§Æt vÊn ®Ò 1 §Æt vÊn ®Ò MiÔn dÞch häc lµ mét lÜnh vùc ngµy cµng ph¸t triÓn vµ cã nhiÒu øng dông réng r i trong y, sinh häc Mét trong c¸c híng nghiªn cøu quan träng cña miÔn dÞch lµ t×m hiÓu c¸c yÕu tè[.]
1 Đặt vấn đề Miễn dịch học lĩnh vực ngày phát triển có nhiều ứng dụng réng r·i y, sinh häc Mét c¸c híng nghiên cứu quan trọng miễn dịch tìm hiểu yếu tố mạng lới điều hoà, kiểm soát hoạt động hệ thống Trong trình hoạt ®éng cđa hƯ thèng miƠn dÞch, cã sù tham gia nhiều chất đóng vai trò truyền đạt thông tin tế bào Các chất có tác dụng kích thích hay kìm hÃm trởng thành hoạt động chức tế bào miễn dịch Những chất đợc gọi chất kích thích miễn dịch làm tăng cờng đáp ứng miễn dịch ngợc lại có tác dụng gây suy giảm đáp ứng miễn dịch đợc gọi chất ức chế miễn dịch Trên lâm sàng tình trạng bệnh lý liên quan đến suy giảm miễn dịch, đặc biệt suy giảm miễn dịch thứ phát phổ biến nhiễm trùng cấp, mạn tính, nhiễm độc hoá chất, sau trị liệu ung th tia xạ, AIDS Điều trị bệnh lý việc điều trị nguyên nhân cần dùng thêm biện pháp kích thích miễn dịch thích hợp Các chất kích thích miễn dịch có nguồn gốc khác nhau, quan trọng phải kể đến chất kích thích miễn dịch nội sinh (đây sản phẩm chế tiết tế bào miễn dịch) nh: interleukin (IL) 1, 2, 35, interferon (IFN) gäi chung cytokin Các chất kích thích miễn dịch có nguån gèc tõ vi khuÈn, virus, ký sinh trïng, nÊm nh BCG, bronchovaxom, lentinan C¸c chÊt kÝch thÝch miƠn dịch có nguồn gốc hoá học đợc tổng hợp bán tổng hợp đà đợc sử dụng nh levamisol, imuthiol Hiệu mang lại việc sử dụng chất kích thích miễn dịch khả quan, nhiên nhiều tồn nh chi phí cho đợt điều trị cao sử dụng thc kÝch thÝch miƠn dÞch cã ngn gèc néi sinh, không phù hợp với điều kiện kinh tế phần lớn ngời bệnh Trong thuốc có nguồn gốc hoá học lại có độc tính cao, ảnh hởng xấu tới chức gan, thận Vì vậy, việc tìm kiếm đa vào sử dụng chất kích thích miễn dịch có nguồn gốc từ thực vật, đặc biệt dợc liệu có sẵn nớc vấn đề cấp thiết đợc đặt Cây nhàu (Morinda citrifolia L Rubiaceae), dợc liệu đợc nhân dân sử dụng lâu đời với mục đích nâng cao sức đề kháng thể Đặc biệt gần nhiều nhà khoa học giới đà nghiên cứu sâu nhàu trồng Hawaii đa nhiều kết nghiên cứu khả quan tác dụng chống ung th, chống oxyhóa kích thích miễn dịch Trong nghiên cứu trớc đà chứng minh cao nhàu có tác dụng kích thích miễn dịch thông qua tác dụng kích thích hồi phục số miễn dịch súc vật thực nghiệm bị suy giảm miễn dịch chiếu tia gamma tiêm cyclophosphamid Vì vậy, tiến hành nghiên cứu đề tài nhằm nghiên cứu tác dụng chống oxyhóa đánh giá sâu tác dụng kích thích miễn dịch thực