Đang tải... (xem toàn văn)
i ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC PHẠM THỊ HẰNG TẠO DÒNG VÀ PHÂN TÍCH TRÌNH TỰ GEN MÃ HÓA LEUCOANTHOCYANIDIN REDUCTASE Ở CÂY CHÈ Chuyên ngành Công nghệ sinh học Mã số 8 42 02 01 TÓM TẮT LU[.]
i ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC PHẠM THỊ HẰNG TẠO DỊNG VÀ PHÂN TÍCH TRÌNH TỰ GEN MÃ HÓA LEUCOANTHOCYANIDIN REDUCTASE Ở CÂY CHÈ Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 42 02 01 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG Thái Nguyên - 2018 ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu kết trình bày luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Mọi trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Mọi giúp đỡ cá nhân tập thể ghi nhận lời cảm ơn Tôi xin chịu hồn tồn trách nhiệm cam đoan Tác giả Phạm Thị Hằng iii LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Hoàng Thị Thu Yến - Khoa Công nghệ Sinh học - Trường Đại học Khoa học - người tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu để tơi hồn thành luận văn Tơi xin cảm ơn thầy cô tập thể cán Khoa Công nghệ Sinh học, cảm ơn lãnh đạo Trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên cán công tác Viện Nghiên cứu hệ gen - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam giúp đỡ tơi q trình thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn TS Huỳnh Thị Thu Huệ Cử nhân Phạm Thị Hằng - Phòng đa dạng sinh học hệ gen, Viện Nghiên cứu hệ gen, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, tận tình dẫn giúp đỡ tơi hồn thành đề tài nghiên cứu khoa học Nhân dịp xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Dương Trung Dũng – Khoa Nông học – Trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên giúp đỡ thời gian thu thập vật liệu nghiên cứu làm đề tài Cuối cùng, xin bày tỏ lịng biết ơn tới tồn thể gia đình, bạn bè đồng nghiệp cổ vũ, động viên suốt thời gian qua Một lần xin chân thành cảm ơn! Tác giả Phạm Thị Hằng iv MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 LÝ DO CHỌN ĐỀ TÀI MỤC TIÊU ĐỀ TÀI NỘI DUNG NGHIÊN CỨU CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ CÂY CHÈ 1.1.1 Nguồn gốc phân loại chè 1.1.2 Đặc điểm sinh học chung chè 1.1.3 Thành phần hóa học chè 1.2 TÌNH HÌNH SẢN XUẤT CHÈ TRÊN THẾ GIỚI VÀ VIỆT NAM 12 1.2.1 Tình hình sản xuất chè giới 12 1.2.2 Tình hình sản xuất chè Việt Nam 13 1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU CHÈ TRÊN THẾ GIỚI VÀ VIỆT NAM 14 1.3.1 Tình hình nghiên cứu chè giới 14 1.3.2 Tình hình nghiên cứu chè Việt Nam 15 1.4 CATECHINS VÀ LEUCOANTHOCYANIDIN REDUCTASE Ở CHÈ 16 1.4.1 Catechins công dụng Catechins 16 1.4.2 Cơ chế sinh tổng hợp catechins chè 17 1.4.3 Leucoanthocyanidin reductase (LAR) 19 CHƯƠNG II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 VẬT LIỆU 21 2.1.1 Nguyên liệu 21 2.1.2 Hóa chất, thiết bị 21 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.2.1 Phương pháp thu mẫu chè 22 2.2.2 Phương pháp tách chiết RNA tổng số từ chè 22 v 2.2.3 Điện di RNA tổng số 23 2.2.4 Tổng hợp cDNA 24 2.2.5 Nhân gen CsLAR1 kỹ thuật RT –PCR 24 2.2.6 Tách dòng gen CsLAR1 25 2.2.7 Xác định phân tích trình tự 29 2.2.8 Tạo vector biểu gen CsLAR1 30 2.2.9 Biểu gen CsLAR1 31 CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 3.1 KHUẾCH ĐẠI GEN CsLAR1 TỪ MẪU CHÈ NGHIÊN CỨU 32 3.2 TẠO DÒNG GEN, XÁC ĐỊNH VÀ PHÂN TÍCH TRÌNH TỰ GEN MÃ HĨA LEUCOANTHOCYANIDIN REDUCTASE 33 3.2.1 Tạo dòng gen CsLAR1 33 3.2.2 Xác định phân tích trình tự gen CsLAR1 34 3.3 BIỂU HIỆN GEN MÃ HÓA CsLAR1 TỪ CHÈ TRUNG DU XANH TRONG VI KHUẨN E COLI 41 3.3.1 Tạo cấu trúc biểu mang gen CsLAR1 vào vi khuẩn E coli DH10B 41 3.3.2 Biểu gen CsLAR1 43 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 45 KẾT LUẬN 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO 46 vi DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Nghĩa tiếng Việt Từ viết tắt C Nghĩa tiếng Anh Catechin Catechin cDNA DNA bổ sung Complementary DNA CsLAR Gen LAR chè Camellia sinensis LAR DNA Axit Deoxiribonucleic Deoxyribonucleic Acid dNTP dNTP Deoxynucleoside triphosphate DMSO Dimethyl sulfoxide Dimethyl sulfoxide Đồng tác giả et al Đtg EDTA Axit etylene diamin tetraaxetic Ethylene Diamine Tetraacetic Acid EtBr Ethidium Bromide Ethidium Bromide EtOH Etanol Ethanol EGCG Epigallocatechin-3-O-gallate Epigallocatechin-3-O-gallate Epicatechin Epicatechin ECG Epicatechin-3-O-gallate Epicatechin-3-O-gallate EGC Epigallocatechin Epigallocatechin Gallocatechin Gallocatechin Chất cảm ứng biểu gen Isopropyl- -D-thiogalactoside EC GC IPTG IPTG Kilô bazơ Kilo base Leucoanthocyanidin reductase Leucoanthocyanidin reductase LB Môi trường LB Luria Bertani mRNA ARN thông tin Mesenger Axit Ribonucleic Trung tâm Thông tin Công National Center for nghệ Sinh học Quốc gia Biotechnology Information Nicotinamid adenine Nicotinamid adenine Kb LAR NCBI NAD vii dinucleotide dinucleotide Nicotinamid adenine Nicotinamid adenine dinucleotide phosphate dinucleotide phosphate Khung đọc mở Open reading frame Proanthocyanidin Proanthocyanidin Phản ứng chuỗi trùng hợp Polymerase Chain Reaction Primer R Mồi ngược Primer reverse Primer F Mồi xuôi Primer forward RNA Axit Ribonucleic Ribonucleic Acid RNase Enzyme phân hủy RNA Ribonuclease RT Enzyme phiên mã ngược Reverse Transciptase SSR Chất thị phân tử Simple sequence repeats TAE TAE Tris Acetate EDTA Taq Vi khuẩn chịu nhiệt Thermus aquaticus UTR Vùng không dịch mã Untranslated