Nghiên cứu tác dụng của hải mã và sâm Việt Nam lên hình thái - chức năng của tinh hoàn chuột cống trưởng thành
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG I HC Y H NI Đậu xuân cảnh Nghiên cứu tác dụng hải mà v sâm Việt Nam lên hình thái - chức tinh hon chuột cống trắng trởng thnh Chuyên ngành : Bệnh học Nội khoa Mà số : 3.01.31 TóM TắT LUậN áN TIếN Sỹ Y HäC HÀ NỘI - 2007 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI Người hướng dn khoa hc: GS Ts Phạm Thị Minh Đức PGS.TS Ngun Nh−ỵc Kim Phản biện 1:GS Bành Văn Khìu Phản biện 2:GS.TS.Đỗ Công Huỳnh Phản biện 3: PGS.TS.Chu Quốc Trường Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp Nhà nước Trường Đại học Y Hà Nội Vào hồi 30 phút ngày 29 tháng 11 năm 2007 CĨ THỂ TÌM HIỂU LUẬN ÁN TẠI - Thư viện Quốc gia - Thư viện Trường Đại học Y Hà Nội - Viện thông tin - Th vin Y hc Trung ng Những công trình đ công bố liên quan đến luận án Đậu Xuân Cảnh, Phạm Thị Minh Đức (2002), Tác dụng hải mà hải mà - nhân sâm lên trọng lợng chuột trọng lợng số quan sinh dục chuột đực, Số đặc biệt kỷ niệm 100 năm thành lập Đại học Y Hà Nội, Tạp chí Nghiên cứu Y học phụ 20(4), tr 98-104 Đậu Xuân Cảnh, Trịnh Bình, Phạm Thị Minh Đức (2003), ảnh hởng hải mà hải mà - nhân sâm lên cấu trúc hình thái tinh hoàn chuột cống trắng, Tạp chí Nghiên cứu Y học phụ 20(1), tr 7-13 Đậu Xuân Cảnh, Trịnh Bình, Phạm Thị Minh Đức, Nguyễn Nhợc Kim (2004), Những biến đổi hình thái tinh hoàn chuột cống trắng trởng thành dới tác động nhiệt, Hội nghị khoa học nghiên cứu sinh lần thứ X, Đại học Y Hà Nội Tạp chí Nghiên cứu Y học phụ 20(5), tr 28-35 Đậu Xuân Cảnh, Phạm Thị Minh Đức, Trịnh Bình, Nguyễn Nhợc Kim (2007), ảnh hởng hải mà - nhân sâm lên trình hồi phục hình thái chức tinh hoàn chuột cống trắng, Hội nghị khoa học nghiên cứu sinh lần thứ XII, Đại học Y Hà Nội, Tạp chí Sinh lý Y học, Tập 11-N0-1, 4, pp 1-8 chữ viết tắt ABP ACTH ADN AMPc ARN ATP CYP17 FSH Gly GnRH HCG HM HT LH M NS NST : Androgen binding protein : Adrenocorticotropic hormon : Acid deoxyribonucleic : Adenosin monophosphat cyclic : Acid ribonucleic : Adenosine triphosphat : Cytocrom P450 C17 : Follicle stimulating hormone : Glycogen : Gonadotropin releasing hormone : Human chorionic gonadotropin : H¶i m· : HuyÕt : Luteinizing hormone : Mitochondria (ti thĨ) : Nh©n s©m : Nhiễm sắc thể ÔST Pro SGTT SR SRY StAR SVN VS YHCT YHH§ : èng sinh tinh : Prolactin : Suy gi¶m tinh trïng : Smooth endoplasmic reticulum (l−íi néi bào không hạt) : Sex determining region on Y : Steroidogenic Acut Regulatory protein : Sâm Việt Nam : Vô sinh : Y häc cỉ trun : Y häc hiƯn đại Đặt vấn đề Theo Tổ chức Y tế Thế giới, tỷ lệ vô sinh chiếm khoảng 8% số cặp vợ chồng Tuỳ nớc giới, tỷ lệ thay đổi từ 10% đến 18% Việt Nam, theo điều tra dân số quốc gia năm 1982, vô sinh chiếm khoảng 