Trichoderma asperellum T10 - Chủng vi sinh tiềm năng đối kháng với nấm Neoscytalidium dimidiatum gây bệnh đốm trắng trên thanh long ở Bình Thuận

Chủng Trichoderma asperellum T10 được phân lập từ đất trồng thanh long ở tỉnh Bình Thuận có khả năng đối kháng mạnh với nấm Neoscytalidium dimidiatum gây bệnh đốm trắng trên thanh long. Kết quả nghiên cứu cho thấy, T. asperellum T10 có hiệu suất đối kháng cao với nấm bệnh là 100%, đường kính vòng vô khuẩn đạt 28,00 mm ở điều kiện phòng thí nghiệm. T. asperellum T10 có hiệu quả phòng trị bệnh đốm trắng ở điều kiện nhà màng, giảm tỷ lệ bệnh 28-40% và giảm chỉ số bệnh 23-33% so với đối chứng. T. asperellum T10 được đề nghị là chủng vi sinh tiềm năng để làm chế phẩm vi sinh phòng trị bệnh đốm trắng trên thanh long. Cùng tham khảo chi tiết bài viết tại đây nhé các bạn!

Khoa học Tự nhiên /Khoa học sống DOI: 10.31276/VJST.64(10DB).14-19 Trichoderma asperellum T10 - Chủng vi sinh tiềm đối kháng với nấm Neoscytalidium dimidiatum gây bệnh đốm trắng long Bình Thuận Lê Thanh Bình*, Trương Minh Ngọc, Hồ Thị Nguyệt, Lê Thị Huyền Chi nhánh Viện Ứng dụng Cơng nghệ TP Hồ Chí Minh Ngày nhận 4/7/2022; ngày chuyển phản biện 7/7/2022; ngày nhận phản biện 29/7/2022; ngày chấp nhận đăng 4/8/2022 Tóm tắt: Chủng Trichoderma asperellum T10 phân lập từ đất trồng long tỉnh Bình Thuận có khả đối kháng mạnh với nấm Neoscytalidium dimidiatum gây bệnh đốm trắng long Kết nghiên cứu cho thấy, T asperellum T10 có hiệu suất đối kháng cao với nấm bệnh 100%, đường kính vịng vơ khuẩn đạt 28,00 mm điều kiện phịng thí nghiệm T asperellum T10 có hiệu phịng trị bệnh đốm trắng điều kiện nhà màng, giảm tỷ lệ bệnh 28-40% giảm số bệnh 23-33% so với đối chứng T asperellum T10 đề nghị chủng vi sinh tiềm để làm chế phẩm vi sinh phòng trị bệnh đốm trắng long Từ khóa: bệnh đốm trắng, Bình Thuận, Neoscytalidium dimidiatum, long, Trichoderma asperellum Chỉ số phân loại: 1.6 Đặt vấn đề Thanh long ăn cho giá trị xuất cao tỉnh Bình Thuận Trên long, bệnh đốm trắng nấm N dimidiatum gây xem bệnh nguy hiểm [1] Nhiều phương pháp khác sử dụng để phòng trị nấm N dimidiatum Phương pháp điều trị hóa học hiệu nhất, mang lại nhiều tác dụng phụ gây ô nhiễm môi trường, ảnh hưởng trực tiếp đến sức khỏe người tăng nguy xuất mầm bệnh kháng thuốc Do đó, việc kiểm sốt bệnh phương pháp sinh học sử dụng vi sinh vật đối kháng biện pháp phù hợp [1-3] Nhiều nghiên cứu cho thấy, số chủng Trichoderma có khả kiểm sốt vi sinh vật gây bệnh trồng [4, 5] Trong số đó, chủng T asperellum đánh giá chủng có tiềm phịng trị số bệnh, khả sinh trưởng nhanh hình thành số lượng bào tử lớn [6] Chủng T asperellum có khả đối kháng cao với nấm Penicillium digitatum Colletotrichum gloeosporioides [7], phòng trị vi khuẩn Ralstonia solanacearum gừng [8], giảm 74% tỷ lệ nấm Sclerotium cepivorum hành điều kiện nhà kính, giảm tỷ lệ bệnh thối trắng 3,41 3,61% so với hành xử lý thuốc diệt nấm hóa học [9], có