Luận án nghiên cứu chuyển gen cry8db có tính kháng vào cây mía

1 MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Cây mía (Saccharum officinarum L.) công nghiệp đƣợc trồng rộng rãi giới (Dotaniya, Datta, 2014; Choudhary et al., 2017) đƣợc canh tác 109 quốc gia với diện tích 26,9 triệu ha, sản lƣợng đạt 1,91 tỷ (Factfish, 2015) ây m a đƣợc sử dụng vào nhiều mục đ ch: cung cấp thực phẩm: sucrose, fructose, mật m a; làm sợi: cung cấp vật liệu cenlullose, thức n gia súc: lá, thân đƣợc ép đƣờng; tạo n ng lƣợng: n ng lƣợng sinh học tái tạo từ rỉ đƣờng…; công nghiệp hóa chất: ethanol sinh học, chất mùn (Dotaniya et al., 2016) Việc cải thiện đặc t nh nông sinh học m a đƣợc nghiên cứu n m qua nhằm t ng trữ lƣợng đƣờng, t ng khả n ng chống ch u điều kiện stress nhƣ: hạn hán, ngập, mặn, kháng sâu hại, thuốc diệt cỏ, nấm gây bệnh… Tuy nhiên số đặc thù m a nhƣ: k ch thƣớc hệ gen lớn (985 Mbp), nhi m sắc thể phức tạp (2n 70-140 , tƣơng tác phức tạp mía với điều kiện môi trƣờng (Zhang et al., 2012)… khiến cho thời gian để tạo giống mía theo phƣơng pháp truyền thống lên tới 10-12 n m Kỹ thuật chuyển gen xem phƣơng pháp tối ƣu để tạo giống mía thời gian ngắn ây m a đƣợc biết vật chủ 1500 lồi trùng 80 bệnh hại, đặc biệt gây hại diện rộng khó kiểm sốt lồi bọ cánh cứng (bọ hung, xén tóc , sâu đục thân, rệp nhƣng phần lớn chúng thƣờng b giới hạn phân bố đ a lý Tuy nhiên, phát triển du l ch, thƣơng mại nƣớc với thay đổi điều kiện khí hậu làm t ng nguy sâu bệnh hại xâm nhập bùng phát nhiều hệ thống nơng nghiệp, sâu bệnh gây hại mía ngày khó kiểm sốt Khả n ng th ch ứng số loài gây hại xâm nhập vào khu vực trồng mía nhanh, gây thiệt hại đặc biệt nghiêm trọng ôn trùng bọ cánh cứng ảnh hƣởng xấu đến n ng suất mía chúng phá hoại m a giai đoạn ấu trùng trƣởng thành Các nghiên cứu tạo chuyển gen biểu protein độc tố diệt côn trùng gây hại Bt phát triển khắp giới từ n m 1996 Việc tạo trồng biến đổi gen bƣớc đột phá nhằm: (i): giảm thiểu tác hại thuốc trừ sâu hóa học, (ii): t ng cƣờng hiệu quả, t nh đặc hiệu diệt trừ sâu đ ch; (iii): giảm chi phí, ảnh hƣởng tới mơi trƣờng, sức khỏe ngƣời loài sinh vật khác (James, 2014) Ở Việt Nam, m a số trồng ch u phá hoại lớn từ trùng thuộc Bộ cánh cứng có họ bọ Scarabaeidae Ấu trùng bọ thƣờng đục thân, phá hoại r , giai đoạn trƣởng thành chúng n phận nhƣ thân, m a Sự phá hại bọ gây làm chết giảm đáng kể n ng suất m a (Shu et al., 2009a) Kết nghiên cứu cho thấy, khơng có giống mía hệ gen tự nhiên mang gen biểu t nh kháng côn trùng gây hại (James, 2014) Vì vậy, việc tạo giống m a chuyển gen có khả n ng kháng trùng nói chung bọ nói riêng vấn đề cấp thiết Nhóm protein ry8 nhóm protein độc tố Bt đƣợc mã hóa gen thuộc họ cry8 đƣợc chứng minh có độc t nh với ấu trùng bọ cánh cứng có bọ (Zhang et al., 2013) ho đến nay, mía chuyển gen chủ yếu đƣợc tạo nhờ sử dụng hai phƣơng pháp ch nh súng bắn gen chuyển gen đ ch thông qua A tumefaciens Với điều kiện thực tế Việt Nam, sử dụng A tumefaciens để chuyển gen thực vật phƣơng pháp đơn giản mang lại hiệu cao Xuất phát từ sở khoa học thực ti n, thực đề tài: “Nghiên cứu hu n g n r D kháng n tr ng v o t nh m ” Mục tiêu nghiên cứu Tạo đƣợc dòng m a chuyển gen cry8Db có hoạt t nh kháng ấu trùng bọ hại m a Nội dung nghiên cứu Đánh giá thiệt hại bọ gây mía thử hoạt tính kháng ấu trùng lồi bọ điển hình Cry8Db tái tổ hợp Thiết kế vector chuyển gen thực vật pCAMBIA1300 chứa gen chuyển cry8Db Xây dựng hệ thống tái sinh in vitro hiệu m a Tối ƣu hóa quy trình chuyển gen in vitro ex vitro thông qua A tumefaciens Đánh giá khả n ng kháng ấu trùng bọ dịng mía biểu gen cry8Db Ý nghĩa lý luận thực tiễn Kết đạt đƣợc luận án có giá tr khoa học thực ti n tiếp cận nghiên cứu t ng cƣờng khả n ng kháng bọ hại m a kỹ thuật chuyển gen thông qua A tumefaciens 4.1.Ý nghĩ lý luận Kết nghiên cứu đề tài cung cấp sở khoa học cho việc nghiên cứu thực nghiệm tạo giống mía kháng bọ chuyển gen Bt 4.2 Ý nghĩ thực tiễn Tạo đƣợc protein tái tổ hợp Cry8Db quy mơ phịng thí nghiệm thơng qua vi khuẩn E.coli Rosetta - amy B, chứng minh đƣợc protein tinh có khả n ng kháng ấu trùng Lepidiota signata abricius – loài thuộc họ bọ hại m a thu đƣợc Sơn Nam, Sơn ƣơng, Tuyên Quang Tạo đƣợc dịng mía chuyển gen cry8Db có khả n ng biểu độc tố có tính kháng ấu trùng bọ thu thập đƣợc Sơn Nam, Sơn ƣơng, Tuyên Quang Kết sở khoa học vững cho hƣớng nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật chuyển gen nhằm nâng cao khả n ng kháng côn trùng gây hại m a, mở triển vọng ứng dụng thực ti n tạo giống m a kháng trùng hại m a Đóng góp luận án Đã chứng minh đƣợc protein ry8 b k ch thƣớc phân tử khoảng 73 K a có khả n ng diệt ấu trùng Lepidiota signata Fabricius giai đoạn khác Đối với ấu trùng tuổi 1, nồng độ gây chết 50% số cá thể LC50 = 183,5 ng/g, ấu trùng tuổi LC50 = 270,8 ng/g ấu trùng tuổi nồng độ ngƣỡng cao với giá tr LC50 = 345,4 ng/g Đây cơng trình sử dụng song song quy trình chuyển gen vào m a (trong điều kiện in vitro ex vitro để tạo dịng mía chuyển gen cry8Db ơng trình tạo đƣợc 13 dịng m a chuyển gen cry8Db Protein Cry8Db dịng mía chuyển gen đƣợc kiểm tra phản ứng ELISA cho thấy nồng độ protein tái tổ hợp dòng mía chuyển gen dao động từ 1.62 - 21,73 ng/µg protein tổng số Thử nghiệm sinh học cho thấy dòng m a chuyển gen S3 có khả n ng kháng ấu trùng Lepidiota signata abricius tốt với tỷ lệ b phá hại thấp (12,91% , khối lƣợng ấu trùng b giảm 2,85 lần sau 14 ngày ƯƠ TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Y V TR ẠI 1.1.1 guồn gốc vị trí phân loại Cây mía (Saccharum officinarum Linn.) trồng thuộc chi Saccharum, họ Gramineae, lớp mầm (Monocotyledoneae), ngành thực vật hạt kín (Magnoliophyta) (Đ N ng V nh, 2006) Việc phân loại mía gặp nhiều vấn đề phức tạp, ngồi chi Saccharum cịn có chi khác thuộc nhóm giao phấn gọi „„phức hợp Saccharum” bao gồm: Erianthus, Ripidium, Miscanthus, Diandra, Narenga Sclerostachya (Office of Gene Technology Regulator, 2011) Chi Saccharum gồm có sáu loài khác nhau: S barberi L., S edule L., S officinarum L., S robustum L., S sinense L., S spontaneum L Trong số này, S officinarum L (loài đƣợc hóa để canh tác cung cấp đƣờng) S spontaneum L (loài hoang dại với NST thể d bội đƣợc cho tổ tiên mía trồng ngày (Sandhu et al., 2012) Các giống m a thƣơng mại ngày lai S officinarum L (chiếm 80 – 90% hệ gen) S spontaneum L (chiếm 10–20% hệ gen) (Hoarau et al., 2002) (Hình 1.1) Hình 1.1: C c lồi mía tổ ti n c c giống mía th ng mại ngày A: Loài S officinarum L.; B: loài S spontaneum L (Nguồn: Aditya, Jitendra, 2014) Loài S spontaneum L đƣợc phân bố rộng rãi vùng nhiệt đới đến cận nhiệt đới châu châu Phi, có mơi trƣờng sống đa dạng Đây loài tự nhiên có hình thái biến đổi, rậm ngắn cao lớn (có thể cao tới m Hầu hết lồi S spontaneum L có cuống mỏng, hàm lƣợng đƣờng thấp, tỷ lệ xơ cao (Aditya, Jitendra, 2014) ác ngành công nghiệp m a đƣờng giới hóa phát triển giống m a thuộc loài S officinarum L , đặc trƣng loài hàm lƣợng đƣờng cao, lƣợng xơ thấp, dày cuống rộng có nguồn gốc từ New uinea Melanesian (Grivet et al., 1996) 1.1.2 Đặc điểm h nh th i sinh th i di truyền Đặc điểm hình thái M a mầm, thân thảo Thân m a nguyên liệu chế biến đƣờng làm giống cho vụ sau Trên biểu bì thân m a có chứa nhiều chlorophin xantophin hợp thành màu sắc đặc trƣng giống m a iữa dóng thân đốt m a chứa bốn phận gồm đai sinh trƣởng, r , chồi bên sẹo Trên thân có bẹ bao bọc, mọc thành hai hàng so le, đối theo đƣờng vòng thân m a Là thực vật thuộc nhóm 4, m a dài 1-2 m, rộng -7 cm (Taparia et al., 2012) Lá m a có hai phận ch nh: phiến bẹ h tiếp giáp bẹ phiến gọi cổ lá, thƣờng phát triển đến thật thứ 12 -15, đạt đến độ to chiều dài tiêu chuẩn tƣơng ứng với m i giống Ngoài ra, cịn có lớp phấn lơng nơi bẹ M a thuộc loại r chùm R m a nói chung đƣợc chia thành hai loại: r sơ cấp r thứ cấp R sơ cấp gọi r tạm thời, loại r mọc từ hom giống hạt giống, loại r đƣờng k nh bé, phân nhánh nhiều, t n sâu, đảm bảo nuôi đến khoảng 4-7 tuần đầu R thứ cấp gọi r vĩnh cửu, xuất có từ 3-5 thật Loại tồn lâu n sâu đất có ba dạng (r hấp thu, r n sâu r chống đổ , m i dạng có vai trị khác việc cung cấp chất dinh dƣỡng đảm bảo sinh tồn m a có điều kiện bất lợi thời tiết xảy (Trần V n Sỏi, 2003) Khi kết thúc thời kỳ sinh trƣởng, m a chuyển sang giai đoạn sinh thực (ra hoa Mầm hoa đƣợc hình thành từ đỉnh sinh trƣởng đƣợc bao bọc cuối (lá địng Bơng hoa m a gồm trục ch nh nhánh cấp 1, cấp 2, có chứa nhiều hoa nhỏ Hoa m a lƣỡng t nh, có ba nh đực bầu nỗn, q trình thụ tinh đƣợc tiến hành nhƣ thuộc họ Hịa thảo khác (lúa, ngơ… Hạt m a bé, k ch thƣớc khoảng 1-1,25 mm, nặng 0,15 – 0,25 mg, hình thoi, bên có chứa albumin, tinh bột phôi mầm Trong công tác cải tạo giống m a, lai hữu t nh phƣơng pháp truyền thống đƣợc áp dụng (Trần V n Sỏi, 2003 Đặc điểm sinh thái M a thuộc nhóm thực vật th ch nghi với kh hậu vùng nhiệt đới cận nhiệt đới Nhiệt độ tối th ch cho phát triển m a từ 30-34o Nếu 38oC sinh trƣởng m a b đình trệ q trình đồng hóa cao d hóa ịn nhiệt độ thấp dƣới 0o kéo dài, m a b chết đông nhựa Tuy nhiên, nhiệt độ tối th ch cho việc phát triển m a tùy thuộc vào giai đoạn phát triển chất giống Trong thân m a, nƣớc chiếm tỷ lệ 70% Tùy thời kỳ sinh trƣởng, m a th ch nghi với độ ẩm đ nh Thời kì đẻ nhánh, m a tiêu hao nƣớc nhiều hơn, độ ẩm th ch hợp tối đa đất 55–70% Thời kì vƣơn lóng, m a đòi hỏi tiêu hao nƣớc nhiều (60-80% Đến thời kỳ t ch lũy đƣờng, yêu cầu nƣớc giảm xuống độ ẩm tối th ch đất 50-60% Đất phù hợp để trồng m a đất cát pha, đất th t nhẹ trung bình, đất có chất hữu cơ, chất mùn Độ pH 5,5-7,5, không b nhi m mặn (Trần V n Sỏi, 2003 Đặc điểm di truyền Bộ gen m a đƣợc cho phức tạp tất loài trồng đƣợc hình thành từ lồi đa bội thuộc chi m a Số lƣợng nhi m sắc thể loài m a biến đổi từ 36 đến 200 (Office of Gene Technology Regulator, 2011) Trong đó, Zhang đtg (2012 cho hai loài S officinarum L có số lƣợng NST 2n NST 2n 70–140 S spontaneum L có số lƣợng 40–128 (Bảng 1 Bộ nhi m sắc thể loài thuộc chi Saccharum khơng đa bội lồi autopolyploid (mang hai nhi m sắc thể đồng hợp từ lồi mà cịn đa bội khác lồi allopolyploid (mang hai hai nhi m sắc thể từ lồi khác nhau, hệ gen m a phức tạp ây m a có nhi m sắc thể x 6; x x 10 Sự biến động số lƣợng nhi m sắc thể m a nguyên nhân sau: (i lai lồi; (ii số dịng có tần số biến d số lƣợng nhi m sắc thể lớn trình phân bào giảm nhi m; (iii biến d tế bào soma xảy trình nhân giống vô t nh xâm nhi m gen từ loài sang loài khác (Đ N ng V nh, 2006 Hai loài S officinarum L S spontaneum L có số lƣợng nhi m sắc thể khác nhau, lai với để tạo nên giống m a thƣơng mại ngày Trong lồi S officinarum L có k ch thƣớc gen lớn (985 Mbp (Bảng 1 Bảng 1.1: Đặc điểm di truyền lồi mía tổ tiên giống mía th Chi/ Lồi ng mại ngày Số lượng Nồng độ Đặ m ph n loại nhiễm sắ đường th (2n) S officinarum L Loài lai Cao 70–140 S spontaneum L Loài hoang dã Thấp 40–128 h thướ Tá giả h g n (Mbp) 985 Zhang et al., 2012 843 Zhang