoạt tính chống oxy hoá, quét gốc tự do, chống peroxy hoá lipid, làm ổn định và điều hoà tính thấm của màng tế bào chống sự phá hoại của các tác nhân gây độc, kích thích tổng hợp protein giúp tái sinh tế bào gan, chống chuyển dạng các tế bào hình sao thành các nguyên bào sợi gây tích tụ các sợi colagen làm xơ hoá gan Với tác dụng và cơ chế tác dụng rõ ràng, silymarin có thể được coi là một thuốc bảo vệ gan điển hình Trên lâm sàng, silymarin giúp cải thiện chức năng gan của các bệnh nhân bị viêm gan và xơ gan do các nguyên nhân khác nhau và kéo dài thời gian sống của bệnh nhân xơ gan do rượu

- Silymarin không chỉ bảo vệ tế bào gan mà còn bảo vệ các tế bào thần kinh, tim, thận chống độc hại do hoá chất và các thuốc chống ung thư, thuốc ức chế miễn dịch, thuốc hướng tâm thần, thuốc giảm đau, thuốc gây mê

- Các tác dụng chống ung thư (đặc biệt là ung thư tiền liệt tuyến và ung thư da), hạ cholesterol huyết, chống tăng lipid huyết, chống đái tháo đường của silymarin là những tác dụng mới được chú ý nghiên cứu trong những năm gần đây và silymarin có nhiều triển vọng được dùng làm thuốc điều trị các bệnh này trong tương lai gần

- Silymarin có độc tính thấp và hầu như không gây tác dụng phụ ở liều điều trị

Với các hoạt chất có tác dụng đã được chứng minh, có thể nói cây cúc gai là một cây thuốc quý đáng được quan tâm nghiên cứu phát triển để đưa vào sử dụng, làm phong phú thêm nguồn tài nguyên cây thuốc ở nước ta

4 Cây bạch thược Paeonia lactiflora Pall (Paeoniaceae)

• Mô tả cây: Cây thảo, sống lâu năm, cao 50-80 cm Rễ

củ to, mập, mặt ngoài màu nâu, ruột màu trắng hoặc

hồng nhạt Thân nhẵn, mọc thẳng Lá mọc so le, có

cuống dài, chia thành 3-7 thuỳ hình trứng hoặc mác

thuôn, dài 8-12 cm, rộng 2- 4 cm, đầu nhọn

• Phân bố, sinh thái: Bạch thược vốn là cây mọc tự

nhiên ở một số tỉnh Hắc Long Giang, Cát Lâm, Hà Bắc,

Liêu Ninh, Sơn Đông…(Trung Quốc) Do giá trị và nhu

cầu làm thuốc tăng, nên bạch thược cũng như một số

loài khác cùng chi đã được đưa vào trồng từ lâu đời ở

nhiều địa phương của Trung Quốc Bạch thược được

nhập từ Trung Quốc vào Việt Nam giữa những năm 70

Cây được trồng tại Sa pa, Tam Đảo và Đà Lạt

Công dụng và tác dụng dược lý của cây bạch thược

[3], [4]

Cây bạch thược (Paeonia lactiflora Pall)

a Công dụng:

Bạch thược chữa đau bụng, tả lỵ do ruột co bóp quá mạnh, lưng ngực đau, chân tay nhức mỏi, nhức đầu, mắt hoa, bệnh về mạch như viêm mạch huyết khối, tắc mạch, nghẽn mạch não, kinh nguyệt không đều, bê kinh, xích bạch đới, mô hôi trộn, tiểu tiện khó

b Tác dụng dược lý

• Tác dụng kháng khuẩn: Cao nước bạch thược có tác dụng kháng khuẩn trên Shigella, Vibrio cholerae, Staphylococcus, Salmonella, Pneumococcus và Corynebacterium diphtheriae

tiêu chảy Ngoài ra, còn tác dụng giảm đau

• Cao thân và lá có tác dụng chống thực khuẩn thể Nước sắc rễ có tác dụng ứch chế

sự biến hoá sinh học acid arachidonic in vivo và in vitro Trong thí nghiệm có so sánh với

tác dụng của indomethacin

Các nghiên cứu về thành phần hoá học

Rễ cây bạch thược chứa 3,30-5,70% paeoniflorin, oxypeoniflorin, albiflorin, benzoyl paeoniflorin

Ngoài ra, rễ còn có ít hoặc không có paconol, paenocosid hoặc paenoliđ, lactiflorin, (Z)-(15,5R)-β-pinen-10-yl vicianosid, β-sitosterol, β- sitosterol-α-glucosid, acid benzoic (vào khoảng 1%), acid palmitic, acid cis-9,12-octađecadienoic, nhiều alkan (C24-C26), daucosterol, acid galic, methyl galat, d-catechin, mynoinositol, sucrose và glucogalin [3], [4]

Năm 1995, Akira Ikuta và cộng sự [40] đã tiến hành nghiên cứu thành phần hoá học của cây bạch thược, kết quả đã phân lập và xác định cấu trúc được sáu triterpenoid trong đó

có 4 chất mới lần đầu tiên được phân lập từ hợp chất thiên nhiên (11,12 dihydroxyolean-28,13β-olid; 3β-hydroxyoleana-11,13(18)-dien-28-oic acid; 3β-hydroxy-11-oxo-olean-12-en-28-oic acid và 3β,23-dihdydro-oleana-11, 11,13(18)-dien-28-oic acid)

α-epoxy-3β,23-Năm 1997, Kokei Kamiya và cộng sự [5] tiến hành các nghiên cứu hoá học về bạch thược Kết quả nghiên cứu cho thấy, trong thành phần hoá học của bạch thược có chứa các hợp chất triterpen và flavonoid Các hợp chất triterpen từ rễ là acid oleanolic; hederagenin;11,12 α-epoxy-3β,23-dihydroxyolean-28,13β-olid; 30-norhederagenin;acid betulinic; 3β-hydroxyolean-12-en-28-al,11α,12α-epoxy-3β,23-dihydroxy-30-norolean-20(29)-en,28,13-oli trong đó có một hợp chất triterpenoid mới (11,12 α-epoxy-3β,23-dihydroxyolean-28,13β-olid) Ngoài ra, các flavonoid từ lá (1.06%) bao gồm kaempferol-3-O-β-D glucosid và kaempferol-3,7-di-O-β-glucosid

Năm 2004, Nhóm nghiên cứu của Hyun Ok Yang và cs đã phân lập được từ loài

Paeonia lactiflora hợp chất Paenoniflorin, một hợp chất có hàm lượng cao và đã có rất

nhiều các nghiên cứu về hoạt tính của hợp chất này [41]

Năm 2006, Dean Guo và cs [42] trong các nghiên cứu hoá học về loài Paeonia lactiflora đã phân lập được 2-methoxy-5(E)-propenyl-phenol- β-vicinanoside đây là một

hợp chất phenolic glycosid mới lần đâu tiên phân lập từ hợp chất thiên nhiên

Ngoài ra, theo các tài liệu nghiên cứu về chi Paeonia có khoảng 102 hợp chất được

phân lập từ chi này Dưới đây là một số hợp chất điển hình có mặt trong thành phần hoá

học của loài Paeonia lactiflora

5 Cây bách bệnh (Eurycoma longifolia Jack)

Tên khoa học: Eurycoma longifolia Jack thuộc họ Thanh thất (Simaroubaceae)

Tên thường gọi: Bách bệnh, Lông bẹt, bá bịnh, mật nhơn, tho nan

Phân bố: Erycoma Jack là chi nhỏ gồm những đại diện là cây bụi hoặc cây gỗ nhỏ,

phân bố chủ yếu ở vùng nhiệt đới Đông Nam á Vùng Đông Nam á có 3 loài và một vài dưới loài, trong đó đáng chú ý nhất là loài bách bệnh phân bố rộng rãi từ Myanmar đến các nước Đông Dương, Thái lan, Malaysia, đảo Sumantra ở Việt Nam, bách bệnh phân bố rải

rác ở các tỉnh vùng núi thấp (dưới 1000 m) và trung du Các tỉnh Tây Nguyên và miền Trung gặp nhiều hơn các tỉnh phía Bắc

Eurycoma longifolia Jack

Bách bệnh thuộc loại cây nhỡ, cao 2-8 m, ít phân cành Lá kép lông chim lẻ, mọc so le, gồm 21-25 lá chét không cuống, mọc đối, hình mác hoặc bầu dục, gốc thuôn, dần nhọn, mặt trên xanh sẫm bóng, mặt dưới

có lông màu trắng xám, cuốn lá kép màu nâu đỏ Cụm hoa mọc ở ngọn thành chùm kép hoặc chuỳ rộng, cuống có lông màu gỉ sắt; hoa màu đỏ nâu, đài hoa chia thành 5 thuỳ hình thoi cũng có tuyến; nhị 5 có lông dày và hải vảy ở gốc

Bách bệnh có tác dụng dược lý [1]:

- Cao chiết từ bách bệnh có tác dụng kháng ký sinh trùng sốt rét trong thử nghiệm

nuôi cấy in vitro

- Bách bệnh có tác dụng tăng dục Có mối tương quan giữa hoạt tính kích thích sinh dục nam và lượng nội tiết tố sinh dục nam trong huyết thanh Thân và rễ bách bệnh làm tăng lượng testosteron trong huyết thanh động vật, rễ làm tăng testosteron nhiều hơn thân cây

- Một chế phẩm thuốc gồm 3 dược liệu: bách bệnh, trâm bầu và xấu hổ có độc tính cấp diễn và trường diễn thấp Thuốc có tác dụng lợi mật rõ rệt và không làm thay đổi thành phần của mật ở chuột lang Thuốc làm thải trừ BSP của gan thỏ so với đối chứng

- Chế phẩm thuốc này có tác dụng làm chậm quá trình hư biến của gan chuộc cống trắng gây nên do carbon tetraclorid Nó cũng làm tăng sự tái tạo của tế bào gan chuột nhắt trắng trong mô hình gây thương tổn gan thực nghiệm

Thành phần hoá học

Cây bách bênh là cây thuốc nổi tiếng Cây chữa được nhiều chứng bệnh (nên có tên

là Bách-nghĩa là 100) Trên thế giới đã có rất nhiều công trình nghiên cứu về hoá học cũng như hoạt tính sinh học của cây thuốc quý này, nhằm khai thác triệt để tiềm năng y học của cây thuốc quí này

Năm 1970, ở Việt Nam đã có những nghiên cứu về hoá học của cây bách bệnh, các nghiên cứu này được thực hiện bởi các tác giả L.V Thoi, N.N Suong [43], [44], kết quả nghiên cứu cho thấy trong thành phần hoá học của cây bách bệnh có hợp chất

eurycomalactone; β-sitosterol; campesterol; 2,6-dimethoxybenzoquinone và dihydroeurycomalactone

