Nghiên cứu điều kiện thủy phân giới hạn bã nấm men bia bằng protease tạo peptide có hoạt tính sinh học

xí ca Khóa luận tốt nghiệp Ì3 Khoa Cơng nghệ sinh học LỜI CẢM ON Lời xin bày tó lịng biết ơn sâu sắc tới GS.TS Đặng Thị Thu, Viện Công nghệ sinh học - Công nghệ thực phẩm, trường Đại học Bách Khoa Hà Nội tận tình trực tiếp hướng dẫn tơi suốt q trình nghiên cứu hồn thành luận vãn Tơi xin gừi lời cảm ơn chân thành tới TS Trương Quốc Phong thạc sỹ Lâm Hài Yen cán nghiên cứu, nghiên cứu sinh, kỹ sư, sinh viên phịng thí nghiệm trọng điêm Proteomic Đại học Bách Khoa Hà Nội Nghiên cứu sinh Phạm Thị Thu Hiền trung tâm Công nghệ sinh học thực phàm Hà Nội nhiệt tình giúp đỡ tơi tạo diều kiện thuận lợi để tơi hồn thành nội dung cùa luận văn suốt trình thực tập phịng Tơi xin cảm ơn đến tất cà thầy, cô khoa Công nghệ Sinh học, Viện Đại học Mơ Hà Nội giúp đờ truyền đạt cho nhiều kiến thức thời gian học tập trườn® Thư v^n Viện Đại học Mở Hà Nỗi Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến bố mẹ, anh chị em bạn bè bên cạnh úng hộ động viên suốt q trình học tập nghiên cứu, đế tơi có thêm động lực hồn thành tốt luận văn cũa Hà Nội, ngày 20 tháng năm 2015 Sinh viên Đặng Anh Quân Đặng Anh Quân K18.CNSH 1102 Khóa luận tốt nghiệp xí ca ìs Khoa Cơng nghệ sinh học MỤC LỤC LỜI CÁM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC CHỪ CÁI VIẾT TẮT iv DANH MỤC BÁNG V DANH MỤC HÌNH vi MỜ ĐẦU PHẦN I: TỎNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỎNG QUAN VỀ PEPTIDE 1.1.1 Khái niệm peptide 1.1.2 Sự tạo thành liên kết peptide 1.1.3 1.2 Tính chất hóa học cùa peptide PEPTIDE CĨ HOẠT TÍNH SINH HQC 1.2.1 Khái niệm peptide có hoạt lính sinh học 1.2.2 Peptide chôngnĩ^^ện.Vi.ệp £>ại h.ợc Mử.Hà.Nội 1.2.3 Peptide có hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm 1.2.4 Các peptide ãnh hưởng lên hệ thần kinh 1.2.5 Các peptide kìm hãm ACE ( chong tăng huyết áp) 1.2.6 Các peptide chống ung thư 1.3 TỎNG QUAN VÈ BÃ MEN BIA 10 1.4 TỐNG QUAN VỀ PROTEASE 12 1.4.1 1.4.2 1.5 Phân loại Protease 12 Giới thiệu số loại Protease 13 TÌNH HÌNH NGHIÊN cửu PIPTIDE CĨ HOẠT TÍNH SINH HQC TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC 15 1.5.1 Tinh hình nghiên cứu peptide có hoạt tính sinh học giới 15 1.5.2 Tinh hình nghiên cứu peptide có hoạt tính sinh học Việt Nam 16 PHÀN II: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 18 2.1 2.1.1 NGUYÊN LIỆU VÀ HÓA CHÁT 18 Nguyên liệu 18 Đặng Anh Quân K18.CNSH 1102 Khóa luận tốt nghiệp 2.1.2 2.1.3 2.2 Mffilts Khoa công nghệ sinh học Hóa chất 18 Thiết bị, dụng cụ 18 PHƯƠNG PHÁP TIÉN HÀNH 18 2.2.1 Phương pháp thu peptide có hoạt tính sinh học từ bã men bia 18 2.2.2 Xác định hoạt độ protease bang phương pháp Anson cải tiến 19 2.2.3 Xác định hàm lượng Peptide tống phương pháp OPA[ 16,17,25,261 20 2.2.4 Phân tích Peptide điện di SDS-PAGE (Laemmli 1950) 21 2.2.5 Tối ưu hóa thúy phân bã men bia bang Protease(Neutrase) theo quy hoạch bậc hai Box-Benken 22 PHÀN 3: KÉT QUÁ VÀ THÁO LUẬN 24 3.1 Ảnh hường nồng độ Enzym 24 3.2 Anh hường cùa pH 25 3.3 Ảnh hường nhiệt độ 27 3.4 Anh hường nồng độ chất 28 3.5 3.6 Ảnh hường thời gian 29 Tối ưu hóa điều-tóện thủy Th thu phần dịch nồi => lọc qua màng lOkDa (4000v/p, 4°c lOp) => Peptide sinh học (