et al., 2012 Các lồi mía trồng mía hoang dại nói chung có khả n ng nhân giống hữu tính hạt nhân giống vơ t nh ác đặc tính mía có liên quan mật thiết với di truyền nhi m sắc thể Nhân giống hữu tính cho phép lai chéo loài, tạo lai, sau tiến hành nhân giống vơ tính bảo tồn đặc tính sau lai (Đ N ng V nh, 2006) 1.1.3 i trị mía t nh h nh sản xuất mía đ ờng Giá trị kinh tế Cây mía nguyên liệu để sản xuất 80% sản lƣợng đƣờng sucrose giới (Dotaniya et al.,2016) Lƣợng đƣờng bình quân đầu ngƣời sử dụng đƣờng từ 10 – 12 kg/n m dự kiến t ng n m tới Cây mía với thành phần sinh hóa phong phú nên ngày đƣợc ngành công nghiệp quan tâm khai thác, chủ yếu sản xuất đƣờng sucrose ây m a cung cấp nguyên liệu để sản xuất ethanol sinh học, góp phần phát triển n ng lƣợng sinh học thay cho nguồn n ng lƣợng hóa thạch ngày cạn kiệt Xenlulose bã mía nguyên liệu rẻ đƣợc ứng dụng để sản xuất bột giấy, g ép, làm sợi nhân tạo cơng nghiệp dệt Cơng nghiệp hóa chất sử dụng đƣờng thơng qua phản ứng hóa học để tạo chất nhƣ: sobitol, manitol, glixerol, phenol formandehit…Mật rỉ qua trình lên men, chƣng cất tạo nên rƣợu, cồn công nghiệp, acid lactic, acid xitric, men thực phẩm, men thức n gia súc Nhƣ vậy, m a trồng có giá tr cao Hơn nữa, mía cao sản, số diện tích mía lớn, gấp -7 lần diện t ch đất M a có hiệu quang hợp cao, ch m bón tốt cung cấp 200 – 250 sinh khối/ha/n m – n ng suất kỉ lục mà trồng khác không đạt đƣợc Vì vậy, tận dụng hết đƣợc nguồn lợi mà mía đem lại, mang lợi ích gấp – lần so với trồng khác (Pippo, Luengo, 2013) Tình hình sản xuất mía đường giới Việt Nam Mía cơng nghiệp phân bố rộng, thích nghi tốt vùng nhiệt đới cận nhiệt đới, đƣợc thu hoạch sản lƣợng lớn so với trồng khác toàn cầu (http://faostat.fao.org Hơn 100 quốc gia trồng phát triển giống m a thƣơng mại có n ng suất cao, đứng đầu giới sản xuất mía có ba nƣớc: Brazil, Ấn Độ Trung Quốc M i n m có 1,5 tỷ m a đƣợc thu hoạch chế biến Việc mở rộng sản xuất mía Brazil làm cho sản lƣợng mía tồn giới t ng gấp đơi 25 n m qua Sự mở rộng tạo xu t ng lƣợng đƣờng tiêu thụ toàn cầu m i n m 2% cách bền vững Theo thống kê O n m 2013, tổng sản lƣợng thu hoạch toàn cầu đạt lần lƣợt 1,9 tỷ Trong đó, tổng sản lƣợng m a đƣờng chủ yếu tập trung châu Mỹ với xấp xỉ 1,04 tỷ tấn/n m, đó, Brazil nƣớc có sản lƣợng m a đƣờng cao giới đạt xấp xỉ 768,1 triệu tấn/n m n ng suất 75,34 tấn/ Châu Á đứng thứ hai giới tổng sản lƣợng m a, ƣớc t nh đạt xấp xỉ 747,1 triệu (Bảng có hai nƣớc Ấn Độ Trung Quốc đại lục nƣớc sản xuất m a đƣờng mạnh thứ hai, thứ ba giới, sản lƣợng lần lƣợt đạt 341,2 triệu tấn/n m 128,2 triệu tấn/n m hâu Phi hâu Đại dƣơng đạt mức sản lƣợng cao (97,4 29,1 triệu tấn/n m N ng suất m a đƣờng châu lục tƣơng đối đồng Ở châu Âu, diện tích canh tác mía 64 ha, sản lƣợng đạt xấp xỉ 5,5 nghìn tấn/n m, khơng mở rộng diện tích nhƣng n m suất đạt cao tất châu lục (85,16 tấn/ha , cao với mức trung bình chung n ng suất tồn giới (Bảng 1.2) Bảng 1.2: Diện tích suất, sản l ợng mía giới năm 2013, 2014 hu vự Năm Di n t h (h ) Năng suất (tấn/h ) Sản lượng (tấn/năm) 2013 26 942 686 70,94 911 179 776 2014 27 124 723 69,50 884 246 253 2013 559 132 62,49 97 423 114 2014 483 157 64,41 95 531 379 2013 13 968 445 74,28 037 591 125 2014 14 182 849 71,05 007 714 796 2013 11 033 670 67,71 747 075 443 2014 11 032 298 67,84 748 405 113 2013 64 85,16 450 2014 73 81,04 885 hâu Đại 2013 381 375 76,26 29 084 644 dƣơng 2014 426 346 76,44 32 589 079 Toàn giới Châu Phi hâu Mỹ Châu Á Châu Âu (Nguồn: faostat.fao.org, c p nh t 08 2017) N m 2014, diện t ch, n ng suất sản lƣợng m a giới có thay đổi ụ thể diện t ch canh tác toàn giới t ng so với 2013, đạt xấp xỉ 27,12 triệu ha, nhiên n ng suất đạt 69,50 tấn/ha nên sản lƣợng toàn giới đạt xấp xỉ 1,88 tỷ tấn, thấp so với sản lƣợng n m 2013 hâu Mỹ châu tiếp tục châu lục dẫn đầu sản xuất m a giới, sản lƣợng đạt lần lƣợt xấp xỉ tỷ tấn, 0,75 tỷ tấn, không chênh lệch nhiều so với sản lƣợng n m 2013 châu Phi b sụt giảm đáng kể so với 2013 iện t ch sản lƣợng m a hâu u châu Đại ƣơng t ng diện t ch canh tác n ng suất m a, hai châu lục chƣa phát triển đƣợc m a thành công nghiệp chủ lực, cụ thể diện t ch canh tác m a thấp, châu u: 73 ha, châu Đại ƣơng: 426,35 nghìn (Bảng M a trồng phù hợp với điều kiện sinh thái nƣớc ta nên thích nghi đƣợc với nhiều vùng, miền Chính phủ Việt Nam ban hành đ nh số 26/2007/QĐTTg 10 “Quy hoạch phát triển mía đường đến năm 2010 định hướng đến năm 2020” có quan điểm rõ ràng nhằm khuyến khích thành phần kinh tế đầu tƣ phát triển m a đƣờng, gắn lợi ích nhà chế biến ngƣời sản xuất nguyên liệu, thúc đẩy xây dựng nông thôn Đây ch nh tiền đề để vùng miền nƣớc đẩy mạnh sản xuất nhằm t ng n ng suất sản lƣợng mía, cải thiện kinh tế Bảng 1.3: Tình hình sản xuất mía Việt Nam năm 2009 – 2014 Năm Di n t h (ha) Năng suất (tấn/h ) Sản lượng (tấn/năm) 2009 265 600 58,77 15 608 300 2010 269 100 60,06 16 161 700 2011 282 254 62,14 17 539 572 2012 297 500 64,03 19 040 799 2013 310 264 64,88 20 131 089 2014 304 969 64,99 19 822 851 (Nguồn: faostat.fao.org, c p nh t 08 2017) Theo số liệu thức FAO, n m gần Việt Nam phát triển diện t ch canh tác m a Đặc biệt, diện tích canh tác n m 2013, 2014 t ng lên nhiều so với n m n m trƣớc đạt 310,2 nghìn Sản lƣợng m a n m 2009 đạt 15,6 nghìn tấn, sau 05 n m, đạt xấp xỉ 20,1 nghìn N ng suất n m 2009 đạt 58,77 tấn/ha Nhờ biện pháp cải tiến giống, cải tiến kỹ thuật, chống sâu bệnh, n ng suất n m 2013, 2014 đạt lần lƣợt xấp xỉ 64,88 tấn/ha; 