Năm 1982, Các tác giả Muchsin Darise và cs [45] đã phát hiện trong thành phần

của rễ cây bách bệnh có chứa eurycomanone, eurycomanol và

eurycomanone-2-O-β-glycopyranoside, 9-hydroxycanthin-6-one Cùng thời gian này, nhóm tác giả tại Việt Nam cũng đã có những nghiên cứu tiếp theo về thành phần hoá học của cây bách bệnh, kết quả

nghiên cứu cho thấy trong thành phần cây bách bệnh của Việt Nam có eurycomalactone,

campesterol; 2,6-dimethoxybenzoquinone, dihydroeurycomalactone và carboline-1-propionic acid [46]

7-methoxy-β-Năm 1983, nhóm tác giả Muchsin Darise và cs [47] đã phát hiện đ−ợc β-sitosterol; 9-hydroxycanthin-6-one-N-oxide trong lá cây bách bệnh

Năm 1986, nhóm tác giả Chan, L., và cs [48] đã có những nghiên cứu đầu tiên về hoạt tính sinh học của cây bách bệnh và tìm ra khả năng chống sốt rét của cây này

Năm 1989, Nhóm tác giả K L Chan và cs [49] đã nghiên cứu thành phần hoá học

và hoạt tính chống sốt rét của cây bách bệnh, kết quả đã tìm ra các hợp chất

Eurycomanol-2-O-β-glycopyranoside; eurycomanol từ rễ cây bách bệnh thể hiện hoạt tính chống sốt rét

Năm 1990, Nhóm tác giả Hiroshi Morita và cs [50] tìm thấy các hợp chất

Eurycomanol, Klaineanone; 11-Ketone trong thành phần hóa học của cây bách bệnh

Năm 1991, Itokawa, H và cs [11] tìm thấy hợp chất mới eurylen có hoạt tính độc

tế bào trong thành phần hoá học của bách bệnh Cùng thời gian này nhóm tác giả K L Chan và cs [51] đã phân lập đ−ợc hợp chất 3β,18-dihydroeurycomanol; 14,15β-dihydroxyklaineanone từ cây bách bệnh Hoạt tính gây độc tế bào và hoạt tính chống sốt rét của cây bách bệnh cũng đã đ−ợc nghiên cứu bới nhóm tác giả Leonardus B.S Kardono

và cs [52], nhóm tác giả này đã phân lập đ−ợc bốn alkaloid methoxycanthin-6-one; methoxycanthin-6-one-N-oxide; 9-hydroxycanthin-6-one và 9-hydroxycanthin-6-one-N-oxid, một quassinoit eurycomanone và lần đầu tiên phân lập hai β-carboline alkaloid (β-carboline-1-proprionic acid; 7-methoxy-β-carboline-1-proprionic acid)

9-Năm 1992, Hiroshi Morita và cs [53] nghiên cứu về thành phần hoá học của gỗ cây bách bệnh, kết quả nghiên cứu cho thấy trong gỗ cây bách bệnh có 2,2’-dimethoxy-4-(3-hydroxy-1-propenyl)-4’-(1,2,3-trihydroxypropyl) diphenyl ete và 2-hydroxy-3,2’,6’-trimethoxy-4’-(2,3-epoxy-1-hydroxypropyl)-5-(3-hydroxy-1-propenyl)-biphenyl và 2 -hydroxy-3,2’dimethoxy-4’-(2,3-epoxy-1-hydroxypropyl)-5-(3-hydroxy-1-propenyl)-

biphenyl Cùng năm này, các tác giả K L Chan và cs [54] đã tìm ra một hợp chất mới có trong thành phần hoá học của cây bách bệnh, hợp chất 6α-hydroxyeurycomalactone, các tác giả cũng đã nghiên cứu hoạt tính gây độc tế bào của cây bách bệnh Ngoài ra, nhóm tác giả Itokawa và cs [55] đã phân lập đ−ợc các hợp chất dihydroniloticin, 24,25-epoxytirucall-7-ene-3,23-diol trong thành phần hoá học của bách bệnh

Năm 1993, nhóm tác giả Hiroshi Morita và cs [56] tiếp tục các nghiên cứu thành phần hoá học và hoạt tính sinh học của cây bách bệnh, kết quả cho thấy hai hợp chất mới

có khung quassinoid ( C19) (6-dehydroxylongilactone và 7α- hydroxyeurycomalactone và 7 hợp chất (13α(21)-epoxyeurycomanone, 15-Acetyl-13α(21)- epoxyeurycomanone;12,15-diacetyl-13α(21)-epoxyeurycomanone; 12-acetyl-13,12-dihydroeurcomanone; 15 β-acetyl-14-hydroxyklaineanone; 6α-acetoxy-14,15β-dihydroxyklaineanone; 6α-acetoxy-14,15β- dihydroxyklaineanone Hoạt tính gây độc tế bào của các hợp chất trên đã đ−ợc nghiên cứu, kết quả cho thấy hợp chất 6-dehydroxylongilactone và 7α-hydroxyeurycomalactone thể hiện hoạt tính gây độc tế bào cao Nhóm tác giả này tiếp tục các nghiên cứu về hoá học và hoạt tính sinh học đã phân lập đ−ợc 4 hợp chất erylene, 14-deacetyl erylene và longilene peroxide, teurilene và đã tiến hành các nghiên cứu về độc tế bào của các hợp chất này [58] Năm 1993, một nhóm nghiên cứu khác do tác giả Itokawa, H và cs [57] đã phân lập đ−ợc 6 hợp chất eurylactone A, eurylactone B, laurycolactone A, laurycolactone B

Năm 1994, nhóm tác giả Mitsunaga và cs [59] đã phân lập được dimethoxycanthin-6-one; 10-hydroxy-9-methoxycanthin-6-one; 11-hydroxy-10-methoxycanthin-6-one; 5,9-dimethoxycanthin-6-one và 9-methoxy-3-methylcanthin-5,6-dione

9,10-Năm 2000, nhóm tác giả Hooi Hoon Ang và cs [60] đã phân lập và xác định cấu trúc của các hợp chất eurycolactone A, eurycolactone B, eurycolactone C từ cây bách bệnh

Năm 2001, nhóm tác giả S Jiwajinda và cs [61] đã nghiên cứu thành phần hoá học

và hoạt tính sinh học của cây bách bệnh, đã phân lập được longilactone, dehydroxylongilactone, 11-dehydroxyklaineanone; 15β- dihydroxyklaineanone; 14,15β- dihydroxyklaineanone; 15β-O-acetyl-14-dihydroxyklaineanone

6-Năm 2002, Hooi H Ang và cs [62] đã phân lập được eurycolactone E, eurycolactone F, eurycolactone B và eurycomalactone

Năm 2003, nhóm tác giả Ping Chung Kuo và cs [63] đã phân lập và xác định cấu trúc hoá học được 3 hợp chất mới: n-pentyl-carboline-1-propionate; 5-hydroxymethyl-9-methoxycanthin-6-one và 1-hydroxy-9-methoxycanthin-6-one và 9-methoxycanthin-6-one; canthin-6-one đã biết từ cây bách bệnh Các hợp chất phân lập được đã được tiến hành thử

nghiệm hoạt tính gây độc tế bào in vitro và hoạt tính chống sốt rét in vitro Kết quả thử

nghiệm cho thấy hợp chất 9-methoxycanthin-6-one; canthin-6-one thể hiện hoạt tính gây

độc tế bào trên dòng tế bào ung thư phổi và dòng tế bào ung thư vú Trong thời gian này, nhóm tác giả Bedir và cs [64] cũng đã phân lập được hợp chất eurycomaoside

Năm 2004, nhóm tác giả Ping Chung Kuo và cs [65] đã phân lập được thêm hợp chất eurycomalin A từ cây bách bệnh

6 Cây Ôrô nước (Acanthus ilicifolius L.)

Cụm hoa mọc ở ngọn thân và đầu cành thành xim bóng, màu trắng hoặc ngà xanh xếp từng đôi một đối xứng nhau, mỗi hoa có một lá bắc to và hai lá bắc con cứng Đài có bốn răng giống lá bắc, hai răng ngoài to hơn Tràng hợp thành ống ngắn, môi trên teo đi, môi dưới xẻ ba thùy nông tròn, thùy giữa nhỏ Nhị bốn, bầu hai ô

Quả nang tròn, to bằng hạt ngô, màu nâu bóng, chứa bốn hạt dẹt

Nó mọc hoang ở dọc sông ngòi hoặc gần bờ bể Mùa hoa quả là tháng 10-11 trong năm

Cây Ôrô nước (Acanthus ilicifolius L.)

Tác dụng dược lý

Từ lâu các nhà nghiên cứu đã đưa ra một số tác dụng dược lý của loài Ôrô nước như:

ắ Tác dụng kháng khuẩn: Dùng phương pháp khuếch tán trong môi trường

thạch ta thấy có tác dụng trên một số loài như Staphylococcus aureus, Klebsiellapneumoniae, Proteus vulgaris, Bacillus anthracis, Streptococcus pneumoniae

ắ Tác dụng lợi tiểu: Thử trên chuột cống trắng 100- 150g, được nhịn đói qua

đêm, sáng hôm sau cho mỗi con uống NaCl 0,9% 5ml/100g Dùng cao khô Ôrô được chế biến từ dịch chiết cồn liều 250mg/kg thấy lượng nước tiểu tăng rõ rệt so với lô đối chứng

ắ Thử độc tính cấp: Dùng cao khô Ôrô nước tiêm trong màng bụng cho chuột nhắt trắng liều 1000mg/kg, chuột không chết

Các bài thuốc theo kinh nghiệm dân gian

Theo kinh nghiệm dân gian, Ôrô đã được cha ông ta sử dụng trong nhiều bài thuốc

để chữa những bệnh kể cả hiểm nghèo:

ắ Chữa gan lách sưng to: Ôrô 30g, cây thóc lép 12g, liên kiều 15g

ắ Chữa đau gan, nhuận gan, giải độc gan: Ôrô 30g, vỏ thân hay lá quao 30g

ắ Chữa tràng nhạc, u và bệnh hạch bạch tuyết: Ôrô 30g, thóc lép 12g, mỏ quạ 20g

ắ Chữa thấp khớp, đau lưng, nhức sương, tê bại: Rễ Ôrô 35g, canh châu 25g, quế chi 4g, rễ cây kim vàng 18g

