Nghiên cứu thiết lập các chất đối chiếu hederacosid c từ lá thường xuân (hedera helix l ) rotundin từ củ bình vôi (stephania lour )

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ LÊ THỊ MỸ LIÊN NGHIÊN CỨU THIẾT LẬP CÁC CHẤT ĐỐI CHIẾU HEDERACOSID C TỪ LÁ THƯỜNG XUÂN (HEDERA HELIX L.), ROTUNDIN TỪ CỦ BÌNH VƠI (STEPHANIA LOUR.) LUẬN VĂN THẠC SĨ Cần Thơ, 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ LÊ THỊ MỸ LIÊN NGHIÊN CỨU THIẾT LẬP CÁC CHẤT ĐỐI CHIẾU HEDERACOSID C TỪ LÁ THƯỜNG XUÂN (HEDERA HELIX L.), ROTUNDIN TỪ CỦ BÌNH VƠI (STEPHANIA LOUR.) Chun ngành : Kiểm Nghiệm Thuốc Độc Chất Mã số : 8720210 LUẬN VĂN THẠC SĨ Người hướng dẫn khoa học 1- TS.DS Nguyễn Thị Linh Tuyền 2- ThS.DS Dương Thị Trúc Ly Cần Thơ – 2021 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận án trung thực, khách quan chưa công bố nơi Cần Thơ, ngày 20 tháng 01 năm 2022 Tác giả luận văn Lê Thị Mỹ Liên ii LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, lời xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS.DS Nguyễn Thị Linh Tuyền cô ThS.DS Dương Thị Trúc Ly tận tình hướng dẫn, đóng góp ý kiến ln động viên tơi suốt q trình thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến q thầy Liên mơn Hóa Phân Tích - Kiểm Nghiệm - Độc chất động viên, khích lệ tinh thần tạo điều kiện thuận lợi thời gian thực luận văn môn Đồng thời gửi lời thương mến đến bạn khóa chuyên khoa I cao học kiểm nghiệm 2019 chia sẻ kinh nghiệm thực tiển khó khăn q trình học tập Tôi xin chân thành cám ơn đến Ban Giám Đốc anh/chị/em Trung tâm kiểm nghiệm thuốc – mỹ phẩm Cần Thơ tạo điều kiện hỗ trợ em nhiều trình thực đề tài Cuối cùng, tơi vơ biết ơn gia đình, ban lãnh đạo công ty đồng nghiệp công ty CP Dược Hậu Giang tạo điều kiện nguồn động lực giúp vượt qua khó khăn, thử thách hồn thành nghiên cứu iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ix MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan thường xuân hederacosid C 1.2 Tổng quan bình vơi rotundin 10 1.3 Tổng quan chất đối chiếu quy trình thiết lập chất đối chiếu 18 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 Đối tượng nghiên cứu 22 2.2 Phương pháp nghiên cứu 24 2.3 Nội dung nghiên cứu 25 2.4 Phương pháp thu thập đánh giá số liệu 39 2.5 Phương pháp kiểm soát sai số 39 2.6 Phương pháp xử lý phân tích số liệu 39 2.7 Đạo đức nghiên cứu 39 Chương KẾT QUẢ 40 3.1 Xác định thực vật 40 3.2 Chiết xuất, phân lập thiết lập chất đối chiếu hederacosid C từ thường xuân 43 3.3 Chiết xuất, phân lập thiết lập chất đối chiếu rotundin từ củ bình vơi 60 Chương BÀN LUẬN 73 iv 4.1 Xác định thực vật 73 4.2 Chiết xuất, phân lập thiết lập chất đối chiếu hederacosid C từ thường xuân 74 4.3 Xây dựng quy trình chiết xuất, phân lập thiết lập rotundin từ củ bình vơi 81 KẾT LUẬN 86 KIẾN NGHỊ 88 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC v DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt As AOAC ASEAN Conc Từ nguyên Asymmetry Hệ số bất đối Association of Official Hiệp hội hóa phân tích Analytical Chemists quốc tế Association of Southeast Hiệp hội quốc gia Asian Nations Đông Nam Á Concentration Nồng độ DĐVN Dược điển Việt Nam ĐKĐBĐ Độ không đảm bảo đo GLP Nghĩa tiếng Việt Good laboratory practices Thực hành tốt phòng kiểm nghiệm thuốc HPLC High Performance Liquid Sắc ký lỏng hiệu cao Chromatography ICH International Conference on Harmonization ISO/IEC International Organization for Tổ chức quốc tế tiêu Standardization chuẩn hóa IR Infrared Hồng ngoại MS Mass Spectrometry Khối phổ NMR Nuclear magnetic resonance Cộng hưởng từ hạt nhân PDA Photo Diode Array Đầu dò dãy diod quang Resolution Độ phân giải Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tương đối SD Standar Deviation Độ lệch chuẩn SKLM Sắc ký lớp mỏng Sắc ký lớp mỏng Rs RSD vi Chữ viết tắt tR USP Từ nguyên Retention time Thời gian lưu United States Pharmacopoeia Dược điển Mỹ UV-Vis Ultra violet – Visible VKN TPHCM Viện kiểm nghiệm thành phố WHO Nghĩa tiếng Việt Quang phổ hấp thụ phân tử Hồ Chí Minh World Health Organization Tổ chức Y Tế giới vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần hóa học có hường xuân Bảng 1.2 Các chế phẩm có cao khô thường xuân 10 Bảng 1.3 Hàm lượng rotundin số lồi bình vôi Việt Nam 13 Bảng 1.4 Các chế phẩm có cao bình vơi rotundin 18 Bảng 2.1 Các dung mơi, hóa chất sử dụng nghiên cứu 23 Bảng 2.2 Các thiết bị, dụng cụ sử dụng nghiên cứu 24 Bảng 2.3 Chuẩn bị dung dịch chuẩn kiểm tra tính tuyến tính 31 Bảng 3.1 So sánh khảo sát thành phần pha động hederacosid C 54 Bảng 3.2 Kết tính tương thích hệ thống chuẩn hederacosid C 54 Bảng 3.3 Kết kiểm tra độ xác ngày 55 Bảng 3.4 Kết kiểm tra độ xác ngày 55 Bảng 3.5 Kết kiểm tra độ xác trung gian 55 Bảng 3.6 Kết kiểm tra tính tuyến tính hederacosid C 56 Bảng 3.7 Kết kiểm tra độ 57 Bảng 3.8 Độ khơng đảm bảo đo quy trình phân tích 57 Bảng 3.9 Kết khảo sát độ ổn định - hederacosid C 57 Bảng 3.10 Kết đánh giá đồng lô 58 Bảng 3.11 Kết định lượng hederacosid C ba phịng thí nghiệm 58 Bảng 3.12 Phân tích phương sai theo Anova yếu tố (hederacosid C) 59 Bảng 3.13 Bảng tính z-score hederacosid C so sánh phịng thí nghiệm 59 Bảng 3.15 Phổ NMR hợp chất CXR-1 so sánh với tài liệu tham khảo 65 Bảng 3.16 Kết tính tương thích hệ thống chuẩn rotundin 66 Bảng 3.17 Kết kiểm tra độ lặp rotundin 67 Bảng 3.18 Kết kiểm tra độ xác - định