13% Nguyên nhân nam giới chiếm xấp xỉ 40% cặp vợ chồng vô sinh Theo điều tra Viện Bảo vệ bà mẹ trẻ sơ sinh (1993 - 1997), tỷ lệ vô sinh nam 35,6% Cho đến việc điều trị vô sinh nam cha có thuốc điều trị cách hiệu quả, thuốc điều trị cho kết tản mạn, số thuốc có nguồn gốc hormon nên giá thuốc đắt, không phù hợp đại phận dân chúng Do tìm kiếm nguồn dợc liệu có sẵn nớc có tác dụng điều trị vô sinh nam việc làm cần thiết Thuốc y học cổ truyền điều trị vô sinh đà đợc nói đến từ nhiều ngàn năm nay, song cha đợc nghiên cứu đánh giá cách hệ thống Một vị thuốc đông y đợc nhắc đến nhiều y văn cổ nh dân gian, đặc biệt nghiên cứu nhà khoa học gần nói tác dụng chức sinh sản sâm Việt Nam (SVN) hải mà (HM) Vì nhằm đánh giá t¸c dơng cđa mét thø thc Y häc cỉ trun điều trị vô sinh nam tác giả tiến hành nghiên cứu đề tài Nghiên cứu tác dụng hải m sâm Việt Nam lên hình thái - chức tinh hoàn chuột cống trắng trởng thành Đề tài nhằm giải hai mục tiêu sau: Đánh giá ảnh hởng hải mà sâm Việt Nam lên hình thái - chức tinh hoàn chuột bình thờng Đánh giá ảnh hởng hải mà sâm Việt Nam lên hồi phục hình thái - chức chuột bị tổn thơng tinh hoàn Những đóng góp luận án Đây công trình nghiên cứu ảnh hởng hải mà (HM), HM kết hợp sâm Việt Nam (SVN) lên hình thái-chức tinh hoàn chuột cống trắng trởng thành bình thờng tổn thơng tinh hoàn nhiệt đợc công bố Trên chuột bình thờng 1.1 Hải mà sâm Việt Nam liều 120mg/100g thể trọng chuột/24h (TTC) có tác dụng tốt so với HMSVN liều 240 mg/100g TTC/24h HM, SVN đơn lẻ 1.2 HMSVN liều 120mg/100gTTC/24h đà làm tăng đờng kính trung bình ống sinh tinh, tăng tỷ lệ ống sinh tinh hoàn thành giai đoạn sinh tinh trùng, tăng trọng lợng túi tinh nhng không làm tăng trọng lợng tinh hoàn trọng lợng tuyến tiền liệt; không làm thay đổi trật tự tế bào dòng tinh 1.3 HMSVN liều 120mg/100gTTC/24h đà làm tăng tiết testosteron, tăng hàm lợng protein huyết nồng độ FSH nhng không ảnh hởng đến hàm lợng LH huyết 1.4 HMSVN liều 120mg/100gTTC/24h làm phát triển mạnh ti thể, lới nội bào không hạt hạt glycogen tế bào Leydig Trên chuột bị tổn thơng tinh hoàn 1.5 HMSVN liều 120 mg/100gTTC/24h có khả thúc đẩy lên hồi phục hình thái - chức (cả chức nội tiết ngoại tiết) tinh hoàn chuột cống trắng bị tổn thơng tiếp xúc với nhiệt độ cao 430C trở lại bình thờng sớm 15 ngày với tốc độ nhanh so với hồi phục tự nhiên Công trình nghiên cứu áp dụng thành công Việt Nam mô hình gây tổn thơng tinh hoàn chuột cống trắng nhiệt tác giả nớc xây dựng Cấu trúc luận ¸n Ln ¸n dµi 121 trang (ch−a kĨ tµi liƯu tham khảo), gồm chơng với 12 bảng, biểu đồ 33 hình Đặt vấn đề: trang; Chơng Tổng quan: 35 trang; Chơng Đối tợng phơng pháp nghiên cứu: trang; Chơng Kết nghiên cứu: 40 trang; Chơng Bàn luận: 31 trang; Kết luận: trang; Kiến nghị: trang; Những đóng góp luận án: trang; Những công trình đà