ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC DƯƠNG TRUNG THÀNH NHÂN DÒNG VÀ THIẾT KẾ VECTOR BIỂU HIỆN GEN MÃ HÓA ANTHOCYANIDIN REDUCTASE CỦA CÂY CHÈ (Camellia sinensis) LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤ[.]
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC DƯƠNG TRUNG THÀNH NHÂN DÒNG VÀ THIẾT KẾ VECTOR BIỂU HIỆN GEN MÃ HÓA ANTHOCYANIDIN REDUCTASE CỦA CÂY CHÈ (Camellia sinensis) LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG THÁI NGUYÊN - 2018 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC DƯƠNG TRUNG THÀNH NHÂN DÒNG VÀ THIẾT KẾ VECTOR BIỂU HIỆN GEN MÃ HÓA ANTHOCYANIDIN REDUCTASE CỦA CÂY CHÈ (Camellia sinensis) Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 8420201 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG Người hướng dẫn khoa học: TS Huỳnh Thị Thu Huệ TS Hoàng Thị Thu Yến THÁI NGUYÊN - 2018 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu kết trình bày luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Mọi trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Tác giả Dương Trung Thành ii LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Huỳnh Thị Thu Huệ - Phòng đa dạng sinh học hệ gen, Viện Nghiên cứu hệ gen, Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam; TS Hồng Thị Thu Yến - Khoa Công nghệ Sinh học Trường Đại học Khoa học - người tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu để hồn thành luận văn Tơi xin cảm ơn thầy cô tập thể cán Khoa Công nghệ Sinh học, cảm ơn lãnh đạo Trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên cán công tác Viện Nghiên cứu hệ gen - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam giúp đỡ tơi q trình thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn Cử nhân Phạm Thị Hằng - Phòng đa dạng sinh học hệ gen, Viện Nghiên cứu hệ gen, Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam, tận tình dẫn giúp đỡ tơi hồn thành đề tài nghiên cứu khoa học Nhân dịp xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Dương Trung Dũng – Khoa Nông học – Trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên giúp đỡ thời gian thu thập vật liệu nghiên cứu làm đề tài Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới tồn thể gia đình, bạn bè đồng nghiệp ln cổ vũ, động viên suốt thời gian qua Tác giả Dương Trung Thành iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH viii MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu đề tài Nội dung nghiên cứu Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 SƠ LƯỢC VỀ CÂY CHÈ 1.1.1 Nguồn gốc, lịch sử phát triển chè 1.1.2 Đặc điểm sinh học chè 1.1.3 Giá trị chè 1.2 TÌNH HÌNH SẢN XUẤT VÀ NGHIÊN CỨU CHÈ TRÊN THẾ GIỚI VÀ VIỆT NAM 1.2.1 Tình hình sản xuất chè giới Việt Nam 1.2.1.1 Tình hình sản xuất chè giới 1.2.1.2 Tình hình sản xuất chè Việt Nam 11 1.2.2 Tình hình nghiên cứu chè giới Việt Nam 14 1.3 CATECHIN VÀ ANTHOCYANIDIN REDUCTASE Ở CHÈ 16 1.3.1 Catechin tác dụng catechin 16 1.3.2 Cơ chế sinh tổng hợp catechin chè 19 1.3.3 Anthocyanidin reductase gen ANR quy định tổng hợp anthocyanidin reductase 20 iv Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Vật liệu nghiên cứu 23 2.1.1 Nguyên liệu 23 2.1.2 Hóa chất 23 2.1.3 Thiết bị 24 2.2 Phương pháp nghiên cứu 24 2.2.1 Phương pháp tách chiết RNA tổng số 24 2.2.2 Điện di RNA tổng số 25 2.2.3 Tổng hợp cDNA 26 2.2.4 Nhân gen ANR kĩ thuật PCR 26 2.2.5 Tinh sản phẩm PCR 28 2.2.6 Tách dòng gen ANR 29 2.2.7 Xác định trình tự gen 32 2.2.8 Xử lí số liệu phần mềm chuyên dụng 33 2.2.9 Thiết kế vector biểu 33 2.3 Sơ đồ nghiên cứu 34 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35 3.1 Khuếch đại gen ANR từ mẫu chè nghiên cứu 35 3.2 Tạo dịng gen, xác định phân tích trình tự gen mã hóa anthocyanidin reductase 37 3.3 Thiết kế vector biểu vi khuẩn mang gen ANR 45 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 48 KẾT LUẬN 48 KIẾN NGHỊ 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO 49 v DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Nghĩa tiếng Việt Từ viết Nghĩa tiếng Anh tắt ANR Anthocyanidin reductase Anthocyanidin reductase cDNA DNA bổ sung Complementary DNA DMSO Dimethyl sulfoxide Dimethyl sulfoxide C Catechin Catechin CsANR Gen ANR chè ANR gene of Camellia sinensis DNA Axit Deoxiribonucleic Deoxyribonucleic Acid dNTP dNTP Deoxynucleoside triphosphate Đtg Đồng tác giả et al EC Epicatechin Epicatechin ECG Epicatechin-3-O-gallate Epicatechin-3-O-gallate EDTA Axit etylene diamin tetraaxetic Ethylene Diamine Tetraacetic Acid EGC Epigallocatechin Epigallocatechin EGCG Epigallocatechin-3-O-gallate Epigallocatechin-3-O-gallate EtBr Ethidium Bromide Ethidium Bromide GC Gallocatechin Gallocatechin Kb Kilô bazơ Kilo base LAR Leuacoanthocyanidin reductase Leuacoanthocyanidin reductase LB Môi trường LB Luria Bertani NAD Nicotinamid adenine dinucleotide Nicotinamid adenine dinucleotide NADP Nicotinamid adenine dinucleotide Nicotinamid adenine dinucleotide phosphate phosphate vi ORF Khung đọc mở Open reading frame PCR Phản ứng chuỗi trùng hợp Polymerase Chain Reaction Primer F Mồi xuôi Primer forward Primer R Mồi ngược Primer reverse RNA Axit Ribonucleic Ribonucleic Acid RNase Enzyme phân hủy RNA Ribonuclease TAE TAE Tris Acetate EDTA Taq Vi khuẩn chịu nhiệt Thermus aquaticus UTR Vùng không dịch mã untranslated region vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Diện tích, suất, sản lượng chè giới giai đoạn 2010 - 2016 Bảng 1.2 Diện tích, suất, sản lượng số nước giới năm 2016 10 Bảng 1.3 Tình hình diện tích, suất, sản lượng chè Việt Nam năm gần 13 Bảng 1.4 Thành phần amino acid CsANR 21 Bảng 2.1 Thành phần phản ứng tổng hợp cDNA 26 Bảng 2.2 Chu trình nhiệt thực phản ứng tổng hợp cDNA 26 Bảng 2.3 Trình tự đoạn mồi sử dụng nhân gen ANR 27 Bảng 2.4 Thành phần phản ứng PCR nhân gen ANR 27 Bảng 2.5 Thành phần phản ứng tạo đầu sẳn phẩm PCR 29 Bảng 2.6 Thành phần phản ứng ghép nối đoạn gen ANR vector pJET1.2 29 Bảng 2.7 Thành phần phản ứng cắt plasmid 32 Bảng 3.1 Kết kiểm tra nồng độ RNA tổng số 36 Bảng 3.2 Sự sai khác trình tự nucleotide gen ANR chè Trung du xanh với trình tự cơng bố Genbank 41 Bảng 3.3 Sự sai khác trình tự amino acid gen mã hóa anthocyanidin reductase