ắ Chữa ho đờm, hen suyễn: Ôrô 30g, thịt lợn nạc 60-120g, nước 500ml

ắ Chữa táo bón, nước tiểu vàng: Rễ Ôrô 35g, vừng đen 30g, lá muồng trâu 18g

ắ Chữa rong huyết: Rễ Ôrô 35g, bồ hoàng 35g, kinh giới 18g

ắ Chữa ho gà: Hoa Ôrô 20g tẩm mật ong hay mật mía

ắ Chữa bệnh gan, thủy thũng, đái buốt, đái dắt, nhiễm khuẩn: Cả cây Ôrô 30-60g sắc uống

Ngoài ra, búp non và lá Ôrô đắp chữa rắn cắn hay lá Ôrô làm cao để chữa các bệnh viêm nhiễm thông thường Lá và ngọn Ôrô chườm nóng vào các chỗ đau nhức, thấp khớp

Acanthicifoline

O

H N O

MeO

HO MeO

OMe

OH OMe

R = Glc or H R' = H or Glc

Dihydroxymethyl-bis hydroxyphenyl) tetrahydrofuran-9 (or 9′)- O- β-glucopyranosid

(3,5-dimethoxy-4-OH O

O

O

OH OH

HO HO

HO HO

(+)-lyoniresinol 3a-O-β-D- glucopyranoside

Alangilignoside C

O O O

HO HO

HO HO

OH

O O

Syringic acid β-glucopyranosyl ester

O O

OH O

O

OH

OH OH

O

OH O

OH HO

HO

R

CH 3

OH OH OH

R Campneoside I OCH 3

Ilicifoliosides A OCH 2 CH 3

Acteoside H

O HO

OMe H

H

O

OH OH

OH OH

(+)-syringaresinol-O-

β-glucopyranoside

O OH

O HO

HO HO

O

OH

OH

OH HO

HO HOH2C

(8R,7′S,8′R)-5,5′-dimethoxylariciresinol O-β-glucopyranoside

4-OH MeO

HO OMe

O O CH2 OH

OH OH RO

OMe OH MeO

C O OMe OH OMe

(+)-lyoniresinol3a-O-ß-glucopyranoside: R = H (+)-lyoniresinol 3a-[2-(3,5-dimethoxy-4- hydroxy)-benzoyl]-O-ß-glucopyranoside:

R =

OH

OH HO

Verbascoside

OH OH

HO

O O HO

OH O

3 2 5

10

R 1 R 2 R 3

(2R)-2-O- β-D-glucopyranosyl-2H-1,4-benzoxazin-3(4H)-one H H H (2R)-2-O-β-D-glucopyranosyl-4-hydroxy-2H-1,4-benzoxazin- H H OH -3(4H)-one

(2R)-2-O-β-D-glucopyranosyl-7-hydroxy-2H-1,4-benzoxazin- OH H H -3(4H)-one

7-chloro-(2R)-2-O-β-D-glucopyranosyl-2H-1,4-benzoxazin- Cl H H -3(4H)-one

(2R)-2-O-β-D-glucopyranosyl-5-hydroxy-2H-1,4-benzoxazin- H OH H

-3(4H)-one

7 C©y Hoµng liªn « r« Mahonia nepalensis DC (M Annamica Gagnep.) [3, 4, 6]

Phân bố và sinh thái

Chi Mahonia Nutt gồm các đại diện là cây bụi hay gỗ nhỏ, phân bố ở vùng ôn đới ấm hoặc

cận nhiệt đới châu Á, bao gồm Trung Quốc, Nê Pan, Ấn Độ và một số nước khác ở vùng trung Á Ở Việt Nam có 3 loài (Nguyễn tập, 1996)

- Mahonia bealei (Fort ) Carr: ở Quản Bạ (Hà Giang)

- Mahonia japonica (Thumb ) DC: ở Quản Bạ, Đồng Văn (Hà Giang) : Sìn Hồ (Lai

Châu); Hà Quảng (Cao Bằng); Sa Pa (Lào Cai)

- Mahonia nepalensis DC: ở Lạc Dương (Lâm Đồng) và Lai Châu

Nói chung cả ba laòi đều là những cây ưa ẩm, ưa sáng và có thể chịu bóng, thường mcj dưới tán rừng kín thường xanh hay trong các trảng cây bụi trên núi đá vôi với độ cao 1400- 1700m Cây sinh trưởng tốt trong điều kiện khí hậu ẩm mát quanh năm, nhiệt độ trung bình 15- 160C, lượng mưa 1800- 2800mm/năm độ ẩm không khí trên 80% ở những vùng có hoàng liên ô rô quanh năm có sương mù

Mahonia nepalensis

Là cây bụi, có thể cao 6- 7m Thân và rễ màu vàng Lá kép lông chim lẻ, mọc so le, dài 20- 40cm, lá chét dài hình trái xoan hoặc hơi thuôn, không cuống, dài 6- 10cm, rộng 2- 4, 5cm, gốc tròn hoặc hơi hình tim, đầu nhọn như gai, mép khía răng to sắc nhọn, gân chính 3

và gân phụ thành mạng rõ

Cụm hoa mọc ở ngọn thành bông phân nhánh có khi dài hơn lá;lá khắc hình bầu dục hoa nhiều màu vàng nhạt;lá đài 9 sếp thành 3 vòng;cánh hoa 6 có tuyến ở gốc, nhị 6 đối diện với cánh hoa, bao phấn dài bằng nửa chỉ nhị;bầu hình trụ

Quả thịt hình cầu, khi chín màu xanh lơ, đầu quả có núm nhọn;hạt màu nâu đen Mùa hoa: tháng 2- 4;mùa quả: tháng 5- 6

Cây ra hoa quả nhiều hàng năm;quan sát loài Mahonia japonica (thumb.) DC ở quản bạ

(Hà Giang cho thấy, khi rừng bị mở tán (do khai thác gỗ) và những cây mọc trong quần hệ cây bụi, bờ nương dẫy do dược chiếu sáng nhiều nên lượng hoa quả trên mỗi cây nhiều gấp 2- 3 lần những cây mọc dưới tán rừng bị che bóng Mặc dù có lượng hoa quả nhiều (100-

150 quả trên cây) nhưng số cây con mọc tự nhiên từ hạt rất ít Cây có khả năng tái sinh cây trồi sau khi bị chặt

Tác dụng dược lý

Mặc dù trong hoàng liên ô rô có berberin, palmatin và một số alcaloid khác, nhưng những nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn ở Ấn Độ đã không thấy có tác dụng, cũng chưa thấy có tác dụng kháng nấm, kháng virus Thử độc tính cấp cao khô chiết cồn hoàng liên ô

rô đã xác định được LD50 = 175mg/kg khi tiêm phúc mạc cho chuột cống trắng

Trong dân gian cây hoàng liên ô rô được dùng để chữa rất nhiều bệnh, do đặc tính mát, đắng của nó Nó có tác dụng thanh nhiệt ở phế, vị, gan, thận Quả lợi tiểu và làm dịu kích thích Cả cây hoàng liên ô rô chữa kiết lỵ, tiêu chảy viêm ruột, ăn không tiêu, đau mắt

đỏ viêm da dị ứng, mẩn ngứa mụn nhọt

Dưới đây là một số bài thuốc trong dân gian có dùng cây hoàng liên ô rô:

*Chữa viêm gan cấp tính: Dùng thân hoặc rễ hoàng liên ô rô 25g, rễ hoàng liên gai 15g, nhân trần 15g Sắc uống Trường hợp hoàng đản dùng đinh lịch tử 4g, long đởm thảo 4g, sơn chi tử 6g, nhân trần 6g, hoàng cầm 6g Sắc uống

* Thường dùng chữa ho lao, sốt cơn, khạc ra máu, lưng gối yếu mỏi, chóng mặt ù tai, mất ngủ Dùng lá khô hay quả 8- 12g sắc uống hay phối hợp với các vị thuốc khác Chữa viêm ruột, ỉa chảy, viêm da dị ứng, viêm gan vàng da, mắt đau sưng đỏ, dùng rễ hay cây khô 10- 20g sắc uống, dùng riêng hay phối hợp với các vị thuốc khác Ở Ấn Độ, người ta dùng quả trị kiết lỵ Nhân dân thường dùng chữa lỵ, ăn uống không tiêu, vàng da, đau mắt

* Chữa say nắng: Nếu kèm theo nôn mửa, tiêu chảy, tim hồi hộp khát nước dùng hương nhu tía 10g, cát căn 10g, diếp cá 10g, cây ban 10g, hoàng liên ô rô 10g, thạch xương bồ 6g, mộc hương 3g

* Chữa lao phổi, ho ra máu hoặc khạc ra đờm lẫn máu: Mỏ quạ 40g, Dây Rung rúc 30g, Bách bộ và Hoàng liên ô rô, mỗi vị 20g sắc uống

* Chữa kiết lỵ, tiêu chảy, viêm ruột ăn không tiêu: Rễ, thân hoặc toàn cây hoàng liên ô rô 15g, rễ cốt khí củ 15g, thái nhỏ sắc uống làm 2 lần trong ngày Có thể dùng dạng bột trong nhiều ngày

* Chữa đau mắt đỏ, viêm gan vàng da: Rễ hoặc thân hoàng liên ô rô 20g, hạ khô thảo 10g, sắc uống

* Chữa viêm da dị ứng, mẩn ngứa, mụn nhọt: Rễ hoặc lá hoàng liên ô rô 15g, lá khổ sâm 20g, nấu nước đặc để rửa

Loài M japonica có isotetrandrin 1, 566%, palmatin 0, 35% và jatrorrhizin 0, 087% Ngoài

ra còn có magnoflorin và columbamin Trong các loại hạt hoàng liên « rô có berberin và jatrorrhizin

Một số hợp chất đã phân lập từ cây hoàng liên ô rô [69]

Berbamin

Magnoflorin

8 Cây mâm xôi (Rubus alceaefolius Poir.,)

Cây Mâm xôi hay còn được gọi là Đùm đũm có tên khoa học là Rubus alceaefolius

Poir., thuộc họ Hoa hồng - Rosaceae Đây là loài cây bụi nhỏ, thân leo có gai to và dẹt Cành mọc vươn dài, có nhiều lông Lá đơn, mọc so le, hình bầu dục, hình trứng hoặc gần tròn, chia thùy nông, không đều, gân chân vịt, mép khía răng, mặt trên màu lục sẫm phủ lông lởm chởm, mặt dưới có nhiều lông mềm, mịn màu trắng xỉn; cuống lá dài cũng có gai; lá kèm sớm rụng Cụm hoa mọc ở kẽ lá hoặc đầu cành thành chùm ngắn; lá bắc giống lá kèm, hoa màu trắng; cánh hoa 5, mỏng hình tròn, nhị rất nhiều thường dài bằng cánh hoa, chỉ nhị dẹt, lá noãn nhiều Quả hình cầu, gồm nhiều quả hạch tụ họp lại như dáng mâm xôi, khi chín màu đỏ tươi, ăn được Ra hoa tháng 2-3, quả tháng 5-7

Phân bố, sinh thái

Theo Đỗ Huy Bích và cộng sự [3], trên thế

giới chi Rubus có khoảng hơn 400 loài, hầu

hết là cây bụi, mọc thẳng hay bụi trườn,

phân bố chủ yếu ở vùng ôn đới, cận nhiệt

đới và cả ở vùng nhiệt đới Bắc bán cầu Một

vài loài được trồng lấy quả ở Việt Nam, chi

này có 50 loài, trong đó Mâm xôi là loài

phân bố tương đối rộng rãi ở khắp các tỉnh

vùng núi thấp, trung du và đồng bằng Cây

ưa sáng và ẩm, thường mọc trùm lên các cây

Cây Mâm xôi Rubus alceaefolius Poir

bụi và cây leo khác ở ven rừng ẩm, rừng núi đá vôi, đồi, nhất là trong các trảng cây bụi ưa sáng trên đất sau nương rẫy.ở vùng đồng bằng, Mâm xôi mọc lẫn trong các lùm bụi quanh làng, hai bên đường đi Cây này sinh trưởng, phát triển nhanh Những cây ít bị chặt phá ra hoa quả nhiều hàng năm Cây có khả năng tái sinh mạnh sau khi bị chặt phá

Công dụng

Lá, cành và rễ Mâm xôi có vị ngọt nhạt, tính bình, có tác dụng thanh nhiệt, tán ứ, tiêu viêm, chỉ huyết, kích thích tiêu hóa, giúp ăn ngon miệng Cành lá phơi khô, nấu nước uống thay chè, dùng cho phụ nữ sau khi đẻ mất sức và những người ăn không tiêu, đầy bụng Ngoài ra cành và lá Mâm xôi còn được dùng phối hợp với Mộc thông, Ô rô để chữa viêm tuyến vú, viêm gan cấp và mạn tính Quả có vị ngọt, tính bình, được dùng thay vị Phúc bồn tử trong y học cổ truyền, có tác dụng bổ gan thận, giữ tinh khí, làm tráng dương, mạnh sức Quả được dùng chữa thận hư, liệt dương, di tinh, đái són, đái buốt [3], [6]

ở ấn Độ người ta dùng quả Mâm xôi làm thuốc chữa bệnh đái dầm của trẻ em Nước sắc lá và vỏ thân được dùng làm thuốc điều kinh, chữa tiêu chảy

ở Trung Quốc, Mâm xôi được sử dụng trong y học cổ truyền để chữa albumin niệu, viêm tuyến vú và viêm gan mạn tính ở một số vùng của Trung Quốc, nó còn được sử dụng để chữa một số bệnh ung thư nhất định Theo kết quả nghiên cứu của Cui C -B và cộng sự, rễ Mâm xôi thể hiện hoạt tính ức chế mạnh chu kỳ tế bào ở pha G0/G1 của dòng tế bào tsFT210 (Chu kỳ tế bào, con đường duy nhất để tế bào sinh sôi, là một quá trình sinh học được kiểm soát chặt chẽ và thực tế ung thư là sự tăng sinh vô hạn độ không mong muốn của các tế bào ung thư với sự thoái hóa của chu kỳ tế bào Do đó, các chất ức chế chu

kỳ tế bào có khả tiềm tàng trong điều trị ung thư) [70]

Thành phần hoá học

Theo các sách về cây thuốc Việt Nam [3], [6], quả Mâm xôi chứa các axít hữu cơ (chủ yếu là axít citric, malic, salycilic), đường, pectin Lá chứa tanin Tuy nhiên, hiện nay

còn rất ít công trình nghiên cứu được công bố về loài R alceaefolius Mới chỉ có các nhà

khoa học Trung Quốc nghiên cứu loài này và cũng chỉ nghiên cứu về cây thuốc này mọc ở Trung Quốc Còn ở Việt Nam hoàn toàn chưa có nghiên cứu nào về cây thuốc quí này

Theo sự tra cứu của chúng tôi, từ cây R alceaefolius mọc ở Trung Quốc, năm 1998

Gan L và các đồng nghiệp đã phân lập được: corosolic acid (1g), tormentic acid (2g), inchigoside F1 (3g), trachelosperoside E-1 (4g) và suavissimoside R1 (5g) [6] Năm 2000, Gan L và các đồng nghiệp lại công bố phân lập của alcesefoliside (6g), hyperoside (7g), vomifoliol (8g), β-sitosterol (9g), daucosterol (10g) và dotriacontyl alcohol (11g) [4] Năm

niga-2002, nhóm nghiên cứu của Cui C -B đã công bố sự phân lập của rubuphenol (12)

sanguiin H-2 ethyl ester (13g), ellagic acid (14g), ethyl gallate (15g), galloyl-β-D-glucopyranose (16g) và 1,2,3,6-tetra-O-galloyl-β-D-glucopyranose (17g) [5]

1,2,3,4,6-penta-O-Dưới đây chúng tôi dẫn ra cấu trúc của một số hợp chất đã được phân lập từ loài R alceaefolius

Các hợp chất đã được phân lập từ cây Rubus alceaefolius

HO

HO

O OH

1g

HO HO

O OH OH

2g

OH

HO HO

H

O H

HO

O

OH

OH OH

OH OH OH

O O

HOOC

O OH

OH OH OH OH

HO

O O

OH OH

OH OH

7g

O

OH OH

O O

HO OH

15g

O GO

OG OG RO

GO

OH

OH

OH C

O

G =

16g: R=glc; 17g: R=H

O O H O

O O

OH OH

OH O

OH OH HO O

OH HO HO

OH HO

HO HO

HO

OH OC

CH 3 CH 2

OH OH

O O

O

13g

9 Cây bồ kết (Gleditschia australis Hemsl)

Mụ tả cõy: Cây bồ kết (Gleditschia australis Hemsl hay

còn gọi là Gleditsia australis Hemsl.) là cõy thõn gỗ cao 5

- 10m, có nhiều gai to dài 10 - 15cm ở thân và cành, gai

mọc thành cụm Lá mọc cách, thường 2 lần kép lông

chim, mang 3 - 4 cặp lá chét bậc 1, mỗi lá chét này lại

gồm 6 - 8 cặp lá chét bậc 2, phiến lá chét có lông ở mặt

trên Hoa họp thành chùm ở kẽ lá hay đầu ngọn Hoa có

5 lá dài, 5 cánh hoa, có lông dài ở mặt trong - Hoa đực

có 10 nhị, không có bầu Hoa cái hay hoa lưỡng tính có

5 nhị Quả cứng dẹp, dài 7 - 10cm, rộng 1-2cm, khi

chín màu nâu đen, trong có 8 - 12 hạt mầu xám nâu,

Thu hái chế biến:

- Gai: hái quanh năm, chọn những chùm gai to, hái về sấy khô (cũng có thể thái lát rồi phơi sấy khô)

- Quả: Mùa quả bắt đầu già chín đen thì hái, phơi sấy khô thủy phần dưới 12p100

Thành phần hóa học:

- Gai: Có saponin

- Quả: có các chất saponin, flavonoid, một số hợp chất triterpen

Công dụng:

- Gai bồ kết, vị cay, tính ấm vào kinh Phế, Đại trường

Có tác dụng hoạt huyết, tiêu viêm, trừ đờm, thông sữa, giải độc, tan ung nhọt, chữa các chứng ung nhọt độc,.tràng nhạc, sưng vú, tắc sữa

- Quả: vị cay mặn, tính ấm, có độc một ít Vào 2 kinh Phế, Đại trường có tác dụng trừ đờm, khai khiếu, nhuận tràng, thông sữa

Chữa các chứng bệnh: tắc đờm, hen xuyễn, ho, tức ngực, trúng phong, ngất xỉu, cấm khẩu,

động kinh kéo đờm tắc, tắc sữa, phụ nữ đẻ nhau thai không ra, chết đuối hấp hối ngạt thở

Chi Bồ kết ở Việt nam, gồm có 3 loài là G rolfei Vidal y Soler (tạo giác), G

pachycarpa Bal ex Gagn và G australis Hemsl ex Forb & Hemsl (chùm kết, bồ kết, tạo giác) nhưng các nghiên cứu mới chỉ thấy đề cập đến 1 loài trong chi, đó là cây Bồ kết (G australis Hemsl.) [6]

Về tác dụng dược lý: [4]

Cây Bồ kết là một dược liệu dân gian được dùng phổ biến ở Việt nam Cây Bồ kết cung cấp các vị thuốc sau đây: quả Bồ kết-Fructus Gleditsiae, thường gọi là tạo giác; gai Bồ kết-Spina Gleditsiae, thường gọi là tạo giác thích; hạt Bồ kết-Semen Gleditsiae, thường gọi

là tạo giác tử

Quả Bồ kết có vị cay, mặn, tính ôn, hơi có độc, có tác dụng thông khiếu, khử đờm, tiêu thũng, làm hắt hơi Hạt Bồ kết có vị cay, tính ôn, có tác dụng thông đại tiện, bí kết và chữa mụn nhọt Gai Bồ kết có vị cay, tính ôn, có tác dụng tiêu thũng, bài nung, sát trùng Người ta thường dùng quả Bồ kết ngâm hoặc nấu nước gội đầu, trơn tóc, dùng giặt quần áo len, dạ, lụa có màu không bị hoen ố và không bị phai màu Bồ kết thường được dùng làm thuốc tiêu đờm, gây nôn và thông đại, tiểu, trung tiện, sát trùng; chủ yếu dùng chữa trúng phong cấm khẩu, phong tê, tiêu đồ ăn, đờm, suyễn thũng, sáng mắt, ích tinh Liều dùng hàng ngày 0,5-1 g dưới dạng thuốc bột hay đốt ra than để dùng, hoặc thuốc sắc Hạt Bồ kết dùng thông đại tiểu tiện và chữa mụn nhọt Ngày dùng 5-10 g dạng thuốc sắc Gai Bồ kết dùng chữa ác sang, tiêu ung độc, sưng vú, làm xuống sữa

Các đơn thuốc có chứa bồ kết: chữa trúng phong, cấm khẩu, hôn mê, bất tỉnh; chữa hen suyễn, nhiều đờm; chữa bí đại tiện, tắc ruột, bụng trướng sau khi mổ hoặc bệnh phù trướng ứ nước, đại tiểu tiện bí; chữa giun kim; chữa sâu, nhức răng; chữa lở ngứa có nấm, chốc đầu; chữa quai bị; chữa lỵ amip có kén, đi lỵ lâu ngày; chữa mụn nhọt bọc không vỡ mủ; chữa sưng vú cho phụ nữ [6]

