Bệnh đốm nâu thanh long do nấm Neoscytalidium sp. là dịch hại nguy hiểm cho sản xuất thanh long ở Việt Nam. Hiện vẫn chưa có biện pháp hiệu quả để quản lý bệnh hại này. Trong số 27 chủng nấm Trichoderma nội địa phân lập được, đề tài đã chọn ra chủng Trichoderma asperellum có hiệu quả đối kháng cao với nấm Neoscytalidium sp. thông qua việc khảo sát, đánh giá khả năng phòng trừ bệnh của chế phẩm ở điều kiện phòng thí nghiệm, trong chậu và ngoài đồng ruộng.
Giải thưởng Sinh viên Nghiên cứu khoa học Euréka lần thứ XIX năm 2017 Kỷ yếu khoa học TUYỂN CHỌN CHỦNG NẤM TRICHODERMA BẢN ĐỊA CÓ KHẢ NĂNG ỨC CHẾ NẤM NEOSYTALIDIUM SP GÂY BỆNH ĐỐM NÂU HẠI THANH LONG Nguyễn Thị Bích Tuyền*, Nguyễn Thị Hai Đại học Cơng nghệ Tp Hồ Chí Minh *Tác giả liên lạc: nguyentuyen950726@gmail.com TÓM TẮT Bệnh đốm nâu long nấm Neoscytalidium sp dịch hại nguy hiểm cho sản xuất long Việt Nam Hiện chưa có biện pháp hiệu để quản lý bệnh hại Trong số 27 chủng nấm Trichoderma nội địa phân lập được, đề tài chọn chủng Trichoderma asperellum có hiệu đối kháng cao với nấm Neoscytalidium sp thông qua việc khảo sát, đánh giá khả phòng trừ bệnh chế phẩm điều kiện phịng thí nghiệm, chậu ngồi đồng ruộng Ngồi ra, Trichoderma asperellum cịn cho hiệu tốt ủ compost từ cành long Từ khóa: Bản địa, ức chế SELECTION OF INDIGENOUS TRICHODERMA TO CONTROL NEOSYTALIDIUM SP CAUSING BROWN SPOTS ON DRAGON FRUIT Nguyen Thi Bich Tuyen*, Nguyen Thi Hai Ho Chi Minh City University of Technology *Corresponding Author: nguyentuyen950726@gmail.com ABSTRACT Neoscytalidium sp causing brown spot disease is the dangerous species on dragon fruit in Vietnam At present, there have not had effective method to manage this disease This study was isolated 27 Trichoderma spp strains and selected Trichoderma asperellum that has highly antagonistic against Neoscytalidium sp by evaluating the antagonistic activity in Laboratory, on pots and on dragon fruit field More over, Trichoderma asperellum is also effective in control the disease for composting of dragon fruit branches Keywords: Indigenous, inhibited ĐẶT VẤN ĐỀ Thanh long ăn cho giá trị xuất cao, trồng nhiều Bình Thuận, Long An Tiền Giang Tuy nhiên năm gần dịch hại nguyên nhân làm giảm suất, chất lượng sản phẩm đặc biệt bệnh đốm nâu nấm Neoscytalidium sp gây (Nguyễn Thành Hiếu ctv, 2014; Võ Thị Thu Oanh ctv, 2014; Chuang ctv, 2012; Masratul ctv, 2013; Qiao ling lin Ci ctv, 2015; Sanahuja ctv, 2016) Hiện tình trạng bệnh diễn biến phức tạp, lây lan nhanh diện rộng, phát triển mạnh vào mùa mưa Sử dụng hóa chất bảo vệ thực vật có gốc Azoxystrobin, Sifenoconazole kiểm sốt bệnh đốm nâu long tương đối hiệu quả, nhiên dư lượng thuốc bảo vệ thực vật sản phẩm rào cản lớn để xuất long thị trường khó tính EU, Mỹ, Nhật Nghiên cứu sử dụng nấm đối kháng Trichodrema spp làm tác nhân sinh học kiểm soát bệnh đốm nâu long hướng nghiên cứu tích cực đáp ứng yêu cầu sản phẩm an toàn để xuất khẩu, tiêu dùng nước góp phần hạn chế sử dụng hóa chất sản xuất nông nghiệp VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Vật liệu