Nghiên cứu xây dựng quy trình định lượng parabens trong mỹ phẩm bằng phương pháp uplc uv vis

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ NGUYỄN THỊ MINH ĐỨC NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG PARABEN TRONG MỸ PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP UPLC – UV-Vis Chuyên ngành: Kiểm nghiệm thuốc độc chất Mã số: 60.72.04.10 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS TS NGUYỄN THỊ NGỌC VÂN CẦN THƠ – 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu tơi hướng dẫn Cô PGS.TS Nguyễn Thị Ngọc Vân Các số liệu kết nêu luận văn trung thực, chưa cơng bố cơng trình khác Cần Thơ, ngày tháng năm Học viên Nguyễn Thị Minh Đức LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, em xin phép gửi lời cảm ơn chân thành đến Cơ PGS.TS Nguyễn Thị Ngọc Vân, người nhiệt tình hướng dẫn, định hướng nghiên cứu, hỗ trợ tạo điều kiện thuận lợi, truyền đạt cho em kiến thức vô quý báu để em thực hồn thành luận văn tốt nghiệp Cảm ơn Cơ thật nhiều ln theo sát chúng em trình nghiên cứu thực nghiệm, trao cho chúng em kinh nghiệm nghiên cứu, bên cạnh động viên tinh thần lúc chúng em cảm thấy khó khăn để chúng em có thêm động lực hoàn thành luận văn Em xin gửi lời cảm ơn đến Ban Giám Hiệu Trường Đại học Y Dược Cần Thơ, Phòng đào tạo Sau Đại học, Khoa Dược Trường Đại học Y Dược Cần Thơ, tất giảng viên trường, giảng viên Trường Đại học Y dược Thành phố Hồ Chí Minh tạo điều kiện học tập, cung cấp kiến thức tảng, làm sở khoa học để em thực luận văn Em xin cảm ơn Ban Giám Đốc Công Ty Cổ Phần Warrantek - Cần Thơ hỗ trợ dụng cụ thiết bị, dung mơi, hóa chất suốt q trình nghiên cứu thực nghiệm để em hoàn thành luận văn Em xin gửi lời cảm ơn đến toàn thể anh chị em Công Ty Cổ Phần Warrantek - Cần Thơ, hỗ trợ em nhiều, tạo môi trường làm việc thân thiện điều kiện thuận lợi cho em trình nghiên cứu thực nghiệm Và cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn gia đình, tập thể lớp Cao học Kiểm nghiệm thuốc Độc chất, tất bạn bè, người thân quan tâm, khích lệ tinh thần cho em suốt trình học tập thực luận văn Học viên Nguyễn Thị Minh Đức MỤC LỤC Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt i Danh mục bảng iii Danh mục hình vẽ, đồ thị iv ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm chung hợp chất paraben 1.2 Tình hình sử dụng paraben giới Việt Nam 1.3 Tình hình kiểm sốt hàm lượng paraben 1.4 Một số kỹ thuật thường dùng kiểm nghiệm paraben mỹ phẩm 1.5 Các phương pháp xử lý mẫu 18 1.6 Tình hình nghiên cứu paraben Việt Nam giới 19 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Đối tượng nghiên cứu 24 2.2 Phương pháp nghiên cứu 24 2.3 Vấn đề y đức 40 Chương KẾT QUẢ 41 3.1 Kết xây dựng quy trình định lượng đồng thời paraben dầu gội đầu phương pháp UPLC-TUV theo hướng dẫn AOAC 41 3.2 Kết thẩm định quy trình phân tích theo hướng dẫn AOAC 58 3.3 Kết ứng dụng quy trình định lượng vào phân tích mẫu mỹ phẩm thực tế 65 Chương BÀN LUẬN 69 4.1 Xây dựng quy trình định lượng paraben dầu gội đầu phương pháp UPLC-TUV theo hướng dẫn AOAC 69 4.2 Ứng dụng quy trình định lượng vào phân tích mẫu mỹ phẩm 79 KẾT LUẬN 82 KIẾN NGHỊ 83 PHỤ LỤC i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ tắt Chữ nguyên ACN Acetonitril AOAC Association of Official Hiệp hội nhà hóa học Analytical Chemists phân tích thống BeP Benzylparaben BuP Butylparaben EP Ethylparaben