Từ năm 1969, qua nghiên cứu sơ bộ về tác dụng dược lý của Bồ kết, tác giả Ngô Thị Thanh Hải đã thấy rằng hỗn hợp flavonoit và chất saponaretin riêng biệt có hoạt tính chống siêu vi trùng, hỗn hợp saponin Bồ kết có tác dụng đối với trùng roi âm đạo, hỗn hợp saponin và flavonoit có tác dụng giảm đau Những nghiên cứu về tác dụng dược lý cho thấy

bồ kết có tác dụng kháng khuẩn mạnh như kháng tràng cầu khuẩn, trực khuẩn lỵ shigella,

trực khuẩn thương hàn, trực khuẩn mủ xanh và phảy khuẩn tả [4]

Những nghiên cứu về thành phần hoá học:

Thành phần hoá học của các loài trong chi Gleditschia chưa được nghiên cứu nhiều ở

Việt nam Năm 1961, Đỗ Tất Lợi và cộng sự đã chiết được một chất saponin tinh khiết từ quả Bồ kết Việt Nam với hiệu suất 10% Chất này không mùi, vị nhạt, gây hắt hơi mạnh, nhiệt độ nóng chảy 198-202oC, năng suất quay cực-32o Chất này tan trong rượu và nước

Từ chất saponin này, các tác giả đã thuỷ phân và kết tinh được một chất sapogenin có tinh thể hình kim, không tan trong nước, tan trong ete, cồn và clorofoc, độ chảy 298-301o

C Tuy nhiên, cấu trúc của hai hợp chất này chưa được xác định

Năm 1963, Bùi Đình Sang chiết được từ bồ kết Việt Nam saponin, men peroxyđaza và hai chất khác có tinh thể chưa xác định được tính chất

Năm 1969, Ngô Thị Bích Hải đã phân lập được từ quả Bồ kết Việt Nam 8 chất flavonoit và 7 hợp chất tritecpen Trong số 8 chất flavonoit, có 5 chất thu được dưới dạng tinh khiết và được xác định là luteolin, saponaretin, vitexin, homoorientin và orientin Đối với các hợp chất tritecpen, phần aglycon là axit oleanolic gắn với glucoza và galactoza Ngoài ra, tác giả còn chiết được một saponin mới là australozit [4] Theo tra cứu của chúng

tôi vẫn chưa có công trình nào nghiên cứu về lá cây G Australis ở Việt Nam

Nghiên cứu ứng dụng tạo chế phẩm

Trong giai đoạn 2003-2005, Viện Hoá học các Hợp chất thiên nhiên đã được Bộ Khoa học và Công nghệ giao cho thực hiện đề tài nghiên cứu khoa học theo Nghị định thư giữa Chính phủ Việt Nam và Italia “ Nghiên cứu thành phần hoá học và hoạt tính sinh học của một số dược thảo và sinh vật biển Việt Nam ” Đề tài đã đạt được những kết quả khả quan Đã đánh giá được hoạt tính sinh học của một số lượng thảo dược và sinh vật biển để thông qua đó đã có những nghiên cứu hoá học theo định hướng hoạt tính sinh học đạt hiệu quả Theo hướng nghiên cứu này, đề tài đã đưa ra được một số sản phẩm dược dụng có kết quả tốt Ngoài ra, một trong những thành công của giai đoạn 1 là đã tìm ra được các hợp chất có hoạt tính sinh học cao đó là β-eudesmol từ cây thương truật Đây là hợp chất cũng

được các nhà khoa học trên thế giới đặc biệt quan tâm và nghiên cứu nhiều theo hướng điều trị viêm loét dạ dầy

Cây thương truật có tên khoa học là Atractylodes lancea, thuộc họ Cúc Asteraceae

(Compositae) Có nơi còn gọi là xích truật, mao thương truật Cây được sử dụng rộng rãi trong dân gian để chữa các bệnh rối loạn tiêu hoá, đau dạ dày, cây còn dùng để hạ thấp lượng huyết đường quá cao, dùng trong điều trị bện đái tháo đường Ngoài ra cây còn được dùng trong điều trị các triệu chứng tinh thần không phấn khởi, chân tay không có lực ở Trung Quốc, cây có tên là “Cang Zhu” thường được dùng để điều trị các bệnh thấp khớp, rối loạn tiêu hoá, tiêu chảy nhẹ, cảm và nó còn được biết đến như thuốc làm tiết mồ hôi

[180] A lancea cũng có mặt trong rất nhiều các toa thuốc cổ truyền của Nhật Bản để chữa

các bệnh loét dạ dày, rối loạn tiêu hoá ví dụ như trong thang thuốc có tên là Tang [179] Các nghiên cứu hoá học trong nhiều năm qua đã chứng minh rằng thành phần

Liu-Jun-Zi-chủ yếu của cây A lancea là các polyaxetylen Dựa trên các ứng dụng trong dược học cổ truyền và thành phần hoá học của cây, các nghiên cứu về hoạt tính sinh học của A lancea

thường tập trung vào các nghiên cứu để phát triển các thuốc điều trị các bệnh rối loạn tiêu hoá và dạ dày

Vào năm 1986, các nhà khoa học Nhật Bản đã tiến hành các nghiên cứu về hiệu quả

điều trị của các dịch chiết và một vài hợp chất từ rễ cây thương truật trong điều trị các vết loét dạ dày Thí nghiệm sử dụng các phân đoạn benzen, metanol, và nước của dịch chiết 50%MeOH, cùng với 2 hợp chất β-eudesmol và hinesol trong hoạt động kìm hãm quá trình tiết dịch dạ dày ở chuột bị thắt môn vị Kết quả thu được là phân đoạn benzen (chứa các tinh dầu và 2 hợp chất β-eudesmol và hinesol) có hoạt tính rất cao Trong các thí nghiệm này, β-eudesmol cho thấy khả năng kìm hãm sự gây loét ở chuột, cũng như gây loét dạ dày

do histamine và aspirin gây nên Ngoài ra, theo các tác giả này, hai hợp chất trên còn có thể thúc đẩy quá trình sản sinh dịch nhầy trong niêm mạc dạ dày [180] Theo một thông báo

mới đây của Nakai và cộng sự, rễ của A lancea còn có tác dụng trì hoãn quá trình tạo cặn

dạ dày và các polyaxetylen đóng góp chủ yếu cho hoạt động này [179]

Trên một hướng nghiên cứu khác, Resch và cộng sự thực hiện các thí nghiệm trên hoạt

động chống viêm của các hợp chất của A lancea Trong các thí nghiệm này, các hợp chất

phenol đóng vai trò chính trong hiệu quả kìm hãm các enzim 5-LOX (5-lipooxygenase) và

COX-1 (cyclooxygenase-1) Phần phân đoạn ưa béo của A lancea có hoạt động chống cả 2

enzim trên rất mạnh ví dụ như atractylochromen có IC50 đối với 5-LOX là 0,6 àM và 3,3

àM đối với COX-1, hay như , methylphenol có IC50 đối với 5-LOX là 0,1 àM và đối với COX-1 là 2àM [182] Dựa vào những nghiên cứu trên thế giới và kết quả nghiên cứu của chúng tôi thông qua chương trình sàng lọc hoạt tính kháng NF-κB, chúng tôi đã phân lập được các hợp chất β-eudesmol với hàm lượng cao có triển vọng ứng dụng tạo chế phẩm chữa bệnh viêm loét dạ dầy và hành tá tràng Theo Đỗ Huy Bích và cs [3] thương truật được dùng như một bài thuốc chữa viêm dạ dầy, viêm ruột, tiêu chảy, chữa viêm đại tràng mạn tính thể táo Ngoài ra cũng theo các bài thuốc cổ truyền, thương truật còn dược dùng để chữa trị nhiều bệnh viêm mạn tính khác như thấp khớp mạn tính,viêm đa khớp dạng thấp, viêm cầu thận, sỏi đường tiết liệu v.v ngoài ra thương truật còn được dùng tốt trong điều trị bệnh huyết đường, làm thuốc bổ dạ dày và tiêu hoá

2-[(2’E)-3’,7’-dimethyl-2’,6’-octadienyl]-4-methoxy-6-Nhằm tiếp tục kế thừa và phát huy những kết quả đã đạt được trong giai đoan I của dự án, vừa qua, cùng với những kết quả nghiên cứu tìm kiếm các hợp chất kháng yếu tố nhân NF-

κB, một yếu tố mấu chốt của các quá trình viêm nhiễm và ung thư, tập thể các tác giả xin

đăng ký đề tài “Nghiên cứu hoá học và hoạt tính sinh học của một số cây thuốc dân tộc Việt Nam nhằm tạo sản phẩm thuốc có giá trị cao phục vụ cuộc sống” Ngoài mục tiêu tiếp tục nghiên cứu sàng lọc hoạt tính sinh học của 100 loài thực vật và tập trung nghiên cứu sâu trên 9 đối tượng thực vật là những cây thuốc dân tộc có triển vọng nhất thông qua giai đoạn sàng lọc hoạt tính sinh học cũng như tác dụng chữa bệnh trong y học cổ truyền để tìm kiếm những hoạt chất có giá trị sinh học, đề tài cũng tiếp tục hoàn thiên các nghiên cứu theo hướng ứng dụng β-eudesmol từ cây thương truật để đưa ra chế phẩm điều trị viêm loét

dạ dầy, hành tá tràng

Phần II Phương pháp nghiên cứu

2.1 Thu mẫu thực vật

Các mẫu thực vật do các nhà thực vật học thu, chụp ảnh, tạo tiêu bản, định tên khoa học và sử lý đảm bảo theo yêu cầu

2.2 Phương pháp xử lý và chiết mẫu

Mẫu thực vật sau khi thu hái được thái nhỏ, phơi trong bóng râm và sấy khô ở nhiệt

độ 45-500C, sau đó được nghiền nhỏ Bột mẫu khô được ngâm chiết bằng metanol 3 lần (2 ngày/lần) ở nhiệt độ phòng Dịch chiết metanol được cất loại dung môi dưới áp suất giảm

để phục vụ cho các nghiên cứu sàng lọc hoạt tính và nghiên cứu hóa học

2.3 Các phương pháp phân tích, phân tách các hỗn hợp và phân lập các hợp chất

Để phân tích và phân tách các phần chiết của cây cũng như phân lập các hợp chất, các phương pháp sắc ký đã được sử dụng như: sắc ký lớp mỏng (TLC, dùng để khảo sát), sắc ký cột thường (CC), sắc ký cột pha đảo

Sắc ký lớp mỏng được thực hiện trên bản mỏng tráng sẵn DC-Alufolien 60 F254 (Merck 1,05715), RP18 F254s (Merck) Dung môi triển khai sắc kí là hỗn hợp của một số trong số các dung môi thường dùng như n-hexan, cloroform, etyl axetat, axeton, metanol và nước Phát hiện chất bằng đèn tử ngoại ở hai bước sóng 254 nm và 365 nm hoặc dùng thuốc thử là dung dịch H2SO4 10% được phun đều lên bản mỏng, sấy khô rồi hơ nóng trên bếp

điện từ từ đến khi hiện màu

Sắc ký cột được tiến hành với chất hấp phụ là silica gel pha thường, silica gel pha

đảo và sephadex LH-20 Silica gel pha thường có cỡ hạt là 0,040-0,063 mm (240-430 mesh) Silica gel pha đảo YMC (30-50 àm, Fujisilisa Chemical Ltd.)