64,99 tấn/ha (Bảng 1.3) Dự kiến niên vụ tiếp theo, Việt Nam đẩy mạnh sản xuất loại trồng cao sản 1.1.4 Bọ hại mía biện ph p phịng trừ Tình hình nghiên cứu bọ Trên toàn giới, bọ côn trùng phá hoại mạnh nông nghiệp lâm nghiệp đặc biệt châu u châu , ấu trùng chúng phá hại thực vật làm giảm n ng suất đáng kể (Liu et al., 2010) Ở Trung Quốc, Holotrichia parallela Anomala corpulenta hai loài thuộc họ bọ gây hại nghiêm trọng cho sản xuất nông nghiệp đối tƣợng trồng nhƣ lạc, đậu 139 49 Enríquez-Obregón GA, Vázquez-Padrón RI, Prieto-Samsonov DL, De la Riva GA, Selman-Housein G (1998) Herbicide-resistant sugarcane (Saccharum officinarum L.) plants by Agrobacterium-mediated transformation Planta 206(1): 20-27 50 Estruch JJ, Carozzi NB, Desai N, Duck NB, Warren GW, Koziel MG (1997) Transgenic plants: an emerging approach to pest control Nat biotechnol 15(2): 137-141 51 actfish (2015 http://www factfish com/statistic/sugarcane ập nhật ngày 15/05/ 2016 52 Ferreira LT, de Araújo Silva MM, Ulisses C, Camara TR, Willadino L (2017) Using LED lighting in somatic embryogenesis and micropropagation of an elite sugarcane variety and its effect on redox metabolism during acclimatization Plant Cell Tissue Organ Cult 128(1): 211-221 53 Franklin G, Arvinth S, Sheeba C J, Kanchana M, Subramonian N (2006) Auxin pretreatment promotes regeneration of sugarcane (Saccharum spp hybrids) midrib segment explants Plant Growth Regul 50(2-3): 111-119 54 Gallo-Meagher M, Irvine J (1996) Herbicide resistant transgenic sugarcane plants containing the bar gene Crop Sci 36(5): 1367-1374 55 Gao S, Yang Y, Wang C, Guo J, Zhou D, Wu Q, Su Y, Xu L, Que Y (2016) Transgenic sugarcane with a cry1Ac gene exhibited better phenotypic traits and enhanced resistance against sugarcane borer PloS one 11(4): e0153929 56 Geetha S, Padmanabhan D (2001) Effect of hormones on direct somatic embryogenesis in sugarcane Sugar Tech 3(3): 120-121 57 Gilbert R, Gallo-Meagher M, Comstock J, Miller J, Jain M, Abouzid A (2005) Agronomic evaluation of sugarcane lines transformed for resistance to strain E Crop Sci 45(5): 2060-2067 58 Gill R, Malhotra P, Gosal S (2006) Direct plant regeneration from cultured young leaf segments of sugarcane Plant Cell Tissue Organ Cult 84(2): 100205-100209 59 Gonzalez-Arnao M T, Engelmann F (2006) Cryopreservation of plant germplasm using the encapsulation-dehydration technique: review and case study on sugarcane Cryo Letters 27(3): 155-168 140 60 Gosal S, Thind K, Dhaliwal H (1998) Micropropagation of sugarcane-an efficient protocol for commercial plant production Springer, NY 61 Grivet L, D'Hont A, Roques D, Feldmann P, Lanaud C, Glaszmann J C (1996) RFLP mapping in cultivated sugarcane (Saccharum spp.): genome organization in a highly polyploid and aneuploid interspecific hybrid Genetics 142(3): 9871000 62 Guidelli-Thuler AM, Abreu IL d, Lemos MVF (2009) Expression of the sigma35 and cry2ab genes involved in Bacillus thuringiensis virulence Sci Agric 66(3): 403-409 63 Guo J, Gao S, Lin Q, Wang H, Que Y, Xu L (2015) Transgenic sugarcane resistant to Sorghum mosaic virus based on coat protein gene silencing by RNA interference Biomed Res Int 2015 64 Herbert A, Rich A (1999) Left-handed Z-DNA: structure and function Structural Biology and Functional Genomics Springer, NY 65 Ho WJ, Vasil I (1983) Somatic embryogenesis in sugarcane (Saccharum officinarum L.): Growth and plant regeneration from embryogenic cell suspension cultures Ann Bot 51(6): 719-726 66 Hoarau JY, Grivet L, Offmann B, Raboin LM, Diorflar JP, Payet J, Hellmann M, D'Hont A, Glaszmann JC (2002) Genetic dissection of a modern sugarcane cultivar (Saccharum spp.) II Detection of QTLs for yield components Theor Appl Genet 105(6): 1027-1037 67 Horita M, Asano S (2006) Insect resistant transgenic turf grass Google Patents 68 Horita M, Asano S (2009) Insect resistant transgenic turf grass Patent PHYLLOM LLC 20090070896 69 http://www.lifesci.sussex.ac.uk/Home/Neil_Crickmore/Bt/ (truy cập ngày 8/09/2015) 70 Huang DF, Zhang J, Song FP, Lang ZH (2007) Microbial control and biotechnology research on Bacillus thuringiensis in China J Invertebr Pathol 95(3): 175-180 141 71 Ingelbrecht IL, Irvine JE, Mirkov TE (1999) Posttranscriptional gene silencing in transgenic sugarcane Dissection of homology-dependent virus resistance in a monocot that has a complex polyploid genome Plant Physiol 119(4): 1187-1198 72 Jaganath B, Subramanyam K, Mayavan S, Karthik S, Elayaraja D, Udayakumar R, Manickavasagam M, Ganapathi A (2014) An efficient in planta transformation of Jatropha curcas (L.) and multiplication of transformed plants through in vivo grafting Protoplasma 251(3): 591-601 73 Jain M, Chengalrayan K, Abouzid A, Gallo M (2007) Prospecting the utility of a PMI/mannose selection system for the recovery of transgenic sugarcane (Saccharum spp hybrid) plants Plant cell rep 26(5): 581-590 74 James C (2014) Global status of commercialized biotech/GM crops 2013 Executive summary The International Service for the Acquisition of Agri-biotech Applications (ISAAA) 49 75 Jefferson RA, Kavanagh TA, Bevan MW (1987) GUS fusions: betaglucuronidase as a sensitive and versatile gene fusion marker in higher plants EMBO J 6(13): 3901 76 Joshi S, Jain M, Tillman BL, Altpeter F, Gallo M (2013) Comparative analysis of direct plant regeneration from immature leaf whorl and floral explants for three elite