(Luận án tiến sĩ) bước đầu nghiên cứu quy trình nuôi nấm đông trùng hạ thảo (cordyceps militaris) có nguồn gốc từ nhật bản tại trà vinh

QT6.2/KHCN - BM3 TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH HỘI ĐỒNG KHOA HỌC ISO 9001 : 2008 BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NCKH CẤP TRƯỜNG BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH NI NẤM ĐƠNG TRÙNG HẠ THẢO (Cordyceps militaris) CÓ NGUỒN GỐC TỪ NHẬT BẢN TẠI TRÀ VINH Chủ nhiệm đề tài: Chức danh: Đơn vị: Nguyễn Ngọc Trai Giảng viên Bộ môn Trồng trọt & PTNT Khoa Nông nghiệp - Thủy sản Trà Vinh, ngày……tháng… năm 2017 luan an QT6.2/KHCN - BM3 TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH HỘI ĐỒNG KHOA HỌC ISO 9001 : 2008 BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH NI NẤM ĐƠNG TRÙNG HẠ THẢO (Cordyceps militaris) CÓ NGUỒN GỐC TỪ NHẬT BẢN TẠI TRÀ VINH Xác nhận quan chủ quản (Ký, đóng dấu, ghi rõ họ tên) Chủ nhiệm đề tài (Ký, ghi rõ họ tên) Nguyễn Ngọc Trai Trà Vinh, ngày……tháng… năm 2017 luan an TÓM TẮT Mu ̣c tiêu của đề tài nhằ m xác đinh ̣ mô ̣t số yế u tố ảnh hưởng đế n sự sinh trưởng và phát triể n quả thể nấ m Đông trùng ̣ thảo (Cordyceps militaris) đươ ̣c nuôi môi trường nhân ta ̣o (ga ̣o lức bổ sung dinh dưỡng hoă ̣c nhô ̣ng tằ m xay) và ký chủ nhô ̣ng tằ m Kế t quả nghiên cứu đa ̣t đươ ̣c sau : (1) Nhiê ̣t đô ̣ 250C và cường đô ̣ chiế u sáng 500 lux là phù hơ ̣p cho sự hình thành và phát triể n quả thể nấ m C militaris ; (2) Đố i với môi trường nuôi là ga ̣o lức huyế t rồ ng bổ sung dinh dưỡng, 20 g ga ̣o lức đươ ̣c bổ sung 30 ml dung dich ̣ dinh dưỡng gồ m 18,56 g/l glucose; 14,55 g/l peptone; 1,42 g/l KH2PO4; 1,5 g/l MgSO4 và 1,0 mg/l NAA, pH = 5,6 100% keo nuôi có nấ m C militaris hin ̀ h thành quả thể với tro ̣ng lươ ̣ng quả thể đa ̣t 8,01 g/keo; (3) Trên môi trường ga ̣o lức (50 g/hô ̣p nuôi) bổ sung 50 ml nước cấ t và nhô ̣ng tằ m g/hô ̣p nuôi, sau 60 ngày chủng giố ng số lươ ̣ng quả thể /hô ̣p nuôi là 20,11 quả thể và tro ̣ng lươ ̣ng quả thể đa ̣t 10,14 g, hàm lươ ̣ng Cordycepin và Adenosine phân tić h đươ ̣c quả thể lầ n lươ ̣t là 10,08 mg/g và 0,57 mg/l và với chấ t nuôi (ga ̣o lức có chứa tơ nấ m) đa ̣t lầ n lươ ̣t 3,44 mg/g và 0,09 mg/g ; (4) Nấ m C militaris đươ ̣c nuôi ta ̣o quả thể thành công nhộng tằ m ngày tuổ i với số quả thể đa ̣t trung bình 1,69 quả thể /nhô ̣ng ii luan an MỤC LỤC Trang THÔNG TIN CHUNG VỀ ĐỀ TÀI i TÓM TẮT ii MỤC LỤC iii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT vi DANH SÁCH BẢNG vii DANH SÁCH HÌNH viii LỜI CẢM ƠN ix MỞ ĐẦU - 1 Tính cấp thiết đề tài - Tổ ng quan nghiên cứu - 2.1 Giới thiê ̣u chung về nấ m Cordyceps militaris - 2.2 Tình hình nghiên cứu nấ m Đơng trùng ̣ thảo (C militaris) nước- 2.3 Tình hình nghiên cứu nấ m Đơng trùng ̣ thảo (C militaris) ngoài nước- Mục tiêu đề tài - Đố i tươ ̣ng, pha ̣m vi và phương pháp nghiên cứu - 4.1 Đố i tươ ̣ng, điạ điể m và thời gian nghiên cứu - 4.2 Qui mô nghiên cứu - 4.3 Phương pháp nghiên cứu - NỘI DUNG NGHIÊN CỨU - Chương Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ cường độ ánh sáng đến khả hình thành thể thể nấm đơng trùng hạ thảo (C militaris) nuôi môi trường gạo lức bổ sung dinh dưỡng - 1.1 Mục đích nghiên cứu - 1.2 Bố trí thí nghiê ̣m - 1.3 Phương pháp thực - 1.4 Kết nghiên cứu - 10 - iii luan an Chương Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng glucose, peptone, MgSO4, K2HPO4 NAA bổ sung vào môi trường gạo lức lên phát triển thể nấm đông trùng hạ thảo (C militaris) - 15 2.1 Mục đích nghiên cứu - 15 2.2 Bố trí thí nghiê ̣m - 15 2.3 Phương pháp thực - 15 2.4 Kết nghiên cứu - 17 Chương Tối ưu hóa mơi trường ni cấy nấm đơng trùng hạ thảo (C militaris) môi trường gạo lức bổ sung dinh dưỡng - 25 3.1 Mục đích nghiên cứu - 25 3.2 Phương pháp thực - 25 3.4 Kết nghiên cứu - 27 Sau 60 ngày chủng giố ng tiế n hành thu hoa ̣ch quả thể - 32 Chương Nuôi tạo thể nấm đông trùng hạ thảo (C militaris) môi trường gạo lức bổ sung nhộng tằm xay - 33 4.1 Mục đích nghiên cứu - 33 4.2 Bố trí thí nghiê ̣m - 33 4.3 Phương pháp thực - 33 4.4 Kết nghiên cứu - 34 Sau 60 ngày chủng giố ng tiế n hành thu hoa ̣ch quả thể Chương Nuôi tạo thể nấm đông trùng hạ thảo (C militaris) ký chủ nhộng tằm - 38 5.1 Mục đích nghiên cứu - 39 5.2 Bố trí thí nghiê ̣m - 39 5.3 Phương pháp thực - 39 5.4 Kết nghiên cứu - 40 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ - 47 KẾT LUẬN - 47 KIẾN NGHỊ - 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO - 48 Tiếng Việt - 48 Tiếng Anh - 48 PHỤ LỤC - 52 iv luan an Các thành viên tham gia thực đề tài - 52 Phân tích phương sai - 52 - v luan an DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT CV Coefficient of variation C militaris Cordyceps militaris ĐTHT Đông trùng ̣ thảo et al et alia g/l Gram/lit LSD Least significant difference mm milimet mg miligam µg microgam Ns Non Significan NAA Naphthalene acetic acid NBRC Biological resourse center, Nite P Probability vi luan an DANH SÁCH BẢNG Trang Bảng Ảnh hưởng nhiệt độ cường độ chiếu sáng lên tỷ lê ̣ hin ̀ h thành thể - 11 Bảng Ảnh hưởng nhiệt độ cường độ chiếu sáng lên số lượng thể nấm ĐTHT - 12 Bảng Ảnh hưởng nhiệt độ cường độ chiếu sáng lên chiề u cao thể nấm ĐTHT/keo nuôi - 12 Bảng Ảnh hưởng nhiệt độ cường độ chiếu sáng lên đường kính quả thể 13 Bảng Ảnh hưởng nhiệt độ cường độ chiếu sáng lên trọng lượng thể nấm ĐTHT/keo nuôi - 14 Bảng Giá tri ̣ mã hóa, giá tri ̣ thực nghiê ̣m, khoảng giá tri ̣ biế n thiên của yế u tố đươ ̣c sử du ̣ng để thiế t kế tố i ưu theo mô hình Box-Behnken Design (BBD)- 25 Bảng Ma trâ ̣n thực nghiê ̣m với yế u tố glucose, peptone và KH2PO4 - 26 Bảng Ma trâ ̣n thực nghiê ̣m với yế u tố glucose, peptone và KH2PO4 và kế t quả thí nghiê ̣m - 27 Bảng Bảng phân tích phương sai tố i ưu hóa mô hình các yế u tố - 28 Bảng 10 Kế t quả phân tić h sự phù hơ ̣p của mô hin ̀ h với thực nghiê ̣m - 29 Bảng 11 Ảnh hưởng của lươ ̣ng nhô ̣ng tằ m xay bổ sung đế n sự hình thành và phát triể n của quả thể nấ m ĐTHT - 34 Bảng 12 Ảnh hưởng vị trí tiêm tuổi nhộng tằm lên tỷ lệ nhô ̣ng tằ m nhiễm nấm C militaris - 40 Bảng 13 Ảnh hưởng vị trí tiêm tuổi nhộng tằm lên sớ lươ ̣ng thể nấm nấm C militaris hiǹ h thành nhô ̣ng tằ m - 41 Bảng 14 Ảnh hưởng vị trí tiêm tuổi nhộng tằm lên chiề u cao thể nấm nấm C militaris hiǹ h thành nhô ̣ng tằ m - 42 Bảng 15 Ảnh hưởng vị trí tiêm tuổi nhộng tằm lên đường kính thể nấm nấm C militaris hiǹ h thành nhô ̣ng tằ m - 43 - vii luan an DANH SÁCH HÌNH Trang Hin ̀ h Quả thể nấ m C militaris ký chủ nhô ̣ng - Hình Hình thái nấm ĐTHT (C militaris) môi trường nuôi tạo thể - 10 Hin ̣ ̀ h Biể u đồ thể hiê ̣n sự ảnh hưởng của hàm lươ ̣ng Glucose dung dich dinh dưỡng bổ sung lên sự sinh trưởng nấ m C militaris - 17 Hình Quả thể nấ m C militaris ở nghiê ̣m thức (trái) và nghiê ̣m thức (phải) sau 60 ngày chủng giố ng - 18 Hình Biể u đồ thể hiê ̣n sự ảnh hưởng của hàm lươ ̣ng Peptone dung dich ̣ dinh dưỡng bổ sung lên sự sinh trưởng nấ m C militaris - 19 Hin ̀ h Biể u đồ thể hiê ̣n sự ảnh hưởng của hàm lươ ̣ng MgSO4.7H20 dung dich ̣ dinh dưỡng bổ sung lên sự sinh trưởng nấ m C militaris - 21 Hin ̣ ̀ h Biể u đồ thể hiê ̣n sự ảnh hưởng của hàm lươ ̣ng K2HPO4 dung dich dinh dưỡng bổ sung lên sự sinh trưởng nấ m C militaris - 22 Hin ̣ dinh ̀ h Biể u đồ thể hiê ̣n sự ảnh hưởng của hàm lươ ̣ng NAA dung dich dưỡng bổ sung lên sự sinh trưởng nấ m C militaris - 23 Hình Quả thể nấ m ĐTHT (C militaris) môi trường ga ̣o lức bổ sung dinh dưỡng ở nghiê ̣m thức tố i ưu (trái) và quả thể đươ ̣c gửi phân tích Cordycepin và Adenosine (phải) - 30 Hin ̀ h 10 Sơ đồ tóm tắ t qui triǹ h nuôi nấ m ĐTHT (C militaris) môi trường ga ̣o lức bổ sung dinh dưỡng - 31 Hình 11 Quả thể nấ m ĐTHT (C militaris) Trên môi trường ga ̣o lức bổ sung nhô ̣ng tằ m xay sau 60 ngày chủng giố ng - 35 Hình 12 Sơ đồ tóm tắ t qui trình nuôi nấ m ĐTHT (C militaris) môi trường ga ̣o lức bổ sung nhô ̣ng tằ m xay - 37 Hin ̀ h 13 Tằ m (Bombyx mori) đươ ̣c nuôi ta ̣i trường Đa ̣i ho ̣c Trà Vinh Giai đoa ̣n tằ m (trái) và giai đoa ̣n nhô ̣ng (phải) - 40 Hin ̀ h 14 Nhô ̣ng tằ m nhiễm nấ m sau ngày tiêm C militaris (trái) và Quả thể nấ m C militaris hình hành nhô ̣ng tằ m sau 60 ngày chủng giố ng (phải) - 41 Hin ̀ h 15 Sơ đồ tóm tắ t qui trin ̀ h nuôi nấ m ĐTHT (C militaris) ký chủ nhô ̣ng tằ m - 45 - viii luan an LỜI CẢM ƠN Để hồn thành đề tài này, tơi xin chân thành gởi lời cảm ơn đến: Ban Giám Hiệu, Khoa