HPLC Ý nghĩa High Performance Liquid Chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao IBP Isobutylparaben IPP Isopropylparaben LOD Limit of detection Giới hạn phát LOQ Limit of Quantification Giới hạn định lượng MeOH Methanol MP Methylparaben MS Mass Spectrometry PeP Pentylparaben PhP Phenylparaben PLE Pressurized liquid extraction PrP Propylparaben PSA Primary secondary amine Amin bậc bậc RSD Relative standard deviation Độ lệch chuẩn tương đối SD Standard deviation Độ lệch chuẩn SFE Supercritical fluid extraction Khối phổ Chiết lỏng có hỗ trợ áp suất Chiết chất lỏng siêu tới hạn ii SPE UPLC UAE Solid phase extraction Ultra Performance Liquid Chromatography Ultrasonic Assisted Extraction Chiết pha rắn Sắc ký lỏng siêu hiệu Chiết có hỗ trợ siêu âm iii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1.Tính chất lý hóa paraben nghiên cứu Bảng 1.2 Các nghiên cứu paraben giới 20 Bảng 1.3 Các nghiên cứu paraben Việt Nam 22 Bảng 2.1 Thành phần pha động khảo sát nghiên cứu 26 Bảng 2.2 Khảo sát lượng khác hỗn hợp hấp phụ 29 Bảng 2.3 Các điều kiện loại tạp khảo sát 31 Bảng 2.4 Các điều kiện rửa giải chất phân tích khảo sát 31 Bảng 2.5 Nồng độ dung dịch chuẩn xây dựng đường tuyến tính 34 Bảng 2.6 Nồng độ thêm chuẩn xác định độ đúng, độ xác phương pháp 35 Bảng 2.7 Các chất chuẩn paraben sử dụng nghiên cứu 38 Bảng 2.8 Các dung môi, hóa chất sử dụng nghiên cứu 38 Bảng 2.9 Các máy móc, thiết bị dùng nghiên cứu 39 Bảng 3.1 Các tỷ lệ dung môi pha động khảo sát 43 Bảng 3.2 Chương trình rửa giải gradient nghiên cứu 45 Bảng 3.3 Kết quy trình loại tạp hỗn hợp hấp phụ 50 Bảng 3.4 Kết tính tương thích hệ thống sắc ký paraben 59 Bảng 3.5 Kết tính tuyến tính paraben 61 Bảng 3.6 Kết độ đúng, độ xác nồng độ 0,8 µg/ml 62 Bảng 3.7 Kết độ đúng, độ xác nồng độ 1,0 µg/ml 63 Bảng 3.8 Kết độ đúng, độ xác nồng độ 1,2 µg/ml 64 Bảng 3.9 Kết ứng dụng quy trình định lượng mẫu dầu gội đầu thị trường 66 Bảng 3.10 Kết kiểm tra paraben mẫu dung dịch vệ sinh, nước tẩy trang sữa tắm 68 iv DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Cấu trúc chung paraben Hình 2.1 Quy trình - Loại tạp kỹ thuật chiết lỏng - lỏng 28 Hình 2.2 Quy trình - Loại tạp chất hấp phụ 29 Hình 2.3 Quy trình – Loại tạp kỹ thuật chiết pha rắn SPE 30 Hình 2.4 Hệ thống sắc ký UPLC H-class, Waters 39 Hình 3.1 Sắc ký đồ dung dịch hỗn hợp chuẩn paraben sử dụng cột sắc ký C8 Agilent 41 Hình 3.2 Sắc ký đồ dung dịch hỗn hợp chuẩn paraben sử dụng cột Cortecs C18+ 42 Hình 3.3 Sắc ký đồ khảo sát tỷ lệ dung môi pha động 44 Hình 3.4 Sắc ký đồ chương trình rửa giải đẳng dịng mẫu 44 Hình 3.5 Sắc ký đồ chương trình rửa giải gradient 46 Hình 3.6 Sắc ký đồ bước sóng khảo sát nghiên cứu 47 Hình 3.7 Chương trình gradient pha động 48 Hình 3.8 Hình ảnh thí nghiệm sử dụng dung mơi chiết khác 49 Hình 3.9 Sắc ký đồ quy trình loại tạp kỹ thuật chiết lỏng - lỏng 49 Hình 3.10 Sắc ký đồ quy trình loại tạp chất hấp phụ khảo sát nghiên cứu 51 Hình 3.11 Biểu đồ kết loại tạp hỗn hợp ACN:H2O 53 Hình 3.12 Biểu đồ kết loại tạp hỗn hợp MeOH:H2O 54 Hình 3.13 Biểu đồ kết khảo sát thể tích dung mơi loại tạp 55 Hình 3.14 Biểu đồ tổng diện tích đỉnh paraben với dung môi rửa giải khác 56 Hình 3.15 Sắc ký đồ rửa giải MeOH:H2O (80:20) MeOH:H2O (90:10) 57 Hình 3.16 Quy trình loại tạp tối ưu kỹ thuật SPE 57 v Hình 3.17 Quy trình xử lý mẫu tối ưu nghiên cứu 58 Hình 3.18 Sắc