US sugarcane (Saccharum spp hybrids) genotypes In Vitro Cell Dev Biol Plant 49(6): 674-681 77 Joyce P, Kuwahata M, Turner N, Lakshmanan P (2010) Selection system and cocultivation medium are important determinants of Agrobacterium-mediated transformation of sugarcane Plant cell rep 29(2): 173-183 78 Joyce P, Hermann S, O'Connell A, Dinh Q, Shumbe L, Lakshmanan P (2014) Field performance of transgenic sugarcane produced using Agrobacterium and biolistics methods Plant Biotechnol J 12(4): 411-424 79 Kalunke R M, Kolge AM, Babu KH, Prasad DT (2009) Agrobacterium mediated transformation of sugarcane for borer resistance using cry1Aa3 gene and one-step regeneration of transgenic plants Sugar Tech 11(4): 355-359 142 80 Kapur M, Bhatia R, Pandey G, Pandey J, Paul D, Jain RK (2010) A case study for assessment of microbial community dynamics in genetically modified Bt cotton crop fields Curr Microbiol 61(2): 118-124 81 Kaur A, Sandhu JS (2015) High throughput in vitro micropropagation of sugarcane (Saccharum officinarum L.) from spindle leaf roll segments: Cost analysis for agribusiness industry Plant Cell Tissue Organ Cult 120(1): 339-350 82 Kaur R, Kapoor M (2016) Plant regeneration through somatic embryogenesis in sugarcane Sugar Tech 18(1): 93-99 83 Lê Quang Khải, Trần Thanh Toàn, Lê Ngọc nh (2017 Bọ đa (Lepidiota signata abricius hại m a phòng trừ thuốc bảo vệ thực vật huyện Sơn ƣơng, Tỉnh Tuyên Quang ỉ yếu hội nghị c n tr ng học quốc gia lần thứ 9, NX N ng nghiệp: 491-496 84 Kim JY, Gallo M, Altpeter F (2012) Analysis of transgene integration and expression following biolistic transfer of different quantities of minimal expression cassette into sugarcane (Saccharum spp hybrids) Plant Cell Tissue Organ Cult 108(2): 297-302 85 Kumar T, Khan MR, Abbas Z, Ali G M (2014) Genetic improvement of sugarcane for drought and salinity stress tolerance using Arabidopsis vacuolar pyrophosphatase (AVP1) gene Mol Biotechnol 56(3): 199-209 86 Laemmli UK (1970) Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacterio phage T4 Nature 227: 680-685 87 Lại Phú Hoàng, Phạm Hồng Thái, Nguy n Ngọc hâu, Vũ Tứ Mỹ, Nguy n Anh Diệp (2003) Hiệu lực gây chết khả n ng sinh sản tuyến trùng Steinernema carpocapsae TL bọ hại mía Alissonotum impressicolle Tạp chí Khoa học (1): 100-104 88 Lakshmanan P, Geijskes R J, Wang L, Elliott A, Grof C P, Berding N, Smith G R (2006) Developmental and hormonal regulation of direct shoot organogenesis and somatic embryogenesis in sugarcane (Saccharum spp interspecific hybrids) leaf culture Plant cell rep 25(10): 1007-1015 143 89 Lê Th Minh Thành, Phạm Th Vân, Chu Hồng Hà, Trần uy Q, Ngơ Đình Bính (2012) Tạo thuốc chuyển gen mang gen kháng côn trùng cánh cứng cry8Da vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển nông thôn 188(5): 15-19 90 Lê Th Minh Thành, Nguy n Th Huệ, Trần Duy Q, Ngơ Đình B nh (2014 Biểu tinh protein tái tổ hợp Cry8Da diệt côn trùng cánh cứng vi khuẩn Bacillus thurigiensis E.coli Tạp chí hoa học ng Nghệ 50(3): 309-317 91 Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nh , Lê Th Muội (1997) Công nghệ sinh học thực v t cải tiến trồng NXB Nông nghiệp, Hà Nội 92 Leibbrandt NB, Snyman SJ (2003) Stability of gene expression and agronomic performance of a transgenic herbicide-resistant sugarcane line in South Africa Crop Sci 43(2): 671-677 93 Li H, Liu R, Shu C, Zhang Q, Zhao S, Shao G, Zhang X, Gao J (2014) Characterization of one novel cry8 gene from Bacillus thuringiensis strain Q52-7 World J Microbiol Biotechnol 30(12): 3075-3080 94 Lian L, Wang X, Zhu Y, He W, Cai Q, Xie H, Zhang M, Zhang J (2014) Physiological and photosynthetic characteristics of indica Hang2 expressing the sugarcane PEPC gene Mol Biol Rep 41(4): 2189-2197 95 Liu J, Yan G, Shu C, Zhao C, Liu C, Song F, Zhou L, Ma J, Zhang J, Huang D (2010) Construction of a Bacillus thuringiensis engineered strain with high toxicity and broad pesticidal spectrum against coleopteran insects Appl Microbiol Biotechnol 87(1): 243-249 96 Lone SA, Malik A, Padaria JC (2017) Characterization of lepidopteranspecific cry1 and cry2 gene harbouring native Bacillus thuringiensis isolates toxic against Helicoverpa armigera Biotechnology Reports 15:27-32 97 Luo C, Guo X, Zhang Z (2008) Species identification of white grubs in lawns around Beijing and their damage characteristics Acta Entomol Sin 51(1): 108 98 Luo S, Lin J, Zhangsun D (2002) Selective test of antibiotics and PPT in different stages of sugarcane tissue culture Sci J Hainan Univ 21(3): 259-265 144 99 Lƣu Th ƣ, Đ Tiến Phát, Chu Hồng Hà, Lê Trần Bình, Lê Quỳnh Liên (2009) Phân lập thiết kế vector ức chế biểu gen mã hóa enzyme Invertase (β-Fructo furanosidase) mía ỉ yếu hội nghị Cơng nghệ sinh học tồn quốc: 58-60 100 Manchanda P, Gosal S (2012) Effect of activated charcoal, carbon sources and gelling agents on direct somatic embryogenesis and regeneration in sugarcane via leaf roll segments Sugar Tech 14(2): 168-173 101 Manickavasagam M, Ganapathi A, Anbazhagan V, Sudhakar B, Selvaraj N, Vasudevan A, Kasthurirengan S (2004) Agrobacterium-mediated genetic transformation and development of herbicide-resistant sugarcane (Saccharum species hybrids) using axillary buds Plant cell rep 23(3): 134-143 102 Mayavan S, Subramanyam K, Arun M, Rajesh M, Dev GK, Sivanandhan G, Jaganath B, Manickavasagam M, Selvaraj N, Ganapathi A (2013) Agrobacterium tumefaciens-mediated