Nông nghiệp - Thủy sản, Phịng Khoa học Cơng nghệ, Phịng Kế hoạch - Tài vụ Trường Đại học Trà Vinh tạo điều kiện thuận lợi để tơi có điều kiện làm việc nghiên cứu đề tài Các đồng nghiệp Bộ môn Trồng trọt & PTNT, Khoa Nông nghiệp Thủy sản Trường Đại học Trà Vinh hỗ trợ tơi hồn thành đề tài Q Thầy cô Trường Đại học Cần Thơ giảng dạy truyền đạt kiến thức quý báo làm tảng để tơi thực đề tài Các em sinh viên lớp Đại học Khoa học canh tác trồng khóa 2013, Khoa Nơng nghiệp - Thủy sản, Trường Đại học Trà Vinh hỗ trợ thực đề tài Chân thành cảm ơn với lòng trân trọng nhất! Nguyễn Ngọc Trai ix luan an Ga ̣o lức huyế t rồ ng C militaris (50g/hô ̣p) - 50 ml nước cấ t - g nhô ̣ng tằ m xay Nuôi sinh khố i 100ml môi trường bản nhuyễn - Khử trùng 1210C, để - Che tố i,250C, ngày nguô ̣i - Lắ c 150 rpm 25 ml/hô ̣p Hô ̣p nuôi Giố ng Che tố i, 250C Tơ nấ m phủ kín môi trường Kić h thić h hiǹ h thành quả thể Quả thể hiǹ h thành Nuôi quả thể Thu quả thể Hin ̀ h 12 Sơ đồ tóm tắ t qui trin ̀ h nuôi nấ m ĐTHT (C militaris) môi trường ga ̣o lức bổ sung nhô ̣ng tằ m xay Mô tả qui trı̀nh nuôi nấ m ĐTHT (C militaris) môi trường ga ̣o lức bổ sung nhộng tằ m xay Qui trình nuôi nấ m ĐTHT (C militaris) môi trường ga ̣o lức bổ sung nhô ̣ng tằ m xay đươ ̣c thực hiê ̣n sau: Giố ng nấ m C militaris môi trường PSA (Potato succrose agar) đươ ̣c tiếp tục nuôi môi trường (20 g/l sucrose, 20 g/l peptone, 0.5 g/l MgSO4.7H2O 1g/l K2HPO4) điều kiện 250C thời gian ngày máy lắc với tố c đô ̣ 150 rpm để lấy dịch nuôi 50 g ga ̣o lức huyế t rồ ng đươ ̣c cho vào các hô ̣p nhựa 1000 ml Bổ sung g nhô ̣ng tằ m đã đươ ̣c xay nhuyễn vào mỗi hô ̣p nhựa - 37 - luan an Sau đó cho 50 ml nước cấ t vào Trô ̣n đề u Đâ ̣y nắ p Khử trùng ở nhiê ̣t đô ̣ 121 C, thời gian 20 phút Để nguô ̣i ở nhiê ̣t đô ̣ phòng 25 ml dich ̣ nuôi nấ m C militaris đươ ̣c chủng vào hô ̣p nuôi có chứa ga ̣o lức và nước cấ t đã đươ ̣c khử trùng Sau đó nắ p đâ ̣y đươ ̣c thay bằ ng bich ̣ nilon đã đươ ̣c khử trùng Hô ̣p nuôi đươ ̣c đưa vào phòng ủ tơ có nhiê ̣t đô ̣ 250C, điề u kiê ̣n che tố i hoàn toàn cho đế n tơ nấ m phủ kín bề mă ̣t môi trường Đưa hô ̣p nuôi vào phòng nuôi và kích thích hình thành quả thể ở điề u kiê ̣n: 23 C, 500 lux 12 vào ban ngày 170C 12 điều kiện tối hoàn toàn vào ban đêm, ẩm độ điều chỉnh 90-95%, thời gian ngày Khi quả thể nhú mầ m bằ ng ngòi bút bi tiế n hành nuôi quả thể ở điề u kiê ̣n 25 C, 500 lux 14 giờ và điề u kiê ̣n tố i hoàn toàn ở 250C 10 giờ Sau 60 ngày chủng giố ng tiế n hành thu hoa ̣ch quả thể - 38 - luan an Chương Nuôi tạo thể nấm đông trùng hạ thảo (C militaris) ký chủ nhộng tằm 5.1 Mục đích nghiên cứu Xác định vị trí tiêm độ tuổi nhộng tằm phù hợp để nuôi tạo thể nấm đông trùng hạ thảo (C militaris) ký chủ nhô ̣ng tằ m 5.2 Bố trı́ thı́ nghiê ̣m Thí nghiê ̣m đươ ̣c bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên với nhân tố: nhân tố A (tuổi nhộng tằm) với mức độ 9; 10; 11; 12 ngày tuổi tính từ lúc tằm bắt nhả tơ; nhân tố B (vị trí tiêm) với mức độ: phần ngực phần bụng Thí nghiệm gồm nghiệm thức lặp lại lần với lần lặp lại keo thủy tinh chứa 10 nhô ̣ng tằ m chủng dịch nuôi nấm đông trùng hạ thảo (C militaris) 5.3 Phương pháp thực Viê ̣c gây nhiễm và nuôi ta ̣o quả thể nấ m C militaris ký chủ nhô ̣ng tằ m đươ ̣c thực hiê ̣n theo phương pháp đươ ̣c mô tả bởi Hong et al (2010) với mô ̣t số biế n đổ i để phù hơ ̣p điề u kiê ̣n phòng thí nghiê ̣m Dịch nuôi nấm đông trùng hạ thảo (C militaris) lọc qua màng lọc 75 µl dịch ni nấm đơng trùng hạ thảo (C militaris) sau lọc tiêm vào nhộng tằm nghiệm thức khác Nhộng tằm sau tiêm đặt keo lót giấy điều kiện 200C thể nhộng tằm trở nên cứng bao tơ nấm màu trắ ng bên ngồi Ni tạo thể: các nhộng tằm nhiễm nấ m C militaris chuyển sang keo nuôi có lót giấ y thấ m và thêm nước ta ̣o ẩ m để tạo điều kiện cho thể hin ̀ h thành và phát triển Các keo nuôi này đươ ̣c đưa vào phòng nuôi để điề u chỉnh nhiê ̣t đô ̣ và ánh sáng (230C, 500 lux 12 vào ban ngày 170C 12 điều kiện tối hoàn toàn vào ban đêm) cho đế n quả thể nhú lên từ nhô ̣ng tằ m Đế n lúc này, nhiê ̣t đô ̣ phòng nuôi quả thể đươ ̣c điề u chin ̉ h 25 C, cường đô ̣ chiế u sáng 500 lux 14 giờ/ngày và 250C điề u kiê ̣n che tố i hoàn