2.4 Các phương pháp xác định cấu trúc của các hợp chất phân lập được

Cấu trúc của các hợp chất được phân lập được xác định bằng sự kết hợp của các dữ kiện thu được từ các phương pháp phổ như: quang phổ hồng ngoại (FT-IR), phổ khối va chạm electron (EIMS), phổ khối phân giải cao (HRMS) và các phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân gồm phổ một chiều (1H NMR, 13C NMR, DEPT) và phổ 2 chiều (COSY, HSQC, HMBC, NOESY)

Phổ hồng ngoại được đo trên máy FTIR-Impact-410 bằng phương pháp nén viên KBr Phổ cộng hưởng từ nhân (NMR): 1H-NMR (500 MHz) và 13C-NMR (125 MHz) được

đo trên máy Bruker AM500 FT-NMR Spectrometer, sử dụng TMS làm chất chuẩn nội Phổ khối lượng phun mù điện tử (Electrospray Ionization Mass Spectra) được đo trên máy AGILENT 1100 LC-MSD Trap Các thiết bị trên thuộc Viện Hóa học, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam

Phổ khối lượng phân giải cao (HRESI-MS) đo trên máy Q/TOF spectrometer (Waters Q/TOF premier equipped with an electrospray ion source) của Trường Đại học tổng hợp Salemo, Italia

Độ quay cực đo trên máy JASCO DIP-1000 KUY polarimeter

Điểm nóng chảy đo trên máy Kofler micro-hotstage

2.5 Phương pháp đánh giá hoạt tính sinh học

2.5.1 Đánh giá hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định (Antimicrobial activity assay)

• Nguyên liệu: Mẫu thực vật được chuẩn bị theo một quy trình thống nhất đã trình

bày ở phần trên và các chủng vi sinh vật kiểm định bao gồm:

- Vi khuẩn Gr(-):Escherichia coli (ATCC 25922 ); Pseudomonas aeruginosa (ATCC

25923

- Vi khuẩn Gr (+): Bacillus subtillis (ATCC 27212 ); Staphylococcus aureus

- Nấm sợi: Aspergillus niger, Fusarium oxysporum

- Nấm men: Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae

- Kháng sinh kiểm định: Ampicilin đối với vi khuẩn Gr(+); Tetracylin đối với vi khuẩn Gr(-); Nystatin đối với nấm sợi và nấm men

- Cách pha kháng sinh: Kháng sinh pha trong dung môi DMSO100% với nồng độ: Ampixilin: 50mM; Tetracylin: 10mM; Nystatin: 0.04mM

- Môi trường nuôi cấy vi sinh vật:

* Môi trường duy trì và bảo tồn giống: Saboraud Dextrose Broth (SDB) cho nấm men và nấm mốc Vi khuẩn trong môi trường Trypcase Soya Broth (TSB)

* Môi trường thí nghiệm: Eugon broth cho vi khuẩn, Myco phil cho nấm

• Phương pháp tiến hành và đọc kết quả:

- Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định để đánh giá hoạt tính kháng sinh của các mẫu chiết được tiến hành trên các phiến vi lượng 96 giếng (96-well microtiter plate) theo phương pháp hiện đại của Vander Bergher và Vlietlinck (1991) [1], và McKane, L., & Kandel (1996), hiện đang được áp dụng tại trường đại học Dược, đại học Tổng hợp Illinois, Chicago, Mỹ

Bước1: Sàng lọc sơ bộ tìm mẫu (chất) có hoạt tính

- Chuẩn bị vi sinh vật:

Nấm được duy trì trong môi trường dinh dưỡng đã nêu ở phần nguyên liệu và phương pháp Các chủng kiểm định được hoạt hoá trước khi tiến hành thử nghiệm trong môi trường dinh dưỡng dịch thể đặc biệt (24 giờ đối với vi khuẩn, 48 giờ đối với nấm) Sau

đó được pha loãng tới nồng độ 0,5 đơn vị Mc Fland để tiến hành thí nghiệm

- Chuẩn bị mẫu thử:

- Hoà tan các chiết phẩm trong dung dịch DMSO 100% bằng máy Vortex với nồng

độ 4-10 mg/ml

- Từ dung dịch gốc nhỏ sang phiến vi lượng 96 giếng, mỗi giếng10àl mẫu

- Nhỏ vào mỗi giếng đã có mẫu sẵn 190àl vi sinh vật đã hoạt hoá

- Đối chứng dương:

Dãy 1: Môi trường; Dãy 2: Kháng sinh + vi sinh vật kiểm định

- Đối chứng âm: chỉ có vi sinh vật kiểm định

- Để trong tủ ấm 370C/24 giờ đối với vi khuẩn và 300C/48 giờ đối với nấm

- Đọc kết quả:

Mẫu dương tính khi nhìn bằng mắt thường thấy trong suốt, không có vi sinh vật phát triển, giống như hình ảnh ở các giếng chứng âm tính Mẫu dương tính ở bước 1 sẽ

được tiếp tục thử bước 2 để tính giá trị MIC (Minimmum Inhibitory Concentration)

Bước 2: Tìm nồng độ ức chế tối thiểu (MIC-Minimmum Inhibitory Concentration) của mẫu (chất) có hoạt tính:

Các bước tiến hành như bước 1: Riêng các mẫu có biểu hiện dương tính ở bước 1

được pha loãng theo các thang nồng độ thấp dần, từ (5- 10) thang nồng độ để tính giá trị ức chế tối thiểu mà ở đó vi sinh vật bị ức chế phát triển gần như hoàn toàn

• Đọc kết quả:

Nồng độ dương tính là ở đó không có vi sinh vật phát triển Khi nuôi cấy lại nồng

độ này trên môi trường thạch đĩa để kiểm tra, có giá trị CFU (Colony Forming Unit) < 5

Mẫu thô có MIC ≤ 200àg/ml: chất sạch có MIC ≤ 50àg/ml là có hoạt tính

2.5.2 Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào (Cytotoxic activity assay)

• Nguyên liệu: - Dòng tế bào

Dòng LU (Lung cancer - ung thư phổi)

Dòng Hep-G2 (Hepatocellular carcinoma- Ung thư gan) từ Viện VSDT Trung ương

- Môi trường nuôi cấy tế bào: DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle Medium) hoặc MEME

(Minimum Essential Medium with Eagle’s salt) Có bổ sung L-glutamine, Sodium piruvat, NaHCO3, PSF (Penixillin-Streptomycin sulfate-Fungizone); NAA (Non-Essential Amino Acids); 10% BCS (Bovine Calf Serum)

- Tripsin-EDTA 0,05%; DMSO (Dimethyl Sulfoside); TCA(Trichloro Acetic Acid); Tris Base; PBS (Phosphate Buffered Saline); SRB (Sulfo Rhodamine B); Acid Acetic

- Các typ dùng 1 lần: Bình nuôi cấy tế bào, phiến vi lượng 96 giếng, pipet pasteur, các đầu

tip cho micropipet…

- Chất chuẩn chứng dương tính: Dùng chất chuẩn có khả năng diệt tế bào: Elipticine hoặc

Colchicine pha trong DMSO với nồng độ 0.01mM

- Mẫu thực vật: Các mẫu thực vật được chuẩn bị theo một quy trình thống nhất như đã trình

bày ở phần trên

- Tủ ấm CO2, tủ lạnh sâu- 84C, tủ lạnh thường, máy li tâm, máy đọc Elisa; Box Laminar

PII, bình ni tơ lỏng, cân phân tích, máy đo pH, buồng đếm tế bào, kính hiển vi soi ngược

• Phương pháp tiến hành:

- Theo phương pháp của Skehan và cộng sự [2] và Likhiwitayawuid và cộng sự [3] hiện

đang được áp dụng tại viện nghiên cứu ung thư Quốc gia của Mỹ (NCI) và trường đại học Dược, đại học Tổng hợp Illinois, Chicago, Mỹ

- Dòng tế bào được giữ trong Nitơ lỏng, đánh thức và duy trì trong các môi trường dinh dưỡng có bổ sung huyết thanh bê tươi 7-10% Hoà mẫu thí nghiệm vào dung dịch DMSO 100% (4- 10mg/ml) cho bước sàng lọc sơ bộ

- Pha 10 thang nồng độ cho bước 2 để tính giá trị IC50 Tế bào nuôi cấy cho phát triển tới mức 60-70%, thay môi trường sạch để hoạt hoá tế bào từ 18-24 giờ, lúc đó tế bào đã sẵn

sàng để thực hiện thí nghiệm

- Tế bào được xử lý Trípsin 0,1% cho tách khỏi đáy bình Hoà dung dịch huyền phù tế bào bằng môi trường sạch, rửa và đếm số lượng, pha tế bào nồng độ 3x104 tế bào/ml đối với dòng KB, 4x104 tế bào/ml đối với dòng Fl

- Thêm vào các giếng đã có chất chuẩn bị sẵn ở trên 190àl dung dịch huyền phù tế bào

- Phiến được ủ trong tủ CO2 thêm 3 ngày

- Kết thúc thí nghiệm: Tế bào khi ủ 3 ngày được cố định bằng dung dịch TCA lạnh 50%) Rửa, để khô, nhuộm SRB 0,4% trong axit acetic 1% và rửa lại bằng axit acetic 1%

(30-để loại mầu thừa và (30-để khô, hoà lại bằng dung dịch đệm Tris base 10 mM

- Đọc trên máy ELISA ở bước sóng 495-515nm

• Tính kết quả:

Giá trị CS: Là khả năng sống sót của tế bào ở nồng độ nào đó của chất thử tính theo

% so với đối chứng Dựa trên kết quả đo được của chúng OD (ngày 0), DMSO 10% và so sánh với giá trị OD khi trộn mẫu để tìm giá trị CS(%) theo công thức:

OD (mẫu) – OD (ngày 0)

CS% = x 100

OD (DMSO) – OD (ngày 0) Giá trị CS% sau khi tính theo công thức trên, được đưa vào tính toán Excel để tìm ra

% trung bình ± độ lệch tiêu chuẩn của phép thử được lặp lại 3 lần theo công thức của Ducan như sau: Độ lệch tiêu chuẩn σ

Σ (xi - x )2

σ =

n - 1

Hình 2 : Đồ thị tính giá trị IC 50 của mẫu chứng

Các mẫu có biểu hiện hoạt tính (CS < 50%) sẽ được chọn ra để thử nghiệm tiếp để tìm giá trị IC50.