in planta seed transformation strategy in sugarcane Plant cell rep 32(10): 1557-1574 103 Mayavan S, Subramanyam K, Jaganath B, Sathish D, Manickavasagam M, Ganapathi A (2015) Agrobacterium-mediated in planta genetic transformation of sugarcane setts Plant cell rep 34(10): 1835-1848 104 McQualter R, Dale J, Harding R, McMahon J, Smith G (2004) Production and evaluation of transgenic sugarcane containing a Fiji disease virus (FDV) genome segment S9-derived synthetic resistance gene Crop Pasture Sci 55(2): 139-145 105 Molinari HBC, Marur CJ, Daros E, De Campos MKF, De Carvalho JFRP, Pereira LFP, Vieira LGE (2007) Evaluation of the stress‐inducible production of proline in transgenic sugarcane (Saccharum spp.): osmotic adjustment, chlorophyll fluorescence and oxidative stress Physiol Plant 130(2): 218-229 106 Murashige T, Skoog F (1962) A revised medium for rapid growth and bio assays with tobacco tissue cultures Physiol Plant 15(3): 473-497 107 Nawaz M, Ullah I, Iqbal N, Javed MA (2013) Improving in vitro leaf disk regeneration system of sugarcane (Saccharum officinarum L.) with concurrent shoot/root induction from somatic embryos Turk J Biol 37(6): 726-732 145 108 Nguy n Th Nhẫn (2006) Khả n ng th ch ứng mía in vitro nâng cao hệ số nhân giống biện pháp xử lý Multi Effect Triazol (MET) kết hợp với kỹ thuật giâm hom mầm yếu hội thảo Khoa học cơng nghệ quản lý nơng học phát triển nông nghiệp bền vững Việt Nam, NX N ng nghiệp: 144-149 109 ƣơng Tấn Nhựt, Nguy n Thành Hải, Nguy n Đức Huy, Lƣơng Ngọc Thuận (2007 Sự phát sinh phôi tế bào sinh dƣỡng thực vật Tạp chí c ng nghệ sinh học (2): 133-149 110 Nguy n Đức Khiêm (1996) Một số kết nghiên cứu bọ nâu (Serica orientalis Motschulky) hại mía Tạp chí Bảo vệ thực v t 2: 11-14 111 Nguy n V n Đĩnh, Hà Quang Hùng, Nguy n Th Thu Cúc, Phạm V n Lầm (2012) n tr ng động v t hại Nông nghiệp NXB Nông nghiệp, Hà Nội 112 O'Neill B (2011) Carbon mobilisation and utilisation in the sugarcane biofactory Springer, NY 113 Office of Gene Technology Regulator (2011) The biology of the Saccharum spp Verson OGTR Canbenra, Autrallia www.ogtr.gov.au 114 Palma L, Muñoz D, Berry C, Murillo J, Caballero P (2014) Bacillus thuringiensis toxins: an overview of their biocidal activity Toxins 6(12): 3296-3325 115 Palma L, Muñoz D, Berry C, Murillo J, de Escudero IR, Caballero P (2014) Molecular and insecticidal characterization of a novel Cry-related protein from Bacillus thuringiensis toxic against Myzus persicae Toxins 6(11): 3144-3156 116 Pandey R, Rastogi J, Sharma M, Singh R (2011) Technologies for cost reduction in sugarcane micropropagation Afr J Biotechnol 10(40): 7805 117 Pandey R, Singh S, Rastogi J, Sharma M, Singh R (2012) Early assessment of genetic fidelity in sugarcane (Saccharum officinarum) plantlets regenerated through direct organogenesis with RAPD and SSR markers Aust J Crop Sci 6(4): 618-624 146 118 Pardo‐López L, Soberon M, Bravo A (2013) Bacillus thuringiensis insecticidal three‐domain Cry toxins: mode of action, insect resistance and consequences for crop protection FEMS Microbiol Rev 37(1): 3-22 119 Paterson AH, Moore PH, Tew TL (2013) The gene pool of Saccharum species and their improvement Genomics of the Saccharinae Springer, NY 120 Paula M, Pijut S (2010) Development of transgenic North American ash trees expressing a Bacillus thuringiensis protein for management of the emerald ash borer USDA Forest Service, Northern Research Station (NRS), Hardwood Tree Improvement and Regeneration Center, Research Plant Physiologist 121 Pham BN, Lan VT, Trang TT, Thuong NH, Ngoc LT, Ha CH, Binh LT (2015) Agrobacterium-mediated transformation of cry8Db gene in Vietnam sweet potato cultivar J Life Sci 9: 262-271 122 Phạm Th Vƣợng, Nguy n Th Mão, Nguy n Tiến Quân, Phạm Hồng Hiên (2006) Nghiên cứu đặc điểm sinh học sinh thái tình hình gây hại bọ giống mía vùng mía trọng điểm K yếu hội nghị t ng kết khoa học công nghệ Nông nghiệp 2001 – 2005, NX N ng nghiệp: 222 - 238 123 Phạm Th Vƣợng, Nguy n Th Mão, Nguy n Tiến Quân, Phạm Hồng Hiên, Đào Th Hằng, Nguy n Th Hoa, Lƣơng Minh Khơi, Nguy n Th Hiền (2011) Phịng trừ tổng hợp sâu hại mía K yếu hội nghị Khoa học Cơng nghệ toàn quốc bảo vệ thực v t lần thứ 3, NX N ng nghiệp: 355-363 124 Phan HT, Hause B, Hause G, Arcalis E, Stoger E, Maresch D, Altmann F, Joensuu J, Conrad U (2014) Influence of elastin-like polypeptide and hydrophobin on recombinant hemagglutinin accumulations in transgenic tobacco plants PloS one 9(6): e99347 125 Phan Tƣờng Lộc, Hoàng V n ƣơng, Mai Trƣờng, Lê Tấn Đức, Trần Th Ngọc Hà, V n Đắc Thành, Phạm Đức Trí, Nguy n Th Thanh, Nguy n Hữu Hổ (2012) Bƣớc đầu chuyển gen Bt vào mía (Saccharum officinarum L.) Tạp chí Sinh học 34: 170 - 179 147 126 Phan Tƣờng Lộc, Hoàng V n ƣơng, Mai Trƣờng, Lê Tấn Đức, Trần Th Ngọc Hà, V n Đắc Thành, Phạm Đức Trí, Nguy n Th Thanh, Nguy n Hữu Hổ (2014) Chuyển gen kháng sâu cry1Ab, cry1B-cry1Ab vào mía (Saccharum officinarum L.) Tạp chí khoa học phát triển 12(7): 1058 – 1067 127 Pippo WA, Luengo CA (2013) Sugarcane energy use: accounting of feedstock energy considering current agro-industrial trends and their feasibility IJEEE 4(1): 10 128 Qing CM, Fan L, Lei Y, Bouchez D, Tourneur C, Yan L, Robaglia C (2000) Transformation of Pakchoi (Brassica rapa L ssp chinensis) by Agrobacterium infiltration Mol Breed 6(1): 67-72 129 Randhawa GJ, Singh M, Grover M (2011) Bioinformatic analysis for