toàn thời gian 10 giờ/ngày, ẩm độ điều chỉnh 90-95% để quả thể phát triể n Nhộng tằm nghiệm thức có tỷ lệ nhộng tằm tạo thể nhiều gởi phân tích hàm lượng Cordycepin và Adenosine Chỉ tiêu theo dõi Tỷ lệ (%) nhộng tằm bị nhiễm nấm đông trùng hạ thảo (C militaris) ở các nghiê ̣m thức Số lượng thể/nhộng tằm sau 60 ngày nhộng tằm nhiễm nấm đông trùng hạ thảo (C militaris) - 39 - luan an Chiều cao trung bình thể (mm) sau 60 ngày nhộng tằm bị nhiễm nấm đơng trùng hạ thảo (C militaris) Đường kính trung bình thể (mm) sau 60 ngày nhộng tằm bị nhiễm nấm đông trùng hạ thảo (C militaris) Hàm lươ ̣ng Cordycepin và Adenosine quả thể và nhô ̣ng tằ m ở nghiê ̣m thức đươ ̣c cho ̣n 5.4 Kết nghiên cứu Hin ̀ h 13 Tằ m (Bombyx mori) đươ ̣c nuôi ta ̣i trường Đa ̣i ho ̣c Trà Vinh Giai đoa ̣n tằ m (trái) và giai đoa ̣n nhô ̣ng (phải) Sau thời gian -5 ngày tiêm dich m ̣ nuôi nấ m C militaris nhô ̣ng tằ m đã bi nhiễ ̣ nấ m với biể u hiê ̣n tơ nấ m màu trắ ng đu ̣c hin ̀ h thành ở vi ̣ trí tiêm và các lỗ khí hai bên thành bu ̣ng và nhô ̣ng trở nên cứng sau 7-10 ngày tiêm nấ m (hình 14) Bảng 12 Ảnh hưởng vị trí tiêm tuổi nhộng tằm lên tỷ lệ nhô ̣ng tằ m nhiễm nấm C militaris Vị trí tiêm (B) Phần ngực Phần bụng Trung bình (%) F (A) F (B) F (A x B) 43,33 43,33 43,33c Tuổi nhộng (ngày) (A) 10 11 53,33 56,67 47,89b CV (%) 56,67 63,33 50,81ab ** ns ns 12 66,67 63,33 53,88a Trung bình (%) 47,93 48,89 7,0 Ghi chú: Trong cùng một hàng, số có ít nhấ t một chữ cái theo sau giố ng thì khác biê ̣t không có ý nghiã thố ng kê dùng phép kiể m ̣nh LSD, (ns): khác biê ̣t không có ý nghiã thố ng kê; (**): khác biê ̣t ở mức ý nghiã 1% Các giá tri ̣ bảng là trung bình của các lầ n lặp lại - 40 - luan an Không có sự tương tác giữa vi ̣ trí tiêm và tuổ i nhô ̣ng tằ m lên tỷ lê ̣ nhô ̣ng tằ m nhiễm nấ m C militaris Ở hai vi ̣ trí tiêm dich ̣ nuôi nấ m C militaris khác (phầ n ngực hoă ̣c phầ n bu ̣ng) tỷ lê ̣ nhô ̣ng tằ m nhiễm nấ m C militaris khác biê ̣t không có ý nghiã thố ng kê và dao đô ̣ng từ 47,93% đế n 48,89% Tuy nhiên, có sự khác biê ̣t lớn về tỷ lê ̣ nhô ̣ng nhiễm nấ m C militaris ở các tuổ i nhô ̣ng khác (bảng 12) Nhô ̣ng tằ m 12 ngày tuổ i có tỷ lê ̣ nhiễm cao nhấ t (53,88%) và đa ̣t thấ p nhấ t (43,33%) nhô ̣ng tằ m có tuổ i đời ngày Tuy nhiên, đố i với nhô ̣ng 12 ngày tuổ i đươ ̣c ghi nhâ ̣n có 50% nhô ̣ng đã hóa bướm Hin ̀ h 14 Nhô ̣ng tằ m nhiễm nấ m sau ngày tiêm C militaris (trái) và Quả thể nấ m C militaris hin ̀ h hành nhô ̣ng tằ m sau 60 ngày chủng giố ng (phải) Kế t quả này tương tự nghiên cứu đươ ̣c báo cáo bởi Hong et al (2010) nghiên cứu sự hình thành quả thể của chủng nấ m C militaris ký chủ nhô ̣ng tằ m là với vi ̣ trí tiêm: đầ u, ngực và bu ̣ng thì tỷ lê ̣ nhô ̣ng nhiễm nấ m cao nhấ t là phầ n ngực và phầ n bu ̣ng Bảng 13 Ảnh hưởng vị trí tiêm tuổi nhộng tằm lên sớ lươ ̣ng thể nấm nấm C militaris hin ̀ h thành nhơ ̣ng tằ m Vị trí tiêm (B) Phần ngực Phần bụng Trung bình (quả thể /nhô ̣ng) F (A) F (B) F (A x B) CV (%) 1,68 1,70 1,69a Tuổi nhộng (ngày) (A) 10 11 1,45 1,47 1,46b 1,55 1,57 1,56ab * ns ns 12,29 - 41 - luan an 12 1,47 1,38 1,43b Trung bình (quả thể /nhơ ̣ng) 1,53 1,53 Ghi chú: Trong cùng một hàng, số có ít nhấ t một chữ cái theo sau giố ng thì khác biê ̣t không có ý nghiã thố ng kê dùng phép kiể m ̣nh LSD, (ns): khác biê ̣t không có ý nghiã thố ng kê; (*): khác biê ̣t ở mức ý nghiã 5% Các giá tri ̣ bảng là trung bình của các lầ n lặp lại Sau nhiễm nấ m C militaris, các nhô ̣ng tằ m đươ ̣c chuyể n sang các keo khác có chứa giấ y thấ m đươ ̣c bổ sung nước nhằ m giữ ẩ m và đă ̣t vào phòng nuôi ta ̣o điề u kiê ̣n để quả thể hình thành và phát triể n nhô ̣ng tằ m Sau 12 ngày kić h thić h hình thành quả thể có 100% nhô ̣ng tằ m bi ̣ nhiễm nấ m C militaris ở các nghiê ̣m thức hiǹ h thành quả thể Tuy nhiên, số lươ ̣ng quả thể hin ̀ h thành nhô ̣ng tằ m ở các nghiê ̣m thức rấ t ít, quả thể chỉ mo ̣c từ vi ̣ trí tiêm nấ m C militaris với số lươ ̣ng trung biǹ h từ 1,38 - 1,7 quả thể /nhô ̣ng tằ m Mă ̣c dù có tỷ lê ̣ nhiễm nấ m C militaris cao nhấ t số lươ ̣ng quả thể nấ m C militaris hình thành/nhô ̣ng tằ m thấ p nhấ t (chỉ đa ̣t 1,43 quả thể /nhô ̣ng) nhô ̣ng có tuổ i đời 12 ngày tuổ i Nhô ̣ng tằ m