Xác định sudan iii bằng phương pháp hplc và ứng dụng phân tích mẫu thực phẩm

Trường ĐH Nơng Lâm TP.HCM Bộ Mơn Cơng Nghệ Hóa Học  XÁC ĐỊNH SUDAN III BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC VÀ ỨNG DỤNG PHÂN TÍCH MẪU THỰC PHẨM GV: ThS Phùng Võ Cẩm Hồng Nhóm 10 SINH VIÊN THỰC HIỆN NỘI DUNG Giới thiệu Thực nghiệm Kết Kết luận kiến nghị Giới thiệu SUDAN Là loại phẩm màu tổng hợp chứa hợp chất azo,naphtols, có gốc methyl di động Nguồn gốc từ nhựa than đá Tìm cách 150 năm Sudan I màu đỏ Sudan II màu cam Sudan III đỏ ceresin Sudan IV dung môi đỏ 24 Giới thiệu SUDAN Chất màu nhân tạo Sudan III chất độc hại cấm dùng thực phẩm Cơ quan nghiên cứu Ung thư quốc tế ( IARC) xếp vào chất gây ung thư nhóm thứ 1 Giới thiệu HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao Một phương pháp chia tách Pha tĩnh chất rắn phân chia dạng tiểu phân chất lỏng phủ lên chất mang rắn Pha động chất lỏng Thích hợp tách hợp chất khó bay dễ phân hủy nhiệt Đặc biệt hay dùng thực phẩm Độ nhạy cao, khả định lượng tốt 1 Giới thiệu HPLC - Điều kiện tối ưu phân tích HPLC: Cột ODS C18 Nhiệt độ cột 40οC Bước sóng đo 520nm Thành phần pha động methanol:nước=95:5(v/v) Tốc độ pha động 0.5mL/phút Thể tích tiêm mẫu 10μL - Đường chuẩn xây dựng có dạng: y = 92375+6788342.C Thực nghiệm Chuẩn bị Hóa chất • • • • Thiết bị • Máy khuấy từ, cân phân tích • Máy siêu âm, máy ly tâm • Bộ hút chân khơng • Hệ thống máy HPLC đầu dò Sudan III dạng bột Nước đề ion Methanol Acetonitril Thực nghiệm Lấy mẫu Kí hiệu mẫu Lấy mẫu tương ớt MT-01 MT-02 MT-03 MB-01 Lấy mẫu bim bim MB-02 MB-03 Thực nghiệm Xử lí mẫu Quy trình chiết tách Sudan III từ mẫu thực Mẫu thực ( tương ớt bim bim) đồng mẫu, cân xác 1g cho vào bình tam giác (1)Thêm 10ml dung môi MeOH (2)Khuấy từ thời gian (3)Siêu âm 10 phút Sơ đồ 2.2: Quy trình chiết tách Sudan III từ mẫu thực (4) Quay ly tâm phút (5) Dịch ly tâm lọc qua phim lọc 0.45μm Dung dịch dùng phân tích HPLC Kết HPLC Khảo sát bước sóng hấp thụ cực đại 520 nm 220 nm 650 nm Sự phụ thuộc độ hấp thụ quang dung dịch Sudan III theo bước sóng Kết HPLC Khảo sát thành phần pha động Dung dịch Sudan III 2ppm (a) Methanol: nước (b) Acetonitril: nước (c) Methanol: phot phat (a) Methanol: nước Pha động (a) cho pic Sudan III cân đối, đỉnh pic nhọn Kết HPLC Khảo sát thành phần pha động (b) Acetonitril: nước Chọn hệ pha động methanol: nước (c) Methanol: phosphat Hệ pha động (b) có xuất pic Sudan III pic thấp, tù, hệ pha động (c) không thấy xuất pic Sudan III 3 Kết Khoảng tuyến tính nồng độ Sudan III Dựng đường chuẩn, tính LOD, LOQ Đường chuẩn Sudan III dựng Sự xuất pic Sudan III giá trị nồng độ chuẩn Phương trình đường chuẩn dạng Y=A+B*X Thơng số Hệ số A B Giá trị 92375 𝑅2 