khả đối kháng mạnh với Fusarium oxysporum cà chua [10] Hiện chưa có nghiên cứu cơng bố chủng T asperellum đối kháng với nấm N dimidiatum gây bệnh đốm trắng long tỉnh Bình Thuận Trong nghiên cứu này, chủng nấm T Asperellum phân lập, định danh xác định hiệu đối kháng với N dimidiatum thực Đối tượng phương pháp nghiên cứu Đối tượng Chủng nấm N dimidiatum MB1 (từ Chi nhánh Viện Ứng dụng Công nghệ TPHồ Chí Minh [11]) phân lập từ mẫu * long bệnh tỉnh Bình Thuận, có độc lực gây nhiễm bệnh 100% định danh sinh học phân tử đến loài Chủng Trichoderma spp phân lập từ mẫu đất vườn trồng long đất rừng Tà Cú tỉnh Bình Thuận dùng để tuyển chọn khả đối kháng N dimidiatum MB1 Phương pháp nghiên cứu Phân lập sàng lọc chủng có khả nấm Trichoderma từ mẫu đất: Pha lỗng mẫu đất cấy trải mơi trường: PGA (thành phần: 200 g khoai tây, 20 g glucose, 20 g agar, 1.000 ml nước), ủ nhiệt độ 22-25oC, quan sát khuẩn lạc môi trường PGA sau 48-72 giờ, phân lập vi nấm từ khuẩn lạc riêng lẻ đĩa thạch sau khoảng thời gian 4-10 ngày Xác nhận dòng vi nấm Trichoderma spp dựa đặc điểm hình thái vi thể [6] Nghiên cứu khả đối kháng N dimidiatum chủng vi sinh tuyển chọn điều kiện phịng thí nghiệm: - Phương pháp đối kháng trực tiếp: Cấy nấm bệnh chủng vi nấm tiềm điểm đối xứng qua tâm đĩa petri, điểm cấy cách mép đĩa 1,5 cm Đối chứng đĩa cấy riêng nấm bệnh, ủ nhiệt độ phòng điều kiện tối Thí nghiệm lặp lại lần, kết giá trị trung bình lần lặp Quan sát ghi nhận kết sau 2, ngày Tính hiệu ức chế nấm bệnh theo công thức sau [5]: H = (Ddc - D)/Ddc*100 đó: H: hiệu ức chế (%); Ddc: đường kính khuẩn lạc nấm bệnh trung bình đĩa đối chứng (mm); D: đường kính khuẩn lạc nấm bệnh trung bình đĩa đối kháng (mm) - Phương pháp khuếch tán qua lỗ thạch: Nuôi cấy chủng vi nấm tiềm môi trường PGA lỏng 48 Sau ly tâm (8.000 vịng/phút phút) để loại bỏ sinh khối thu dịch Nuôi cấy nấm bệnh N dimidiatum đĩa môi trường PGA, Tác giả liên hệ: thanhbinhbiogg@gmail.com 64(10ĐB) 10.2022 14 Khoa học Tự nhiên /Khoa học sống Trichoderma asperellum T10 - A potential microbial strain against the Neoscytalidium dimidiatum causes white spot disease on dragon fruit in Binh Thuan province Thanh Binh Le*, Minh Ngoc Truong, Thi Nguyet Ho, Thi Huyen Le National Center for Technological Progress - Ho Chi Minh Branch Received July 2022; accepted August 2022 Abstract: The Trichoderma asperellum T10 isolated from soil for dragon fruit growth in Binh Thuan province, has a strong antagonistic ability against the Neoscytalidium dimidiatum, causing the white spot disease on dragon fruit The results showed that T asperellum T10 had a high antagonistic effect against fungal pathogens of 100%, and the inhibitory zone diameter reached 28.00 mm in laboratory conditions T asperellum T10 has been influential in the prevention and treatment of white spot disease in greenhouse conditions and reducing disease rates by 28-40% and disease index by 