giơng chè Trung du xanh với trình tự công bố Genbank 44 viii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cơng thức tổng qt catechin 16 Hình 1.2 Các đường sinh tổng hợp catechin chè 19 Hình 1.3 Cấu trúc khơng gian chiều protein CsANR 22 Hình 2.1 Chu kỳ nhiệt thực phản ứng nhân gen ANR 27 Hình 2.2 Sơ đồ vector tách dịng pJET 1.2 29 Hình 2.3 Sơ đồ vector biểu pET-32a(+) 33 Hình 2.4 Sơ đị thí nghiệm nhân dịng thiết kế vector biểu gen mã hóa anthocyanidin reductase chè 34 Hình 3.1 Kết điện di kiểm tra sản phẩm tách chiết RNA tổng số 36 Hình 3.2 Kết nhân gen ANR từ cDNA mẫu chè Trung du xanh nhiệt độ khác 37 Hình 3.3 Hình ảnh điện di tách plasmid mẫu chè Trung du xanh 37 Hình 3.4 Hình ảnh điện di kiểm tra có mặt sản phẩm PCR plasmid pJET1.2 38 Hình 3.5 Kết phân tích trình tự gen CsANR2 phân lập từ mẫu chè xanh 41 Hình 3.6 So sánh trình tự amino acid suy diễn CsANR2 từ giống chè Trung du xanh với trình tự cơng bố 43 Hình 3.7 Hình ảnh điện di kiểm tra có mặt gen ANR plasmid pET32a(+) 46 Hình 3.8 Kết cắt kiểm tra plasmid pET32a(+)_ANR NcoI XhoI 46 Hình 3.9 Kết PCR kiểm tra plasmid pET32a(+)_ANR 47 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Chè (Camellia sinensis (L) O Kuntze) loại cơng nghiệp lâu năm, có nguồn gốc vùng nhiệt đới Á nhiệt đới, trồng xuất từ lâu đời, trồng phổ biến nhiều quốc gia Trung Quốc, Nhật Bản, Việt Nam Sản phẩm từ chè sử dụng rộng rãi khắp giới nhiều công dụng khác phổ biến đồ uống Theo thống kê, chè thức uống phổ biến thứ hai giới sau nước, với hương vị độc đáo tác dụng có lợi cho sức khỏe người Nước chè thức uống tốt, có tác dụng giải khát, chống lạnh, có tác dụng bảo vệ sức khỏe người khắc phục mệt mỏi thể, kích thích hoạt động hệ thần kinh trung ương, kích thích vỏ đại não làm cho tinh thần minh mẫn sảng khoái, hưng phấn thời gian lao động căng thẳng trí óc chân tay, kích thích hệ tiêu hóa, chữa số bệnh đường ruột, lợi tiểu (do chứa theofilin, theobromin), kích thích tiêu hố mỡ, chống béo phì, chống sâu răng, miệng, chống lão hóa, phịng ngừa ung thư (do chứa catesin), phòng ngừa bệnh tăng huyết áp, tiểu đường ngăn ngừa cholesteron tăng cao… Ngoài ra, chè cịn có khả bảo vệ da khỏi tác hại tia cực tím, chè cho ức chế xâm nhiễm sinh sản HIV Hầu hết đặc tính có lợi cho sức khỏe liệt kê chứng minh hợp chất polyphenol có chè Chính đặc tính ưu việt trên, chè trở thành sản phẩm đồ uống phổ thơng tồn giới, sản phẩm chè từ lâu trở thành nét văn hóa đặc trưng nhiều quốc gia, đặc biệt quốc gia vùng Đông Nam Á Ngồi ra, chè cịn mang lại nhiều lợi ích kinh tế xã hội như: giải công ăn việc làm, đem lại nguồn thu nhập ổn định cho người dân, góp phần quan trọng việc xóa đói giảm nghèo; chè số công nghiệp khác trở thành trồng mũi nhọn góp phần chuyển dịch cấu kinh tế, cải thiện đời sống nhân dân, thúc đẩy q trình cơng nghiệp hóa đại hóa nơng thơn Thành phần hóa học chất rắn chiết xuất từ chè polyphenol Hàm lượng polyphenol định đến màu sắc, độ chát nước chè góp phần tạo hương vị chè Các catechin dẫn xuất cịn gọi flavan-3-ol chiếm khoảng 70% polyphenol tổng số Thành phần catechin bao gồm