công bố liên quan đến luận án: trang; Có 151 tài liệu tham khảo gồm 55 tài liệu tiếng Việt, 96 tài liệu tiếng nớc Chơng Tổng quan 1.1 Đặc điểm quan sinh dục nam tạo tinh trùng ngời 1.1.1 Vô sinh Tổ chức Y tế giới (WHO) định nghĩa vô sinh nh sau: cặp vợ chồng có sức khoẻ bình thờng ngời vợ có lần có thai nhng bị sẩy thai, sau 12 tháng chung sống sinh hoạt tình dục không sử dụng biện pháp tránh thai mà đợc coi mắc bệnh vô sinh - Vô sinh nguyên phát (vô sinh I): Một cặp vợ chồng cha thụ thai sau năm sống với nhau, có giao hợp đặn, không sử dụng biện pháp tránh thai - Vô sinh thứ phát (vô sinh II): Một cặp vợ chồng cha thụ thai lại sau lần có thai trớc năm, có giao hợp đặn, không sử dụng biện pháp tránh thai 1.1.2 Sâm Việt Nam (SVN) (Panax Vietnamensis Ha et Grushv) Tên khác: Sâm Ngọc Linh, sâm Khu Năm, thuốc dấu (Xê Đăng) * Tác dụng dợc lý: Các nghiên cứu tác dụng dợc lý dịch chiết P Vietnamensis đợc thực Trung tâm Sâm Việt Nam, kết thu đợc khẳng định dịch chiết sâm Việt Nam có tác dụng sau : * Tác dụng hệ thần kinh trung ơng: sâm Việt Nam liều thấp có tác dụng kích thích thần kinh, làm tăng hoạt động vận động trí nhớ, nhng liều cao lại ức chế thần kinh * Tác dụng chống trầm cảm: sâm Việt Nam có tác dụng chống trầm cảm liều uống lần 200 mg/kg liều 50-100 mg/kg dùng ngày chuột nhắt trắng, majonosid R2 tiêm màng bụng có tác dụng chống trầm cảm liều 3,1; 6,2 12,5 mg/kg * Tác dụng tăng sinh lực: sâm Việt Nam có tác dụng tăng lực thí nghiệm chuột bơi, làm tăng sinh lùc chèng l¹i sù mƯt mái, gióp phơc håi søc lực * Tác dụng tăng cờng khả thÝch øng: Trong stress vËt lý, cho chuét nh¾t tr¾ng uống SVN liều 100 mg/kg có tác dụng làm tăng khả chịu đựng nóng (37-42oC) lạnh (-5oC), làm kéo dài thời gian sống thêm chuột thí nghiệm * Tác dụng chống oxy hóa: Trên thí nghiệm in vitro dùng dịch mô nÃo, gan phân đoạn vi thể gan chuột nhắt trắng, saponin sâm Việt Nam nồng độ 0,05-0,5 mg/ml có tác dụng chống oxy hóa, ức chế hình thành MDA (malonyl dialdehyd) sản phẩm trình oxy hóa lipid màng sinh học * Tác dụng kích thích miƠn dÞch - Bét chiÕt SVN liỊu ng 500 mg/kg majonosid R2 tiêm màng bụng có tác dụng làm tăng số thực bào thí nghiệm in vitro invivo chuột nhắt trắng - Dùng liều Escherichia coli gây chết chuột nhắt trắng Nếu kết hợp dùng sâm majonosid R2 với liều nh làm tăng tỷ lệ số chuột sống sót Có lẽ thuốc làm tăng tác dụng thực bào với E coli * Tác dụng hồi phục tế bào máu: thí nghiệm làm giảm hồng cầu bạch cầu động vật thí nghiệm, SVN có tác dụng làm phục hồi số lợng hồng cầu bạch cầu đà bị giảm * Với tuyến sinh dục: Đậu Xuân Cảnh, Phạm Thị Minh Đức đà nghiên cứu chuột cống đực trắng non nhận thấy nhân sâm kết hợp với hải mà làm tăng số lợng ống sinh tinh có tinh trùng tăng nồng độ testosterone huyết chuột 1.1.3 Hải m Hải mà có tên gọi khác Cá ngựa, Long