23-33% compared to the control T asperellum T10 is proposed as a potential strain of a microbial product for the prevention and treatment of white spot disease on dragon fruit Keywords: Binh Thuan, dragon fruit, Neoscytalidium dimidiatum, Trichoderma asperellum, white spot disease Classification number: 1.6 thu lấy bào tử, pha loãng để đạt nồng độ 105 CFU/ml Phương pháp thu bào tử pha loãng xác định nồng độ bào tử nấm: Nấm nuôi cấy đĩa môi trường PGA 25-28oC khoảng ngày, dùng gạt thủy tinh vô trùng cạo lớp bào tử, cho thêm vào ml nước cất vô trùng, tiến hành lọc qua màng lọc Miracloth (Calbiochem, Đức), tiếp tục thu bào tử cách ly tâm 4000 vịng/phút 10 phút, sau rửa bào tử lần nước cất vô trùng, dung dịch bào tử xác định số lượng bảo tử kính hiển vi buồng đếm hồng cầu, pha loãng dung dịch bào tử nước cất vô trùng đạt 107 CFU/ml, để tủ mát -4oC, sử dụng pha loãng với nước cất vô trùng đạt 105 CFU/ml Hút 0,1 ml dung dịch chứa bào tử N dimidiatum trải đĩa petri chứa môi trường PGA Tạo giếng nhỏ có đường kính mm Nhỏ 0,1 ml dịch nuôi cấy chủng vi nấm đối kháng loại sinh khối Ủ đĩa 4oC 15 phút cho dịch giếng khuếch tán Sau ủ nhiệt độ phòng 24-48 cho vi nấm N dimidiatum phát triển Chủng vi nấm có khả sinh chất kháng khuẩn để ức chế N dimidiatum xuất vòng kháng khuẩn xung quanh 64(10ĐB) 10.2022 lỗ thạch Đo kích thước vịng vơ khuẩn xung quanh giếng Thí nghiệm lặp lại lần chủng cần chọn lọc, kết giá trị trung bình cộng lần lặp lại Tính kích thước vịng vơ khuẩn = D-d Trong đó, D: đường kính vịng đối kháng (mm); d: đường kính lỗ (mm) Từ phương pháp đối kháng trực tiếp khuếch tán qua lỗ thạch, tuyển chọn chủng Trichoderma có khả đối kháng mạnh với nấm bệnh N dimidiatum để tiến hành định danh đến loài Các chủng vi nấm định danh đến lồi phương pháp giải trình tự vùng ITS-rDNA Trung tâm Khoa học Công nghệ, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh Nghiên cứu khả phịng trị bệnh đốm trắng long chủng Trichoderma điều kiện nhà màng: Đối với thí nghiệm phịng bệnh, phun kết hợp tưới gốc Trichoderma, sau 10 ngày tiến hành phun kết hợp tưới gốc bào tử vi nấm N dimidiatum lên tồn thí nghiệm với nồng độ phun 105 CFU/ml (đối với thí nghiệm trị bệnh, phun N dimidiatum trước, sau phun xử lý Trichoderma) Thí nghiệm bố trí ngẫu nhiên hồn tồn theo khối, ô gồm với lần lặp lại cho nghiệm thức Theo dõi tỷ lệ bệnh số bệnh đốm trắng sau 10, 20 30 ngày sau xử lý vi nấm Phương pháp xử lý số liệu: Các số liệu thí nghiệm đánh giá phương pháp thống kê phân tích biến lượng (Analysis of Variance - ANOVA), so sánh trung bình theo phương pháp trắc nghiệm Ducan Các số liệu ghi nhận xử lý phần mềm SPSS phiên 19 Kết Phân lập sàng lọc chủng nấm có khả Trichoderma Từ 20 mẫu đất thu tỉnh Bình Thuận, phân lập 69 chủng có khả năngTừlà 20 Trichoderma quanBình sát đặc điểm hìnhđược dạng69 chủng có khả mẫu đất thuqua tỉnh Thuận, phân lập khuẩn lạc thạch, nhuộm quan sát đặc điểm tơ nấm, bào