0.9996 Đường chuẩn sudan III thông số đường chuẩn 6788342 N Kết luận : Tại giá trị nồng độ để xây dựng đường chuẩn - RSD < 5% - Phương pháp đo có độ lặp lại tốt Chọn nồng độ Sudan III 2,0ppm khoảng đường chuẩn , lặp lại 10 lần đo Cho kết : RSD = 1,7% Đường chuẩn đạt độ tin cậy thống kê 95% Kết Dựng đường chuẩn, tính LOD, LOQ Lần 1 Spic 65339 64435 64647 64566 65335 65646 65668 65565 SD 516 Spic TB 65150 Giới hạn phát : LOD sudanIII Giới hạn định lượng : LOQ sudanIII Kết Đánh giá độ thu hồi - Mẫu MT-01 MB-01 xử lý sơ đồ 2.2 GD (1) thêm vào 10ml dd Sundan III 1,0ppm - Mỗi mẫu đo lặp lại lần Hiệu suất thu hồi TB 92% Đạt tiêu chuẩn AOAC 2016 Dùng phương pháp Sudan III sơ đồ 2.2 cho phân tích sau Kết Phân tích mẫu thực • Các mẫu thực sau chiết đem phân tích sơ HPLC Áp dụng tính tốn theo phương pháp đường chuẩn, phát mẫu tương MT-02 có hàm lượng Sudan III lớn LOQ Kết sau lần xử lý phân tích mẫu MT-02 thể bảng sau Ký Khối Thể tích Nồng độ Sudan III Khối lượng Hàm lượng Diện tích pic hiệu lượng dung dịch tính theo đường Sudan III Sudan III (mV.min) •mẫu Dùngmẫuphương pháp để xác định Sudan (mg) chiết (ml) đường thêm chuẩn chuẩn (ppm) dịch tín chiếthiệu ( mẫu thực III (/g) với mẫu lại, dung dịch chuẩn Sudan III 5,0 ppm dùng làm MT1009 thêm10 0.276 2.76 2.74 dung dịch chuẩn 1963556 02 Với mẫu MT-01: lấy 2265mg mẫu, thêm vào 25ml methanol, tách MT1046 10 2085434 0.294 2.94 2.81 02 chiết Sudan III theo sơ đồ 2.2 thu dung dịch chiết A Các dung MTdịch thêm theo bảng 0.282 3.4 Kết thu 1018 chuẩn 10được pha 2004332 2.82 được: 2.77 02 Hàm lượng Sudan III trung bình (𝜇 g/g) 2.77 Kết Phân tích mẫu thực Thể tích dung dịch = 10ml STT Thể tích dd chiết Thể tích dd chuẩn Thể tích methanol Diện tích puc (mV.min) 55534 3344582 4 5987213 4 3 9056252 4 12005233 15025622 Phương trình đường thêm chuẩn Nồng độ Sudan III tính theo đường thêm chuẩn (ppm) Khối lượng Sudan III dịch chiết (𝝁𝐠) Hàm lượng Sudan III mẫu thực (𝝁𝐠/g) y= 255047+588372 8.C 0.043 0.173 0.076 Kết Phân tích mẫu thực Phương trình đường thêm chuẩn dạng Y=A+B*X Thông số: -Hệ số Giá trị A 255047 B 5883728 -N 0.9976 ... 2016 Dùng phương pháp Sudan III sơ đồ 2.2 cho phân tích sau Kết Phân tích mẫu thực • Các mẫu thực sau chiết đem phân tích sơ HPLC Áp dụng tính tốn theo phương pháp đường chuẩn, phát mẫu tương... III Sudan III (mV.min) ? ?mẫu Dùngmẫuphương pháp để xác định Sudan (mg) chiết (ml) đường thêm chuẩn chuẩn (ppm) dịch tín chiếthiệu ( mẫu thực III (/g) với mẫu lại, dung dịch chuẩn Sudan III 5,0 ppm... lượng Sudan III lớn LOQ Kết sau lần xử lý phân tích mẫu MT-02 thể bảng sau Ký Khối Thể tích Nồng độ Sudan III Khối lượng Hàm lượng Diện tích pic hiệu lượng dung dịch tính theo đường Sudan III Sudan