region NADP ORF PA PCR viii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Các dạng tán chè Hình 1.2 Mầm chè cắt dọc Hình 1.3 Búp chè Hình 1.4 Sơ đồ đợt sinh trưởng Hình 1.5 Các loại cành chè Hình 1.6 Rễ chè Hình 1.7 Sơ đồ tổng hợp catechins chè 18 Hình 2.1 Sơ đồ vector tách dịng pJET 1.2 26 Hình 2.2 Sơ đồ vector biểu pET32a(+) 30 Hình 2.3 Sơ đồ nghiên cứu 31 Hình 3.1 Hình ảnh điện di kết PCR khuếch đại gen CsLAR1 từ chè Trung Du xanh 32 Hình 3.2 Kết điện di sản phẩm tách dòng gen CsLAR1 từ mẫu chè Trung du xanh vector pJET1.2 33 Hình 3.3 Hình ảnh điện di kiểm tra có mặt sản phẩm PCR plasmid pJET 1.2 34 Hình 3.4 Kết so sánh trình tự gen CsLAR1 phân lập từ mẫu chè Trung du xanh với số trình tự Genbank 36 Hình 3.5 So sánh trình tự amino acid suy diễn CsLAR1 từ giống chè Trung Du xanh với trình tự cơng bố 38 Hình 3.6 Kết kiểm tra plasmid 41 Hình 3.7 Kết điện di sản phẩm tách plasmid gắn gen CsLAR1 vào vector pET32a(+) 42 Hình 3.8 Kết cắt kiểm tra plasmid pET32a(+)_CsLAR1 BamHI XhoI PCR khuếch đại gen CsLAR1 từ plamid 43 Hình 3.9 Kết điện di sản phẩm protein tổng số từ chủng Rosetta tạo CsLAR1 tái tổ hợp 44 ix DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần hóa học chè tươi Bảng 1.2 Thành phần độ ẩm thay đổi theo tháng năm 11 Bảng 1.3 Diễn biến diện tích, suất, sản lượng số nước trồng chè giới năm 2016 12 Bảng 1.4 Tình hình diện tích, suất, sản lượng chè Việt Nam năm gần 14 Bảng 2.1 Thiết bị dụng cụ sử dụng nghiên cứu 22 Bảng 2.2 Thành phần phản ứng tổng hợp cDNA 24 Bảng 2.3 Chu trình nhiệt thực phản ứng tổng hợp cDNA 24 Bảng 2.4 Trình tự đoạn mồi sử dụng nhân gen CsLAR1 25 Bảng 2.5 Thành phần phản ứng PCR nhân gen CsLAR1 25 Bảng 2.6 Thành phần phản ứng tạo đầu sản phẩm PCR 26 Bảng 2.7 Thành phần phản ứng ghép nối đoạn gen CsLAR1 vector pJET 1.2 27 Bảng 2.8 Thành phần phản ứng cắt plasmid 29 Bảng 3.1 Sự sai khác số trình tự nucleotide gen CsLAR1 chè Trung du xanh với trình tự công bố Genbank 37 Bảng 3.2 Sự sai khác trình tự amino acid gen mã hóa LAR giống chè Trung du xanh với trình tự cơng bố Genbank 39 MỞ ĐẦU LÝ DO CHỌN ĐỀ TÀI Chè (Camellia sinensis (L) O Kuntze) loại cơng nghiệp lâu năm, có nguồn gốc vùng nhiệt đới Á nhiệt đới, trồng xuất từ lâu, trồng phổ biến giới Chè nước uống thông dụng người ưa thích khơng hương vị độc đáo nó, mà cịn nước chè có lợi cho sức khỏe Nước chè có tác dụng giải khát, khắc phục mệt mỏi bắp hệ thần kinh trung ương, kích thích vỏ đại não làm cho tinh thần minh mẫn sảng khoái, hưng phấn thời gian lao động căng thẳng trí óc chân tay, ngăn chặn phát triển tiến triển bệnh Alzheimer [22] Hơn nữa, uống chè cịn kích thích tiêu hố mỡ, chống béo phì; chống viêm; chống sâu răng, miệng ung thư vòm họng; phòng