Trichoderma qua quan sát đặc điểm hình dạng khuẩntửlạc thạch, nh kính hiển vi quang học vật kính x40 x100 Các khuẩn lạc quan sát đặc điểm tơ nấm, bào tử kính hiển vi quang học vật kính x40 ban đầu có màu trắng, sinh bào tử chuyển sang xanh đậm, Cáchoặc khuẩn ban (hình đầu có1A màu sinh thìvườn chuyển sang xanh đậ xanh vàng lụclạctrắng trắng, 1B) Trong đó,bào mẫutửđất vàng trắng(57,97%), (hình 1A đó,phân mẫulập đất vườn phân lập phân lập 40lục chủng đất1B) rừngTrong Tà Cú 29 chủng 42,03% (bảng 1) (57,97%), đất rừng Tà Cú phân lập 29 chủng 42,03% (bảng 1) (A) 10 µm (B) Hình 1.Hình Hình1.dạng củalạc chủng ĐV8T1ĐV8T1 (A); tơ (A nấm, Hìnhkhuẩn dạng lạc khuẩn chủng thể tơ nấm, thể bình bình bào tử chủng ĐV8T1 kính hiển vi quang học kính hiển vi quang học vật kính X100 (B) chủng ĐV8T1 vật kính x100 (B) Bảng Kết sàng lọc chủng Trichoderma từ 20 mẫu đất tỉnh Bình 15 Mẫu đất vườn Mẫu đất rừng Tà Cú Ký hiệu Số chủng Ký hiệu Số chủng ĐV1 ĐR1 ĐV2 ĐR2 TT Khoa học Tự nhiên /Khoa học sống Bảng Kết sàng lọc chủng Trichoderma từ 20 mẫu đất tỉnh Bình Thuận TT Mẫu đất vườn Ký hiệu Mẫu đất rừng Tà Cú Số chủng Ký hiệu Số chủng ĐV1 ĐR1 ĐV2 ĐR2 ĐV3 ĐR3 ĐV4 ĐR4 ĐV5 ĐR5 Bảng Khả ức chế nấm N dimidiatum gây bệnh đốm trắng long 19 chủng Trichoderma spp đối kháng mạnh (phương pháp khuếch tán đĩa thạch) TT Phương pháp khuếch tán đĩa thạch Tên chủng (D-d) (mm) ĐV8T1 28,0a±2,27 ĐV9T4 27,5ab±1,93 ĐR10T5 25,5abc±0,96 ĐV7T1 25,0abcd ±2,48 ĐV3T4 23,5abcde±3,10 ĐV6 ĐR6 ĐV7 ĐR7 ĐV8 10 ĐR8 ĐV9 ĐR9 ĐV2T1 23,5abcde±1,71 10 ĐV10 ĐR10 12 ĐV8T2 22,8abcdef±2,81 29 ĐV9T8 22,3abcdefg±2,32 ĐR10T7 20,0abcdefgh±1,18 10 ĐV8T7 19,8abcdefgh±2,29 11 ĐV2T4 19,8abcdefgh±3,71 12 ĐV2T2 19,8abcdefgh±2,56 13 ĐV9T2 19,8abcdefgh±1,18 14 ĐV9T1 18,8bcdefgh 0,48 15 ĐV8T10 18,8bcdefgh±2,17 16 ĐV9T3 18,5cdefgh±3,84 17 ĐR9T1 18,5cdefgh±2,02 18 ĐV9T5 18,3cdefgh±2,06 19 ĐV9T6 18,0cdefgh±3,19 Tổng 40 Nghiên cứu khả đối kháng vi nấm N dimidiatum chủng Trichoderma Kết đối kháng xác định thơng qua hiệu ức chế đường kính vòng kháng khuẩn Kết đối kháng 19 chủng Trichoderma có hiệu đối kháng mạnh 69 chủng phân lập thể bảng Bảng Khả ức chế nấm N dimidiatum gây bệnh đốm trắng long 19 chủng Trichoderma spp đối kháng mạnh (phương pháp đối kháng trực tiếp) Phương pháp đối kháng trực tiếp TT Tên chủng Hiệu ức chế sau ngày (%) Hiệu ức chế sau ngày (%) ĐV8T1 71,85a 100,00a ĐR10T6 68,52abc 100,00a ĐV4T2 63,70abcd 100,00a ĐV4T1 61,85abcd 100,00a ĐR2T5 abcd 59,63 100,00a ĐR2T9 59,26abcd 100,00a ĐR2T4 61,85abcd 98,89ab ĐV3T2 66,67 95,19abc ĐR2T7 57,04bcd 94,81abc 10 ĐR9T1 abcd 65,56 94,44abc 11 ĐV8T7 65,19abcd 93,70abc 12 ĐR2T6 61,48 93,70abc 13 ĐR2T3 bcd 57,78 93,70abc 14 ĐV9T5 57,41bcd 93,33abc 15 ĐV2T6 abcd 66,67 92,59abcd 16 ĐV9T3 58,52abcd 92,59abcd 17 ĐV8T5 61,85abcd 91,85abcd 18 ĐV7T1 abcd 60,37 91,48abcd 19 ĐV5T2 60,37abcd 90,74abcd abcd abcd Ghi chú: cột, giá trị trung bình có ký tự theo sau khác có khác biệt mặt thống kê (p