Giá trị IC50: Dùng giá trị CS của 10 thang nồng độ, dựa vào chương trình Table curve theo thang gía trị logarit của đường cong phát triển tế bào và nồng độ chất thử để tính

giá trị IC50

Giá trị IC 50 ≤ 30àg/ml đối với mẫu thô và ≤ 4àg/ ml đối với chất sạch là có hoạt tính

Công thức: 1/y=a+blnX Trong đó Y: Nồng độ chất thử ; X: Giá trị CS (%)

2.5.3 Đánh giá hoạt tính chống ôxy hoá của các mẫu thực vật thông qua phản ứng bao vây gốc tự do DPPH (Antioxidant activity assay- DPPH free radical scavenging)

• Nguyên liệu, máy móc thí nghiệm:

1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (Sigma, USA); Axit ascorbic (Sigma, USA); Ethanol 96% (Việt Nam); Dimethylsulphoxid (DMSO) 100% (Sigma, USA); Phiến vi lượng 96 giếng (Conning - Mỹ); Bản mỏng Silicagel RP-18 F254s (Art 1.05559); Pippetman (Gilson - Pháp) Máy đọc Elisa

• Mẫu thực vật

Các mẫu thực vật được chuẩn bị theo một quy trình thống nhất như đã trình bày ở phần trên

• Phương pháp tiến hành:

+ Phương pháp sàng lọc sơ bộ khả năng bẫy gốc tự do trên phiến 96 giếng:

Thử nghiệm chống ôxy hoá dựa trên nguyên lý: DPPH có khả năng tạo ra các gốc tự

do bền trong dung dịch EtOH bão hoà Khi cho các chất thử nghiệm vào hỗn hợp này, nếu chất có khả năng làm trung hoà hoặc bao vây các gốc tự do sẽ làm giảm cường độ hấp phụ

ánh sáng của các gốc tự do DPPH Hoạt tính chống ôxy hoá được đánh giá thông qua giá trị hấp phụ ánh sáng của dịch thí nghiệm so với đối chứng khi đọc trên máy Elisa ở bước sóng 515nm

Chuẩn bị mẫu thí nghiệm:

- Tạo dung dịch có các gốc tự do: DPPH 300àM trong ethanol

- Mẫu sinh thực vật pha trong DMSO 100% với nồng độ 4mg/ml

- Chứng dương tính 1 mM Flavonoid hoặc 5mM axit Acscorbic

Tiến hành thí nghiệm:

Trộn mẫu và DPPH trên phiến 96 giếng

Dãy thí nghiệm: 10àl mẫu +190àl DPPH trong Ethanol

Dãy chứng âm tính: 10àl DMSO 10% +190àl DPPH trong ethanol

Dãy Blank (mẫu trắng): 10àl mẫu +190àl Ethanol

Dãy chứng dương tính: 10àl mẫu +190àl DPPH trong ethanol

Phiến được bọc kín để tránh ánh sáng môi trường và ủ trong tủ ấm 370C trong 2 giờ

Đọc kết quả trên máy Elisa bước sóng 515nm

• Tính kết quả:

Tính giá trị % hoạt động SC% (Scavenging capacity):

Giá trị trung bình của SC% Được đưa vào chương trình xử lý số liệu Excell Window tìm ra % trung bình ± độ lệch tiêu chuẩn của phép thử được lặp lại 3 lần theo công thức:

Pha mẫu theo 5 thang nồng độ, giá trị IC50 được đưa vào chương trình Table Curve,

thông qua nồng độ chất thử và % hoạt động của chất thử tính ra nồng độ của chất thử nghiệm mà ở đó 50% các gốc tự do được tạo bởi DPPH được trung hoà bởi chất thử theo công thức:

Trong đó Y: Nồng độ chất thử X: Giá trị SC (%)

+ Phương pháp thử nghiệm trực tiếp trên bản mỏng

Phương pháp hiện đồ sinh học trực tiếp trên bản mỏng đã chạy sắc kí (TLC

Bioautographic assays) là phương pháp đơn giản và rẻ tiền nhất, dễ dàng thực hiện và đòi

hỏi rất ít các trang thiết bị để phát hiện các thành phần chất có hoạt tính Phương pháp này

đóng vai trò quan trọng trong việc định vị và xác định đặc tính của chất trong quá trình phân lập chất theo định hướng hoạt tính sinh học, là sự kết hợp việc chạy sắc kí bản mỏng với thử nghiệm sinh học tại chỗ Nó cho phép định vị vị trí chất có hoạt tính trên bản mỏng trong một hỗn hợp chất nền (Hostettmann và cộng sự, 1995, 1997) Tuy nhiên, phương pháp này chỉ có tác dụng chủ yếu là phát hiện ra các chất, thường là các chất dẫn đường cho các nghiên cứu tiếp theo

Trong phần thử nghiệm sàng lọc hoạt tính chống ôxy hoá thông qua thử nghiệm bắt giữ các gốc tự do tiếp theo, chúng tôi đã áp dụng phương pháp phun sương gốc 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) lên bản mỏng đã chạy chất thử (phương pháp TLC-DPPH)

Mẫu được chấm trên bản mỏng với bề rộng 9-10mm và phân tách trên bản nhôm RP-18 (10x20cm) Vị trí khởi đầu là 12mm từ cả hai mặt và 10mm từ đáy phiến Phiến

được phát triển trên hệ dung môi thích hợp Sau khi để khô 15 phút, phiến được nhúng hoặc phun sương với dung môi DPPH 0,04% trong 5 giây Sau khi nhúng 2 phút, ảnh được lưu giữ dưới ánh sáng khả kiến Hoạt tính bẫy gốc tự do được xác định theo phương pháp của Glavind (1967) bằng chương trình phần mềm quét ảnh, thông qua sự biến thiên của cường

độ màu của chất thử trên các vùng khác nhau của phiến Dải chất có màu vàng sáng trên nền màu tía chính là vùng có hoạt tính bao vây các gốc tự do làm thay đổi màu của phản ứng

2.5.4 2.4.3 Phương pháp thử hoạt tính chống loãng xương:

Bệnh loãng xương kết hợp với sự thiếu estrogen là nguyên nhân chung nhất của quá trình lão hóa xương Liệu pháp thay thế hocmon có thể giải quyết được cho phụ nữ mãn kinh Tuy nhiên kết hợp liệu pháp này không có lợi cho sức khỏe, bởi vì điều trị trong một thời gian dài có thể gây ra biến chứng những bệnh như ung thư vú và ung thư tử cung…Trong nghiên cứu ngày nay người sử dụng phương pháp dùng các estrogen từ thực vật để chữa trị

có tính cách thay thế và bảo vệ sức khỏe bởi vì chúng không có sự biến chứng như phương pháp điều trị liệu pháp thay thế hocmon

Việc đánh giá hoạt tính chống loãng xương thông qua các cơ chế kích thích sự biệt hóa của tế bào nguyên bào xương MC3T3-E1 [74], [75], [76]

Nuôi cấy tế bào:

Các tế bào MC3T3-E1 được lấy từ ngân hàng tế bào RIKEN (Tsukuba, Nhật Bản) và nuôi cấy ở nhiệt độ 37oC trong môi trường dinh dưỡng alpha-minimum essential medium (α-MEM; GIBCO) trong điều kiện không khí chứa 5% CO2 Thường môi trường có chứa 10% huyết thanh phôi bò đã được hoạt hóa bằng nhiệt (fetal bovine serum - FBS), và ủ trong 3 ngày với tỉ lệ 1:5 dung dịch 0,05% trypsin: EDTA trong môi trường đệm phosphat Mẫu được hòa tan trong DMSO và pha loãng với môi trường chứa 0,3% albumin huyết thanh bò (bovine serum albumin - BSA)

Sự phát triển của tế bào:

Thử nghiệm MTT được sử dụng để xác định mức độ phát triển của các tế bào MC3T3-E1 Các tế bào được nuôi cấy ở mật độ 5x103 tế bào/một giếng và nuôi cấy trên phiến 48 giếng Mức độ phát triển của tế bào được xác định sau 2 ngày tính từ thời điểm xử

lý với các hợp chất thử nghiệm sử dụng máy đo màu dựa trên sự hấp thu muối dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT) của các tế bào phát triển, dung dịch MTT 20àl pha trong 7,2mM dung dịch đệm phosphat ở pH 6,5 (5mg/ml) được

3-(4,5-bổ sung vào môi trường đã nuôi cấy các tế bào, ủ ở 37°C để cho phép sự phân cắt của vòng tetrazolium bằng các enzim dehydrogenaza ty thể và sự tạo thành các tinh thể formazan màu xanh Sau 2 giờ, lượng MTT còn lại được loại bỏ một cách cẩn thận và các tinh thể

được hòa tan bằng cách ủ với DMSO trong 20 phút Phiến được lắc trong 5 phút và độ hấp thụ ở bước sóng 570 nm được xác định bằng máy đo quang phổ

Hoạt lực của enzym Alkanine Phosphatase (ALP):

Các tế bào được xử lý với môi trường chứa 10 mM β-glycerophosphat và 50 àg/ml

axit ascorbic, để khởi đầu quá trình khoáng hóa in vitro Môi trường được thay thế định kỳ

2-3 ngày một lần Sau 8 ngày, các tế bào được nuôi cấy với môi trường có chứa 3% albumin huyết thanh bò (bovine serum albumin - BSA) và từng hợp chất thử nghiệm trong

2 ngày Khi kết thúc, môi trường được loại bỏ và màng tế bào được rửa nhẹ 2 lần với dung dịch muối đệm phosphat (phosphate buffered saline - PBS) Các tế bào được phân giải với 0.2% Triton X-100, dịch thủy phân được ly tâm ở tốc độ 14000 v/p trong 5 phút Phần dịch trong phía trên được sử dụng để xác định hoạt lực enzim ALP sử dụng kit thử hoạt lực enzim ALP được cung cấp bởi công ty Asan, Hàn Quốc

Xác định hàm lượng collagen:

Các tế bào được xử lý với môi trường chứa 10 mM β-glycerophosphat và 50 àg/ml

axit ascorbic, để khởi đầu quá trình khoáng hóa in vitro Môi trường được thay thế định kỳ