lạc tử, Thuỷ mÃ, Mà đầu ng (cá đầu ngựa), có tên khoa học Hippocampus, thuộc họ cá chìa vôi- Syngnathidae + Tính, vị, tác dụng Theo YHCT, HM có vị ngọt, mặn, tính ấm, có tác dụng bổ thận tráng dơng, ấm thuỷ tạng, tiêu sng, bình suyễn điều hoà khí huyết Trong "Bản thảo cơng mục" Lý Thời Trân viết HM có tác dụng tráng dơng ấm thận, tiêu u cục (hà khối) bụng, tiêu mụn nhọt độc thể + Công dụng HM đợc dùng để chữa bệnh liệt dơng, đái són, h suyễn, đẻ khó, chứng tích, đinh sang thũng độc + ứng dụng lâm sàng Trên lâm sàng ngời ta dùng HM để điều trị trờng hợp rối loạn cơng dơng, thể h nhợc, hen, ho lâu ngày, lao hạch, bớu giáp, phụ nữ chậm có chuyển chậm Chơng chất liệu, đối tợng v phơng pháp nghiên cứu 2.1 Chất liệu nghiên cứu + Thân rễ sâm Việt Nam (panax Vietnamensis) theo tiêu chuẩn Dợc điển Việt Nam III + Hải mà (Hippocampus) họ Hải long Syngnathidae theo tiêu chuẩn Dợc điển Việt Nam III 2.2 Đối tợng nghiên cứu 281 chuột cống trắng đực, chủng Rattus, tháng tuổi có trọng lợng trung bình là: 205 27,8g Tất chuột đợc nuôi phòng thí nghiƯm víi cïng ®iỊu kiƯn nhiƯt ®é, ®é Èm, thêi gian sáng/ tối 12/12 h Thức ăn nớc uống đợc cung cấp đầy đủ 2.3 Phơng pháp nghiên cứu 2.3.1 Chỉ số nghiên cứu Trọng lợng chuột; Trọng lợng tinh hoàn (tính g/100g trọng lợng cht); Träng l−ỵng tói tinh (tÝnh mg/100g träng l−ỵng cht); Träng l−ỵng tun tiỊn liƯt (tÝnh mg/100g trọng lợng chuột); 5.Nồng độ testosteron, LH, FSH, protein huyÕt thanh; §−êng kÝnh èng sinh tinh; Sè lợng ống sinh tinh hoàn thành giai đoạn sinh tinh bào; 8.Hình ảnh vi thể tế bào dòng tinh; Siêu cấu trúc tinh hoàn: lới nội bào không hạt tế bào Leydig 2.3.2 Phơng pháp gây tổn thơng tinh hoàn Dùng nớc nóng có nhiệt độ 430C cho tinh hoàn tiếp xúc thời gian 30 phút để gây tổn thơng tinh hoàn Kỹ thuật cho tinh hoµn cht tiÕp xóc víi n−íc nãng: tinh hoµn cht đợc bộc lộ cách cố định chuột treo theo chiều thẳng đứng vào giá sau đặt giá vào buồng nớc đợc ổn định nhiệt độ 430C Điều chỉnh lợng nớc buồng ngâm cho ngập toàn tinh hoàn chuột Bật đồng hồ tính Thời gian ngâm tinh hoàn chuột nớc 430C 30 phút Nớc 430C đợc cấp kiểm soát nhiệt độ buồng ổn nhiệt Nhật, có nhiệt độ sai số tối đa cho phép không 0,10C 2.4 Cách tiến hành thí nghiệm 2.4.1 Thí nghiệm đánh giá tác dụng HM, SVN HMSVN chuột bình thờng 119 chuột cống trắng đực, 2,5 tháng tuổi đợc nuôi thức ăn công nghiệp 15 ngày, đủ tháng tuổi đợc cân trọng lợng chia thành nhóm nhau: + Nhóm 1: 17 chøng uèng n−íc cÊt; Nhãm 2: 17 uèng h¶i m· liỊu I (HM I); Nhãm 3: 17 ng h¶i m· liỊu II (HM II); Nhãm 4: 17 uèng SVN I (SVN I); Nhãm 5: 17 uèng SVN liÒu II (SVN II); Nhãm 6: 17 uèng HM + SVN liÒu I (HMSVN I); Nhãm 7: 17 uèng HM + SVN liÒu II (HMSVN II) * Sau 35 ngày uống thuốc liên tục, giết chuột làm xét nghiệm xác định số nghiên cứu * Chọn nhóm thuốc có kết rõ để nghiên