Epicatechin (EC), ECG (Epicatechin-3-O-gallate), EGC (Epigallocatechin), EGCG (Epigallocatechin-3-O-gallate), C (catechin) GC (Gallocatechin) Epicatechin nhiều loại polyphenol có vai trị định đến hương vị chè hoạt chất chống ơxy hóa có nhiều chè Hiện nay, hoạt tính sinh học chế tổng hợp polyphenol mức độ phân tử nhà khoa học tập trung nghiên cứu, đặc biệt gen thực chức tổng hợp polyphenol Anthocyanidin reductase (ANR) enzyme quy định tổng hợp nên epicatechin, phân lập xác định trình tự gen tổng hợp epicatechin bước tạo tiền đề nghiên cứu chức gen ANR, nhằm góp phần làm sáng tỏ giá trị polyphenol nói riêng chè nói chung người Ở chè Việt Nam, gen mã hóa anthocyanidin reductase chưa phân lập nghiên cứu chức Xuất phát từ thực tế trên, tiến hành thực đề tài: “Nhân dòng thiết kế vector biểu gen mã hóa anthocyanidin reductase chè (camellia sinensis)” Mục tiêu đề tài Tạo dịng, xác định, phân tích trình tự thiết kế vector biểu gen mã hóa Anthocyanidin reductase phân lập từ chè trồng Thái Nguyên Nội dung nghiên cứu + Khuếch đại gen ANR mã hóa anthocyanidin reductase từ chè + Tạo dòng gen, xác định phân tích trình tự gen ANR thu + Thiết kế vector biểu gen mã hóa anthocyanidin reductase 3 Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 SƠ LƯỢC VỀ CÂY CHÈ 1.1.1 Nguồn gốc, lịch sử phát triển chè Cây chè có tên khoa học Camellia sinensis (L) O Kumtze thuộc hệ thống phân loại sau : Ngành: Hạt kín (Angiospermae) Lớp: Song tử diệp (Dicotyledonae) Bộ: Chè (Theaseae) Họ: Chè (Theaceae) Chi: Chè (Camelia Thea) Lồi: Camellia sinensis Cây chè có nguồn gốc vùng khí hậu gió mùa Đơng Nam Á, bao gồm vùng Tây Nam Trung Quốc, Bắc Myanma, Bắc lào Bắc Việt Nam Cây chè cư dân Bách Việt phương Nam, thuộc văn hóa lúa nước phát giới làm thảo dược; lan truyền lên phương Bắc dân tộc Hán có văn hóa nơng nghiệp cạn du mục Hồng Hà Từ phát triển mạnh mẽ công nghệ chế biến thành nước chè, thứ nước uống giải khát phổ cập Trung Hoa, truyền bá khắp năm châu giới ngày có 4000 năm lịch sử Những cơng trình nghiên cứu Đjêmukhatze (1961- 1976) so sánh thành phần chất catechin chè có nguồn gốc khác nhau, loại chè trồng trọt chè mọc hoang dại kết luận rằng: Những chè mọc hoang dại từ cổ xưa, tổng hợp chủ yếu epicatechin (-) epicatechin galat, chúng phát triển chậm khả tổng hợp epigalocatechin (-) galat để tạo thành galocatechin (+) Nghiên cứu chè dại Việt Nam cho thấy chúng tổng hợp chủ yếu epicatechin (-) epicatechin galat (chiếm 70% tổng số loại catechin) Năm 1976, Viện sĩ thông Viện Hàn Lâm khoa học Liên Xơ, sau nghiên cứu tiến hóa chè, phân tích chất catechin chè mọc hoang dại vùng chè Tứ Xuyên, Vân Nam Trung Quốc, vùng chè cổ Việt Nam (Suối Giàng, Nghĩa Lộ, Lạng Sơn, Nghệ An …) kết luận: Cây chè cổ Việt Nam tổng hợp catechin đơn giản nhiều chè Vân Nam Từ có sơ đồ tiến hóa chè giới sau: Chi Camellia chè Việt Nam chè Vân Nam to (chè Trung Quốc) chè Assam (Ấn Độ) [3] Như vậy, kết luận Việt Nam nôi chè Người Việt Nam biết đến chè sớm nhiều so với nước, tục uống chè người Việt Nam trở thành nét văn hóa độc đáo, chiếm vị trí quan trọng giao tiếp, lễ nghi… 1.1.2 