ngừa ung thư [18], [36]; phòng ngừa bệnh tăng huyết áp [41]; tiểu đường [20] ngăn ngừa cholesteron tăng cao [17] Ngoài ra, chè cịn có khả bảo vệ da khỏi tác hại tia cực tím [21] Hầu hết đặc tính có lợi cho sức khỏe liệt kê chứng minh hợp chất polyphenol có chè Ngồi ra, chè cịn mang lại nhiều lợi ích kinh tế xã hội như: giải công ăn việc làm, đem lại nguồn thu nhập ổn định cho người dân, cải thiện đời sống nhân dân, thúc đẩy q trình cơng nghiệp hóa đại hóa nơng thơn [11] Theo đánh giá Unal (2011) có khoảng 2,5 triệu chè khơ sản xuất năm, chè đen chiếm khoảng 78%, chè xanh chiếm 20% chè Olong chiếm 2% [26] Thành phần hóa học, đặc biệt hàm lượng polyphenol, chất hịa tan định đến chất lượng sản phẩm chè [3] Trong đó, catechins chiếm khoảng 30% thành phần polyphenol chè Catechins chia thành nhóm: catechins epimer hóa cịn gọi epicatechin (EGCG, ECG, EGC EC) catechins khơng epimer hóa (GC C) [27], [30] Hiện nay, hoạt tính sinh học chế tổng hợp polyphenol nói chung catechins nói riêng mức độ phân tử nhà khoa học tập trung nghiên cứu [16], [33], [35] Nhiều nghiên cứu rằng, leucoanthocyanidin reductase (LAR) enzyme đóng vai trị quan trọng sinh tổng hợp C GC chè [29] Ở nước ta, nhìn chung việc nghiên cứu thành phần sinh hóa chè, hàm lượng polyphenol, thành phần catechins cịn quan tâm, cập nhật Trong thành phần thay đổi lớn theo giống chất lượng nguyên liệu Bên cạnh đó, hiểu biết mức độ phân tử gen mã hóa enzyme tham gia vào đường sinh tổng hợp polyphenol nói riêng, catechins nói chung chưa nghiên cứu cấu trúc chức Xuất phát từ thực tế trên, chúng tơi tiến hành thực đề tài: “Tạo dịng phân tích trình tự gen mã leucoanthocyanidin reductase chè” MỤC TIÊU ĐỀ TÀI Nghiên cứu cấu trúc gen mã hóa leucoanthocyanidin reductase từ chè trồng Thái Nguyên NỘI DUNG NGHIÊN CỨU + Khuếch đại gen CsLAR1 mã hóa leucoanthocyanidin reductase từ chè + Tạo dịng, xác định phân tích trình tự gen CsLAR1 thu + Thiết kế vector biểu tạo leucoanthocyanidin reductase tái tổ hợp 3 CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ CÂY CHÈ 1.1.1 Nguồn gốc phân loại chè Cây chè có tên khoa học Camellia sinensis (L) O Kumtze thuộc hệ thống phân loại sau: Ngành: Hạt kín (Angiospermae) Lớp: Song tử diệp (Dicotyledonae) Bộ: Chè (Theaseae) Họ: Chè (Theaceae) Chi: Chè (Camelia Thea) Lồi: Camellia sinensis Cây chè loại cơng nghiệp lâu năm, cho hiệu kinh tế cao, trồng 58 quốc gia Ngày nay, Việt Nam hầu hết tỉnh có điều kiện thuận lợi trồng chè, song ba vùng trồng nhiều [33]: • Vùng chè thượng du (Hà Giang, Tuyên Quang, Lai Châu, Yên Bái) chiếm khoảng 25% sản lượng chè miền Bắc • Vùng trung du (Vĩnh Phúc, Phú Thọ, Bắc Cạn, Thái Nguyên) Đây vùng chè chủ yếu chiếm đến 75% sản lượng chè miền