NGHIÊN C U CHI T XU T VÀ TINH CH POLICOSANOL T V MÍA Nguy n Qu c Th ng*, Ki u Tr n Kim Loan, Nguy n Ng c Qu ih cC *Email: nqthang.d42@student.ctump.edu.vn TÓM T T tv : Policosanol nhóm ancol no m ch th ng v c ch ng minh có tác d ng h cholesterol máu M c tiêu nghiên c u: (1) Chi t xu t tinh ch policosanol t v nh thành ph n c a policosanol m u sau tinh ch i u: V Mía ph ph m thu t i thành ph C ct v c chi t xu c làm s ch b t pha r c th y phân, lo i t c tinh ch b t tinh/ k t t thu c policosanol sau tinh ch H n h p policosanol sau tinh ch c ki m t tinh t thành ph n hóa h c b ng k thu t s c ký l p m ng (SKLM), ph h ng ngo i (IR), s c ký khí (GCFID GC-MS) K t qu : S n ph c chi t xu t tinh ch t v Mía tinh t tinh t cao GC-FID K t qu phân tích b ng k thu t GCnh c octacosanol policosanol v ng 88,65 % K t lu n: T v Mía, 53,49mg c chi t xu t tinh ch tinh th tác d ng sinh h c ng nghiên c u làm ch ph m T khóa: sáp, Mía, policosanol ABSTRACT EXTRACT AND PURIFY POLICOSANOLS FROM SUGARCANE BARK Nguyen Quoc Thang, Kieu Tran Kim Loan, Nguyen Ngoc Quynh, Le Thanh Vinh Tuyen Can Tho University of Medicine and Pharmacy Background: Policosanol is a group of saturated long-chain alcohols, with chain lengths varying between 24 to 34 carbon atoms, that has been proven to be effective in reducing blood cholesterol level Objectives: (1) Extract and purify policosanol mixture from sugarcane bark; (2) Determine policosanol composition of purified sample Materials and methods: Sugarcane bark, a byproduct of sugarcane juice production, was collected in Can Tho city Crude wax, obtained from sugarcane bark, was extracted and refined by solid phase extraction (SPE) Refined wax was then hydrolyzed and by fractional crystallization/ precipitation to obtain purified policosanol mixture The purity and composition of policosanol mixture product were determined by thin layer chromatography (TLC), infrared (IR) and gas chromatography (GC-FID and GC-MS) Results: The obtained policosanol mixture from sugarcane bark was high purity product and was confirmed by TLC and GC-FID The GC-MS analysis determined that octacosanol was the main policosanol (88,65 % in GC-MS) in sugarcane wax in Can Tho City Conclusion: From sugarcane bark, 53,49mg high purity policosanol mixture was extracted and confirmed to be ready for pharmacological trial and pharmaceutical preparations Keywords: wax, sugarcane, policosanol TV N 163 M Policosanol nhóm ancol no máu [2] Tuy Mía 1) Chi t xu t tinh ch policosanol t v Mía 2) nh thành ph n c a policosanol m u sau tinh ch U ng nghiên c u u Dung mơi, hóa ch t (Meck - gel 0,200mm) (Merck - 21-C40 -Aldrich) n- hexan, ethyl acetat, acid acetic, acid sulfuric Thi t b Ultra Innert (30m x 0,25mm x 0,25 Technologies, G3461- mao mao -5MS -FID Agilent 7890B (Agilent -5MS (30m x 0,25mm x 0,25µm, UVsóng 254nm 365nm; Cân phân tích Kern ABJ N i dung nghiên c u Chi t xu t làm s ch sáp thơ t v Mía Chi t xu t sáp thơ t v Mía Cân 30kg v Mía, s y khơ 50 - 60oC, chi t v c nóng 100oC, g n thu o o l yd c nóng làm l n C, l c l y t a, s y t a 50 c sáp thô Kh u ki n làm s ch sáp thô t v Mía Kh o sát dung mơi hịa tan cho chi t pha r c hòa tan v i 100 ml dung môi bao g m ethanol i, ethyl acetat, cloroform n-hexan nhi phòng 30oC L c l ng c n không tan dung môi, s y khô nhi 100oC, cân Làm s ch sáp thô t v Mía b t pha r n g sáp th 164 SKLM Kh u ki n chi t xu t tinh ch policosanol t Kh o sát th i gian th ml KOH Metha o 85 sung 240ml Tinh ch policosanol t policosanol thô b t tinh/ k t t - 60 C - 60o o C thu n o o làm 4oC 80 - thu n-hexan - ethyl acetat - acid acetic (90 cloroform - acid acetic (10 : 0, - ethyl acetat - acid acetic (30 : 70 : 0, c 2SO4 10 %/ methanol nh thành ph n policosanol sau tinh ch nh thành ph n policosanol s ch b ng ph IR 800 MPa Kh u ki n s c ký policosanol s ch b ng GC-FID c 3µl chia dịng 2:1) Khí mang dịng o o dò 310oC 320o C (4oC/phút) o C 10 phút nh ancol thành ph n policosanol s ch b ng GC-MS - o o o o 300 C (10 o C 320o o