cứu chuột bị tổn thơng tinh hoàn 2.4.2 Thí nghiệm đánh giá tác dụng HMSVN chuột bị tổn thơng tinh hoàn (TTTH) nhiệt 162 chuột cống trắng đực, 2,5 tháng tuổi đợc nuôi thức ăn công nghiệp 15 ngày, đủ tháng tuổi đợc cân trọng lợng chia thành lô nhau: Lô I: chuột TTTH + HMSVN : 54 con; L« II: cht TTTH + ng n−íc cÊt : 54 con; L« III: cht nhóng n−íc 28oC (nhiƯt độ phòng thí nghiệm) + uống nớc cất (lô chứng): 54 con; Mỗi lô 54 chuột theo dõi thời điểm 24h, 7, 14 , 21, 35, 70 ngày sau chuột bị TTTH Số chuột theo dõi thời điểm số chuột đợc giết thời điểm theo dõi ®Ĩ thu tËp sè liƯu nghiªn cøu Cht cđa tÊt lô đợc cho uống thuốc vào 9h sáng hàng ngày Các thí nghiệm chuột bình thờng chuột TTTH đợc lặp lại 2-3 lần, lÇn 4-6 cht/nhãm 2.5 LiỊu dïng: LiỊu I = 120mg/100g träng l−ỵng cht/24h LiỊu II = 240mg/100g träng l−ỵng cht/24h 2.6 Xử lý số liệu: Các số liệu nghiên cứu thu đợc đợc xử lý phần mềm Epi Info version 6.04 2.7 Nơi thực đề tài: Đại học Y Hà Nội, BV Phụ sản Trung ơng, Phòng KHVĐT- Viện VSDT TW, Viện Dợc liệu, Viện Krolinska-Thuỵ Điển Chơng Kết nghiên cứu 3.1 ảnh hởng HM, SVN HMSVN lên thể trọng; trọng lợng tinh hoàn, túi tinh, tuyến tiền liệt chuột cống trắng đực b×nh th−êng 3.1.1 DiƠn biÕn thĨ träng cht - Tr−íc thí nghiệm thể trọng chuột trung bình nhóm tơng đơng nhau(p>0,5) - Có tăng thể trọng rõ rệt tất nhóm sau tuần tuần thí nghiệm (p0,05) 3.1.2 Trọng lợng tinh hoàn - Không có khác biệt có ý nghĩa trọng lợng tinh hoàn bên phải bên trái tất nhóm (p>0,05) - Mức biến đổi trọng lợng tinh hoàn/100mg trọng lợng thể chuột nhóm nghiên cứu so với nhóm chứng khác biệt có ý nghĩa thống kê với p>0.05 3.1.3 Trọng lợng túi tinh - Sau 35 ngày uống thuốc, trọng lợng túi tinh nhóm nghiên cứu cao hẳn so với nhóm chứng (p0,05) - Giữa nhóm nghiên cứu trọng lợng tuyến tiền liệt khác biệt có ý nghÜa (p>0,05) 3.2 ¶nh h−ëng cđa HM, SVN, HMSVN lên hình thái - chức tinh hoàn chuột cống trắng bình thờng 3.2.1 ảnh hởng HM, SVN, HMSVN lên hình thái - chức ngoại tiết tinh hoàn 3.2.1.1 ảnh hởng HM, SVN, HMSVN lên cấu tạo vi thể tinh hoàn chuột cống trắng trởng thành bình thờng * Hình ảnh vi thể tinh hoàn chuột nhóm chứng (ảnh 3.1) ảnh 3.1 ÔST tinh hoàn chuột cống trắng bình thờng (HE x 200)1 ống sinh tinh; Mô kẽ + Trên tiêu mặt cắt ngang qua tinh hoàn - Các ống sinh tinh có hình bầu dục, có đờng kính dài khác nhau, nhng đờng kính ngắn tơng đối đồng - Mô kẽ chứa tế bào kẽ nằm vùng ranh giới ống sinh tinh; mô liên kết phát triển - Biểu mô tinh mặt cắt ống sinh tinh có mật độ tế bào loại tế bào không đồng nh (biểu giai đoạn chu kỳ tạo tinh) + Đặc điểm vi thể loại tế bào dòng tinh - Tinh nguyên bào: nằm sát màng ống sinh tinh thành hàng Nhân bắt màu base đậm, kích thớc nhỏ Có loại: sẫm màu nhạt màu - Tinh bào: kích thớc nhân lớn, khối chất nhiễm sắc bắt màu base đậm Tinh