nghiên cứu Mẫu nấm bệnh Neoscytalidium sp thu thập xã Bình Trinh Đơng, huyện Tân Trụ, tỉnh Long An 27 chủng nấm Trichoderma nội địa phân lập Hóa chất thiết bị cần thiết phân tích, đánh giá Phương pháp nghiên cứu Xác định khả đối kháng chủng nấm Trichoderma với nấm gây bệnh đốm nâu long: Dựa phương pháp đồng nuôi cấy môi trường thạch 459 Giải thưởng Sinh viên Nghiên cứu khoa học Euréka lần thứ XIX năm 2017 đĩa, từ đánh giá ức chế nấm đố kháng nấm bệnh phần trăm đối kháng Xác định hiệu phòng trừ bệnh đốm nâu long điều kiện chậu Thí nghiệm tiến hành long đâm rễ, nhú chồi kéo dài tháng tuổi, gồm công thức: - Công thức 1: đối chứng, tưới nấm bệnh Neoscytalidium sp - Công thức 2: tưới nấm Trichoderma asperellum (106 bào tử/ml) trước tưới nấm bệnh Neoscytalidium sp sau - Cơng thức 3: tưới nấm Trichoderma asperellum trước ngày, sau tưới nấm bệnh Neoscytalidium sp Xác định hiệu phòng trừ bệnh đốm nâu hại long đồng ruộng chủng nấm Trichoderma asperellum: Thí nghiệm bố trí ruộng nơng dân, gồm cơng thức: - Công thức 1: Đối chứng nông dân thực - Công thức 2: Tưới nấm T Asperellum với liều lượng 106 bào tử / ml, trụ tưới 10 lít dung dịch huyền phù nấm Xử lí cành long phương pháp ủ compost kiểm tra diện Kỷ yếu khoa học nấm bệnh sau ủ: Các phế phẩm long (hầu hết cành long bị nấm gây bệnh đốm nâu gây hại nên nông dân cắt bỏ đồng) băm thành đoạn ngắn từ - 10 cm phơi nắng ngày để giảm bớt ẩm độ Sau đó, trộn phế phẩm chia vào thùng xốp (kích thước 60,5 x 45,5 x 18 cm ) để ủ compost theo công thức sau: - Công thức 1: Đối chứng không bổ sung Trichederma asperellum - Công thức 2: Bổ sung Trichoderma chủng Trichederma asperellum với liều lượng 10% (100g chế phẩm/1kg long phơi nắng ngày) Trong q trình ủ ý ln đảo trộn Theo dõi ghi nhận kết sau 15 30 ngày sau ủ KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Tuyển chọn chủng nấm Trichoderma có khả ức chế nấm Neoscytalidium sp Từ 27 chủng nấm Trichoderma nội địa phân lập, sinh viên tuyển chọn chủng có khả ức chế mạnh với nấm Neoscytalidium sp điều kiện phịng thí nghiệm (Bảng 1) Bảng Hiệu lực ức chế (%) nấm Neoscytalidium sp gây bệnh đốm nâu hại long chủng Trichoderma spp có triển vọng Ký Tỷ lệ phần trăm đối kháng Nguồn gốc STT hiệu phân lập 4NSC 6NSC 7NSC chủng T3 Đất hồ tiêu 58,65a 88,35a 88,35a Tai nấm linh T9 51,26d-h 79,46a 88,35a chi Tai nấm linh T11 51,77c-g 88,30a 88,35a chi Tai nấm linh T22 57,86ab 88,35a 88,35a chi Tai nấm linh T26 54,50cd 61,12bc 88,35a chi TC7 Đất hồ tiêu 54,24cd 79,46a 88,35a g-m b-d TC9 Đất hồ tiêu 49,07 58,68 88,35a TC13 Đất hồ tiêu 47,39j-m 58,97bcd 88,35a Ghi chú: số liệu hiệu lực ức chế (%) chuyển đổi arcsin, cơng thức có số giống sai khác khơng có ý nghĩa mặt thống kê mức 99% Theo quan sát, sau thời gian ngày nuôi cấy, tỷ lệ phần trăm đối kháng chủng Trichoderma với nấm bệnh Neoscytalidium sp tăng lên đáng kể (từ 47,39 - 58,65%) Tại thời điểm thấy ảnh hưởng ức chế lẫn Theo đó, chủng nấm bệnh bắt đầu ngưng phát triển vị trí tiếp xúc chúng 460 Giải thưởng Sinh viên Nghiên cứu khoa học Euréka lần thứ XIX năm 2017 Đến