nghiệm cao nhàu Việt Nam Mục tiêu đề tài: Nghiên cứu tác dụng kích thích miễn dịch in vitro in vivo cao nhàu chuột nhắt trắng Nghiên cứu tác dụng chống oxyhoá cao nhàu thỏ bị chiếu xạ mô hình gây tổn thơng gan carbon tetraclorid paracetamol chuột nhắt trắng Chơng Tổng quan tài liệu 1.1 Miễn dịch suy giảm miễn dịch Miễn dịch khả thể nhận diện đợc loại trừ kháng nguyên (vật lạ) khỏi thể Khả hệ miễn dịch đảm nhiệm Hệ miễn dịch gồm yếu tố tế bào: hàng rào vật lý, hoá học yếu tố tế bào (các tế bào lympho T, B, đại thực bào, tế bào trình diện kháng nguyên, NK ) Cơ quan miễn dịch trung ơng (tuỷ xơng tuyến ức) nơi sản sinh huấn luyện tế bào lympho Cơ quan miễn dịch ngoại vi (lách, hạch bạch huyết) nơi trú ngụ tế bào lympho đà trởng thành Dới điều kiện bất lợi nh tia xạ, hoá chất, suy dinh dỡng, nhiễm khuẩn kéo dài dẫn đến tế bào quan miễn dịch bị tổn thơng Suy giảm miễn dịch trạng thái hoạt động hệ miễn dịch không đủ mạnh để chống lại kháng nguyên nhằm bảo vệ thể, đợc chia làm nhóm: bẩm sinh mắc phải Suy giảm miễn dịch bẩm sinh hậu nhiều khiếm khuyết trình phát triển bào thai Suy giảm miễn dịch bẩm sinh thờng khó điều trị Suy giảm miễn dịch mắc ph¶i thêng suy dinh dìng; nhiƠm vi sinh vËt: nhiễm vi khuẩn, nấm, kí sinh trùng, virus Đặc biệt suy giảm miễn dịch nhiễm HIV/AIDS, bệnh lý: bệnh mạn tính kéo dài, đặc biệt bệnh ung th; phóng xạ; thuốc hóa chất nguyên nhân khác nh: tuổi già, chấn thơng 1.2 Các thuốc kích thích miễn dịch (KTMD) đợc sử dụng lâm sàng *Các chất tác động vào khâu sau: - Kích thích làm tăng sinh tế bào: tác động để đẩy nhanh trình phân bào tế bào gốc đa hay tế bào gốc đà định hớng dòng bạch cầu hạt, dòng bạch cầu lympho, dòng bạch cầu đơn nhân tủy xơng Các chất KTMD tác động đến trình biệt hoá trởng thành tế bào tủy xơng hay tuyến ức - Chất KTMD làm tăng cờng hoạt động chức tế bào miễn dịch: loại tế bào có loại chức riêng tế bào đợc hoạt hoá tham gia vào đáp ứng miễn dịch đặc hiệu không đặc hiệu chống lại kháng nguyên Chức khả thực bào, chế tiết yếu tố tham gia vào ĐƯMD giúp cho trình viêm mạnh - Chất KTMD giúp cho tế bào miễn dịch liên hệ hợp tác với tốt trình ĐƯMD: tế bào dù thực tốt chức nhng chúng mối liên hệ dẫn tới bệnh lý rối loạn miễn dịch Thông thờng mối quan hệ thông qua cytokine * Tế bào đích chất KTMD Trên đáp ứng miễn dịch không đặc hiệu: - Hàng rào vật lý: gồm da niêm mạc, có nhiệm vụ che chắn bề mặt thể, ngăn cản xâm nhập vi sinh vật gây bệnh Da lành lặn không bị sây sát cản trở xâm nhập kháng nguyên Da gồm nhiều lớp tế bào, lớp tế bào đà bị sừng hoá luôn bong đổi mới, tạo cản trở vật lý trớc