ký đồ tính đặc hiệu quy trình phân tích 60 Hình 4.1 Pha tĩnh cột Cortecs C18+ 70 Hình 4.2 Thí nghiệm loại tạp kỹ thuật chiết lỏng – lỏng 74 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Danh mục mẫu mỹ phẩm nghiên cứu PL-1 Phụ lục 2: Xử lý số liệu thẩm định quy trình phân tích PL-2 Phụ lục 3: Sắc ký đồ kết ứng dụng quy trình định lượng paraben vào mẫu mỹ phẩm thực tế PL-34 PL-1 Phụ lục DANH MỤC CÁC MẦU MỸ PHẨM TRONG NGHIÊN CỨU Tên sản phẩm Mã hóa Số lơ Hạn dùng Dầu gội Dove DG01 100420 - 21 10/04/2020 Dầu gội Johnson baby DG02 6097637 09/2021 Dầu gội Head & Shoulder DG03 91354603 15/12/2020 Dầu gội dược liệu Thái Dương DG04 2318 25/08/2021 Dầu gội Purite DG05 A009 12/01/2022 Dầu gội Treseme DG06 01/03 29/01/2022 Dầu gội LOREAL DG07 80R000 10/2021 Dầu gội Ramus DG08 G011018 01/10/2021 Dầu gội Selsun DG09 TU38 24/10/2021 Dầu gội Sunsilk vàng DG10 32009512 20/01/2022 Dầu gội Clear - men DG11 02017A2 03/2020 Dầu gội Pantene DG12 71434811B6 05/2020 Sữa tắm Mocha ST01 A815 05/12/2020 Sữa tắm Lux ST02 67034627 01/08/2021 Sữa tắm Purite ST03 A002 05/11/2022 Sữa tắm Johnson baby bath ST04 310818E 08/2021 Dung dịch vệ sinh Lactacyd VS01 8VH0960 27/11/2020 Dung dịch vệ sinh Thảo dược VS02 010517 03/05/2020 Dung dịch vệ sinh pH care VS03 20024631 27/06/2021 Nước tẩy trang Biore TT01 91952896 03/12/2020 Nước tẩy trang Nivea TT02 7446077 05/2020 Nước rửa tay Fruiser RT01 67133637 08/02/2020 Sữa rửa mặt tinh chất nghệ RM01 04081807 04/08/2021 PL-2 Phụ lục XỬ LÝ SỐ LIỆU THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH PHÂN TÍCH - Tính tương thích hệ thống - Tính tuyến tính - Độ đúng, độ xác  Độ đúng, độ xác ngày  Độ đúng, độ xác ngày  Độ đúng, độ xác ngày  Độ đúng, độ xác ngày liên tiếp PL-34 Phụ lục SẮC KÝ ĐỒ KẾT QUẢ ỨNG DỤNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG PARABEN VÀO MẪU MỸ PHẨM THỰC TẾ Chú thích: (1) Mẫu thử (2) Mẫu thử thêm chuẩn (1) (2) Hình Sắc ký đồ mẫu DG01 (1) (2) Hình Sắc ký đồ mẫu DG02 PL-35 (1) (2) Hình Sắc ký đồ mẫu DG03 (1) (2) Hình Sắc ký đồ mẫu DG04 PL-36 (1) (2) Hình Sắc ký đồ mẫu DG05 (1) (2) Hình Sắc ký đồ mẫu DG06 PL-37 (1) (2) Hình Sắc ký đồ mẫu DG07 (1) (2) Hình Sắc ký đồ mẫu DG08 PL-38 (1) (2) Hình Sắc ký đồ mẫu DG09 (1) (2) Hình 10 Sắc ký đồ mẫu DG10 PL-39 (1) (2) Hình 11 Sắc ký đồ mẫu DG11 (1) (2) Hình 12 Sắc ký đồ mẫu DG12 PL-40 (1) (2) Hình 13 Sắc ký đồ mẫu ST01 (1) (2) Hình 14 Sắc ký đồ mẫu ST02 PL-41 (1) (2) Hình 15 Sắc ký đồ mẫu ST03 (1) (2) Hình 16 Sắc ký đồ mẫu ST04 PL-42 (1) (2) Hình 17 Sắc ký đồ mẫu VS01 (1) (2) Hình 18 Sắc ký đồ mẫu VS02 PL-43 (1) (2) Hình 19 Sắc ký đồ mẫu VS03 (1) (2) Hình 20 Sắc ký đồ mẫu TT01 PL-44 (1) (2) Hình 21 Sắc ký đồ mẫu TT02 (1) (2) Hình 22 Sắc ký đồ mẫu RT01 PL-45 (1) (2) Hình 23 Sắc ký đồ mẫu RM01 ... phân tích, nhóm nghiên cứu tiến hành thực đề tài ? ?Nghiên cứu xây dựng quy trình định lượng paraben mỹ phẩm phương pháp UPLC – UV- Vis? ?? với mục tiêu cụ thể sau: Xây dựng quy trình định lượng paraben... Đại học Dược Hà Nội [10] nghiên cứu xây dựng quy trình phát định lượng paraben mỹ phẩm Nghiên cứu sử dụng hệ thống HPLC với đầu dị UV- Vis để xây dựng quy trình định lượng paraben mẫu sữa rửa... 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu Nghiên cứu thực nghiệm 2.2.2 Cỡ mẫu Xây dựng thẩm định quy trình định lượng đồng thời paraben theo hướng dẫn AOAC: 100 mẫu 25 Ứng dụng quy trình