ngày thứ 6, chủng nấm Trichoderma tiếp tục tăng trưởng mạnh, mở rộng vòng phát triển gần hết đĩa (tỷ lệ ức chế đạt 61 88%), đường kính khuẩn lạc tiếp tục tăng trưởng vị trí trống bề mặt thạch, bao vây khuẩn lạc chủng nấm bệnh, tượng giao thoa tiêu diệt lẫn chủng nấm xuất rõ Kỷ yếu khoa học Đến ngày thứ 7, chủng Trichoderma ức chế hoàn toàn tăng trưởng chủng nấm bệnh Trong số này, chủng T3 tỏ có xu hướng mạnh Vì vậy, chủng T3 chọn để định danh sinh học phân tử sản xuất sinh khối cho thử nghiệm chậu ngồi đồng ruộng N Hình Đĩa nấm đối chứng Neoscytalidium sp 2,4,6,7 NSC (theo thứ tự từ trái qua) T N Hình Kết đối kháng chủng nấm T3 với nấm Neoscytalidium sp đĩa petri 2,4,6,7 NSC (theo thứ tự từ trái qua) Ghi chú: T: Trichoderma T3; N: Neoscytalidium sp.; NSC: Ngày sau cấy Trichoderma T3 N dimidiatum Hình Sợi nấm Trichoderma T3 công nấm Neoscytalidium sp kính hiển vi quang học với độ phóng đại 1.000 lần Kết khảo sát khả đối kháng công thức (chỉ phun nấm bệnh) 80% chủng nấm T asperellum với chủng nấm Trong đó, cơng thức cịn lại tương bệnh Neoscytalidium sp long ứng với thời điểm xử lý khác hoàn điều kiện chậu cho thấy tỷ lệ bệnh tồn khơng có xuất nấm bệnh 461 Giải thưởng Sinh viên Nghiên cứu khoa học Euréka lần thứ XIX năm 2017 Kỷ yếu khoa học Bảng Tỷ lệ cành long bị bệnh công thức Công thức Số cành bị bệnh đốm nâu Tỷ lệ cành bị bệnh (%) Đối chứng 4±1 80 Tưới nấm T asperellum trước tưới nấm bệnh Neoscytalidium sp sau 0 Tưới nấm T asperellum trước ngày, sau tưới nấm bệnh 0 Neoscytalidiun sp Hiệu lực phòng trừ bệnh chế phẩm long tháng tuổi, chọn ngẫu nhiên 54 cành long lô (18 trụ) để đánh giá tỷ Trichoderma asperellum đồng ruộng Sau 45 ngày thử nghiệm trụ lệ bệnh số bệnh Bảng Tình hình bệnh đốm nâu long công thức Công thức Tỷ lệ bệnh (%) Chỉ số bệnh (%) Công thức đối chứng 30,25±2,83 4,05±0,93 Cơng thức thí nghiệm 4,32±1,07 0,48±0,12 Kết bảng cho thấy, việc sử dụng nấm cho thấy, có khác biệt rõ Trichoderma asperellum làm giảm hẳn số bệnh lô tưới nấm lô đối chứng gây hại nấm Neoscytalidium sp gây bệnh Chỉ số bệnh lô sử dụng nấm Trichoderma đốm nâu hại long Tỷ lệ bệnh trụ asperellum khoảng 0,48% thấp nhiều có tưới nấm khoảng 4,32% thấp hẳn so với 4,05% lô đối chứng nông so với trụ đối chứng nông dân (với tỷ dân lệ bệnh 30,25%) Mặt khác, số bệnh Hiệu ủ compost chủng nấm tiêu quan trọng để đánh giá mức độ Trichoderma asperellum nhiễm bệnh trồng Kết bảng Bảng Kết phân tích 15 ngày sau ủ Nguyên liệu 15 ngày sau ủ Chỉ tiêu phân Nguyên liệu ban đầu tích Đối chứng Thí nghiệm Hàm lượng carbon Hàm lượng nitơ Tỷ lệ C/N 50,740 44,67 40,10 2,08 2,22 2,91 24,4 20,13 13,79 Ẩm độ 88,51±0,48 Số liệu bảng cho thấy, nguyên liệu ban đầu có độ ẩm 88,51% độ ẩm mức tương đối cao thân long chứa nhiều nước Tỷ lệ C/N nguyên liệu ban đầu 24,4 Sau ủ 15 ngày, công thức đối chứng cơng thức thí nghiệm có khác biệt rõ rệt Trong đó, cơng thức đối chứng 20,13 Tuy nhiên cơng thức thí nghiệm có bổ sung chế phẩm Trichoderma asperellum T3, tỷ lệ lại có giảm đáng kể (giảm 13,79) Điều chứng tỏ, nấm T asperellum sử dụng ủ compost