với tuổ i đời ngày nhiễm cho số lươ ̣ng quả thể nấ m C militaris/nhô ̣ng tằ m là cao nhấ t đa ̣t trung bình 1,69 quả thể /nhô ̣ng tằ m (bảng 13) Bảng 14 Ảnh hưởng vị trí tiêm tuổi nhộng tằm lên chiề u cao thể nấm nấm C militaris hin ̀ h thành nhô ̣ng tằ m Vị trí tiêm (B) Phần ngực Phần bụng Trung bình (mm) F (A) F (B) F (A x B) CV (%) 31,67 30,5 31,08a Tuổi nhộng (ngày) (A) 10 11 30,04 27,36 28,70ab 26,72 28,20 27,46b ** ns ns 6,36 12 26,43 28,33 27,38b Trung bình (mm) 28,72 28,60 Ghi chú: Trong cùng một hàng, số có ít nhấ t một chữ cái theo sau giố ng thì khác biê ̣t không có ý nghiã thố ng kê dùng phép kiể m ̣nh LSD, (ns): khác biê ̣t không có ý nghiã thố ng kê; (*): khác biê ̣t ở mức ý nghiã 5% Các giá tri ̣ bảng là trung bình của các lầ n lặp lại Kế t quả thí nghiê ̣m trình bày ở bảng 14 cho thấ y đô ̣ tuổ i nhô ̣ng tằ m có ảnh hưởng đế n chiề u cao quả thể nấ m C militaris Chiề u quả thể nấ m tỷ lê ̣ nghich ̣ với tuổ i nhô ̣ng tằ m thí nghiê ̣m Chiề u cao quả thể nấ m C militaris dao đô ̣ng khoảng 30mm Nhô ̣ng tằ m ngày tuổ i quả thể nấ m C militaris hin ̀ h thành có chiề u cao đa ̣t cao nhấ t với trung bình ở hai vi ̣trí tiêm là 31,08 mm và khác biê ̣t có ý nghiã thố ng kê ở mức 1% so với chiề u cao quả thể ở nhô ̣ng tằ m các đô ̣ tuổ i còn la ̣i Chiề u cao quả thể đa ̣t thấ p nhấ t (27,38) nhô ̣ng tằ m 12 ngày tuổ i Tuy nhiên, chiề u cao trung bình quả thể thu đươ ̣c đố i với vi ̣ trí tiêm của nhô ̣ng tằ m ở các đô ̣ tuổ i khác - 42 - luan an không có sự khác biê ̣t ý nghiã thố ng kê và cũng không có sự tương tác giữa vi ̣ trí tiêm và tuổ i nhô ̣ng tằ m lên chiề u cao quả thể nấ m C militaris thu đươ ̣c Bảng 15 Ảnh hưởng vị trí tiêm tuổi nhộng tằm lên đường kính thể nấm nấm C militaris hin ̀ h thành nhơ ̣ng tằ m Vị trí tiêm (B) Phần ngực Phần bụng Trung bình (mm) F (A) F (B) F (A x B) CV (%) 2,07 2,14 2,10a Tuổi nhộng (ngày) (A) 10 11 2,11 1,97 2,04ab 2,05 1,91 1,98ab ** ns ns 5,53 12 1,82 1,87 1,85b Trung bình (mm) 2,01 1,97 Ghi chú: Trong cùng một hàng, số có ít nhấ t một chữ cái theo sau giố ng thì khác biê ̣t không có ý nghiã thố ng kê dùng phép kiể m ̣nh LSD, (ns): khác biê ̣t không có ý nghiã thố ng kê; (**): khác biê ̣t ở mức ý nghiã 1% Các giá tri ̣ bảng là trung bình của các lầ n lặp lại Đường kính quả thể ở các nghiê ̣m thức thí nghiê ̣m dao đô ̣ng từ 1,82 - 2,14 mm kế t quả cho thấ y rằ ng đường kin ̣ với tuổ i ́ h quả thể C militaris tỷ lê ̣ nghich nhô ̣ng tằ m, nhô ̣ng tằ m có tuổ i đời nhỏ thì đường kính quả thể lớn và ngươ ̣c la ̣i Từ các kế t quả thí nghiê ̣m thu thâ ̣p đươ ̣c phân tić h và trin ̀ h bày ở các bảng 15 có thể thấ y rằ ng nhô ̣ng tằ m có tuổ i đời nhỏ (9 ngày tuổ i) thì tỷ lê ̣ nhiễm nấ m C militaris thấ p các chỉ tiêu về sự phát triể n quả thể như: số lươ ̣ng quả thể , chiề u cao quả thể và đường kính quả thể la ̣i so với nhô ̣ng tằ m có đô ̣ tuổ i lớn (10, 11 và 12 ngày tuổ i) Điề u này có thể giải thić h là nhô ̣ng tằ m có tuổ i đời lớn thì khả miễm dich ̣ yế u nên dễ dàng bi ̣ nấ m xâm nhâ ̣p lây nhiễm và có thành phầ n dinh dưỡng mà đă ̣c biê ̣t là hàm lươ ̣ng protein giảm nhô ̣ng tằ m đã nhả hế t tơ và chuẩ n bi ̣hóa bướm nên thiế u dinh dưỡng cho sự phát triể n quả thể Từ những kế t quả trình bày bên trên, nhô ̣ng tằ m ngày tuổ i và vi ̣trí tiêm phầ n bu ̣ng đươ ̣c cho ̣n để nghiên cứu sản xuấ t nấ m ĐTHT ký chủ nhô ̣ng tằ m Kế t quả phân tić h thành phầ n Cordycepin và Adenosine, hai thành phầ n có tác du ̣ng dươ ̣c lý chính ở nấ m ĐTHT từ quả thể và ký chủ nhô ̣ng tằ m, cho thấ y hàm lươ ̣ng Cordycepin và Adenosine đa ̣t đươ ̣c lầ n lươ ̣t là 4,28 g/g và 0,14 mg/g Hàm lươ ̣ng Cordycepin và Adenosin đươ ̣c phân tích nhỏ ở quả thể nuôi môi trường ga ̣o lức bổ sung nhô ̣ng tằ m và ga ̣o lức bổ sung dinh dưỡng, điề u này có thể phân tích cả quả thể và nhô ̣ng tằ m nên nhô ̣ng tằ m hàm lươ ̣ng hai chấ t này it́ quả thể Tuy nhiên, so với nghiên cứu đươ ̣c báo cáo bởi Huang et - 43 - luan an al (2009) cho thấ y hàm lươ ̣ng Cordycepin cao gấ p lầ n và hàm lươ ̣ng Adenosin thấ p 12 lầ n Từ kế t quả thí nghiê ̣m đa ̣t đươ ̣c bên trên, có thể khái quát qui trin ̀ h nuôi ta ̣o quả thể nấ m ĐTHT (C militaris) ký chủ nhô ̣ng tằ m theo sơ đồ đươ ̣c trình bày ở hin ̀ h 15 Mô tả qui trı̀nh nuôi nấ m ĐTHT (C militaris) ký chủ nhộng tằ m Qui triǹ h nuôi nấ m ĐTHT (C militaris) ký chủ nhô ̣ng tằ m đươ ̣c thực hiê ̣n sau: Giố ng nấ m C militaris môi trường PSA (Potato succrose agar) đươ ̣c tiếp tục nuôi môi trường (20 g/l sucrose, 20 g/l peptone, 0.5 g/l MgSO4.7H2O 1g/l K2HPO4) điều kiện 250C thời gian ngày máy lắc với tố c đô ̣ 150 rpm, dich ̣ nuôi đươ ̣c lo ̣c qua màng lo ̣c để thu lấ y dich ̣ tiêm vào nhô ̣ng tằ m Nhô ̣ng tằ m ngày tuổ i (đươ ̣c tính từ lúc tằ m nhả tơ) đươ ̣c cắ t khỏi kén và đươ ̣c vê ̣ sinh bề mă ̣t bằ ng cờ n 700 Tiêm 75 µl dich ̣ ni sau đã lo ̣c vào mỗi nhô ̣ng tằ m ở phầ n bu ̣ng nhô ̣ng tằ m Đưa keo chứa nhô ̣ng tằ m nhiễm nấ m C militaris vào phòng nuôi đươ ̣c che tố i với nhiê ̣t đô ̣ 200C Sau 10 - 12 ngày nuôi, cho ̣n nhô ̣ng tằ m nhiễm nấ m C militaris vào keo nuôi mới có lót giấ y thấ m Đưa keo nuôi vào phòng nuôi và kić h thić h hin ̀ h thành quả thể ở điề u kiê ̣n: 230C, 500 lux 12 vào ban ngày 170C 12 điều kiện tối hoàn toàn vào ban đêm, ẩm độ điều chỉnh 90-95%, thời gian 12 ngày Khi quả thể nhú từ nhô ̣ng tằ m bằ ng ngòi bút bi tiế n hành nuôi quả thể ở điề u kiê ̣n 250C, 500 lux 14 giờ và điề u kiê ̣n tố i hoàn toàn ở 250C 10 giờ Sau 60 ngày tính từ lúc tiêm nấ m C militaris vào nhô ̣ng tằ m tiế n hành thu hoa ̣ch quả thể - 44 - luan an Trứng tằ m C militaris - Nuôi bằ ng lá dâu Nuôi sinh khố i - Tằ m nhả tơ đươ ̣c ngày 100ml môi trường bản - Cắ t nhô ̣ng khỏi kén, vê ̣ - Che tố i,250C, ngày sinh bằ ng cồ n 700 - Lắ c 150 rpm - Lo ̣c qua màng lo ̣c Giố ng Nhô ̣ng Tiêm 75 µl/nhơ ̣ng - Cho vào keo thủy tinh có lót giấ y, giữ ẩ m - Che tố i, 200C Nhô ̣ng tằ m nhiễm nấ m C militaris - Chuyể n sang keo khác - Kích thích hình thành quả thể -Nuôi quả thể Thu quả thể Hin ̀ h 15 Sơ đồ tóm tắ t qui trin ̀ h nuôi nấ m ĐTHT (C militaris) ký chủ nhơ ̣ng tằ m Nhóm thực đề tài tổ chức Hội thảo “Đông trùng hạ thảo (C militaris)nguồn dược liệu quý tiềm phát triển Trà Vinh” Trường Đại học Trà Vinh ngày 17 tháng năm 2017 với sự tham dự của 30 đại biểu đế n từ Trung tâm Công nghê ̣ Sinh ho ̣c, Trung tâm Ứng Du ̣ng Tiế n Bô ̣ Khoa ho ̣c và Công nghê ̣, bô ̣ môn Dươ ̣c, Trung tâm Công nghê ̣ Sau thu hoa ̣ch Trường Đa ̣i ho ̣c Trà Vinh,… Các Đại biểu tham dự hội thảo đánh giá cao kết nghiên cứu đa ̣t đươ ̣c và đưa mô ̣t số hướng nghiên cứu mới nhằ m ta ̣o các sản phẩ m có giá tri ̣cao từ nấ m Đông trùng ̣ thảo để phu ̣c vu ̣ nhu cầ u chăm sóc sức khỏe người dân và ngoài tỉnh Qua kết nghiên cứu qua Hội thảo cho thấy triển vọng để phát triển viê ̣c nuôi trồ ng nấ m Đông trùng ̣ thảo ta ̣i Trà Vinh để cung cấ p sản phẩ m cho những nghiên cứu sâu cũng chuyể n giao công nghê ̣ cho các đơn - 45 - luan an vi ̣ có nhu cầ u là rấ t lớn Đó thành cơng bước đầu đề tài niềm động viên cán tham gia thực đề tài - 46 - luan an KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Nhiê ̣t đô ̣ 250C và cường đô ̣ chiế u sáng 500 lux là phù hơ ̣p cho sự hình thành và phát triể n quả thể nấ m C militaris; 20 g ga ̣o lức đươ ̣c bổ sung 30 ml dung dich ̣ dinh dưỡng gồ m 18,56 g/l glucose; 14,55 g/l peptone; 1,42 g/l KH2PO4; 1,5 g/l MgSO4 và 1,0 mg/l NAA phù hơ ̣p cho viê ̣c nuôi ta ̣o quả thể Môi trường nuôi chứa 50 g ga ̣o lức huyế t rồ ng bổ sung 50 ml nước cấ t và nhô ̣ng tằ m g/hơ ̣p có 100% keo ni có nấm hình thành thể đạt tro ̣ng lươ ̣ng tươi quả thể đa ̣t cao nghiệm thức nghiên cứu Nhô ̣ng tằ m ngày tuổ i đươ ̣c tiêm 75µl dich ̣ ni vào phầ n bu ̣ng phù hơ ̣p cho viê ̣c nuôi ta ̣o quả thể nấ m C militaris ký chủ nhô ̣ng tằ m KIẾN NGHỊ Sản xuấ t thử nghiê ̣m quả thể nấ m C militaris các môi trường đã đươ ̣c nghiên cứu để điề u chỉnh các thông số phù hơ ̣p cho qui mô nuôi công nghiê ̣p Ly trích, đánh giá khả kháng khuẩ n, kháng nấ m, kháng oxy hóa và điề u tri ̣ung thư của mô ̣t số hơ ̣p chấ t từ quả thể nấ m C militaris Nghiên cứu sản xuấ t mô ̣t số sản phẩ m có giá tri gia ̣ tăng từ nấ m C militaris Nghiên cứu tố i ưu hóa các thành phầ n môi trường lỏng để nuôi cấ y chìm nấ m C militaris thu Cordycepin và Adenosin - 47 - luan an TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Lê Văn Vẻ, Trầ n Thu Hà, Nguyễn Thi ̣ Bích