lượng rotudin 67 Bảng 3.19 Kết kiểm tra độ xác trung gian - định lượng rotundin 68 viii Bảng 3.20 Kết kiểm tra tính tuyến tính rotundin 68 Bảng 3.21 Kết kiểm tra độ rotundin 69 Bảng 3.22 Kết độ không đảm bảo đo phương pháp phân tích 70 Bảng 3.23 Độ ổn định rotundin phân tích 70 Bảng 3.24 Kết đánh giá đồng lô rotundin 71 Bảng 3.25 Kết định lượng rotundin ba phịng thí nghiệm 71 Bảng 3.26 Phân tích phương sai theo Anova yếu tố (rotundin) 72 Bảng 3.27 Bảng tính z-score rotundin phịng thí nghiệm 72 PL-79 Phụ lục 10 Phiếu kiểm nghiệm chất chuẩn sử dụng Chuẩn hederacosid C PL-80 Chuẩn rotundin PL-81 CONG TY CP DUQC HU GIANG CONG HOA XA HQI CHU NGHiA VIT NAM Dc 1p Tir Hnh phüc - - Ccn Tho', ngày 11 tháng 01 nám 2022 WAY xAC NHiN BAN TONG GIAM DOC CONG TY CP DUC HJU GIANG XAC N}IN Ds Lê Thi M5 Lien Dan vi Cong tác: Phông kim nghim - Cong ty Co^ Phn Diiỗic Hu Giang Hin l hoc viờn Thc si duc hoc, chuyên ngành Cao hoc Kim nghim thuc - Dc cht khóa 2019-2021 theo Quyt djnh so ^ 1402/QD-DHYDCT ngày 05 tháng näm 2019 cüa Hiu trithng Tru&ig Dti hoc Y Drỗic Can Thu Cỏc S6 1iu nghiờn ci'ru thirc nghim cüa Ds Lê Thj M Lien phii hic cüa d tài "Nghiên ciru thit 1p chit di chiu hederacosid C tü thuing xuân (Hedera helix L.), rotundin ti'x cu' bInh vôi (Stephania Lour.)" theo Quyt djnh so^ 917/QD-DHYDCT ngây 29 tháng nàm 2020 cüa Hiu tnräng Trithng Di hoc Y Dugc Can Thu ve vic giao de^ tài 1un van t& nghip cüa hoc viên Thtc si dugc hoc khôa 2019-2021 Tr tháng 07 nãm 2020 so 1iu thrc nghim de^ tài bao gm : khão sat quy trInh chit xut, phân 1p hederacosid C tü ' blnh vôi, thm djnh phuang pháp phân tIch so thung xuân rotundin tü cu sánh lien phông thI nghim hederacosid C rotundin bng phuong pháp sac k lông hiu näng cao du PDA Kt qua phân tIch tü may duc h.ru trü tai phOng kim nghim dung sr tht./ cong ty CP Ducic Hu Giang thai gian nghiên cru - CONG TY CP DU'QC HAU GIANG NHA MAY DUC PHAM DHG CONG HOA XA HO! CHU NGHiA V!ET NAM Dc 1p — Tiy — Hnh phüc can Tho, ngày 1] tháng 01 nám 2022 GIAY XAC NHJN BAN GIAM DOC NHA MAY DUC PHAM DHG — CONG TY CP DIJC HU GIANG XAC NHIN Ds Lê Th1 M5 Lien Don vj cong tác: Phông kiêm nghim — nhà may Duqc Hu Giang - COng ty C Phn Duỗc HQu Giang Hin l h9c viờn Thic si duỗc h9c, chuyên ngành Cao h9c Kim nghim thu,c - Dc cht khóa 2019-2021 theo Quyt djnh s 1402/QD-DHYDCT ngày 05 tháng näm 2019 cüa Hiu trithng Trumg Dui h9c Y Duqc Cn Tho Các s lieu nghiên ciru th?c nghim cüa Ds Lê Thj M5 Lien phii 1ic cüa d tài "Nghiên ciru thit 1p cht di chiu hederacosid C tü thu&ig xuân (Hedera helix L.), rotundin tü cü bInh vOi (Stephania Lour.)" theo Quyt djnh s 91 7/QD-DHYDCT ngày 29 tháng näm 2020 cüa Hiu