cành long Hơn nữa, sau kết kiểm tra diện nấm bệnh, phân ủ công thức đối chứng, nấm Neoscytalidium sp xuất tất nồng độ pha lỗng (Hình 5) cịn cơng thức thí nghiệm, có nấm Trichoderma asperellum mọc hồn tồn khơng thấy có mặt nấm gây bệnh đốm nâu Neoscytalidium sp (Hình 6) Như vậy, khả phân hủy cellulose cành 462 Giải thưởng Sinh viên Nghiên cứu khoa học Euréka lần thứ XIX năm 2017 long, nấm Trichoderma asperellum cịn tiêu diệt nấm Neoscytalidium sp có Kỷ yếu khoa học cành long ủ phân compost Mặt trước Mặt sau Hình Kết kiểm tra diện nấm bệnh công thức đối chứng Mặt trước Mặt sau Hình Kết kiểm tra diện nấm bệnh công thức thí nghiệm KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Đã phân lập 27 chủng Trichoderma spp nội địa có khả sinh trưởng, khả sinh enzyme chitinase cellulase mạnh Trong đó, chủng, T3, T9, T11, T22, T26, TC7 , TC9, TC13 đối kháng mạnh với nấm Neoscytalidium sp gây bệnh đốm nâu long Đã định danh sinh học phân tử đến tên loài chủng nấm T3 Trichoderma asperellum Chế phẩm nấm Trichoderma asperellum T3 có hiệu lực phịng trừ cao nấm Neoscytalidium sp gây bệnh đốm nâu hại long chậu đồng ruộng Bổ sung thêm chế phẩm Trichoderma asperellum T3 để ủ compost cành long bị bệnh, rút ngắn thời gian phân hủy so với đối chứng không bổ sung tiêu diệt hoàn toàn nấm Neoscytalidium sp có vật liệu ủ (cành long) Kiến nghị Mở rộng diện tích áp dụng chế phẩm Trichoderma asperellum T3 đồng ruộng Tiến hành kết hợp chế phẩm Trichoderma asperellum T3 với chất dinh dưỡng, phân bón trồng để tạo sản phẩm đa chức giúp trồng vừa phòng chống bệnh vừa kích thích tăng trưởng TÀI LIỆU THAM KHẢO NGUYỄN THÀNH HIẾU, NGUYỄN NGỌC ANH THƯ VÀ NGUYỄN VĂN HÒA 2014 Nghiên cứu xác định tác nhân, đặc điểm hình thái sinh học nấm Neoscytalidium dimidiatum gây bệnh đốm nâu long (Hylocereus undatus) Hội thảo quốc gia Bệnh hại thực vật Việt Nam lần thứ 13, tổ chức Trường Đại học Nông lâm TP Hồ Chí Minh, 6-7/5/2014, 114-120 VÕ THỊ THU OANH, BÙI CÁCH TUYẾN, NGUYỄN PHAN THÀNH, LÊ ĐÌNH ĐƠN, PHAN THỊ THU HIỀN, 2014 Xác định tác nhân gây bệnh đốm nâu (Neoscytalidium dimidiatum) long dựa vào trình tự vùng ITS – RADN Tạp chí Nơng nghiệp & Phát triển nông thôn số 21/2014 Trang 17-23 CHUANG M F., NI H F., YANG H R., SHU S L., AND LAI S Y., 2012, First Report of Stem Canker Disease of Pitaya (Hylocereus undatus and H polyrhizus) Caused by Neoscytalidium dimidiatum in Taiwan Plant Disease June 2012, Volume 96, Number 6.Page 906 463 ... VÀ THẢO LUẬN Tuyển chọn chủng nấm Trichoderma có khả ức chế nấm Neoscytalidium sp Từ 27 chủng nấm Trichoderma nội địa phân lập, sinh viên tuyển chọn chủng có khả ức chế mạnh với nấm Neoscytalidium... dụng nấm cho thấy, có khác biệt rõ Trichoderma asperellum làm giảm hẳn số bệnh lô tưới nấm lô đối chứng gây hại nấm Neoscytalidium sp gây bệnh Chỉ số bệnh lô sử dụng nấm Trichoderma đốm nâu hại long. .. (Bảng 1) Bảng Hiệu lực ức chế (%) nấm Neoscytalidium sp gây bệnh đốm nâu hại long chủng Trichoderma spp có triển vọng Ký Tỷ lệ phần trăm đối kháng Nguồn gốc STT hiệu phân lập 4NSC 6NSC 7NSC chủng