xâm nhập kháng nguyên Niêm mạc có lớp tế bào nhng đợc bao phủ lớp chất nhày Chất nhày tuyến dới niêm mạc tiết tạo nên màng bảo vệ làm cho kháng nguyên không xâm nhập thẳng đợc vào tế bào - Hàng rào hoá học: Kháng nguyên sau đà vợt qua hàng rào vật lý gặp hàng rào hoá học bên thể Đó huyết có chứa lysozym, protein phản ứng C, thành phần bổ thể, interferon Nhiều chất KTMD làm tăng cờng chức phận bảo vệ nh bronchovaxom làm tăng sản xuất IFN, rannitidin melatoin làm tăng hàm lợng bổ thể - Hµng rµo tÕ bµo: Lµ hµng rµo quan träng phức tạp Trên niêm mạc có nhiều tế bào có khả thực bào, tham gia trực tiếp gián tiếp loại trừ kháng nguyên lạ vi khuẩn, virus, ký sinh trùng, tế bào ung th Thành phần hàng rào tế bào gồm: bạch cầu đa nhân trung tính, đại thực bào, bạch cầu toan, bạch cầu diệt tự nhiên, tế bào nội mô, dỡng bào Nhiều chất kích thích miễn dịch tác động vào loại tế bào làm tăng chức phËn cđa chóng nh: hormon tun øc, c¸c IL, c¸c IFN, chất KTMD có nguồn gốc hoá học thực vật - Trên đáp ứng miễn dịch đặc hiệu: Đáp ứng miễn dịch đặc hiệu trạng thái miễn dịch xuất thể tiếp xúc với kháng nguyên Đáp ứng miễn dịch có hai điểm khác với miễn dịch không đặc hiệu khả nhận dạng trí nhớ kháng nguyên Ngời ta chia đáp ứng miễn dịch đặc hiệu thành đáp ứng miễn dịch dịch thể đáp ứng miễn dịch tế bào Miễn dịch dịch thể giữ vai trò bảo vệ thể thông qua kháng thể hoà tan có mặt dịch sinh học thể Bản chất kháng thể globulin nên đợc gọi globulin miễn dịch (Ig) Đó sản phẩm tiết tơng bào, giai đoạn cuối trình biệt hoá tế bào lympho B Miễn dịch tế bào, chủ yếu tế bào lympho T đảm nhiệm Các chất kích thích miễn dịch tác động làm tăng cờng đáp ứng miễn dịch dịch thể hay đáp ứng miễn dịch tế bào Những chất làm tăng cờng đáp ứng miễn dịch dịch thể nh lipopolysacarid, IL-1, TNF, IFN, lectinNhững chất làm tăng cờng đáp ứng miễn dịch tế bào: có nguồn gốc hoá häc nh azimexon, isoprinosine, levamisol, imuthiol, nguån gèc sinh häc nh IL-2, hormon tuyÕn øc, tõ vi sinh vËt nh BCG, protein A, thùc vËt nh c¸c lectin 1.3 Gèc tù vµ hƯ thèng chèng oxyhãa - Gèc tù nguyên tử, nhóm nguyên tử hay phân tử mà lớp điện tử chúng có chứa điện tử không cặp đôi (điện tử cô độc) Chúng đợc sinh từ nguyên nhân chính: hô hấp tế bào, phóng xạ, tợng thực bào, tợng thiếu máu cục tới máu lại, chuyển hoá số chất dị sinh - Hệ thống chống oxy hóa: thể khí đợc bảo vệ để chống lại stress oxy hoá gây gốc tự dạng oxy hoạt động Hệ thống bảo vệ bao gồm nhiều loại chất chống oxy hoá với chức chế hoạt ®éng kh¸c C¸c chÊt chèng oxy ho¸ thu dän gốc tự rào chắn, ức chế khởi phát dập tắt phản ứng