bào xếp thành đến hàng, tuỳ biểu mô tinh - Tiền tinh trùng: nhân tròn bầu dục, sáng màu, xếp thành nhiều hàng phía lòng ống sinh tinh, vùi bào tơng tế bào Sertoli Có ống sinh tinh không thấy tiền tinh trùng - Tinh trùng: đầu bắt màu base đậm, hình thoi dài (hoặc chấm mặt cắt ngang), đuôi tinh trùng tập trung thành đám phía lòng ống sinh tinh Có biểu mô tinh không thấy đầu tinh trùng * Hình ảnh vi thể tinh hoàn chuột nhóm uống hải m I II (ảnh 3.2, 3.3) 3/HM 2/HM 1 ¶nh 3.2 èng sinh tinh chuét ë nhãm uèng ¶nh 3.3 èng sinh tinh chuét nhãm uèng HM I (HE x 200) 1- Biểu mô tinh có loại HM II (H.Ex 200) Tinh nguyên bào, tế bào dòng tinh; (không có tiền tinh Tinh bào; 3.Tiền tinh trïng; Tinh trïng trïng); 2- BiĨu m« tinh cã loại tế bào dòng tinh (không có tinh trùng) 11 * Hình ảnh siêu cấu trúc tế bào Leydig tuyến kẽ tinh hoàn chuột cống trắng trởng thành uống HM 1, (¶nh 3.12, 3.13) 13/SCT 12/SCT Gly SR M RS M Gly ảnh 3.12 Siêu cấu trúc phần bào tơng tế bào Leydig tuyến kẽ tinh hoàn chuột cống trắng bình thờng, sau uống HM 1( x 30.000) Ti thể (M); Lới nội bào không hạt (SR); hạt glycogen (Gly) ảnh 3.13 Siêu cấu trúc phần bào tơng tế bào Leydig tuyến kẽ tinh hoàn chuột cống trắng bình thờng, sau uống HM ( x 30.000) Ti thĨ kh¸ phong phó, cÊu tróc bình thờng Túi lới nội bào không hạt phân bố khắp bào tơng tế bào Hạt glycogen xuất vùng bào tơng * Hình ảnh siêu cấu trúc tế bào Leydig tuyến kẽ tinh hoàn chuột cống trắng trởng thành uống HMSVN I, II (ảnh 3.14, 3.15) M Gly SR M V ảnh 3.14 Siêu cấu trúc phần bào tơng tế bào Leydig tuyến kẽ tinh hoàn chuột cống trắng bình thờng, sau uống HMSVN I ( x 50.000) V Gly SR ảnh 3.15 Siêu cấu trúc phần bào tơng tế bào Leydig tuyến kẽ tinh hoàn chuột cống trắng bình thờng, sau uống HMSVN II (x 40.000) Các bào quan siêu vi đặc thù tế bào Leydig có cấu trúc điển hình; Ti thể, glycogen, không bào túi lới nội bào không hạt phát triển nhóm chuột uống SVN, HM không thấy thay đổi siêu cấu trúc bào quan cđa tÕ bµo Leydig; ë nhãm cht ng SVN kÕt hỵp HM víi liỊu I nhËn thÊy ti thĨ, lới nội bào không hạt hạt glycogen bào tơng tế bào Leydig tăng số lợng; nhóm chuột uống SVN đơn thuần, nhận thấy lợng glycogen tăng bào tơng tế bào Leydig; nhóm 12 chuột uống HM đơn thuần, nhận thấy lợng lới nội bào không hạt không bào tăng; nhóm chuột uống HMSVN, nhận thấy glycogen lới nội bào không hạt phát triển phong phú bào tơng tế bào Leydig 3.2.2.2 Nồng độ testosteron huyết chuột (bảng 3.3) Bảng 3.3 Kết nghiên cứu nồng độ testosteron huyết chuột nhóm uèng HM, SVN vµ HMSVN sau 35 ngµy Nhãm Chøng (1) HM I (2) HM II (3) SVN (I) (4) SVN II (5) HMSVN I (6) HMSVN II (7) p n 17 17 17 17 17 17 17 Nång ®é testosteron huyÕt (nmol/L) ( X ± SD) 3,3 11 ± 0,710 3,912 ± 0,832* 3,770 ± 0,993 3,902 ± 1,133 3,570 ± 1,379 4,125 ± 0,913** 3,941 ± 1,204 ** P1-6