C (TIC - total ion c Z Z -MS III K T QU NGHIÊN C U 3.1 Chi t xu t làm s ch sáp thô t v Mía Chi t xu t sáp thơ t v Mía T 30kg v Mía, sau q trình chi t xu 165 c 20g sáp thô Kh Kh ng u (g) 1,00 u ki n làm s ch sáp thô t v Mía Dung mơi Ethanol Nhi (oC) i Th tích (ml) ng c n khơng tan dung môi (g) 30 100 0,920 1,00 Ethyl acetat 30 100 0,868 1,00 Cloroform 30 100 0,471 1,00 Hexan 30 100 0,804 Làm s ch sáp thơ t v Mía b 20g sáp thô thu 0g sáp t pha r n Ghi chú: A: Sáp thơ i chi u Hình 1: S i chi u v i h dung môi n-hexan - EA - CH3COOH (90 : : 1) 3.2 Kh u ki n chi t xu t tinh ch policosanol t sáp Kh o sát th i gian th Ghi chú: B: S n ph m th y phân sau gi C: S n ph m th y phân sau gi D: S n ph m th y phân sau gi i chi u Hình 2: S , s n ph m th chi u v i h dung môi n-hexan - EA - CH3COOH (90 : : 1) 166 i so sánh policosanol Hình 3: Ph IR c 4000 3500 3000 2500 2000 Wavenumber cm-1 1500 1000 500 Hình 4: Ph IR c a s n ph m sau th y phân gi g 167 g policosanol thô Tinh ch policosanol t policosanol thô b n t tinh/ k t t a phân mg I) 14 mg Ghi chú: A: Policosanol lo i I B: Policosanol i chi u 254nm 365nm Hình 5: S policosanol s i chi u v i h dung môi 1: nhexan - EA - CH3COOH (90 : : 1) UV 254nm, 365nm; h dung môi 2: Cf CH3COOH (10 : 0,1); h dung môi 3: Cf - EA - CH3COOH (30 : 70 : 0,1) policosanol (254nm) hay phát quang (365nm) nm 365 nm) nh thành ph n policosanol sau tinh ch 168 4000 3500 3000 2500 2000 Wavenumber cm-1 1500 1000 500 Hình 6: Ph IR c a policosanol lo i I OH), 2959.40, 2917.63 2849.99 ( CH), 1462.28 ( CH2), 1098.27 1027.85 ( CO) Hình 7: Ph GC-FID c a policosanol lo i I - hút có % (920,3/1232) 169 B ng B ng phân tích k t qu nh Th 14,543 15,493 15,933 17,558 nh (phút) Chi u cao 249052,78 63026,27 4625986,26 188417,52 Hình S Di nh 521321,38 150695,25 11050473,55 712963,8 Di 4,72 1,36 100 6,45 GC-MS c a policosanol lo i I % (100/112,53) 170 nh (%) - -40 - KI IV BÀN LU N 4.1 Chi t xu t làm s ch sáp thơ t v Mía [3] so sánh 4.2 Kh u ki n chi t xu t tinh ch policosanol t sáp policosanol nm 365nm không 171 Các nh thành ph n policosanol sau tinh ch vào 6, xét policosanol I hình õ -MS hình [4] 3089, phù gia - National Institute of Standards and Technology) [5] V K T LU N T 30 kg v c 20g sáp thô tinh ch c 16,4g sáp sau tinh ch V ng 4,5g sáp sau tinh ch th c hi n th c 4,239g s n ph m th y phân L y 3g s n ph m th y phân th c hi n k t tinh k t t c 53,49mg policosanol lo i I 14mg policosanol lo i II Policosanol lo tinh t cao SKLM GC-FID Trong s n ph c, octacosanol thành ph n chi m 88,65 % GC-MS TÀI LI U THAM KH O H Qu c Phong (2015), Nghiên c u ng d ng bã mía ch t o v t li u biocomposite H i th o KH i h c k thu t l n th i h c k thu t v i s phát tri n b n v ng c a t nh H - 160 Van Tang Nguyen (2017), Recovering Bioactive Compounds from Agricultural Wastes John Wiley & Sons (1): 165 - 170 Uribarri, E., Laguna, A., Sierra, R., and Ricardo, Y (2002), Physico-mechanical characterization of policosanol, a novel hypocholesterolemic drug Drug Dev Ind Pharm 28(1): 89 - 93 Mei - Fei Wang (2007), Comparison of Various Extraction Methods for Policosanol from Rice Bran Wax and Establishment of Chromatographic Fingerprint of Policosanol Journal of Agricultural and Food chemistry: 5552 - 5558 https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/1-Octacosanol: Kovats Retention Index (3.2.5), truy c p ngày 01/7/2020 (Ngày nh n bài: 03/4/2020 - Ngày 172 06/8/2020) ...M Policosanol nhóm ancol no máu [2] Tuy Mía 1) Chi t xu t tinh ch policosanol t v Mía 2) nh thành ph n c a policosanol m u sau tinh ch U ng nghiên c u u Dung mơi, hóa... sáp thơ t v Mía b t pha r n g sáp th 164 SKLM Kh u ki n chi t xu t tinh ch policosanol t Kh o sát th i gian th ml KOH Metha o 85 sung 240ml Tinh ch policosanol t policosanol thô b t tinh/ k t t... sáp sau tinh ch V ng 4,5g sáp sau tinh ch th c hi n th c 4,239g s n ph m th y phân L y 3g s n ph m th y phân th c hi n k t tinh k t t c 53,49mg policosanol lo i I 14mg policosanol lo i II Policosanol