2-3 ngày một lần Sau 8 ngày, các tế bào được nuôi cấy với môi trường có chứa 3% albumin huyết thanh bò (bovine serum albumin - BSA) và từng hợp chất thử nghiệm trong

2 ngày Khi kết thúc, môi trường được loại bỏ và màng tế bào được rửa nhẹ 2 lần với dung dịch muối đệm phosphat (phosphate buffered saline - PBS)

Hàm lượng collagen được xác định bằng phương pháp so màu Sirius Red Các nguyên bào xương nuôi cấy được rửa với PBS, sau đó cố định bằng dịch Bouin trong 1 giờ Sau quá trình cố định, dịch cố định được loại bỏ và các đĩa nuôi cấy được rửa bằng cách nhúng vào dòng nước đang chảy trong 15 phút Các đĩa này được để khô trong không khí

và nhuộm bằng thuốc nhuộm Sirius Red trong 1 giờ dưới điều kiện lắc nhẹ nhàng Sau đó, loại bỏ phần dịch và môi trường nuôi cấy được rửa với HCl 0,01N để loại bỏ phần thuốc nhuộm không được liên kết Hòa tan môi trường nuôi cấy đã được nhuộm màu bằng NaOH 0,1 N và cường độ hấp thụ được đo ở bước sóng 550 nm

Khả năng tích tụ canxi:

Các tế bào được xử lý với môi trường chứa 10 mM β-glycerophosphat và 50 àg/ml

axit ascorbic, để khởi đầu quá trình khoáng hóa in vitro Sau 12 ngày, các tế bào được nuôi

cấy trong môi trường chứa 0,3% BSA và từng hợp chất thử nghiệm trong 2 ngày Khi kết thúc, các tế bào được cố định bằng etanol 70% trong 1 giờ, sau đó nhuộm bằng thuốc nhuộm 40 mM Alizarin Red S trong 10 phút dưới điều kiện lắc nhẹ nhàng Để định lượng các thuốc nhuộm đã liên kết, thuốc nhuộm được hòa tan bằng cách lắc với cetylpyridinum clorua 10% trong 15 phút ở điều kiện không có ánh sáng Cường độ hấp thụ được xác định

ở bước sóng 561 nm

Tính toán:

Kết quả được biểu thị bằng mean±SEM Phân tích thống kê được thực hiện bằng

phần mềm ANOVA (P<0.05) với hệ thống SAS

2.6 Phương pháp đánh giá an toàn và hiệu lực in vivo

2.6.1 Nghiên cứu độc tính cấp của PG1 :

- Dựa theo phương pháp nghiên cứu xác định độc tính cấp của Abrham W.B., Turner A và theo quy định của Bộ Y tế Việt nam và Tổ chức Y tế thế giới về nghiên cứu độc tính của các thuốc có nguồn gốc tự nhiên [1], [5a], [71], [72]

- Thí nghiệm được tiến hành trên chuột nhắt trắng Chuột được chia làm các lô, mỗi lô 10 con Từng lô chuột được uống PG1 với các mức liều tăng dần, cho đến liều gây chết 100%

số chuột

- Sau khi uống thuốc, chuột được nuôi dưỡng và theo dõi liên tục trong 72 giờ Xác định

số chuột chết theo từng nhóm thí nghiệm

- Tính toán : theo phương pháp cải tiến của Livschitz P.Z [71]

2.6.2 Nghiên cứu độc tính bán trường diễn trên thực nghiệm

Theo phương pháp Abrham, quy định của Tổ chức Y tế thế giới và Bộ Y tế về hiệu lực và an toàn thuốc và các chế phẩm có nguồn gốc từ thiên nhiên [1], [71], [72], [73]

* Thỏ được chia thành 2 nhóm :

- Nhóm chứng: uống dung môi pha thuốc, liều 2,0 ml/kg/24 h

- Nhóm thử thuốc: uống dung dịch PG1 Uống một lần vào buổi sáng (căn cứ vào liều độc

cấp đã tính toán theo phương pháp ngoại suy)

* Các chỉ tiêu đánh giá:

- Sinh lý - dược lý : theo dõi tình trạng chung, hoạt động, ăn uống, đặc biệt là trọng

lượng cơ thể (cân trọng lượng hàng tuần), điện tim

- Huyết học: hồng cầu, hemoglobin, bạch cầu, tiểu cầu

- Sinh hóa: SGOT, SGPT, creatinin,

- Mô bệnh học: vào ngày thứ 42, giết thỏ, quan sát hình ảnh đại thể gan, lách, thận Sau

đó sinh thiết các tạng để nghiên cứu hình ảnh mô bệnh học của tất cả các thỏ thực nghiệm

* Thời điểm xét nghiệm: lấy máu xét nghiệm các chỉ số sinh hóa, huyết học, ghi điện tim, tại 3 thời điểm: xuất phát điểm, sau 3 tuần, sau 6 tuần nghiên cứu Thời gian theo dõi : 7 tuần

Chia 48 chuột cống trắng (CCT) thành 4 lô đều nhau:

- Lô 1 (lô chứng): uống dung môi pha thuốc nghiên cứu PG1 0,5ml/100g TLCT

- Lô 2 (lô dùng cimetidin): uống hỗn dịch cimetidin liều 10mg/100g TLCT

- Lô 3 (lô dùng PG1 mức liều I): uống dung dịch PG1 liều 0,2mg/100g TLCT

- Lô 4 (lô dùng PG1 mức liều II): uống dung dịch PG1 liều 0,4mg/100g TLCT

Thể tích cho chuột uống ở các lô là nh nhau, đều là 0,5ml/100g TLCT

Trước khi làm thí nghiệm, chuột được để nhịn ăn 16h Cho chuột uống thuốc Gây

mê bằng Calypsol 1% với liều 0,1ml/100g TLCT-CCT, mở ổ bụng theo đường trắng giữa, thắt môn vị, sau đó đóng ổ bụng lại Sau thắt môn vị 20h, mở thành bụng, cô lập dạ dày CCT khỏi cơ thể, thu dịch vị cho vào ống đã có chia độ, mở dạ dày theo bờ cong lớn Xác

Chuột cống trắng (n=48)

Lụ 3 (n=12) Uống PG1 mức liều I 0,2mg/100g TLCT

Lụ 4 (n=12) Uống PG1 mức liều II 0,4mg/100g TLCT

Thắt mụn vị

-Lấy dich vị đo thể tớch và làm xột nghiệm -Mở dạ dày tớnh chỉ số loột

-Xử lý số liệu -Kết luận về tỏc dụng của PG1 Nhịn ăn 16h

định thể tích dịch dạ dày, các chỉ số axit dịch vị và đánh giá mức độ loét ở dạ dày CCT theo lô nghiên cứu

2.6.3.3 Các chỉ tiêu đánh giá về chức năng bài tiết dịch vị dạ dày

Thuốc thử là dung dịch toeffer và phenolphtalein

Độ axit dịch vị dạ dày đợc tính theo công thức sau:

A = 2

1

V V ì10

A : Độ axit (tự do, hoặc toàn phần)

V1 : thể tích dịch dạ dày đa vào định lượng

V2 : thể tích dung dịch NaOH 0,1N đã dùng

2.6.3.4 Các chỉ tiêu đánh giá về hình thái niêm mạc dạ dày

*Tỷ lệ CCT xuất hiện tổn thương loét ở từng lô thí nghiệm tính theo công thức sau:

+ ổ loét nhỏ đường kính d < 1mm: 1 điểm

+ ổ loét nhỏ đường kính d = 1-2 mm: 2 điểm

+ ổ loét đường kính d > 2mm: số điểm tương đương với đường kính ổ loét

2.6.3.5 Đánh giá tác dụng bảo vệ niêm mạc dạ dày đợc đánh giá theo

+ mức độ giảm thể tích của dịch dạ dày

+ mức độ giảm độ axit tự do của dịch dạ dày

+ mức độ giảm độ axit toàn phần của dịch dạ dày

+ mức độ giảm tổng điểm loét dạ dày tính theo thang điểm Shay J.P (1954) + tỷ lệ số chuột có tổn thương loét ở niêm mạc dạ dày

2.6.3.6 Phương pháp xử lý số liệu:

Các số liệu thu được, được xử lý theo phương pháp thống kê y học theo chương

trình EPI-INFO 6.0

Phần III Thực nghiệm và kết quả

3.1 Thu mẫu

Sau 3 năm thực hiện đề tài đã tiến hành thu thập được 102 mẫu thực vật Các mẫu thực vật

được gửi đến các chuyên gia phân loại thực vật giám định tên khoa học Chúng tôi cũng đã

tiến hành tạo tiêu bản mẫu để lưu trữ lâu dài, đồng thời đánh dấu các khu vực thu mẫu

nhằm tiến hành khai thác các dược liệu tiềm năng Trong đề tài này chúng tôi cũng đã tiến

hành xây dựng các dữ liệu tổng quan về từng loại thực vật thu thập được như: Tên khoa

học, khu vực thu hái mẫu, khu vực sinh sống của thực vật, ứng dụng y học cổ truyền, các

nghiên cứu hoá học đã được thực hiện, ảnh thực vật Các dữ liệu này được sử dụng trong

xây dựng cơ sở dữ liệu thực vật sử dụng cho đề tài Danh sách các mẫu thực vật được cập

nhật vào cơ sở dữ liệu được trình bày trong bảng dưới đây:

Bảng 3.1.a: Danh sách các mẫu thực vật thu thập được (2006-2008)

Stt Ký hiệu Tên khoa học Tên việt nam Họ

36 VNI2-36 Cratoxylum formosum (Jack.) Benth & Hook f

39 VNI2-39 Curcuma zedoaria (Berg.) Roscoc Nga truật Zingiberaceae

92 VNI2-92 Polygonum lapathifolium L Nghể dại Polygonaceae

Kết quả xử lý số liệu cho thấy các mẫu thực vật thu thập đ−ợc thuộc 59 họ thực vật

khác nhau (thuộc 92 chi) Kết quả thống kê các mẫu thu đ−ợc cho thấy mẫu thuộc họ Đậu

chiếm số l−ợng cao nhất; tiếp đó là các mẫu thuộc họ Thầu dầu; mẫu thuộc họ Cúc; Danh

sách họ thực vật và số l−ợng thực vật thu hái của từng họ đ−ợc thống kê trên bảng 3.1.b

Bảng 3.1.b Danh sách các họ thực vật và số l−ợng thực vật thu hái theo từng họ

TT Họ Tên tiếng Việt Số l−ợng TT Họ Tên tiếng Việt Số l−ợng

Abelmoschus moschatus Medik

VNI2-07: B−ëi bung

Acronychia pedunculata (L.) Miq

(Rutaceae)

VNI2-08: V¹n liªn thanh khiªm tèn

Aglaonema modestum Schott ex Engh

(Araceae)