Đặc điểm sinh học chè Cây chè có nhiễm sắc thể lưỡng bội 2n = 30, thuộc loại thân gỗ thân bụi có số đặc điểm sinh học sau [3]: a Đặc điểm hình thái Thân: Thẳng trịn, phân nhánh liên tục thành hệ thống cành chồi Trên thân có mấu chia thành nhiều lóng Cành: Do mầm dinh dưỡng biến đổi thành Trên cành chia làm nhiều đốt, chiều dài đốt cành biến đổi từ - 10 cm tùy theo giống điều kiện sinh trưởng Tùy theo lứa tuổi mà màu sắc cành chè biến đổi từ màu xanh thẫm, xanh nhạt, màu đỏ, màu nâu cành già có màu xám Chồi: Mọc từ nách lá, chia theo biệt hóa chồi có chồi dinh dưỡng mọc chồi sinh thực mọc nụ, hoa, Chia theo vị trí cành có: Chồi (đỉnh), chồi nách, chồi ngủ (trong cành) 5 Lá: Lá chè loại hình đơn ngun, mọc cách; hệ gân hình mạng lơng chim; rìa có cưa, chiều dài từ - 15 cm, rộng từ - cm Mặt phiến nhẵn, lồi lõm, láng bóng Lá chè có hình thn, mũi mác, van, trứng gà, gần tròn Gốc nhọn, tròn đến tù; chóp nhọn tù Lá chè thường thay đổi hình dạng, màu sắc kích thước tùy theo giống, điều kiện tự nhiên điều kiện canh tác Hoa: Hoa chè loại hoa lưỡng tính, chèng có - cánh màu trắng hay phớt hồng, nhị đực trung bình có 200 - 300 cái; bao phấn có hai nửa bao, chia túi phấn, hạt phấn hình tam giác màu vàng nhạt (khi chín màu hồng kim) Bầu nhị có - ơ, chứa - nỗn, ngồi phủ lớp lơng tơ, núm nhị chẻ ba Ở gốc bầu nhụy có tuyến mật làm thành vòng tròn gọi đĩa Quả: Quả chè loại nang có từ 1- hạt Quả chè có dạng hình trịn, tam giác, vng tùy theo số hạt Khi cịn non chè có màu xanh, chín chuyển sang màu xanh thẫm nâu Khi chín vỏ nứt giải phóng hạt chè Hạt: Hình cầu, bán cầu, tam giác tùy giống chè; vỏ sành thường màu nâu, cứng, bên lớp vỏ mỏng Hệ rễ: Gồm rễ cọc (trụ), rễ dẫn (hay rễ nhánh, rễ bên) màu nâu hay nâu đỏ rễ hút hay rễ hấp thụ màu vàng ngà b Đặc điểm sinh lý, sinh thái chè Nhiệt độ khơng khí thuận lợi cho sinh trưởng phát triển chè 22 - 28oC, độ ẩm khơng khí tương đối thích hợp 80 - 85 % Hàm lượng nước cần thiết cho chè biến động tùy giống chè Loại đất thích hợp cho trồng chè dày 60 - 100 cm; mực nước ngầm 100 cm; độ chua pH: 4,5 5,5; tỷ lệ mùn - % 6 c Sinh trưởng phát triển chè Sự phát triển chè chia làm hai chu kỳ: Chu kì phát triển lớn gồm suốt đời sống chè từ hạt nảy mầm đến chết chu kì phát triển nhỏ bao gồm giai đoạn sinh trưởng, phát triển lặp lại nhiều lần năm d Thành phần hóa học chè Thành phần hóa học chè đa dạng, bao gồm lượng lớn nước, thành phần hữu vơ khác Trong đó, polyphenol có vai trị quan trọng, định đến màu sặc hượng vị chè [48] Nước thành phần quan trọng chủ yếu búp chè, chiếm 75 80% khối lượng chè, hàm lượng phụ thuộc vào giống chè, thời vụ độ non già chè Nước nguyên liệu chè tham gia trực tiếp vào nhiều phản ứng thủy phân, oxi hóa khử, liên quan trực tiếp đến q trình hóa sinh búp chè có ảnh hưởng đến hoạt động enzyme.Trong chế biến chè, nước có vai trị quan trọng q trình biến đổi, tạo nên mùi vị hình dạng búp chè, có liên quan trực tiếp đến chất lượng chè nguyên liệu chất lượng chè thành phẩm Chất khô chiếm 18 - 25 % khối lượng chè, gồm có polyphenol, pectin, chất xơ (xenlulo), protein, amino acid, alcoloit (cafein, theofilin, theobromin), enzyme (enzyme oxi hóa enzyme thủy phân) chất tro Hợp chất polyphenol (tannin): tannin chè phức hợp nhiểu hợp chất hữu tự nhiên có chất phenol Hợp chất phenol giữ vai trò chủ yếu trình tạo màu sắc, hương vị chè đặc biệt chè đen Tanin có đặc tính dễ bị oxi hóa tác dụng enzym cung cấp oxi đầy đủ Vì vậy, chè nguyên liệu chứa nhiều tanin, đặc biệt tanin hịa tan sản phẩm chè đen có chất lượng cao Flavanoids thành phần quan trọng tanin, catechin flavanoids chiếm tỷ lệ lớn Hợp chất alkaloid: chè có nhiều loại nhiều loại cafein Hàm lượng cafein chè chiếm từ - 5% chất khô Hàm lượng cafein chè thay đổi phụ thuộc vào giống, kỹ thuật canh tác, mùa vụ thu hái thay đổi theo phận Protein amino acid: hợp chất phức tạp có chứa N, phân bố không phần búp chè thay đổi tùy theo giống thời vụ, điều kiện canh tác yếu tố khác Protein kết hợp trực tiếp với tanin, polyphenol tạo nên phẩm chất chè Thái Nguyên đen Do đặc điểm của việc chế biến chè xanh diệt men từ đầu, nên hàm hượng tanin bị thay đổi cịn q cao làm cho chè có vị đắng Protein kết hợp với phần tanin làm cho vị chát đắng giảm Ngồi ra, chè cịn có amino acid, gluxit pectin, dầu thơm, loại vitamin chè, enzyme, chất tro… 1.1.3 Giá trị chè Giá trị chè thể nhiều mặt phải kể đến giá trị dinh dưỡng, giá trị dược tính, giá trị mặt kinh tế - xã hội giá trị mặt văn hóa to lớn a Giá trị mặt thực phẩm Trong chè có thành phần hóa học giàu chất dinh dưỡng, có tác dụng tốt thể người, chè xanh trở thành nguyên liệu quan trọng để chế biến nhiều loại thức ăn đồ uống khác nhiểu nước giới Phần lớn chè xanh sử dụng làm đồ uống Chè pha chế cách loại đồ uống lý tưởng tốt thể có chứa đầy đủ loại vitamin, muối khoáng, protein chất hữu có lợi khác Ngày khuynh hướng sử dụng chè xanh chế biến thức ăn phát triển Các loại bánh kem chè xanh, bánh gatô chè xanh, kem chè xanh, thạch chè xanh, mỳ ăn liền chè xanh, sandwich chè xanh tiêu thụ mạnh nước Nhật Bản, Hàn Quốc, Anh, Mỹ, Úc Trung Quốc Việt Nam có loại bánh nướng chè xanh, bánh dẻo chè xanh… [49] b Giá trị dược tính chè Nước chè làm giảm trình viêm viêm khớp, viêm gan mãn tính, tăng cường tính đàn hồi thành mạch máu giúp ngăn ngừa tai biến mạch máu não, nhồi máu tim Uống chè giảm nguy tim mạch, chống lão hóa, chống nhiễm độc Mới nhất, nhà khoa học cịn phát chè cịn có tác dụng chống khả gây ung thư chất phóng xạ Người ta trích ly chất chè để điều chế thuốc trợ tim, cầm máu, lợi tiểu…Chất cafein số hợp chất alcaloit chè có tác dụng kích thích hệ thần kinh trung ương làm cho tinh thần minh mẫn, tăng hoạt động cơ, nâng cao lực làm việc giảm mệt mói sau lao động Những giá trị tiềm ẩn chè quan tâm nghiên cứu [49] c Giá trị mặt kinh tế Chè công nghiệp dài ngày, trồng lần cho thu hoạch nhiều năm, từ 30 đến 50 năm, mang lại thu nhập kinh tế hàng năm với suất, sản lượng tương đối ổn định Chè có giá trị sử dụng hàng hóa có giá trị kinh tế góp phần xóa đói giảm nghèo, tạo nhiều việc làm thu nhập cho người lao động đặc biệt tỉnh trung du miền núi, coi trồng mũi nhọn, mạnh chu vực trung du miền núi Hiện chè trở thành mặt hàng