Thùy và Ngô Xuân Nghiễn 2015 Bước đầ u nghiên cứu công nghê ̣ nuôi trồ ng nhô ̣ng trùng thảo (Cordyceps militaris L.ex Fr.) ở Viê ̣t Nam Tạp chí Khoa học và Phát triể n, tâ ̣p 13, số 3: 445-454 Tiếng Anh [1] Akaki, J., Matsui Y & Kojima H 2009 Structural analysis of monocyte activation constituents in cultured mycelia of Cordyceps sinensis Fitoterapia, 80, 182–7 [2] Aramwit, P., Bang N., Ratanavaraporn, J., Nakpheng, T & Srichana T 2014 An Anti-Cancer Cordycepin Produced by Cordyceps militaris Growing on the Dead Larva of Bombyx mori Silkworm Journal of Agricultural Science; Vol 6, No [3] Bizarro, A., Ferreira, I C F R., Soković, M., Griensven, L.J L D., Sousa D., Vasconcelos, M.H & Lima R.T 2015 Cordyceps militaris (L.) Link Fruiting Body Reduces the Growth of a Non-Small Cell Lung Cancer Cell Line by Increasing Cellular Levels of p53 and p21 Molecules, 20, 13927-13940 [4] Das, S.K., Masuda, M., Sakurai, A & Sakakibara M 2010a Medicinal uses of the mushroom Cordyceps militaris: Current state and prospects Fitoterapia, 81, 961–8 [5] Dong, J.Z., Lei, C., Ai, X.R & Wang Y., 2012 Selenium enrichment on Cordyceps militaris Link and analysis on its main active components Appl Biochem Biotechnol 166: 1215-1224 [6] Gu, Y.X., Wang, Z.S., Li, S.X & Yuan, Q.S 2007 Effects of multiple factors on accumulation of nucleosides and bases in Cordyceps militaris Food Chem, 102, 1304–9 [7] Gao, X.H., Wu, W & Qian, G.C 2000a Study on influences of abiotic factors on fruitbody differentiation of Cordyceps militaris Acta Agric Shanghai 16(Suppl):93–98 [8] Hur, H 2008 Chemical Ingredients of Cordyceps militaris Mycobiology 36(4):233-235 [9] Hong, I.P, Kang ,P.D., Kim, K.Y., Nam, S.H., Lee, M.Y., Choi, Y.S., Kim, N.S, Kim, H.K., Lee, K.G & Humber, R.A 2010 Fruit body formation on silkworm by Cordyceps militaris Mycobiology 38(2): 128-132 - 48 - luan an [10] Jiang, X.L & Sun, Y 1999 The determination of active components in various Cordyceps militaris strains Acta Edulis Fungi, 6, 47–50 [11] Jin, L.Y., Du, S.T & Ma, L 2009 Optimization on mathematical model of basic medium of Cordyceps militaris cultivation J Northwest A F Univ (Nat Sci Ed) 37(11):175–179 [12] Kamble, V.R., & Agre, D.G 2012 Reinvestigation of insect parasite fungus Cordyceps militaris from Maharashtra Bionano Frontier 5(2):224-225 [13] Kim, S.Y., Shrestha, B., Sung, G.H., Han, S.K & Sung J.M 2010 Optimum conditions for artificial fruiting body formation of Cordyceps cardinalis Mycobiology 38(2): 133-136 [14] Kobayashi, Y 1941 The genus Cordyceps and its allies Sci Rep Tokyo Bunrika Daigaku Sect B 5:53-260 [15] Kobayasi, Y., 1981 Revision of the genus Cordyceps and its allies Bulletin of the National Science Museum Tokyo 7:1–13 [16] Kobayasi, Y., 1982 Keys to the taxa of the genera Cordyceps and Torrubiella Transactions of the Mycological Society of Japan 23:329–364 Herbal, New York [17] Kuo, Y.C, Tasi, W.J & Shiao, M.S 1996 Cordyceps sinesis as an immunomodulatory agent Am J Chin Med, 24, 111–25 [18] Lee, H.H., Lee, S., Lee, K., Shin, Y.S, Kang, H & Cho, H 2009 Anti-cancer effect of Cordyceps militaris in human colorectal carcinoma RKO cells via cell cycle arrest and mitochondrial apoptosis J Acupunct Meridian Stud 2009; (4):294−300 [19] Li, S.P., Yang, F.Q & Tsim, K.W.K 2006 Quality control of Cordyceps sinensis, a valued traditional Chinese medicine J Pharmaceut Biomed, 41, 1571–84 [20] Lim, L.T., Lee, C.Y & Chang, E.T., 2012 Optimization of solid state culture conditions for the production of adenosine, cordycepin, and D-mannitol in fruiting bodies of medicinal caterpillar fungus Cordyceps militaris (L.: Fr.) Link (Ascomycetes), Int J Med Mushrooms, 2: 181-187 [21] Liu, C., Song, J., Teng, M., Zheng, X., Li, X., Tian ,Y., Pan, M., Li, Y., Lee, R.J & Wang D 2016 Antidiabetic and Antinephritic Activities of Aqueous Extract of Cordyceps militaris Fruit Body in Diet Streptozotocin-Induced Diabetic Sprague Dawley Rats Oxidative Medicine and Cellular Longevity Volume 2016 - 49 - luan an [22] Park, S.E., Kim, J., Lee, Y-W, Yoo, H-S & Cho, C.K 2016 Antitumor Activity of Water Extracts From Cordyceps Militaris in NCI-H460 Cell Xenografted