Bắc với nhiều nhà máy sản xuất lớn • Vùng chè Tây Nguyên (Gia Lai, Kon Tum, Lâm Đồng, Đắc Lắc) chủ yếu trồng giống chè Ấn Độ chè shan, chè Ô long Những cơng trình nghiên cứu Đjêmukhatze (1961 - 1976) phức catechins chè từ nguồn gốc khác nhau, so sánh thành phần chất catechins loại chè trồng chè mọc hoang dại nêu lên luận điểm tiến hóa sinh hóa chè sở xác minh nguồn gốc chè Đjêmukhatze kết luận rằng: chè mọc hoang dại, tổng hợp chủ yếu (-) - epicatechin (-) - epicatechin galat, chúng phát triển chậm khả tổng hợp (-) epigalo catechin galat để tạo thành (+) galocatechin Nghiên cứu chè dại Việt Nam cho thấy chúng tổng hợp chủ yếu (-) - epicatechin (-) - epicatechin galat (chiếm 70% tổng số loại catechins Điều có nghĩa trao đổi chất hướng phía tăng cường q trình hiđroxin hóa galin hóa Từ biến đổi sinh hóa chè mọc hoang dại chè trồng trọt chăm sóc, cho phép tới kết luận “Nguồn gốc chè Việt Nam” [45] Hiện chè phân bố rộng điều kiện tự nhiên khác từ 30 độ vĩ nam (Natan - Nam Phi) đến 45 độ vĩ bắc (Gruzia - Liên Xơ) nơi có điều kiện tự nhiên khác xa vùng nguyên sản 1.1.2 Đặc điểm sinh học chung chè Cây chè có nhiễm sắc thể lưỡng bội 2n = 30, thuộc loại thân gỗ thân bụi trồng để thu làm nguyên liệu cho công nghiệp chế biến mang số đặc điểm sinh học sau [10]: Hình thái Thân cành: Cây chè sinh trưởng điều kiện tự nhiên đơn trục, nghĩa có thân chính, thân thẳng tròn, phân nhánh liên tục thành hệ thống cành chồi Sự phân cành thân bụi khác nên tạo cho chè có dạng tán: tán đứng thẳng, tán trung gian tán ngang [42] 5 Hình 1.1 Các dạng tán chè [45] Đứng thẳng Trung gian Nằm ngang Cành chè mầm dinh dưỡng phát triển thành, cành chia làm nhiều đốt Từ thân chính, cành chè phân nhiều cấp: cành cấp 1, cấp 2, cấp Chồi: Mọc từ nách lá, chia theo biệt hóa chồi có chồi dinh dưỡng mọc chồi sinh thực mọc nụ, hoa, Mầm dinh dưỡng gồm có: Mầm đỉnh, mầm nách, mầm ngủ, mầm bất định (mầm cổ rễ) Hình 1.2 Mầm chè cắt dọc [46] Phía trái: (1 Lá vẩy ốc, Mầm cá, Mầm thật,4 Mầm nách, Điểm sinh trưởng); Phía phải: (1 Lá vẩy ốc, Mầm cá, Mầm thật, Mầm nách thứ 4, Mầm nách thứ 5, Điểm sinh trưởng) Búp chè: Búp chè đoạn non cành chè Búp hình thành từ mầm dinh dưỡng, gồm có tơm (phần non đỉnh cành chưa xòe ra) hai ba non 6 Hình 1.3 Búp chè [45] a Búp bình thường b Búp mù Búp chè gồm có hai loại: búp bình thường búp mù Có thể tóm tắt hoạt động sinh trưởng búp theo sau: Hình 1.4 Sơ đồ đợt sinh trưởng [45] Lá: Lá chè loại hình đơn nguyên, mọc cách cành, đốt có Lá chè có gân rõ, gân chè thường khơng phát triển đến tận rìa Trên cành chè thường có loại sau: Hình 1.5 Các loại cành chè [45] Hoa: Cây chè 2, tuổi hoa, kết lần đầu, hoa chè mọc từ mầm sinh thực nách chè Hoa chè hoa lưỡng tính, có 5-8 