xuất có giá trị cao Việt Nam [49] Bên cạnh đó, chè cịn có tác dụng phủ xanh đất trống, đồi trọc, chống xói mịn, bảo vệ đất, bảo vệ môi trường sinh thái 9 d Giá trị văn hóa Chè loại vào đời sống người cách sâu sắc, đậm đà Uống chè trở thành phong tục tập quán, sở thích từ lâu đời nhiều dân tộc giới Cũng giống nhiều nước châu Á Đông Nam Á khác, Việt Nam tục uống chè có từ lâu đời, trở thành nét văn hóa độc đáo chiếm vị trí quan trọng giao tiếp, lễ nghi… Thưởng thức chè tạo nguồn cảm hứng sáng tác nghệ thuật thơ ca, hội họa… 1.2 TÌNH HÌNH SẢN XUẤT VÀNGHIÊN CỨU CHÈ TRÊN THẾ GIỚI VÀ VIỆT NAM 1.2.1 Tình hình sản xuất chè giới Việt Nam 1.2.1.1 Tình hình sản xuất chè giới Chè loại đồ uống phổ biến thứ hai giới với lịch sử 4000 năm Đến nay, chè trồng 58 quốc gia, phân bố khắp Châu Sản xuất chè toàn cầu tăng trưởng ổn định, diện tích trồng chè khơng ngừng tăng lên hàng năm, đến năm 2016, giới có 4.099.230ha chè, đạt sản lượng 5.954.091 Bảng 1.1 Diện tích, suất, sản lượng chè giới giai đoạn 2010 - 2016 Năm Diện tích (ha) Năng suất (Tạ/ha) Sản lượng (Tấn) 2010 3.145.178 14,637 4.603.515 2011 3.400.104 14,040 4.773.895 2012 3.504.972 14,364 5.034.637 2013 3.616.412 14,791 5.349.088 2014 3.799.831 14,636 5.561.339 2015 3.921.335 14,439 5.661.855 2016 4.099.230 14,525 5.954.091 Nguồn: http:// FAOSTAT.FAO.ORG (21/3/2018) 10 Bảng 1.2 Diện tích, suất, sản lượng chè số nước giới năm 2016 Nước Diện tích (ha) Năng suất (Tạ/ha) Sản lượng (Tấn) 2.240.594 10,778 2.414.802 Ấn Độ 585.907 21,372 1.252.174 Kenya 218.500 21,648 473.000 Srilanka 231,628 15,081 349.308 Thổ Nhĩ Kỳ 76.361 31,823 243.000 Indonesia 117.268 12,281 144.015 Việt Nam 118.824 20,198 240.000 Nhật Bản 44.078 18,195 80.200 Iran 20.403 36,759 75.000 Argentina 37.720 23,757 89.609 Trung Quốc Nguồn: http:// FAOSTAT.FAO.ORG (21/3/2018) Mặc dù có gần 60 quốc gia trồng chè giới, nhiên sản xuất chè tập trung số nước Trung Quốc, Ấn Độ, Kenya, Srilanka … Số liệu thống kê tình hình diện tích, suất, sản lượng số nước trồng chè giới năm 2016 cho thấy: Trung Quốc quốc gia đứng đầu diện tích đạt 2,240 triệu ha, chiếm 54,66% diện tích chè giới, sản lượng chè Trung Quốc đứng đầu giới với 2,414 triệu Tuy nhiên suất chè Trung Quốc không cao, đạt 10,778 tạ/ha Sau Trung Ấn Độ với diện tích 585,9 nghìn ha, suất đạt 21,372 tạ/ha nước có sản lượng chè thứ thê giới, đạt 1,2 triệu Trong đó, Iran nước có suất chè cao nhất, đạt 36,759 tạ/ha; sản lượng 119,38 nghìn tấn, đứng thứ 10 giới sản lượng ...ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC DƯƠNG TRUNG THÀNH NHÂN DÒNG VÀ THIẾT KẾ VECTOR BIỂU HIỆN GEN MÃ HÓA ANTHOCYANIDIN REDUCTASE CỦA CÂY CHÈ (Camellia sinensis) Chuyên ngành: Công nghệ Sinh. .. nghiên cứu + Khuếch đại gen ANR mã hóa anthocyanidin reductase từ chè + Tạo dịng gen, xác định phân tích trình tự gen ANR thu + Thiết kế vector biểu gen mã hóa anthocyanidin reductase 3 Chương TỔNG... gen mã hóa anthocyanidin reductase chè (camellia sinensis)? ?? Mục tiêu đề tài Tạo dòng, xác định, phân tích trình tự thiết kế vector biểu gen mã hóa Anthocyanidin reductase phân lập từ chè trồng