Nude Mice Oxidative Medicine and Cellular Longevity Volume 2016 [23] Mao, X.B., Eksriwong, T., Chauvatcharin, S & Zhong, J.J 2005 Optimization of carbon source/nitrogen ratio for cordycepin production by submerged cultivation of medicinal mushroom Cordyceps militaris Process Biochem, 40, 1667–72 [24] Paul, M K., Paul, F C., David, W M and Stalpers, J A., 2008 Dictionary of the Fungi; CABI [25] Petch T 1936 Cordyceps militaris and Isaria farinosa Trans Br Mycol Soc; 20:216-224 [26] Reis, F.S., Barros, L., Calhelha, R.C., 2013 The methanolic extract of Cordyceps militaris (L.) Link fruiting body shows antioxidant, antibacterial, antifungal and antihuman tumor cell lines properties Food Chem Toxicol, 62, 91–8 [27] Sato, H and Shimazu, M., 2002 Stromata production for Cordyceps militaris (Clavicipitales: Clavicipitaceae) by injection of hyphal bodies to alternative hostinsects Applied Entomology and Zoology 37:85–92 [28] Shrestha, B., Kim, H.K., Sung, G.H., 2004a Bipolar heterothallism, a principal mating system of Cordyceps militaris in vitro Biotechnol Bioprocess Eng 9:440–446 [29] Shrestha, B., Park, Y.J, Han, S.K., 2004b Instability in in vitro fruiting of Cordyceps militaris J Mushroom Sci Prod 2:140–144 [30] Shrestha, B., Choi, S.K, Kim, H.K., 2005a Genetic analý sis of pigmentation in Cordyceps militaris Mycobiology 33:125–130 [31] Shrestha, B, Han, S.K., Lee, W.H 2005b Distribution and in vitro fruiting of Cordyceps militaris in Korea Mycobiology 33:178–181 [32] Sung, J.M 1996 The Insects-born fungus of Korea in color Seoul: Kýohak Publishing Co Ltd.; p 62-72 [33] Sung, J.M., Choi, Y.S, Lee, H.K, Kim, S.H., Kim, Y.O and Sung, G.H., 1999 Production of fruiting body using cultures of entomopathogenic fungal species Kor J Mycol 27:15-9 [34] Sung, J.M, Choi, Y.S, Shrestha, B 2002 Investigation on artificial fruiting of Cordyceps militaris Korean J Mycol 30:6–10 - 50 - luan an [35] Sung, J.M, Park, Y.J, Lee, J.O 2006a Effect of preservation periods and subcultures on fruiting body formation of Cordyceps militaris in vitro Mycobiology 34:196–199 [36] Sung, J.M, Park, Y.J, Lee, J.O 2006b Selection of superior strains of Cordyceps militaris with enhanced fruiting body productivity Mycobiology 34:131–137 [37] Tong, Y.K, Kuang, T., Wu, Y.X, 1997 Comparison of components of Cordyceps mycelium and natural Cordyceps sinensis Shi Pin Yan JiuYu Kai Fa, 18, 40–42 (in Chinese) [38] Ying, J.Z, Mao, X.L, Ma, Q.M., Zong, Y.C., Wen, H.A., 1987 Icones of medicinal fungi from China Beijing: Science Press; p 1-575 [39] Wang, L., Zhang, W.M, and Hu B., 2008 Genetic variation of Cordyceps militaris and its allies based on phylogenetic analý sis of rDNA ITS sequence data Fungal Divers, 31, 147–55 [40] Wang, B.S., Lee, Ch.P., Chen, Z.T., 2012b Comparison of the hepatoprotective activity between cultured Cordyceps militaris and natural Cordyceps sinensis J Funct Foods, 4, 489–95 [41] Wen, T.C., Li, G.R., Kang, J.C., Kang, C., Hyde, K.D., 2014.Optimization of Solid-state Fermentation for Fruiting Body Growth and Cordycepin Production by Cordyceps militari Chiang Mai J Sci, 41(4): 858-872 [42] Zheng, P., Xia, Y.L., Xiao, Ch.H., 2011a Genome sequence of the insect pathogenic fungus Cordyceps militaris, a valued traditional Chinese medicine Genome Biol, 12, R116 [43] Zhao, C.Y., Li, H., Zhang, M 2006 Optimization on conditions of artificial cultivation of Cordyceps militaris J Shenyang Agric Univ 37:209–212 Trang web http://danviet.vn/quan-su http://vnexpress.net/tin-tuc/khoa-hoc http://duocthaothienphuc.vn/ http://dongtrunghathaokimlai.vn/ - 51 - luan an ... dân tiếp cận với nguồn dược liệu q phịng trị bệnh bồi bổ sức khỏe, đề tài ? ?Bước đầu nghiên cứu quy trình ni nấm đơng trùng hạ thảo (C militaris) có nguồn gốc từ Nhật Bản Trà Vinh? ?? thực -1- luan... có nguồn gốc từ đơng trùng hạ thảo Việt Nam đa dạng như: dạng đông trùng hạ thảo sau thu hoạch sấy khô, đông trùng hạ thảo dạng viên nén viên nhộng, đông trùng hạ thảo kết hợp với linh chi, đông. .. TRÀ VINH HỘI ĐỒNG KHOA HỌC ISO 9001 : 2008 BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH NI NẤM ĐƠNG TRÙNG HẠ THẢO (Cordyceps militaris) CÓ NGUỒN