cánh màu trắng, có phớt hồng Quả: Quả chè loại nang có từ 1-4 hạt Quả chè có dạng hình trịn, tam giác, vng tùy theo số hạt Khi cịn non chè có màu xanh, chín chuyển sang màu xanh đậm nâu Khi vỏ chín vỏ nứt Hạt: Hình cầu, bán cầu, tam giác tùy giống chè; vỏ sành thường màu nâu, cứng, bên lớp vỏ mỏng Kích thước hạt chè to nhỏ phụ thuộc vào kỹ thuật chăm sóc Hạt chè có khối lượng từ 0,6-2 gam, thường từ 1-1,6 gam Hệ rễ: Hệ rễ chè gồm có: rễ cọc (trụ), rễ dẫn (hay rễ nhánh, rễ bên) màu nâu hay nâu đỏ rễ hút hay rễ hấp thụ màu vàng ngà 8 Hình 1.6 Rễ chè [45] Sự phân bố rễ chè đất phụ thuộc vào giống, tuổi cây, điều kiện đất đai chế độ canh tác Lượng dinh dưỡng đất có ảnh hưởng lớn đến phát triển rễ, lượng đạm Đặc tính sinh lý, sinh thái của chè Chè mọc điều kiện ẩm ướt, râm mát vùng khí hậu cận nhiệt đới gió mùa Đơng Nam Á Về nhu cầu ánh sáng, chè trung tính giai đoạn con, lớn lên ưa sáng hồn tồn Dưới bóng râm, chè xanh đậm, lóng dài, búp non lâu, hàm lượng nước cao búp thưa, sản lượng thấp quang hợp yếu Nhiệt độ khơng khí thuận lợi cho sinh trưởng phát triển chè 22-28oC, búp chè sinh trưởng chậm 1518oC, 10oC mọc chậm Trên 30oC chè mọc chậm, 40oC chè bị khơ xém nắng non Độ ẩm khơng khí tương đối thích hợp 80-85% [46] Sinh trưởng phát triển của chè Thời vụ chè: – Vụ Xuân (tháng 3-4): Hái chừa cá, tạo tán búp cao mặt tán hái sát cá – Vụ Hè Thu (tháng 5-10): Hái chừa cá, tạo tán búp cao mặt tán hái sát cá – Vụ Thu Đông (Tháng 11): hái chừa cá, tháng 12 hái cá Với giống chè có dạng thân bụi, sinh trưởng đỉnh hái kéo hay hái máy để nâng cao suất lao động Chu kỳ sinh trưởng phát triển: Chu kỳ chè bao gồm ba giai đoạn phát triển lặp lại nhiều lần năm: Giai đoạn giai đoạn non hay giai đoạn thiết kế Sau giai đoạn lớn giai đoạn chè lớn kéo dài 20-30 năm, tuỳ giống, điều kiện đất đai, dinh dưỡng khai thác Đây giai đoạn chè cho suất cao Giai đoạn chè già cỗi, chè suy yếu dần, nhỏ, búp ít, chóng mù x, hoa nhiều, cành tăm hương nhiều, chồi gốc mọc nhiều 1.1.3 Thành phần hóa học chè Chất lượng sản phẩm chè đánh giá chủ yếu dựa sở nghiên cứu thành phần hóa học có chè [2] Thành phần hóa học chè xác định thường phụ thuộc loại chè cách pha chế Trong đó, polyphenol có vai trò quan trọng, định đến màu sắc hượng vị chè [42] Bảng 1.1 Thành phần hóa học chè tươi [2] Thành phần Catechins (-)-Epigallocatechin gallate (-)-Epicatechin gallate (-)-Epigallo catechin (-)-Epicatechin % khối lượng chất khô 25 – 30 – 12 3–6 3–6 1–3 10 (+)-Catechin (+)-Gallocatechin Flavonol flavonol glucoside Poliphenolic acid dẫn xuất Leucoanthocyamin Chlorophyll chất màu khác Khoáng Cafeine Theobromine Theophylline Amino acid Acid hữu Monosaccharide Polysaccharide Cellulose hemicellulose Pectin Lignin Protein Lipid Các hợp chất dê bay 1–2 3–4 3–4 3–4 2–3 0,5 – 0,6 5–6 3–4 0,2 0,5 4–5 0,5 – 0,6 4–5 14 – 22 4–7 5–6 5–6 14 – 17 3–5 0,01 – 0,02 Nước thành phần quan trọng chủ yếu búp chè, chiếm 7582% khối lượng chè [45], hàm lượng nước phụ thuộc vào giống chè, thời vụ độ non già chè Lượng mưa trung bình năm thích hợp cho sinh trưởng chè giới 1.500-2.000mm Độ ẩm tương đối khơng khí từ 80-85% có lợi cho sinh trưởng chè Loại đất thích hợp cho trồng chè dày 60-100cm; mực nước ngầm 100cm; độ chua pH: 4,5-5,5; tỷ lệ mùn 34% Xét thành phần khối lượng, nước thành phần chủ yếu chè Theo số liệu Phòng nghiên cứu chè trồng nhiệt đới Liên bang hàm lượng nước búp chè gồm tôm ba tháng % thể bảng 1.2: 11 Bảng 1.2 Thành phần độ ẩm thay đổi theo tháng năm [44] Tháng Độ âm (%) 10 11 12 3,6 3,6 2,9 7,3 7,5 7,5 8,5 7,8 7,2 5.6 3,5 0,3 Hiện nay, xác định độ ẩm chè tăng lên thời gian bảo quản nguyên nhân chủ yếu dẫn đến làm giảm chất lượng chè Như muốn giữ chất lượng chè khơ biến đổi thời gian bảo quản phải quan tâm đến độ ẩm chè lúc bao gói, đóng thùng [47] Chất khơ: Chiếm 25-30% khối lượng chè, gồm có polyphenol, pectin, chất xơ (xenlulo), protein, amino acid, alcoloit (cafein, theofilin, theobromin), enzyme (enzyme oxi hóa enzyme thủy phân) chất tro Hợp chất polyphenol (tannin): Thành phần hóa học chất rắn chiết xuất từ chè xanh polyphenol, thường chiếm 20-30% chất khô chè Tanin chè phức hợp nhiều hợp chất hữu tự nhiên có chất phenol Hợp chất phenol giữ vai trò chủ yếu trình tạo màu sắc, hương vị chè đặc biệt chè đen Tanin có đặc tính dễ bị oxi hóa tác dụng enzym cung cấp oxi đầy đủ Flavanoids thành phần quan trọng tanin, catechins flavanoids chiếm tỷ lệ lớn Hợp chất Caffeine: Ankaloid chè caffeine Caffeine dẫn xuất purine có tên gọi theo cấu tạo 1,3,5- trimethylxanthine, chiếm khoảng 3-4% tổng lượng chất khô chè tươi Và điều đặc biệt hàm lượng caffeine chè cao cà phê từ 2-3 lần Caffeine có khả liên kết với tanin sản phẩm oxy hóa tanin để tạo nên muối tanat caffeine Các muối tan nước nóng, khơng tan nước lạnh tạo nên hương thơm sắc nước chè xanh nâng cao chất lượng chè thành phẩm ... ĐẠI GEN CsLAR1 TỪ MẪU CHÈ NGHIÊN CỨU 32 3.2 TẠO DỊNG GEN, XÁC ĐỊNH VÀ PHÂN TÍCH TRÌNH TỰ GEN MÃ HÓA LEUCOANTHOCYANIDIN REDUCTASE 33 3.2.1 Tạo dòng gen CsLAR1 33 3.2.2 Xác định phân. .. hành thực đề tài: ? ?Tạo dịng phân tích trình tự gen mã leucoanthocyanidin reductase chè? ?? MỤC TIÊU ĐỀ TÀI Nghiên cứu cấu trúc gen mã hóa leucoanthocyanidin reductase từ chè trồng Thái Nguyên NỘI... NGHIÊN CỨU + Khuếch đại gen CsLAR1 mã hóa leucoanthocyanidin reductase từ chè + Tạo dịng, xác định phân tích trình tự gen CsLAR1 thu + Thiết kế vector biểu tạo leucoanthocyanidin reductase tái tổ hợp