allergenicity assessment of Bacillus thuringiensis Cry proteins expressed in insect-resistant food crops Food Chem Toxicol 49(2): 356-362 130 Rani K, Sandhu SK, Gosal S (2012) Genetic augmentation of sugarcane through direct gene transformation with Osgly II gene construct Sugar Tech 14(3): 229-236 131 Raza S, Qamarunisa S, Hussain M, Jamil I, Anjum S, Azhar A, Qureshi JA (2012) Regeneration in sugarcane via somatic embryogenesis and genomic instability in regenerated plants J Crop Sci Biotechnol 15(2): 131-136 132 Sakai K, Nagai S (1998) Sekai no hanamuguri daizukan: The cetoniine beetles of the world Mushisha 133 Sambrook, Fritsch E, Maniatis T (2001) Molecular cloning: A laboratory manual Col Spring Harbor, NY 134 Sandeep B, Biradar D, Patil V, Patil S, Kambar N (2009) In vitro plant regeneration using shoot tip culture in commercial cultivar of sugarcane KJAS 22(1): 21-24 135 Sandhu SK, Thind K, Singh P (2012) Variability trends for brix content in general cross combinations of sugarcane (Saccharum spp.) complex World J Agric Sci 8: 113-117 136 Sansinenea E (2012) Bacillus thuringiensis biotechnology Spinger, NY 148 137 Sato R, Takeuchi K, Ogiwara K, Minami M, Kaji Y, Suzuki N, Hori H, Asano S, Ohba M, Iwahana H (1994) Cloning, heterologous expression, and localization of a novel crystal protein gene from Bacillus thuringiensis serovarjaponensis strain Buibui toxic to scarabaeid insects Curr Microbiol 28(1): 15-19 138 Shu C, Liu R, Wang R, Zhang J, Feng S, Huang D, Song F (2007) Improving toxicity of Bacillus thuringiensis strain contains the cry8Ca gene specific to Anomala corpulenta larvae Curr Microbiol 55(6): 492-496 139 Shu C, Yan G, Wang R, Zhang J, Feng S, Huang D, Song F (2009a) Characterization of a novel cry8 gene specific to Melolonthidae pests: Holotrichia oblita and Holotrichia parallela Appl Microbiol Biotechnol 84(4): 701-707 140 Shu C, Yu H, Wang R, Fen S, Su X, Huang D, Zhang J, Song F (2009b) Characterization of two novel cry8 genes from Bacillus thuringiensis strain BT185 Curr Microbiol 58(4): 389-392 141 Shu C, Tan S, Yin J, Soberón M, Bravo A, Liu C, Geng L, Song F, Li K, Zhang J (2015) Assembling of Holotrichia parallela (dark black chafer) midgut tissue transcriptome and identification of midgut proteins that bind to Cry8Ea toxin from Bacillus thuringiensis Appl Microbiol Biotechnol 99(17): 7209-7218 142 Silva D A L, Delai I, Montes M L D, Ometto A R (2014) Life cycle assessment of the sugarcane bagasse electricity generation in Brazil Renew Energy 32: 532-547 143 Silveira V, de Vita AM, Macedo AF, Dias MFR, Floh EIS, Santa-Catarina C (2013) Morphological and polyamine content changes in embryogenic and nonembryogenic callus of sugarcane Plant Cell Tissue Organ Cult 114(3): 351-364 144 Singh B, Yadav G, Lal M (2001) An efficient protocol for micropropagation of sugarcane using shoot tip explants Sugar tech 3(3): 113-116 145 Snyman S, Meyer G, Richards J, Haricharan N, Ramgareeb S, Huckett B (2006) Refining the application of direct embryogenesis in sugarcane: effect of the developmental phase of leaf disc explants and the timing of DNA transfer on transformation efficiency Plant cell rep 25(10): 1016-1023 146 Sreenivasan T, Sreenivasan J (1992) Micropropagation of sugarcane varieties for increasing cane yield SISSTA Sugar J 18: 61-64 149 147 Subramanyam K, Subramanyam K, Sailaja K, Srinivasulu M, Lakshmidevi K (2011) Highly efficient Agrobacterium-mediated transformation of banana cv Rasthali (AAB) via sonication and vacuum infiltration Plant Cell Rep 30(3): 425-436 148 Subramanyam K, Rajesh M, Jaganath B, Vasuki A, Theboral J, Elayaraja D, Karthik S, Manickavasagam M, Ganapathi A (2013) Assessment of factors influencing the Agrobacterium-mediated in planta seed transformation of brinjal (Solanum melongena L.) Appl Biochem Biotechnol 171(2): 450-468 149 Suprasanna P, Bapat V (2006) Advances in the development of in vitro culture systems and transgenics in sugarcane Int Symp Technologies to improve sugar productivity in developing countries China: 629-636 150 Tabashnik BE, Brévault T, Carrière Y (2013) Insect resistance to Bt crops: lessons from the first billion acres Nat biotechnol 31(6): 510-521 151 Taparia Y, Gallo M, Altpeter F (2012) Comparison of direct and indirect embryogenesis protocols, biolistic gene transfer and selection parameters for efficient genetic transformation of sugarcane Plant Cell, Tissue and Organ Cult 111(2): 131-141 152 Tilbrook K, Gebbie L, Schenk PM, Poirier Y, Brumbley SM (2011) Peroxisomal polyhydroxyalkanoate biosynthesis is a promising strategy for bioplastic production in high biomass crops Plant Biotech J 9(9): 958-969 153 Trần V n Sỏi (2003) Cây mía NXB Nghệ An, Nghệ n 154 Trieu AT, Burleigh SH, Kardailsky IV, Maldonado‐Mendoza IE, Versaw WK, Blaylock LA, Shin H, Chiou TJ, Katagi H, Dewbre GR (2000) Transformation of Medicago truncatula via infiltration of seedlings or flowering plants with Agrobacterium Plant J 22(6): 531-541 155 Ttot T (2003) Elementary guidance to the Japanese species of the genus Holotrichia Hope (Scarabaeidae: Melolonthinae) Saikaku Tsushin 7: 59-67 156 Van Der Vyver C (2010) Genetic transformation of the euploid Saccharum officinarum via direct and indirect embryogenesis Sugar Tech 12(1): 21-25 150 157 Vasil V, Castillo A M, Fromm M E, Vasil I K (1992) Herbicide resistant fertile transgenic wheat plants