lan truyền gốc tù HƯ thèng chèng oxyhãa cã b¶n chÊt enzym: tồn chủ yếu tế bào; hoạt độ enzym chống oxy hóa thấp huyết tơng, dịch mô, dịch nÃo tủy bao hoạt dịch: SOD, catalase, GPx, thioredoxin, peroxiredoxin: HƯ thèng chèng oxy hãa cã b¶n chất không enzyme: gồm nhóm nhóm polyphenol, nhóm thiol nhóm phối tử sắt đồng Chúng có sẵn thể đợc đa từ vào theo dạng thức ăn, nớc uống 1.4 Tổng quan nhàu Cây nhàu gọi ngao núi, nhầu núi, giầu, tên khoa học Morinda citrifolia L., họ Cà phê Rubiaceae Cây mọc tự nhiên nơi ẩm thấp dọc bờ sông bờ suối, miền Nam Việt nam Trên giới nhàu thấy có nhiều nớc nh Thái Lan, ấn Độ, Malaixia, Hawaii Từ năm 1990, Mỹ nhiều công trình nghiên cứu nhàu đà đợc công bố, đặc biệt tập trung nhiều thành phần hoá học, tác dụng kích thích miễn dịch, chống oxy hoá chống ung th nhàu trồng Hawaii Trong trớc chúng tôi, Việt Nam cha có nghiên cứu nhàu, công trình nghiên cứu rễ nhàu Chơng Đối tợng phơng pháp nghiên cøu 2.1 ChÊt liƯu nghiªn cøu Thc nghiªn cøu : cao nhàu dùng nghiên cứu dạng cao mềm, đợc chiết xuất theo phơng pháp ngấm kiệt Đạt tiêu chuẩn sở kiểm định trớc dùng nghiên cứu (PGS.TSKH Nguyễn Thới Nhâm sản xuất cung cấp) 2.2 Đối tợng nghiên cứu Chuột nhắt trắng chủng Swiss thỏ chủng Orytolagus cuniculus 2.3 Phơng pháp nghiên cứu: - Nghiên cứu thực nghiệm in vitro in vivo có đối chứng (nghiên cứu kích thích miễn dịch chuột nhắt trắng, nghiên cứu chống oxy hoá thỏ chuột nhắt trắng) 2.4 Xử lý số liệu Các số liệu thu thập đợc xử lý phơng pháp thống kê y sinh học theo t- test - Student vµ test tríc sau (Avant-aprÌs) BiĨu diƠn X ± SE *: p < 0,05; **: p < 0,01; ***: p < 0,001 Chơng Kết nghiên cứu Nghiên cứu tác dụng kích thích miễn dịch in vitro in vivo cao nhàu chuột nhắt trắng 3.1.1 Trên mô hình gây suy giảm miễn dịch CY 3.1.1.1 Nghiên cứu đánh giá tình trạng chung hệ miễn dịch: Trọng lượng 10tương đối (%o) ** ** * ** * Trọng lượng lách tương đối Lô (Chứng sinh học) Lô (Tiêm CY) Lô (Tiêm CY Lô (Tiêm CY + nhàu) levamisol) * * + * Trọng lượng tuyến ức tương đối Thông số Biểu đồ 3.1 ảnh hởng CQN lên trọng lợng lách tuyến ức tơng đối CQN liều 6g/kg làm tăng rõ rệt TLLTĐ lô so với lô TLTƯTĐ lô chuột có tiêm CY tiêm CY kết hợp với cao nhàu giảm rõ rệt so với lô chứng sinh học (p 0,05) Số lượng BC (nghìn/mm3) Lô (Chứng sinhhọc) 10 ** Lô (TiêmCY) ** Lô (TiêmCY +levamisol) Lô (TiêmCY +Nhàu) * Lô chuột Số lư ợ ng bạch cầu Biểu đồ 3.2 ảnh hởng CQN đến số lợng bạch cầu máu ngoại vi Lô (tiêm CY + nhàu) số lợng bạch cầu tăng cao so với lô chứng sinh học nhng khác biệt ý nghĩa Tuy nhiên, tăng so với lô có ý nghĩa thống kê (p