trueing Trumg Di h9c Y Duge Cn Tho v vic giao d tài 1un van t& nghip cüa h9c viên Thic si duỗc h9c khúa 2019-202 Tr thỏng 10 näm 2021 s 1iu thirc nghim d tài bao gm : so sánh lien phông thI nghim hederacosid C rotundin bang phuo'ng pháp sc k lông hiu näng cao du PDA K& qua phân tIch tü may ducrc 1uu trỹ tai phOng kim nghim nh may Duỗc phm DHG cOng ty CP Duỗc Htu Giang thủ gian nghiên ciru dung sr tht/ GIAM B Y DLC PHAM DHG CONG TV COPHAN DUiCIlUGIAN • CHINUAP4HN •\DuaCP ÀY DHG O\TM UGIANG • - e0vrE cQr\rc I{cA xA uqr cHU NCHIA vrEr NAM Bdc I7p - Tu'do - Hgnh phtic TRUONG EAI HQC Y DU'qC CAN THC Can Tlrc', rLgdl; thang nd.nt 20" " BIEN EAX CUA HOI DONG CHAM LUAN VAN rH4c si Ho t6n hoc vi6n: LE fHI [qV ffEn Oe tal: "Ngki\n cilu tld* tdp chfu eil cni\u hederacosdtd C tir tti thu'dtrg xudn (Hedera helix L.) rotundtn t* cir birclr v6t (Steplrania Lou.r)" Nguo'i hu6ng d6n: TS NguySn Thi Linh TuyAn T'HS Duong Th! Tnic Ly Chuydn ngdlih: Ki0m nghi6m thu6c vd d6c ch6t Duo-c c6ng nhan ld h9c vi6n Th4c si theo Quyat dinh s6 \ AZIQD-DHYDCT ngdy $j/QTDAD cria Hi0u truo'ng Truong Dai ligc Y Duo-c CAn Tho r HQr EOI{G CHAM LUaN VAx Cdn cri'c6c quy dinh ctra B0 Gi6o duc vd Dd,o tao, BO Y t0 r,e viqc t6 chilc ch6m luAn v[n Thac si, I{i6u truo'ng Trud'ng Dai hgc Y Duo-c CAn Tho' dd, quytit dinh thdnh lAp H6i d6ng ch6m luAn vin sO 2qD-DHYDCT ngdy " 120 ., gdm c6c thdnh vi0n sau: TT Hg vi tOn Tr{ch nhiQm I PGS.TS Duoirg XuAn Chu' GS.TS Nguy6n Du'c HQi il0ng Chu tich PhAn biqn a -l PGS.TS P6 cnau Minh Vinh Tlio Phan PGS.TS Vo TS Huinh Thi My Duy6n 1 l'hi Bach Hue brln2 Uy vien Uy vi6n - Thu ky Bu6i ch6m luAn varr dugc tien hanh vdo luc gid' phut ngiy ./ 1" Tnrdng Dai hoc Y Duoc C6n Thtv t?r '" """'.".',"" : , ; ,, Vdng mdt: Q Co nrd',: vidn hoi dong ii Nqr EUNG BiEN sAX: i Eai ciiQn Fhcng Ddo tao sau dai hqc doc quy6t dinh thdnh 10p HQr d6ng ch6rn luir,r r,in Th4c si cria Tru'd'ng Dai hgc Y Duo-c Cin Tho, c6ng bO tirdnh p1i0n H6i d6ng ,.; dam bdo rii6u kiQn de HQi d6ng ldm viQc Chitich Hqi d6ng: pC"S.fS Duong Xu6n Chir dieu khion bu6i cir6m lufln v6n Uy vi6n thu i,y dqc ly lich khoa hcc, bAng di6rr todn khoa cta hoc vi0n vA i.,hang dinh hqc vi0n ddm b6o ddy du chuong trinh dio tao Hoc vi6n trinh biy 1u4n v5n thd'i gian kh6ng qu6 15 ph[t Phan bien 1: GS.TS Nguy6n Dri'c Tu5n dsc nhQn x6t (iiinh kdm bdn nhQn xet) Ph6n biQn 2: PGS.TS nh0n x6t) p6 Cnau Minh Vinh Thg doc nhdn xet (dinh kdm bin Thdnh viOn HQi dong va nguo'i tham dLl d[t cau hci hoac ph6t bi6u y ki6n: *s/ ql a aa XrUhdI" lhC l.'5 'r,|a c^n:h n d^ * p/u * ril***.s.at *.a.( 6a*=hn dfr,: r^L; v.0h CD fut J at 0q aua o$y /a/^ dA offi d-bi 4l ,?? m, d( ,& qL&,,s*c,