obtained by microprojectile bombardment of regenerable embryogenic callus Nat Biotechnol 10(6): 667-674 158 Vickers J, Grof C, Bonnett G, Jackson P, Morgan T (2005) Effects of tissue culture, biolistic transformation, and introduction of PPO and SPS gene constructs on performance of sugarcane clones in the field Crop and Past Sci 56(1): 57-68 159 Vinogradov A E (2003) DNA helix: the importance of being GC‐rich Nucleic Acids Res 31(7): 1838-1844 160 Vũ Tứ Mỹ, Nguy n Ngọc Châu, Lại Phú Hoàng, Cao Quỳnh Nga (2004) Hiệu lực phịng trừ bọ đen hại mía (Alissonotum impressicolle Arrow.) chế phẩm sinh học tuyến trùng Biostar-3 Thạch Thành-Thanh Hóa Tạp chí Bảo vệ thực v t (4): 5-8 161 Vũ V n Vụ (2007) Công nghệ sinh học NXB Giáo dục Việt Nam Tập 2, Hà Nội 162 Walter C, Fladung M, Boerjan W (2010) The 20-year environmental safety record of GM trees Nat Biotechnol 28(7): 656-658 163 Wang AQ, Dong WQ, Wei YW, Huang CM, He LF, Yang LT, Li YR (2009) Transformation of sugarcane with ACC oxidase antisense gene Sugar Tech 11(1): 39-43 164 Weng LX, Deng HH, Xu JL, Li Q, Zhang YQ, Jiang ZD, Li QW, Chen JW, Zhang LH (2011) Transgenic sugarcane plants expressing high levels of modified cry1Ac provide effective control against stem borers in field trials Transgenic Res 20(4): 759-772 165 Weng LX, Deng H, Xu JL, Li Q, Wang LH, Jiang Z, Zhang HB, Li Q, Zhang LH (2006) Regeneration of sugarcane elite breeding lines and engineering of stem borer resistance Pest Manag Sci 62(2): 178-187 166 Weng L-X, Deng H-H, Xu J-L, Li Q, Zhang Y-Q, Jiang Z-D, Li Q-W, Chen JW, Zhang L-H (2011) Transgenic sugarcane plants expressing high levels of modified cry1Ac provide effective control against stem borers in field trials Transgenic Res 20(4): 759-772 151 167 World Health Organization (1999) Microbial Pest Control Agent: Bacillus thuringiensis Environment Health Criteria 217 Geneve, Switzerland 168 Wu H, Awan FS, Vilarinho A, Zeng Q, Kannan B, Phipps T, McCuiston J, Wang W, Caffall K, Altpeter F (2015) Transgene integration complexity and expression stability following biolistic or Agrobacterium-mediated transformation of sugarcane In Vitro Cell Dev Biol Plant 51(6): 603-611 169 Wu L, Birch RG (2007) Doubled sugar content in sugarcane plants modified to produce a sucrose isomer Plant Biotechnol J 5(1): 109-117 170 www.kazusa.or.jp/codon/ Truy c p ngày 08/09/2015 171 Yamaguchi T, Sahara K, Bando H, Asano S (2008) Discovery of a novel Bacillus thuringiensis Cry8D protein and the unique toxicity of the Cry8D-class proteins against scarab beetles J Invertebr Pathol 99(3): 257-262 172 Yamaguchi T, Sahara K, Bando H, Asano S (2010) Intramolecular proteolytic nicking and binding of Bacillus thuringiensis Cry8Da toxin in BBMVs of Japanese beetle J Invertebr Pathol 105(3): 243-247 173 Yamaguchi T, Bando H, Asano S (2013) Identification of a Bacillus thuringiensis Cry8Da toxin-binding glucosidase from the adult Japanese beetle, Popillia japonica J Invertebr Pathol 113(2): 123-128 174 Yokoyama T, Tanaka M, Hasegawa M (2004) Novel cry gene from Paenibacillus lentimorbus strain Semadara inhibits ingestion and promotes insecticidal activity in Anomala cuprea larvae J Invertebr Pathol 85(1): 25-32 175 Yu H, Zhang J, Huang D, Gao J, Song F (2006) Characterization of Bacillus thuringiensis strain Bt185 toxic to the Asian cockchafer: Holotrichia parallela Curr Microbiol 53(1): 13-17 176 Zhang F, Shu C, Crickmore N, Li Y, Song F, Liu C, Chen Z, Zhang J (2016) Use of Redundant Exclusion PCR to identify a novel Bacillus thuringiensis Cry8 toxin gene from pooled genomic DNA Appl Environ Microbiol: AEM 00862-00816 177 Zhang J, Hodgman T C, Krieger L, Schnetter W, Schairer HU (1997) Cloning and analysis of the first cry gene from Bacillus popilliae J bacteriol 179(13): 4336-4341 152 178 Zhang J, Nagai C, Yu Q, Pan YB, Ayala-Silva T, Schnell RJ, Comstock JC, Arumuganathan AK, Ming R (2012) Genome size variation in three Saccharum species Euphytica 185(3): 511-519 179 Zhang Y, Zheng G, Tan J, Li C, Cheng L (2013) Cloning and characterization of a novel cry8Ab1 gene from Bacillus thuringiensis strain B-JJX with specific toxicity to scarabaeid (Coleoptera: Scarabaeidae) larvae Microbiol res 168(8): 512-517 180 Zhangsun D, Luo S, Chen R, Tang K (2007) Improved Agrobacterium-mediated genetic transformation of GNA transgenic sugarcane Biologia 62(4): 386-393 181 Zhu YJ, McCafferty H, Osterman G, Lim S, Agbayani R, Lehrer A, Schenck S, Komor E (2011) Genetic transformation with untranslatable coat protein gene of sugarcane yellow leaf virus reduces virus titers in sugarcane Transgenic res 20(3): 503-512 182 Zilberman D, Hochman G, Rajagopal D, Sexton S, Timilsina G (2012) The impact of biofuels on commodity food prices: Assessment of findings Am J Agric Econ: aas037 PHỤ LỤC , ... nghiên cứu phát triển giống mía chuyển gen có tính kháng với stress phi sinh học để thích nghi với biến đổi khí hậu Các cơng trình nghiên cứu chuyển gen quy đ nh tính kháng mặn, kháng lạnh, kháng. .. biến đổi gen khiêm tốn, đặc biệt chuyển gen kháng sâu vào m a 21 1.2.2 c nghi n cứu tạo mía chuyển gen 1.2.2.1 Các tính trạng đ h tạo mía chuy n gen Những cơng trình nghiên cứu chuyển gen m a... thực đề tài: ? ?Nghiên cứu hu n g n r D kháng n tr ng v o t nh m ” Mục tiêu nghiên cứu Tạo đƣợc dịng m a chuyển gen cry8Db có hoạt t nh kháng ấu trùng bọ hại m a Nội dung nghiên cứu Đánh giá thiệt